基于paqr3的降低膽固醇、脂肪合成的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，具體地說，本發明涉及基于改變PAQR3功能的降低膽 固醇、脂肪合成和減肥的新方法。
【背景技術】
[0002] 膽固醇又稱為膽醬醇，是存在于動物細胞膜中的一種類固醇物質，W游離膽固醇 和膽固醇醋的方式存在于細胞內，在維持細胞膜適當的膜透性和流動性方面發揮著重要的 作用。膽固醇的主體由環戊焼多氨菲構成，因此賦予了膽固醇分子較為剛性的結構性質。在 主體環的兩端分別是一個極性的居基和一個非極性的碳水化合物鏈，因此，與其他膜脂成 分一樣，膽固醇同時含有的極性和非極性的結構使其在磯脂雙分子層結構中保持正確的體 位。
[0003] 膽固醇不僅是細胞膜的重要組分，也是體內許多重要物質（如維生素 D、膽汁酸、 腎上腺激素、性激素等）的合成前體。此外，膽固醇及其氧化固醇同源物還是許多重要生物 合成途徑中的中間介質，如氧化固醇可W激活某些核受體，某些蛋白質需要膽固醇及其代 謝中間產物的共價修飾才W發揮作用。
[0004] 人體內的膽固醇主要來源于自身合成，食物的補充是次要來源。一個70kg體重 的成年人，體內大約有膽固醇100g,其中每天體內從頭合成約600-900mg，從食物中吸收約 300-500mg。動物組織幾乎所有器官都能合成膽固醇，但肝臟和小腸粘膜是膽固醇自身生物 合成的主要器官，其合成量大約分別占每日新合成膽固醇的50%和24%。其他組織如腎上 腺皮質、脾臟等也可W合成膽固醇。飲食來源的膽固醇主要來自于小腸對膽汁和食物膽固 醇的吸收，即小腸吸收水解的游離膽固醇后將其醋化，與載脂蛋白組成乳糜微粒進入淋己 和血液循環系統。飲食來源的膽固醇對質膜膽固醇的含量影響很小。
[0005] 膽固醇代謝奈亂會導致動脈粥樣硬化等一系列必血管疾病的發生。血液中膽固醇 濃度過高引起高膽固醇血癥，誘發動脈粥樣硬化癥。而動脈粥樣硬化癥又是引起冠必病、中 風、必肌梗死等必血管疾病的最常見原因。此外，血液脂肪酸和甘油H醋水平過高將會引起 高甘油H醋血癥，對膜島素抵抗及2型糖尿病的發生發揮著一定的促進作用。因此，降低膽 固醇成為了預防和治療代謝性疾病的重要方案之一。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的在于提供一種基于PAQR3的降低膽固醇、脂肪合成的新方法。
[0007] 在本發明的第一方面，提供了一種PAQR3或PAQR3調節劑的用途，用于制備藥物或 組合物，所述藥物或組合物用于選自下組的一種或多種用途：
[000引 （1)調節PAQR3與Scap的相互作用；
[0009] 似調節PAQR3與SREBP的相互作用；
[0010] (3)調節SREBP或Scap在高爾基體的定位；
[0011] (4)調節SREBP和Scap的相互作用；
[001引 妨調節膽固醇和/或脂質的合成；和
[0013] (6)預防或治療體內膽固醇和/或脂質異常所引起的疾病。
[0014] 在另一優選例中，所述PAQR3調節劑包括PAQR3枯抗劑和PAQR3激動劑。
[0015] 在另一優選例中，所述PAQR3枯抗劑選自下組：
[001引 （a)降低或抑制PAQR3的活性的物質；
[0017] 化）降低PAQR3的表達或穩定性的物質；
[0018] (C)保留PAQR3與SREBP和Scap中之一的結合功能但與SREBP和Scap中另一者 的結合功能喪失或下降的PAQR3的衍生蛋白或片段；和
[0019] (d)保留PAQR3與SREBP和Scap中至少一種的結合功能但鋪定高爾基體膜功能喪 失或下降的PAQR3的衍生蛋白或片段。
[0020] 在另一優選例中，所述PAQR3激動劑是指具有選自下組功能的物質：
[00川 （a)增強PAQR3的活性；和/或
[002引 化）提高PAQR3的表達或穩定性。
[0023] 另一優選例中，所述PAQR3調節劑選自；抗體、多膚、sh-RNA、dsRNA、miRNA、反義寡 核巧酸、化合物或其組合。
