本發明涉及藥物活性技術領域，具體提供一種帶有一氧化氮供體的二苯乙烯衍生物的用途。
背景技術：
一氧化氮是一種壽命較短的自由基，半衰期僅數秒鐘，由于其分子小且具有親脂性所以很容易透過細胞膜。在體內由l-精氨酸和氧分子在一氧化氮合酶(nos)催化下生成。一氧化氮在哺乳動物生理和病理生理中發揮著非常重要的作用[agurla,s.；gayatri,g.；raghavendra,a.s.,nitricoxide2014,43,89.]，如參與維持微血管和大血管的動態平衡[jin,r.c.；loscalzo,j.,hematologyresearch&reviews2010,2010(1),147.]、神經信號傳導[esplugues,j.v.,britishjournalofpharmacology2002,135(5),1079.]、免疫炎癥的調節[wallace,j.l.,memóriasdoinstitutooswaldocruz2005,100suppl1(1),5.]、腫瘤發生與轉移[david,h.；tracy,r.,journalofpharmacy&pharmacology2007,59(1),3.]等多種生理病理過程。
糖尿病是世界上最常見的代謝紊亂疾病之一，糖尿病在成人中的發病率在過去幾十年一直在增加。城市化推動了生活方式的急劇變化，特別是在發展中國家，隨著這些快速轉變伴隨著非傳染性疾病如2型糖尿病的風險因素的增加，糖尿病患者的數量和患病率迅速增加。國際糖尿病聯合會(idf)估計，2013年有3.818億糖尿病人，到2035年預計增長55％，達到5919萬。由于許多因素的結合，包括：表現不佳的衛生系統、一般公眾和衛生專業人員的低意識、以及2型糖尿病的癥狀或進展通常緩慢的發作，該病癥可能在多年中仍然未被發現，在此期間可能出現并發癥。隨著人民生活水平的提高、人口的老齡化和生活方式的改變，糖尿病目前已是繼心血管疾病和腫瘤之后的第三大非傳染性疾病，給社會和經濟帶來了沉重的負擔，嚴重威脅人類的健康。糖尿病本身并不可怕，可怕的是它的并發癥。糖尿病并發癥涉及全身各個器官，是導致血腦血管疾病、腎病、失明、足壞死等嚴重疾病的主要原因。
葡萄糖苷酶是生物體內糖代謝途徑中的重要成員之一。β-葡萄糖苷酶可以參與纖維素的代謝以及多種生理生化途徑，α-葡萄糖苷酶更是直接參與淀粉及糖原的代謝途徑。這類酶的功能發生異常會導致出現代謝類的疾病，同時這類酶也是多種藥物與抑制劑的作用靶點，用以調節人體內的糖化學代謝。α-葡萄糖苷酶抑制劑是一類以延緩腸道碳水化合物吸收而達到治療糖尿病的口服降糖藥物。α-葡萄糖苷酶抑制劑是比較成熟的治療糖尿病藥物，已廣泛應用于臨床。其作用機制為：競爭性抑制位于小腸的各種α-葡萄糖苷酶，使淀粉類分解為葡萄糖的速度減慢，從而減緩腸道內葡萄糖的吸收，降低餐后高血糖。α-葡萄糖苷酶抑制劑不刺激β細胞分泌胰島素，但可降低餐后胰島素水平，說明可增加胰島素的敏感性。目前多種α-葡萄糖苷酶抑制劑已經被批準在臨床用于糖尿病的治療，如拜唐蘋(阿卡波糖)，倍欣(伏格列波糖)。
醛糖還原酶在哺乳動物體內催化葡萄糖向山梨醇的轉化，這是糖尿病后遺癥如白內障和神經疾病的主要起因。醛糖還原酶抑制劑可有效抑制糖尿病病人許多器官中山梨醇含量的異常升高。
糖基化終產物(advancedglycationendproducts，age)在未患糖尿病受試者組織中緩慢增加，但在糖尿病患者體內，由于循環中持續高糖水平加速了age的產生，使其大量蓄積。產生的過量age不僅可以與蛋白質交聯，影響蛋白質性能，也可以通過與特異受體結合，發生反應來改變細胞功能，從而導致機體的病理變化。age與糖尿病腎病、視網膜病變、神經病變、動脈粥樣硬化等糖尿病并發癥的發生發展密切相關。美國糖尿病控制與并發癥實驗(dcct)和英國糖尿病前瞻性研究(ukpds)等結果證明，皮膚中age濃度的異常升高是提示糖尿病和未來可能發生并發癥的生物標志。
綜上所述，國內外現有藥物對于治療糖尿病和糖尿病引起的并發癥表現出了較好療效。但具有較好協同生物活性的藥物還亟待開發，需要我們對此類化合物進行深入活性研究，開發出具有預防和治療糖尿病及其并發癥的新藥物。
技術實現要素：
本發明的技術任務是針對上述存在的問題，提供一種帶有一氧化氮供體的二苯乙烯衍生物的用途。
本發明還提供一種預防和/或治療糖尿病及其并發癥的組合物。
為實現上述目的，本發明提供了如下技術方案：
由下述結構式為(ⅰ)的化合物與一氧化氮供體拼接的衍生物在制備預防和/或治療糖尿病及其并發癥制劑中的應用，
