一種治療腫瘤的藥物組合物及其制備方法
【專利摘要】本發明屬生物醫藥技術領域，具體涉及一種由治療有效量的PI3K抑制劑5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine和吉西他濱組成的藥物組合物及其制備方法。本發明的藥物組合物作為聯合制劑供同時、分開或順序使用用于治療腫瘤，經體外實驗和體內實驗，結果顯示，能夠獲得優于兩種藥物單獨使用的藥效，對細胞的抑制作用更明顯，對PANC-1體內移植瘤模型的抑制作用顯著強。
【專利說明】
一種治療腫瘤的藥物組合物及其制備方法
技術領域
[0001]本發明屬生物醫藥技術領域，涉及一種治療腫瘤的藥物組合物及其制備方法；具體涉及治療腫瘤的？131(抑制劑 5-(2, 6-dimorpholinopyrimidin-4-yl) ~4~ (trif Iuoromethyl)pyridin-2-amine和吉西他濱的藥物組合物及其制備方法。
【背景技術】
[0002]據報道，近年來腫瘤的發病率呈逐年上升趨勢。目前抗腫瘤藥物治療的方法包括化療、分子靶向治療、中醫藥以及支持對癥治療等。隨著分子生物學和基因組學的發展，研究發現腫瘤的發生、發展和轉移與多種基因突變及細胞信號傳導通路的異常密切相關，因此，分子靶向藥物單獨使用或聯合干預已成為腫瘤治療技術領域中新的研究熱點。研究顯示，蛋白酪氨酸激酶是一類具有酪氨酸激酶活性的蛋白質，主要分布在細胞膜上，其功能是催化ATP的磷酸基轉移到下游蛋白的酪氨酸(Tyr)殘基上，使其發生磷酸化。蛋白酪氨酸激酶在細胞信號轉導通路中占據了十分重要的地位，調節細胞的生長、分化、死亡等一系列生理生化過程，因此，酪氨酸激酶的功能和腫瘤的發生、發展密切相關；磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的主要功能是催化PIP2轉化為PIP3，從而激活下游信號Akt/mTOR。研究發現，PI3K-AKT-mT0R在廣泛的人類腫瘤譜中失調，該通路中某些基因突變所致的功能異常或缺失會引起正常細胞轉化，促進腫瘤細胞增殖和存活并介導腫瘤細胞的侵襲和迀移，因此，PI3K-AKT-mT0R信號通路已經成為一個很有希望的抗腫瘤治療靶點。
[0003]迄今為止，尚未見有5-(2，6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifIuoromethyl) pyridine-2-amine與鹽酸吉西他濱的組合藥物用于抗腫瘤的相關報道。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是提供一種治療腫瘤的藥物組合物及其制備方法；具體涉及由PI3K抑制劑和吉西他濱組成的治療腫瘤的藥物組合物及其制備方法。
[0005]本發明所述的卩131(抑制劑為5-(2，6-dimorpholinopyrimidin-4-yl) ~4~ (trifluoromethyl)pyridine-2-amine。
[0006]具體的，本發明的治療腫瘤的藥物組合物，其特征在于，由治療有效量的所述的PI3K抑制劑與治療有效量的吉西他濱組成，其中吉西他濱與PI3K抑制劑的摩爾比為500:1 ?1:500。
[0007]本發明的治療腫瘤的藥物組合物，其中的吉西他濱與PI3K抑制劑作為聯合制劑供同時、分開或順序使用。
[0008]本發明中，吉西他濱可以堿基形式或者鹽的形式存在，包括但不限于鹽酸鹽、硫酸土卜筆
ΠΤΤ.0
[0009]本發明中，卩131(抑制劑5- (2, 6-dimorpholinopyrimidin-4-yl) ~4~ (trif Iuoromethyl)pyridine-2-amine可以堿基形式或者鹽的形式存在，包括但不限于鹽酸鹽、硫酸鹽等。
[0010]本發明還提供了一種試劑盒，其包括含有吉西他濱的第一單元和含有的PI3K抑制齊1J 5-(2, 6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)~4~(trifluoromethyl)pyridin-2-amine 第二單元以及包裝說明書或者標簽，所述包裝說明書或者標簽指明試劑盒用于抗腫瘤的治療。
[0011]所述的試劑盒中，吉西他濱可以堿基形式或者鹽的形式存在，包括但不限于鹽酸鹽、硫酸鹽等。
[0012]所述的試劑盒中，5-(2, 6-dimorpholinopyrimidin-4-yl) ~4~ (trif luoromethyl)pyridin-2-amine可以堿基形式或者鹽的形式存在，包括但不限于鹽酸鹽、硫酸鹽等。
[0013]本發明還提供了一種產品，其包含
[0014]5-(2, 6-dimorpholinopyrimidin-4-yI)~4~(trifluoromethyl)pyridin-2-amine和吉西他濱，所述產品為在腫瘤治療中分開、同時或先后使用的組合制品。
[0015]所述的產品中，吉西他濱可以堿基形式或者鹽的形式存在，包括但不限于鹽酸鹽、硫酸鹽等。
