一種口腔生物膜制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及口腔醫用材料領域，尤其涉及到一種口腔生物膜制備方法。
【背景技術】
[0002]膠原蛋白是一種生物性高分子物質，英文學名Collagen。在動物細胞中扮演結合組織的角色。為生物科技產業最具關鍵性的原材料之一，也是需求量十分龐大的最佳生醫材料。其應用領域包括生物醫材料、化妝品、食品工業、研究用途等。
[0003]膠原蛋白是細胞外基質的結構蛋白質，其分子在細胞外基質中聚集為超分子結構。分子量為300KD。膠原蛋白最普遍的結構特征是三螺旋結構。其由3條a鏈多肽組成，每一條膠原鏈都是左手螺旋構型。3條左手螺旋鏈叉相互纏繞成右手螺旋結構，即超螺旋結構閉膠原蛋白獨特的三重螺旋結構，使其分子結構非常穩定，并且具有低免疫原性和良好的生物相容性等。結構決定性質，性質決定用途，膠原蛋白的結構的多樣性和復雜性決定其在許多領域的重要地位。膠原蛋白產品具有良好的應用前景。
[0004]膠原蛋白以其本身的眾多優點:生物相容性好、降解產物易被吸收，最后分解成氨基酸、二氧化碳和水，成為組織工程用生物材料的研究熱點。
[0005]硫酸軟骨素是細胞外基質中的一種糖胺聚糖，糖鏈由交替的葡萄糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺(又稱N-乙酰氨基半乳糖)二糖單位組成，通過一個似糖鏈街區連接到核心蛋白的絲氨酸殘基上。硫酸軟骨素存在于從線蟲到人除植物外的所有生物中，發揮著許多重要的生理功能。雖然多糖的主鏈結構并不復雜，但就硫酸化程度、硫酸基和兩種差異向異構糖醛酸再鏈內的分布來說，呈現高度的不均一性。硫酸軟骨素的精細結構決定著功能的特異性和與多種蛋白質分子的相互作用。
[0006]從材料的選材方面來看，膠原蛋白和硫酸軟骨素均為性能優良的組織工程生物材料，生物相容性良好，可降解吸收。從材料的結構方面來看，單層的薄膜或海綿材料，力學性能及降解適宜性等方面存在著一定的問題。
【發明內容】
[0007]本發明的目的是提供一種口腔生物膜制備方法，以解決現有技術的上述不足。
[0008]本發明的目的是通過以下技術方案來實現:
[0009]本發明提供了一種口腔生物膜制備方法，該制備方法包括下述步驟:
[0010]將I型膠原蛋白加入到0.2% -06%的乙酸溶液中配置成膠原乙酸溶脹液；
[0011]在配置好的膠原乙酸溶脹液中加入硫酸軟骨素，攪拌配置成膠原-硫酸軟骨素漿液；
[0012]將攪拌均勻的膠原-硫酸軟骨素漿液倒入不銹鋼凍干盤中，置于真空冷凍干燥機中進行第一次真空冷凍干燥；
[0013]將第一次真空冷凍干燥后的膠原-硫酸軟骨素漿液利用壓膜機壓制成膠原復合薄膜；
[0014]在兩層膠原復合薄膜中噴涂一層膠原-硫酸軟骨素漿液，放入到真空冷凍干燥機內進行第二次真空冷凍干燥；
[0015]將第二次真空冷凍干燥后的膠原復合薄膜進行高溫真空交聯；
[0016]將交聯后的膠原復合薄膜進行環氧乙烷滅菌，得到膠原-硫酸軟骨素復合口腔生物膜。
[0017]優選的，所述I型膠原蛋白為從牛跟腱中提取的I型膠原蛋白，在加入到
0.2% -0.6%的乙酸溶液中時，控制I型膠原蛋白質量分數在0.3% -0.8%之間，在15°C _25°C溫度下以每分鐘16000r-20000r高速攪拌，配制成膠原乙酸溶脹液。
[0018]優選的，在所述配置好的膠原乙酸溶脹液中加入硫酸軟骨素時，控制硫酸軟骨素的質量分數在0.01% -0.05%之間，10C -20°c下以每分鐘16000r_20000r高速攪拌，配制成膠原-硫酸軟骨素衆液。