其中，r1～r10為羥基，烴基或烴氧基，但至少有一個是羥基；一氧化氮供體為-ono2。
結構式為(ⅰ)的化合物與一氧化氮供體拼接的衍生物的制備過程，與公布號為cn106187780a的專利中公開的制備方法相同。
作為優選，所述衍生物用于制備葡萄糖苷酶抑制劑。
作為優選，所述葡萄糖苷酶抑制劑為α-葡萄糖苷酶抑制劑。
作為優選，所述衍生物用于制備醛糖還原酶抑制劑。
作為優選，所述衍生物用于制備ages形成抑制劑。
一種α-葡萄糖苷酶抑制劑，其有效成分為式ⅰ所述化合物與一氧化氮供體拼接衍生物。
一種醛糖還原酶抑制劑，其有效成分為式ⅰ所述化合物與一氧化氮供體拼接衍生物。
一種ages形成抑制劑，其有效成分為式(ⅰ)所述化合物與一氧化氮供體拼接的衍生物。
申請人發現，以結構式為(ⅰ)的化合物與一氧化氮供體拼接的衍生物作為有效成分的葡萄糖苷酶抑制劑、醛糖還原酶抑制劑、ages形成抑制劑在預防和/或治療糖尿病及其并發癥方面均具有顯著效果。
本發明的預防和/或治療糖尿病及其并發癥的組合物，以式(ⅰ)的化合物與一氧化氮供體拼接的衍生物為有效成分，并含有一種或多種藥學上的常規藥用載體、例如稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、潤濕劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
本發明所述預防和/或治療糖尿病及其并發癥的組合物為藥品或保健品。
本發明的所述預防和/或治療糖尿病及其并發癥的組合物可以經口服或非口服等形式，如可通過注射、噴射、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或化學介導的方法導入機體如肌肉、皮內、皮下、靜脈、粘膜組織；或是被其他物質混合或包裹后導入機體。
用于口服時，可以將其制成常規的固體制劑，如片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、膏劑、霜劑等；制成液體制劑如水或油懸浮劑或其它液體制劑，如口服液等。用于非口服給藥時，可將其制成注射液等。
使用量因使用途徑不同而各有不同，對成人來說，作為藥品使用時，每天2mg－10mg比較合適；作為保健品使用時，每天2mg－10mg比較合適。
本發明制劑的各種劑型可以按照藥學領域的常規生產方法制備。例如將活性成份與一種或多種載體混合，然后將其制成所需劑型。
具體實施方式
下面通過具體實施例對本發明的一種帶有一氧化氮供體的二苯乙烯衍生物的用途進行詳細說明，但本發明并不局限于此。
下述實施例中所述試驗方法，如無特殊說明，均為常規方法；所述試劑和生物材料，如無特殊說明，均可從商業途徑獲得。
實施例中所用的8種化合物的結構式如下：
【試驗實施例1】8種衍生物在體外α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定
1、反應溶液的配置
(1)配制底物α-葡萄糖甘(pnpg)溶液：精確稱取0.3766gpnpg，加適量0.1mol/l磷酸緩沖液(ph為6.8)溶解，再用容量瓶準確定容到50ml，配制成25mmol/l的母液。將母液分別稀釋成0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mmol/l7個不同梯度的標準品溶液，備用。
(2)配制α-葡萄糖苷酶的酶溶液：將凍干酶粉用0.01mol/l磷酸緩沖液(ph為6.8)溶解，配制成2u/ml的母液。再將酶液分別稀釋，配制成0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0u/ml的酶溶液，備用。
(3)配制阿卡波糖標準溶液(抑制劑)：精確稱取10mg阿卡波糖水合物標準品，用容量瓶準確定容到10ml，配制成1000μg/ml的阿卡波糖標準母液。將母液分別稀釋成0.1、0.5、1、5、10、20、40、60μg/ml不同梯度的標準品溶液，備用。
(4)配制測試樣品溶液：精確稱取上述8種衍生物各10mg，用容量瓶準確定容到10ml，配制成1000μg/ml的衍生物母液。將母液分別稀釋成1、5、10、100、200、500μg/ml不同梯度的測試樣品溶液，備用。
(5)0.2mol/l的na2co3：稱取2.16gna2co3于燒杯中，加入適量蒸餾水溶解，并定容到100ml，4℃下保存，備用。
2、體外α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定原理