[0016]所述的產品中，5-(2，6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridin-2-amine可以堿基形式或者鹽的形式存在，包括但不限于鹽酸鹽、硫酸鹽等。
[0017]本發明的藥物組合物進行了體外人胰腺癌PANC-1、CFPAC-1、Bxpc-3細胞的細胞毒作用試驗，結果表明，所述的吉西他濱與PI3K抑制劑作為聯合制劑使用能顯著增加抗腫瘤的效果。
[0018]本發明中，將5-(2，6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifluoromethyl)pyridine-2-amine與吉西他濱的組合物用于人胰腺癌PANC-1、CFPAC-U Bxpc3細胞實驗，結果顯示，比單獨使用吉西他濱或者 5-(2, 6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)-4-(trifIuoromethyl)pyridin-2-amine對細胞的抑制作用更明顯。
[0019]本發明的藥物組合物進行了實驗動物體內實驗，結果顯示，其中的5-(2，6-dimorpholinopyrimidin-4-yl) -4- (trifluoromethyl) pyridin-2-amine 與鹽酉愛吉西他濱耳關用，具有顯著的體內抗腫瘤作用，比單獨使用吉西他濱或者5-(2, 6-dimorpholino pyrimidin-
4-yl)-4- (trifluoromethyl) pyridin-2-amine 對 PANC-1 體內移植瘤模型的抑制作用顯著強。
[0020]本發明的有益效果:本發明提供了治療腫瘤的藥物組合物，其中的吉西他濱與PI3K抑制劑作為聯合制劑供同時、分開或順序使用，其明顯較單用增加了抗腫瘤的作用，提高了化療的效果。
【附圖說明】
[0021 ] 圖1為本發明的藥物組合物對人胰腺癌細胞PANC-1 (A)、CFPAC-1 (B)、Bxpc-3 (C)的細胞毒作用，其中細胞存活率采用MTT法測定；其中的鹽酸吉西他濱和PI3K抑制劑
5-(2, 6-dimorpholinopyrimidin-4-yl)~4~(trifluoromethyl)pyridin-2-amine 耳關用。
[0022]圖2為本發明的藥物組合物對對PANC-1細胞裸小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用(A)以及對裸小鼠體重的影響(B);其中，鹽酸吉西他濱和5-(2, 6-dimorpholinopyrimidin-4-yl) -4- (trifluoromethyl) pyridin-2-amine 耳關用 ο
【具體實施方式】
[0023]以下結合具體實施例對本發明作進一步說明。但并不意味著本發明僅限于此。
[0024]實施例1
[0025]對人胰腺癌PANC-1、CFPAC-1、Bxpc-3細胞的細胞毒作用試驗
[0026]本實施例中，采用本發明的藥物組合物，其中的吉西他濱與PI3K抑制劑作為聯合制劑供同時、分開或順序使用；其中吉西他濱與PI3K抑制劑的摩爾比為500:1?1:500 ;
[0027]實驗材料:
[0028]人胰腺癌PANC-1、CFPAC-1、Bxpc-3細胞(購自中科院上海細胞庫)于37°C，5%0)2條件下常規培養，培養基為含10%胎牛血清(Hyclone)的DMEM和頂DM (Gibco);鹽酸吉西他濱標準品購自中國藥品生物制品檢定所，母液50mM由DMSO配制；5-(2，6-dimorpholinopyrimidin-4-yl) ~4~ (trifluoromethyl) pyridin-2-amine 貝勾于 Selleck 公司(美國)，母液1mM DMSO配。MTT購自Sigma(美國);
[0029]實驗方法:
[0030](I)分化良好的細胞經胰酶消化，懸浮于常規培養基中，并調節細胞密度為5X 14細胞/ml，100 μ I/孔接種于96孔培養板中，于培養箱中培養過夜；
[0031](2)次日更換培養基，加入系列濃度的藥物(具體濃度如圖1所示，DMSO的濃度小于0.2% )，將給藥后的細胞于37°C，5% CO2條件下培養48小時；
[0032](3)每孔加入10 μ I MTT (5mg/ml)溶液，繼續在培養箱中培養4小時；
[0033](4)洗去培養基，加入100 μ I DMSO,置于搖床上37 °C使充分溶解，以檢測波長570nm測定吸光度的值，。計算細胞的生長抑制率，N = 4，實驗平行三次。
[0034]實驗結果顯示(如圖1所示)，在PANC-1、CFPAC-1、Bxpc-3細胞上
[0035]5-(2, 6-dimorpholinopyrimidin-4-yI)~4~(trifluoromethyl)pyridin-2-amine增加了鹽酸吉西他濱的細胞毒作用。
[0036]實施例2