[0024] 在另一優選例中，所述PAQR3枯抗劑選自；抗PAQR3抗體，針對PAQR3的反義寡核 巧酸、Sh-RNA或dsRNA，PAQR3的化學抑制劑。
[00巧]在另一優選例中，所述PAQR3枯抗劑為多膚，所述多膚包括SEQ ID NO. : 30所示的 氨基酸序列，W及任選地穿膜膚序列；優選地，所述穿膜膚序列為（但不限于）：
[0026] 服邸RQRRRo
[0027] 可W用于本發明中的穿膜膚序列可W為其它基于TAT的序列、W及多種其它用于 能夠穿透細胞膜的多膚序列，如文獻"穿膜膚的研究進展"（熊維德等，海峽藥學，Vol 20 NO. 9 2008)中涉及的穿膜膚。
[0028] 在另一優選例中，所述PAQR3枯抗劑為多膚，所示多膚選自下組：
[002引 （A)具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的多膚；
[0030] 度）具有與SEQ ID NO: 2中所示氨基酸序列> 80%同源性（優選地，> 90%的同 源性；等優選地> 95%的同源性；最優選地，> 97%的同源性）的多膚，且所述多膚具有與 SREBP的結合能力和/或具有與Scap的結合能力；
[0031] (C)將SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列經過1-5個氨基酸殘基的取代、缺失或添加 而形成的，且具有與SREBP結合能力和/或具有與Scap的結合能力的衍生多膚。
[0032] 在另一優選例中，含有所述PAQR3枯抗劑的藥物用于：
[003引 （1)降低或阻斷PAQR3與SREBP的相互作用；和/或
[0034] 似降低或阻斷PAQR3與Scap的相互作用；和/或
[00對 做抑制SREBP的激活；和/或
[003引 （4)抑制SREBP下游基因的表達；和/或
[0037] 妨減少SREBP和/或Scap在高爾基體的定位；和/或
[003引 （6)降低或阻斷SREBP和Scap的相互作用；和/或
[003引 （7)抑制膽固醇和/或脂質的合成；和/或
[0040] (8)預防或治療體內膽固醇和/或脂質升高所引起的疾病。
[0041] 在另一優選例中，所述"膽固醇和/或脂質升高所引起的疾病"選自；肥胖、高膽固 醇血癥、動脈粥樣硬化、高甘油H醋血癥、必肌梗死和腦卒中。
[004引在另一優選例中，含有所述PAQR3激動劑的藥物用于：
[004引 （1)增強PAQR3與SREBP的相互作用；和/或
[0044] 似增強PAQR3與Scap的相互作用；和/或
[004引 做增強SREBP的表達或活性；和/或
[004引 （4)增強SREBP下游基因的表達；和/或
[0047] 妨增加 SREBP和/或Scap在高爾基體的定位；和/或
[004引 （6)增強SREBP和Scap的相互作用；和/或
[004引 （7)促進膽固醇和/或脂質的合成；和/或
[0050] 做預防或治療體內膽固醇和/或脂質降低所引起的疾病。
[005。 在另一優選例中，所述"膽固醇和/或脂質降低所引起的疾病"選自：脂肪萎縮癥 和腫瘤惡病質。
[0052] 在另一優選例中，所述 SREBP 選自；SREBP-Ia, SREBP-Ic 和 SREBP-2。
[0053] 本發明的第二方面提供了一種分離的復合物，所述復合物為PAQR3或PAQR3衍生 物與SREBP或Scap相結合所形成的二元復合物；或者，
[0054] 所述復合物為PAQR3或PAQR3衍生物與SREBP和Scap相結合所形成的H元復合 物。
[0055] 在另一優選例中，所述復合物的結構如式I所示：
[0056] B-A-C 式 I
[0057] 式中，
[0058] A 為 PAQR3 或 PAQR3 衍生物；
[0059] B 為無、或 SREBP ;
[0060] C 為無或 Scap,
[006。表示元件A與元件B和/或元件C之間的相互結合的結合力；
[0062] 且B和C不同時為無。