由于pnpg在α-葡萄糖苷酶的作用下能水解產生葡萄糖和pnp，pnp在405nm處有最大吸收，所以測定其吸光度，根據公式便可計算出各樣品α-葡萄糖苷酶的抑制率及ic50值。
3、α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定方法
測定方法參照masaohattori等試驗條件，并做調整。實驗分為空白組、對照組、樣品空白組和樣品組，各反應物按表1中劑量在96孔板中進行加樣，每組3個平行。按表1依次加入pbs緩沖液即磷酸緩沖液、抑制劑溶液和底物，混合均勻，于37℃水浴保溫10min，結束后，取出，加入37℃水浴的酶溶液，充分混勻，于37℃水浴反應20min，結束后加入70μl0.2mol/l的na2co3溶液中止反應。由于pnpg在α-葡萄糖苷酶的作用下能水解產生葡萄糖和pnp，pnp在405nm處有最大吸收，測定其吸光度。
表1各反應物添加計量和順序(單位：μl)
4、試驗結果
根據公式計算出各衍生物及阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶的抑制率及ic50值。
式中，ac為對照組吸光值；ab為空白組吸光值；as為樣品組吸光值；asb為樣品空白組吸光值。
ic50(halfmaximalinhibitoryconcentration)是指被測量的拮抗劑的半抑制濃度。它能指示某一藥物或者物質(抑制劑)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物質，比如酶，細胞受體或是微生物)的半量。在酶活力抑制方面，一定濃度的藥物可以抑制α-葡萄糖苷酶活力，使之下降50％，該濃度稱為50％抑制濃度，即該酶此時的活性是其原有活性的一半。ic50值可以用來衡量藥物抑制該酶作用的強弱，即抑制作用越強，該數值越低。
結果見表2。
表28種衍生物及阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶的ic50值
5、試驗結論
通過計算得知衍生物m401的ic50值為33.33ug/ml，即0.08312umol/ml。阿卡波糖水合物作為陽性對照，其ic50值為0.032ug/ml，即0.04954nmol/ml。
【試驗實施例2】8種衍生物在體外醛糖還原酶抑制活性的測定
1、醛糖還原酶(alr2))的提取
醛糖還原酶從sd大鼠晶狀體中提取。采用已報道的方法，從大鼠眼球中得到，然后做了部分提純。雖然沒有得到高純度的醛糖還原酶，但并不影響測試。由于酶在高溫時很容易失活，所有提取操作在低于4℃進行。從正常殺死的大鼠眼球中迅速提取出晶狀體，然后加入3倍于其體積的冷去離子水(0-4℃)，再用勻漿機勻漿。勻漿液在低溫離心機中以12000g轉速，0-4℃的溫度，離心30min。最后取上清液，即為醛糖還原酶的水溶液，用于酶活性測試。
2、體外醛糖還原酶活性測定原理
在nadph的存在下，醛糖還原酶催化dl-甘油醛還原為甘油，同時nadph轉化為nadp+，而還原態nadph在340nm處有特征吸收，可以測定340nm處光密度的下降速率△abs，間接測定醛糖還原酶的活性。
3、體外醛糖還原酶(ar)抑制活性的測定方法
采用秦祥宇的方法進行測定，酶的活性最佳值是處于nadph吸光度變化在0.011±0.0010吸光度單位/min的范圍內，如果不在此范圍，通過調整酶液濃度來使其達到這一范圍。對測試比色皿要加對照比色皿是為了校正由于非酶因素(比如空氣中氧氣也會氧化nadph)所導致的nadph的氧化。所加試劑順序及用量見表3，各反應試劑均提前在25℃水浴中預熱，混合后20s在340nm波長下，用紫外監測5min，記錄下數據，求斜率記為i0。
表3醛糖還原酶酶活性測定各反應物添加量
4、體外醛糖還原酶(alr2)抑制活性的測定
樣品管反應體系：按照表4所示，分別加入ph6.2的0.2mol/l磷酸緩沖液1.1ml，0.10mmol/lnadph四鈉鹽1.25ml，10mmol/ldl-甘油醛1.25ml，0.5ml的醛糖還原酶水溶液，15ul被測化合物溶液，混勻，20s后開始在紫外分光光度計上測定△abs，測定波長340nm，測定時間5min，溫度為25℃，求斜率記為ix。對照組測定：樣品用dmso溶劑代替；陽性對照組測定：用槲皮素測定。
表4醛糖還原酶抑制測定各反應物添加量
5、試驗結果
計算各衍生物及槲皮素對醛糖還原酶的抑制率及ic50值。
