本發明涉及醫藥技術領域，尤其涉及一種抗腫瘤藥物的組合物及其醫藥用途。
背景技術：
根據WHO(世界衛生組織)統計顯示，目前在殘害人類生命各種疾病中，癌癥已經成為死亡率第一重大疾病。僅在2008年，全球約有1270萬癌癥新增病例以及760萬癌癥死亡病例，其中約70％的死亡病例發生在低等收入和中等收入國家。另據國際權威調查機構預測，到2020年癌癥死亡人數將翻一番，達到1000萬人以上。目前，癌癥的治療手段主要包括手術、放療和化療等。其中，化療能夠明顯延長病人的生命，在癌癥的綜合治療中占有越來越重要的地位。但眾所周知：在腫瘤化療治療中，患者普遍具有明顯的惡心、嘔吐、身體衰弱以及體重明顯下降等副作用，給患者帶來強烈的不適感同時影響臨床結局。因此，在腫瘤治療過程中，探索既可以增強藥物療效又能夠減低副作用的輔助性治療方案變得極為重要。
人參是一種藥食同源食品，在我國已有較長的使用歷史，未見顯著的副作用，對多種疾病都具有防治效果，例如動脈硬化、高脂血癥、血栓、高血壓、免疫功能降低、肝功能降低等。在國際上，人參作為一種膳食營養補充品，深受人們的歡迎。
國內外大量科學研究表明，人參在腫瘤治療中具有廣泛的應用，如抑制腫瘤細胞增殖、誘導腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞的侵襲和轉移；協同放化療輔助治療；增強腫瘤患者免疫功能等。然而，目前人參在使用過程中也存在著很多不足。首先，由于中藥人參的產地、種類的不同，其質量良莠不齊；其次，在炮制過程中，由于制備工藝不同，人參樣品中各人參皂苷活性成分含量不用；此外，采用人參皂苷單一成分時，人參皂苷Rg3和人參皂苷Rh2是具有較強抗腫瘤活性的人參單體，人參皂苷Re在降低胃腸道反應和骨髓抑制等不良反應的發生率中發揮著重要的作用，但僅靠單一使用難以充分展現中藥多組分、多靶點的優勢。
因此，為了增強放化療的治療效果，降低毒副作用，提高腫瘤患者的生活質量，依據補充替代醫學原理，本發明將人參皂苷三組分(人參皂苷Rg3、人參皂苷Rh2和人參皂苷Re)依據不同比例設計成配方，使其能與抗腫瘤藥物聯合應用發揮增效減毒功效。
技術實現要素：
本發明所解決的技術問題是提供一種具有增強抗腫瘤藥物效果，并減少抗腫瘤藥物副作用的藥物組合物。
根據上述需解決的技術問題，設計了一種藥物組合物，其包括人參皂苷三組分以及抗腫瘤藥物紫杉醇，人參皂苷三組分和紫杉醇質量比為2000～500∶1，優選地，人參皂苷三組分和紫杉醇質量比1000∶1。
作為本發明進一步改進，所述的人參皂苷三組分包括人參皂苷Rg3、人參皂苷Rh2、和人參皂苷Re，其中，人參皂苷Rg3的質量百分比為20％～60％、人參皂苷Rh2的質量百分比為20％～60％、和人參皂苷Re的質量百分比為20％～60％。優選地，人參皂苷Rg3的質量百分比40％、人參皂苷Rh2的質量百分比為20％、和人參皂苷Re的質量百分比為40％。
本發明藥物組合物的用途在于增強抗腫瘤藥物的療效，并減少抗腫瘤藥物治療造成的副作用。本發明藥物組合物特別針對乳腺癌疾病的治療。
本發明按一定比例將人參皂苷三組分配成6種配方，與抗腫瘤藥物紫杉醇聯合使用后，均具有明顯的協同抑制人癌細胞生長的作用(增強作用)。這些結果預示著在腫瘤化療過程中，同時服用該人參皂苷三組分的特定配方，有助于腫瘤患者的治療和康復。
具體實施方式
下面通過具體實施方式對本發明作進一步說明。
本發明提供了一種抗腫瘤的藥物組合物，包括人參皂苷三組分和抗腫瘤藥物紫杉醇，人參皂苷三組分和紫杉醇質量比為2000～500∶1，優選地，人參皂苷三組分和紫杉醇質量比1000∶1。
所述的人參皂苷三組分包括人參皂苷Rg3、人參皂苷Rh2、和人參皂苷Re。其中，人參皂苷Rg3的質量百分比為20％～60％、人參皂苷Rh2的質量百 分比為20％～60％、和人參皂苷Re的質量百分比為20％～60％。優選地，在本實施方式中，人參皂苷Rg3的質量百分比40％、人參皂苷Rh2的質量百分比為20％、和人參皂苷Re的質量百分比為40％。