[0063] 在另一優選例中，所述復合物為PAQR3、SREBP和Scap相結合所形成的H元復合 物。
[0064] 在另一優選例中，所述復合物的分子量> IOOKD ;優選地所述復合物的分子量 > 150 邸。
[0065] 在另一優選例中，所述復合物的分子量為100邸-350邸；優選地為150邸-300邸。
[0066] 在另一優選例中，所述PAQR3衍生物包括但不限于；PAQR3蛋白的活性片段、PAQR3 蛋白的截短形式。
[0067] 本發明的第H方面，提供了本發明第二方面所述的復合物的應用，用于篩選藥物 或化合物，所述藥物或化合物促進或抑制所述復合物的形成。
[0068] 在另一優選例中，當應用所述復合物篩選藥物時，所述應用包括步驟：
[0069] (a)在測試組中，在待測物質存在下，培養細胞，并且設置無待測物質的對照組；
[0070] 化）檢測測試組中所述復合物的含量Hl并與對照組中的復合物含量冊進行比較， 其中當化顯著高于冊，則表示所述測試物為PAQR3的激動劑；當化顯著低于冊，則表示所 述測試物為PAQR3的枯抗劑。
[0071] 本發明的第四方面，提供了一種調節體內膽固醇和/或脂質水平的方法，包括步 驟；調節PAQR3的活性、表達水平或PAQR3與SREBP或Scap的相互作用。
[0072] 在另一優選例中，當需要降低體內膽固醇和/或脂質水平時，執行降低PAQR3的活 性或表達水平的步驟；
[0073] 當需要提高體內膽固醇和/或脂質水平時，執行增強PAQR3的活性或表達水平的 步驟。
[0074] 在另一優選例中，所述方法包括步驟；給需要的對象施用本發明第二方面所述的 復合物的激動劑。
[0075] 在另一優選例中，所述方法包括步驟；給需要的對象施用本發明第二方面所述的 復合物的抑制劑。
[0076] 本發明的第五方面，提供了一種蛋白或其調節劑的用途，所述的蛋白選自下組： PAQR3、Scap、SREBP或其組合，并且所述蛋白和/或其調節劑用于制備調控本發明第二方面 所述復合物形成的組合物。
[0077] 在另一優選例中，所述的組合物包括藥物組合物。
[0078] 在另一優選例中，所述的調節劑包括枯抗劑或激動劑。
[0079] 在另一優選例中，所述"枯抗"指抑制本發明第二方面所述的復合物的形成。
[0080] 在另一優選例中，所述"激動"指促進本發明第二方面所述的復合物的形成。
[008。 在另一優選例中，所述調節劑包括PAQR3的衍生蛋白。
[008引在另一優選例中，所述PAQR3的衍生蛋白選自下組：
[008引 （A)具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的多膚；
[0084] 度）具有與SEQ ID NO: 2中所示氨基酸序列> 80%同源性（優選地，> 90%的同 源性；等優選地> 95%的同源性；最優選地，> 97%的同源性）的多膚，且所述多膚具有與 SREBP的結合能力和/或具有與Scap的結合能力；
[0085] (C)將SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列經過1-5個氨基酸殘基的取代、缺失或添加 而形成的，且具有與SREBP結合能力和/或具有與Scap的結合能力的衍生多膚。
[0086] 本發明的第六方面，提供了一種藥物篩選方法，所述方法包括檢測本發明第二方 面所述的復合物是否形成的步驟和/或檢測本發明第二方面所述的復合物的含量的步驟。
[0087] 在另一優選例中，所述方法包括步驟：
[008引 （a)設置具有待測物質的測試組，并且設置無待測物質的對照組；
[0089] 化）檢測測試組中所述復合物的含量化并與對照組中的復合物含量冊進行比較， 其中當Hl顯著高于冊，則表示所述測試物為PAQR3的激動劑；當Hl顯著低于冊，則表示所 述測試物為PAQR3的枯抗劑。
[0090] 本發明的第走方面，提供了一種治療或預防體內膽固醇和/或脂質水平異常引起 的疾病的方法，包括