[0037]對裸小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用實驗
[0038]本實施例中，采用本發明的藥物組合物，其中的吉西他濱與PI3K抑制劑作為聯合制劑供同時、分開或順序使用；其中吉西他濱與PI3K抑制劑的摩爾比為500:1?1:500 ;
5-(2, 6-dimorphol inopyrimidin-4-yl) ~4~ (trifluoromethyl) pyridin-2-amine 和鹽酉愛吉西他濱聯用。
[0039]實驗材料:
[0040]裸小鼠購自上海西普爾一必凱實驗動物有限公司。其余材料同實施例1。
[0041]實驗方法:
[0042](I).收集融合度80%?90%的PANC-1細胞，臺盼藍染色后計數，細胞活力大于90%，制成合適密度的細胞懸液，用ImL注射器(26Gauge針頭)接種在裸小鼠的右側皮下，每只0.1mL ；
[0043](2).平均腫瘤體積達100-200mm3時，隨機分組給藥，各組分別為:對照組、PI3K抑制劑單用組、吉西他濱單用組和聯合用藥組，腫瘤體積和動物體重每周測量2?3次，根據體重調整給藥量，連續3周；
[0044](3).用腫瘤生長體積計算腫瘤生長抑制率(TGI, tumor growth inhibit1n, % ),計算公式:
[0045]TGI (% ) = ( Δ TVcontrol- Δ TVtest) / ( Δ TVcontrol- Δ TVtest) X 100% ；
[0046]Δ TVcontrol為對照組腫瘤體積增加絕對值的平均值，
[0047]Δ TVtest為藥物受試組腫瘤體積增加絕對值的平均值，
[0048](4).根據體重考察藥物的毒性作用。
[0049]實驗結果顯示(如圖2所示)，在PANC-1的裸小鼠皮下移植瘤模型上，鹽酸吉西他濱耳關用 5- (2, 6-dimorphol inopyrimidin-4-yl) ~4~ (trifluoromethyl) pyridin-2-amine具有良好的抗腫瘤作用，明顯強于兩藥單用的抗腫瘤作用。
【主權項】
1.一種治療腫瘤的藥物組合物，其特征在于，由治療有效量的PI3K抑制劑與治療有效量的吉西他濱組成，其中吉西他濱與PI3K抑制劑的摩爾比為500:1?1:500 ; 其中的吉西他濱與PI3K抑制劑作為聯合制劑供同時、分開或順序使用；所述的卩131(抑制劑為 5-(2，6-dimorpholinopyrimidin-4-yl) ~4~ (trif Iuoromethyl)pyridine-2-amineo2.根據權利要求1所述的治療腫瘤的藥物組合物，其特征在于，所述的吉西他濱以堿基形式或者鹽的形式存在，所述鹽選自鹽酸鹽或硫酸鹽。3.根據權利要求1所述的治療腫瘤的藥物組合物，其特征在于，所述的5-(2，6-dimorpholinopyrimidin-4-yl) ~4~ (trif Iuoromethyl) pyridin-2-amine 以喊基形式或者鹽的形式存在，所述鹽選自鹽酸鹽或硫酸鹽。4.一種試劑盒，其特征在于，包括含有吉西他濱的第一單元和含有的5-(2，6-dimorpholinopyrimidin-4-yl) ~4~ (trif Iuoromethyl) pyridin-2-amine 第二單元以及包裝說明書或者標簽，所述包裝說明書或者標簽指明試劑盒用于抗腫瘤的治療。5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述的吉西他濱以堿基形式或者鹽的形式存在，所述鹽選自鹽酸鹽或硫酸鹽。6.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述的5-(2，6-dimorpholinopyrimidin-4-yl) -4- (trifluoromethyl) pyridin-2-amine以堿基形式或者鹽的形式存在，所述鹽選自鹽酸鹽或硫酸鹽。7.一種產品，其特征在于，包含 5- (2, 6-dimorpholinopyrimidin-4-yl) ~4~ (trif Iuoromethyl)pyridin-2-amine和吉西他濱，所述產品為在腫瘤治療中分開、同時或先后使用的組合制品。8.根據權利要求7所述的產品，其特征在于，所述的吉西他濱以堿基形式或者鹽的形式存在，所述鹽選自鹽酸鹽或硫酸鹽。9.根據權利要求7所述的產品，其特征在于，所述的5-(2,6-dimorpholinopyrimidin-4-yl) -4- (trifluoromethyl) pyridin-2-amine以堿基形式或者鹽的形式存在，所述鹽選自鹽酸鹽或硫酸鹽。
【文檔編號】A61K31/7068GK105832758SQ201510024274
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2015年1月16日
【發明人】鄭媛婷, 李濤, 蔡衛民, 孫紅, 趙貝
【申請人】復旦大學