實施例1：本發明中人參皂苷的制備
1、人參皂苷Rg3提取純化方法：
1.1人參皂苷的制備：
取200g人參藥材，粉碎成粗粉，過60目篩。加入1000ml的70％乙醇，回流2h，充分震蕩后過濾，再加入1000ml的70％乙醇，如此重復共計5次，合并5次濾液，減壓蒸干得人參總皂苷。
1.2人參二醇組分的分離：
稱取20g人參總皂苷溶于1000ml水，將此溶液通過AB-8型大孔樹脂。首先用1000ml水洗樹脂，流速為10ml/min；再用500ml的30％乙醇溶液洗；后以1000ml的pH＝10的堿性70％乙醇溶液洗脫。將洗脫液用旋轉蒸發器真空濃縮至干，放入電熱干燥箱中60℃干燥，得人參二醇組分粗皂苷。
1.3微波法純化人參皂苷Rg3：
稱取2g人參二醇組分粗皂苷，溶于100ml水中，加入鹽酸至濃度為0.5mol/L，加水稀釋到200ml。放入微波反應器內，選用225w，v＝2500MHz，開始反應。反應結束后，冷卻至室溫，倒去上清液，加甲醇100ml，10000r離心20min。過濾除去沉淀，得人參皂苷Rg3。
2、人參皂苷Rh2提取純化方法：
2.1人參總皂苷的制備：
取200g干燥人參藥材，加入1000ml的95％乙醇水浴加熱回流2h，過濾，藥渣再用1000ml的95％乙醇水浴加熱回流2次，合并濾液，回收乙醇得浸膏，再用3倍量無水乙醇攪拌，靜置2h，過濾，減壓蒸干得人參總皂苷。
2.2人參皂苷Rh2組分的分離：
取人參總皂苷20g，加入200ml水溶解，采用乙醚萃取3次，每次50ml，將萃取液合并，回收溶液得含人參皂苷Rh2組分。
2.3薄層色譜純化：
采用CHCl3∶MeOH∶H2O(2∶2∶4下層)溶劑系統，經硅膠柱反復層析；薄層 色譜檢查，分離得到白色化合物，應用甲醇-水體系重結晶，得到無色針狀結晶，即為人參皂苷Rh2。
3、人參皂苷Re提取純化方法：
3.1粗提液制備：
稱取200g人參藥材，粉碎成粗粉，過60目篩，應用80％乙醇水浴加熱回流提取3次，每次500ml，時間2h。提取液減壓濃縮至50ml，即為人參粗提液。
3.2D101大孔吸附樹脂柱分離：
人參粗提液用20倍量水溶液加到已處理好的D101大孔吸附樹脂柱(50×4cm，樹脂為200g)。先用水洗柱，再用2％NaOH溶液、2％HCl溶液依次洗柱，再用水洗至流出液呈中性，最后采用90％乙醇淋洗，收集流出液。回收溶劑，60℃減壓干燥，得干燥疏松黃白色粉末，即為人參總皂苷。
3.3純化：
用40ml 70％乙醇溶解人參總皂苷，后加入400ml丙酮攪拌，有大量沉淀析出，放置，過濾，母液回收溶劑至干，得棕黃色疏松粉末。粉末再用40ml95％乙醇溶解，加300ml丙酮攪拌，析出沉淀，靜置，過濾，母液回收至干，再用丙酮同法處理二次，過濾，回收溶液至干，60℃減壓干燥，得黃白色干燥疏松粉末，即為人參皂苷Re。
實施例2：本發明通過以下的實驗來驗證上述藥物組合物的效果
1、人參皂苷三組分的配比
6種人參皂苷三組分配方中的人參皂苷Rg3、人參皂苷Rh2、和人參皂苷Re的質量百分比如表1所示。
表1：人參皂苷三組分配方的人參皂苷Rg3、Rh2和Re的質量百分比
2、人參皂苷三組分和紫杉醇的藥物組合物對人乳腺癌細胞的協同抑制作用
2.1實驗方法
人乳腺癌細胞系MCF-7細胞培養：細胞生長于體積分數為10％的胎牛血清的DMEM/F12培養基中，于37℃，5％CO2培養箱中培養。3-4天以約1∶3比例傳代一次。細胞經胰酶分散傳代和收獲，取對數生長期細胞進行實驗。