[0019]優選的，在將攪拌均勻的膠原-硫酸軟骨素漿液倒入不銹鋼凍干盤中時，倒入后的厚度為5mm±0.5mm。
[0020]優選的，在將膠原-硫酸軟骨素漿液進行真空冷凍干燥時，采用梯度冷卻的方式進行冷卻。
[0021]優選的，所述經壓膜機壓制成的膠原復合薄膜的厚度為l_3mm。
[0022]優選的，所述高溫真空交聯為在90°C -110°C的高溫真空干燥箱中進行高溫真空交聯。
[0023]優選的，所述的交聯方式為物理交聯，交聯時間為24_36h。
[0024]本發明的有益效果為:(1)本發明采用牛跟腱為基材，經過除雜、清洗、酸堿鹽及生物學處理，提取的高純度膠原蛋白制作而成，具有良好的組織相容性，適宜可控的降解吸收性，低抗原性，良好的可塑性和力學性能。
[0025](2)采用兩次真空冷凍干燥的方式的膠原-硫酸軟骨素復合膜，為致密薄膜狀材料，具有良好的力學性能，便于臨床操作及使用要求。
[0026](3)用于口腔科手術后，其三維多孔結構為損傷組織的修復提供了組織工程支架，有利于細胞的侵入及分化生長，可誘導缺損組織的修復再生，其特定的厚度可以有效的阻止軟組織的長入。
【附圖說明】
[0027]下面根據附圖對本發明作進一步詳細說明。
[0028]圖1是本發明實施例所述口腔生物膜制備方法的流程圖。
【具體實施方式】
[0029]如圖1所示，本發明實施例所述的一種口腔生物膜制備方法，該制備方法包括下述步驟:
[0030]步驟一、將I型膠原蛋白加入到0.2% -0.6%的乙酸溶液中配置成膠原乙酸溶脹液；
[0031]具體的，所述I型膠原蛋白為從牛跟腱中提取的I型膠原蛋白，在加入到
0.2% -0.6%的乙酸溶液中時，控制I型膠原蛋白質量分數在0.3% -0.8%之間，在15°C _25°C溫度下以每分鐘16000r-20000r高速攪拌，配制成膠原乙酸溶脹液。
[0032]步驟二、在配置好的膠原乙酸溶脹液中加入硫酸軟骨素，攪拌配置成膠原-硫酸軟骨素漿液；
[0033]具體的，在所述配置好的膠原乙酸溶脹液中加入硫酸軟骨素時，控制硫酸軟骨素的質量分數在0.01% -0.05%之間，10C -20°c下以每分鐘16000r_20000r高速攪拌，配制成膠原-硫酸軟骨素衆液。
[0034]步驟三、將攪拌均勻的膠原-硫酸軟骨素漿液倒入不銹鋼凍干盤中，置于真空冷凍干燥機中進行第一次真空冷凍干燥；
[0035]具體的，在將攪拌均勻的膠原-硫酸軟骨素漿液倒入不銹鋼凍干盤中時，倒入后的厚度為5_±0.5_。在將膠原-硫酸軟骨素衆液進行真空冷凍干燥時，采用梯度冷卻的方式進行冷卻。
[0036]步驟四、將第一次真空冷凍干燥后的膠原-硫酸軟骨素漿液利用壓膜機壓制成膠原復合薄膜；
[0037]具體的，所述經壓膜機壓制成的膠原復合薄膜的厚度為1-3_。
[0038]步驟五、在兩層膠原復合薄膜中噴涂一層膠原-硫酸軟骨素漿液，放入到真空冷凍干燥機內進行第二次真空冷凍干燥；
[0039]步驟六、將第二次真空冷凍干燥后的膠原復合薄膜進行高溫真空交聯；
[0040]具體的，所述高溫真空交聯為在90°C -110°C的高溫真空干燥箱中進行高溫真空交聯。所述的交聯方式為物理交聯，交聯時間為24-36h。
[0041]步驟七、將交聯后的膠原復合薄膜進行環氧乙烷滅菌，得到膠原-硫酸軟骨素復合口腔生物膜。
[0042]下面以具體的實施例對本發明實施例提供的口腔生物膜制備方法進行詳細的解釋。
[0043]實施例1
[0044]1.漿液制備
[0045]1.1原料解凍:
[0046]把自牛跟腱中提取的I型膠原蛋白自冷凍室取出，解凍。
[0047]1.2乙酸溶液制備:
[0048]取2_6ml乙酸至100ml錐形瓶加無菌水至1000ml,