ar抑制率計算：不同提取物對醛糖還原酶的抑制作用采用抑制的百分率表示，計算公式如下：抑制率(％)＝(∣i0-ix∣/∣i0∣)×100％。
對醛糖還原酶的ic50值：
ic50(halfmaximalinhibitoryconcentration)是指被測量的拮抗劑的半抑制濃度。它能指示某一藥物或者物質(抑制劑)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物質，比如酶，細胞受體或是微生物)的半量。在酶活力抑制方面，一定濃度的藥物可以抑制醛糖還原酶活力，使之下降50％，該濃度稱為50％抑制濃度，即該酶此時的活性是其原有活性的一半。ic50值可以用來衡量藥物抑制該酶作用的強弱，即抑制作用越強，該數值越低。
結果見表5。
表58種衍生物及槲皮素對醛糖還原酶的ic50值
6、試驗結論
通過計算得知衍生物m373-2的ic50值為3.05ug/ml，即0.00818umol/ml。槲皮素作為陽性對照，其ic50值為1.12ug/ml，即0.00371umol/ml。
【試驗實施例3】8種衍生物體外ages形成抑制活性的測定
糖基化終產物(advancedglycationendproducts，age)是指在非酶促條件下，蛋白質、氨基酸、脂類或核酸等大分子物質的游離氨基與還原糖的醛基經過縮合、重排、裂解、氧化修飾后產生的一組穩定的終末產物。age與糖尿病腎病、視網膜病變、神經病變、動脈粥樣硬化等糖尿病并發癥的發生發展密切相關。血液葡萄糖長期升高的糖尿病患者易形成此種產物，它在糖尿病的慢性并發癥的形成中起重要作用。大量研究已證明，血清和組織中的糖基化終產物濃度與糖尿病慢性并發癥的嚴重程度有一致關系，而阻止糖基化反應，減少其形成的機會，會減少或減輕并發癥。因此，檢測血清或組織中的ages對判定糖尿病患者的療效如何，對評價并發癥的有無或嚴重程度均有重要意義。ages對人體的害處：一是可以引起體內蛋白質的糖基化，使血管上的蛋白質發生變化，使血管壁減低韌性，易于受損；二是可以與細胞上的受體結合，通過一系列的反應促進炎性細胞因子的釋放，促進炎癥形成和組織損傷；三是可以使血管內皮細胞釋放的一氧化氮失去活性，而一氧化氮是舒張血管的重要分子，于是血管的緊張性增加，與高血壓或血管損傷有關；四是可促進氧自由基的形成，氧自由基可使組織損傷。ages對血管和腎臟的損傷最為嚴重，這正是糖尿病患者的常見并發癥。
1、ages形成抑制活性測定原理
age具有自發熒光的特性，在近紫外光的照射下，能夠在可見光波段發射熒光。在ages的無創熒光快速檢測技術研究中，graaff等使用峰值波長為370nm的激發光照射人體皮膚，發現在420～600nm波段產生自體熒光。
2、體外ages形成抑制活性的測定方法
向含有10毫克/ml牛血清白蛋白的50mmpbs(ph7.4)緩沖液中加入0.2m的葡萄糖，并加入0.02％疊氮化鈉，以防止細菌增長。此反應混合物(3ml)與各種濃度的目標化合物(1ml)混合。在37℃溫育14天后，測定age的熒光強度。用一個熒光分光光度計用激發波長和發射波長分別為350nm和420nm的波長測定。一式三份實驗。氨基胍被用作陽性對照化合物。
3、試驗結果
計算8種衍生物及氨基胍對ages形成的ic50值
ic50(halfmaximalinhibitoryconcentration)是指被測量的拮抗劑的半抑制濃度。它能指示某一藥物或者物質(抑制劑)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物質，比如酶，細胞受體或是微生物)的半量。在ages形成抑制方面，一定濃度的藥物可以抑制ages的形成，ic50值可以用來衡量藥物抑制ages形成作用的強弱，即抑制作用越強，該數值越低。
結果見表6。
表68種衍生物及氨基胍對ages形成的ic50值
4、試驗結論
通過計算得知衍生物m401的ic50值為0.39ug/ml，即0.00105umol/ml。氨基胍作為陽性對照，其ic50值為31.27ug/ml，即0.2842umol/ml。
【制劑實施例1】片劑
按照本領域已知的方法制備片劑，制備每片含有10mg活性組分的100片片劑的配方：
【制劑實施例2】散劑
將帶有一氧化氮供體的二苯乙烯衍生物100克和乳糖100克經研磨、100目過篩、混合均勻后分裝成1000包(每包200毫克，含活性物質100毫克)。
以上所述的實施例，只是本發明較優選的具體實施方式，本領域的技術人員在本發明技術方案范圍內進行的通常變化和替換都應包含在本發明的保護范圍內。