人乳腺癌細胞系MCF-7細胞生長抑制實驗：采用ATP方法進行實驗。取對數生長期的MCF-7細胞，0.25％胰酶消化，用含10％胎牛血清的DMEM/F12培養基將細胞配制成細胞懸液，計數。調節細胞濃度至2×104/ml，接種于384孔板中，每孔50μl。置于37℃，5％CO2培養箱中培養24h。實驗分為以下3組：
①紫杉醇單一用藥組：加入10μl不同濃度的紫杉醇于細胞中，使其終濃度為0.1，0.3，1，3，10，30nM；
②人參皂苷三組分組(共6種配方)：加入10μl不同濃度的人參皂苷三組分于細胞中，使其終濃度為0.1，0.3，1，3，10，30μM；
③紫杉醇和人參皂苷三組分聯合組(共6種配方)：以質量濃度1∶1000配比紫杉醇和人參皂苷三組分混合液，加入不同濃度該混合液于細胞中。
每個濃度設5個復孔，同時設空白對照(10μl DMEM/F12培養基)。繼續培養48h后，加入10μl ATP檢測試劑，靜置10min，采用多功能酶標儀在595nm波長下檢測其發光值，并計算細胞的存活率。計算公式：細胞存活率＝(加藥組細胞所測細胞發光值-空白對照組所測發光值)/(對照組細胞所測發光值-空白對照組所測發光值)×100％。實驗重復三次。
2.2實驗結果
紫杉醇和人參皂苷三組分的藥物組合物對人乳腺癌細胞MCF-7的生長影響結果見表2。
表2：不同濃度紫杉醇、人參皂苷三組分配方1及紫杉醇聯合人參皂苷三組分配方1對MCF-7細胞的細胞存活率(％)
注：紫杉醇聯合人參皂苷三組分配方1與紫杉醇組相比，#p＜0.05，##p＜0.01。
表3：不同濃度紫杉醇、人參皂苷三組分配方2及紫杉醇聯合人參皂苷三組分配方2對MCF-7細胞的細胞存活率(％)
注：紫杉醇聯合人參皂苷三組分配方2與紫杉醇組相比，#p＜0.05，##p＜0.01。
表4：不同濃度紫杉醇、人參皂苷三組分配方3及紫杉醇聯合人參皂苷三組分配方3對MCF-7細胞的細胞存活率(％)
注：紫杉醇聯合人參皂苷三組分配方3與紫杉醇組相比，#p＜0.05，##p＜0.01。
表5：不同濃度紫杉醇、人參皂苷三組分配方4及紫杉醇聯合人參皂苷三組分配方4對MCF-7細胞的細胞存活率(％)
注：紫杉醇聯合人參皂苷三組分配方4與紫杉醇組相比，#p＜0.05，##p＜0.01。
表6：不同濃度紫杉醇、人參皂苷三組分配方5及紫杉醇聯合人參皂苷三組分配方5對MCF-7細胞的細胞存活率(％)
注：紫杉醇聯合人參皂苷三組分配方5與紫杉醇組相比，#p＜0.05，##p＜0.01。
表7：不同濃度紫杉醇、人參皂苷三組分配方6及紫杉醇聯合人參皂苷三組分配方6對MCF-7細胞的細胞存活率(％)
注：紫杉醇聯合人參皂苷三組分配方6與紫杉醇組相比，#p＜0.05，##p＜0.01。
由以上結果(表2-表7)可知，6種人參皂苷三組分配方在濃度為0.1-30μM的范圍內對人乳腺癌細胞MCF-7都沒有顯著的生長抑制作用(腫瘤細胞的存活率基本都在80％以上)，而單獨使用紫杉醇時，隨著紫杉醇濃度的不斷增加(0.1-30nM)，MCF-7腫瘤細胞的存活率明顯降低(69.5±6.3％-5.9±1.4％)，且具有濃度劑量依賴特點。更為重要的是，相比于紫杉醇單一組，聯合應用組(即人參皂苷三組分配方聯合紫杉醇)的細胞存活率更低，且具有顯著性差異。說明該6種人參皂苷三組分與紫杉醇聯合應用后，均能夠顯著增強紫杉醇抑制人乳腺癌細胞MCF-7生長的作用。
特別地，當人參皂苷三組分Rg3、Rh2和Re的比例為40％：20％：40％時(配方4)，其與紫杉醇聯合應用后，在實驗所測試的6個濃度下都具有協同抑制腫瘤細胞生長的作用。這些結果預示著在腫瘤化療過程中，同時服用該人參皂苷三組分的特定配方，有助于腫瘤患者的治療和康復。
以上所述的僅是本發明的實施方式，在此應當指出，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明創造構思的前提下，還可以做出改進，但這些均屬于本發明的保護范圍。