一種氫溴酸加蘭他敏的藥物組合物及其醫藥用圖
【專利摘要】本發明公開了一種氫溴酸加蘭他敏的藥物組合物及其醫藥用途，本發明提供的氫溴酸加蘭他敏的藥物組合物中含有氫溴酸加蘭他敏和一種結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，氫溴酸加蘭他敏、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對急性胃潰瘍損傷具有保護作用；氫溴酸加蘭他敏和化合物(Ⅰ)聯合作用時，對急性胃潰瘍損傷的保護作用進一步增強，可以開發成治療急性胃潰瘍損傷的藥物，與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
一種氫溴酸加蘭他敏的藥物組合物及其醫藥用途
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，涉及氫溴酸加蘭他敏的新用途，具體涉及氫溴酸加蘭 他敏的藥物組合物及其在急性胃潰瘍損傷中的應用。
【背景技術】
[0002] 氫溴酸加蘭他敏為抗膽堿酯酶藥，有較弱的抗膽堿酯酶作用，能透過血腦屏障，故 對中樞神經系統作用比較強。使受阻礙的神經肌肉傳導恢復，改善各種末梢神經肌肉障礙 的麻痹狀態。其治療范圍廣，毒性較小，病人較易耐受。臨床主要用于治療脊髓灰質炎(小兒 麻痹癥)后遺癥、肌肉萎縮及重癥肌無力等。也可用于兒童腦型麻痹、外傷性感覺運動障礙、 多發性神經炎及脊神經根炎等。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的在于提供一種氫溴酸加蘭他敏的藥物組合物，該藥物組合物中含有 氫溴酸加蘭他敏和一種天然產物，氫溴酸加蘭他敏和該天然產物可以協同治療急性胃潰瘍 損傷。
[0004] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0005] 一種具有下述結構式的化合物a)，
[0006]
[0007] -種氫溴酸加蘭他敏的藥物組合物，包括氫溴酸加蘭他敏、如權利要求1所述的化 合物(I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0008] 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0009] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0010] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將淡竹葉粉碎，用80~90%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇取物用 大孔樹脂除雜，先用30 %乙醇洗脫6個柱體積，再用85 %乙醇洗脫12個柱體積，收集85 %洗 脫液，減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中85%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d) 步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為20:1、12:1和2:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體 積百分濃度為88%的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~16個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮 得到化合物(I)。
[0011]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用85%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012]進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂。
[0013]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備治療急性胃潰瘍損傷的藥物中的應用。
[0015] 上述氫溴酸加蘭他敏的藥物組合物在制備治療急性胃潰瘍損傷的藥物中的應用。
[0016] 本發明的優點：
[0017] 本發明提供的氫溴酸加蘭他敏的藥物組合物中含有氫溴酸加蘭他敏和一種結構 新穎的天然產物，氫溴酸加蘭他敏和該天然產物單獨作用時，對急性胃潰瘍損傷具有治療 作用;二者聯合作用時，對急性胃潰瘍損傷的治療效果進一步提高，可以開發成治療急性胃 潰瘍損傷的藥物。
【具體實施方式】
[0018] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0019] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0020] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0021]分離方法：（a)將淡竹葉（2kg)粉碎，用85%乙醇熱回流提取（15LX 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 乙酸乙酯萃取物用DlOl型大孔樹脂除雜，先用30%乙醇洗脫6個柱體積，再用85%乙醇洗脫 12個柱體積，收集85%洗脫液，減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中85%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為100:1 (12個柱體積）、50:1 (10個柱體積）、25:1 (8個柱體積)和12:1(8個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組 分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為20:1(6個柱體積）、12:1(8個柱體積)和2:1(6 個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵 合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為88 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~16個柱體積 洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。
[0022] 結構確證:HR-ESI-MS顯示[Μ+Na]+為m/z 319.1208,結合核磁特征可得分子式為 C15H2QO6，不飽和度為 6。核磁共振氫譜數據 δΗ (ppm，DMS〇-d6，600MHz ):H-l(6.37，d，J = 3.0)， Η-3(6· 10，s)，H-5(2.35，d，J = 4.2)，H-6(4.63，d，J = 3.0)，H-7(4.51，d，J = 3.0)，H-9 (2.19，t，J=4.2)，H-10(3.48，m)，H-10(3.85，m)，H-ll(5.03，s)，H-ll(5.09，s)，H-2' (2.07，m，2H)，H-3'（2.13，m)，H-4'（0.89，d，J = 7.2)，H-5'（0.91，d，J = 6.6);核磁共振碳譜 數據Sc(ppm，DMS〇-d6,150MHz ):89.5(CH，1-C)，98.8(CH，3-C)，139.7(C，4-C)，35.6(CH，5-C)，91.1(CH，6-C)，78.2(CH，7-C)，97.3(C，8-C)，40.1(CH，9-C)，62.4(CH2，10-C)，111.6 (CH2，ll-C)，171.3(C，r-C)，42.8(CH2,2'-C)，25.2(CH，3'-C)，21.7(CH 3,4'-C)，21.8(CH3， 5'-C) 光譜表明該化合物含有羥基，羰基和烯烴結構（3457cm-S 1745cm-1和1666cm-4。 1H-NMR 譜顯示一個異戊酰基結構[5!10.89(3!1，(1，1 = 7.2抱，!1-4'），0.91(3!1，(1，1 = 6.6!^，!1-5'），2.13(1!1，111，!1-3'），2.07(2!1，111，!1-2'）]，一個環外亞甲基質子信號[3!15.03(8，!1-11)和 5.09(8，!1-11)]，一個含氧亞甲基信號[6!13.48(111，!1-10)和3.85(111，!1-10)]，四個含氧次甲基 質子信號[3財.51((1，了 = 3.0!^，!1-7)，4.63((1，了 = 3.0!^，!1-6)，6.10(8，!1-3)，6.37((1，了 = 3. OHz，H-I)]。13C-NMR譜顯示了 15個碳信號，包括兩個甲基，三個亞甲基(一個含氧亞甲基， 一個烯屬亞甲基），七個次甲基（四個含氧次甲基），以及三個季碳(一個烯烴季碳，一個含氧 季碳，一個酯羰基碳）dHMBC譜中，H-I和H 2-2'與C-Γ的相關性表明異戊酰基位于C-I位。 HMBC譜中，H-6與C-4、C-8和C-9以及H-3與C-l、C-5和C-6的相關性表明C-3和C-6之間形成了 一個氧橋。此外，H-7與C-9和C-IO的相關性以及C-7和C-8的核磁數據可知C-7和C-8形成環 氧結構;H 2-IO與C-7，C-8和C-9的相關性表明羥甲基位于C-8位上。ROESY譜中，H-9與H-IO和 H-5，H-5與H-IO的相關性表明H-5和H-9為β構型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文 獻關于相關類型核磁數據，可基本確定該化合物如下所示，立體構型進一步通過ECD試驗確 定，理論值與實驗值基本一致。
[0023] 該化合物化學式及碳原子編號如下：
[0024]
[0025] 實施例2:藥理作用
[0026]本實施例采用乙醇制備小鼠急性胃粘膜損傷模型，測定胃粘膜損傷指數包括小鼠 胃組織SOD活性、MAD及PEG2含量，觀察藥物對急性胃黏膜損傷的治療作用。
[0027] 1、材料與方法
[0028] 1.1動物
[0029]昆明小鼠，（25 ±4)g，雌雄各半，山東中醫藥大學動物中心提供。
[0030] 1.2試劑與樣品
[0031]氫溴酸加蘭他敏購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實施 例1。三九胃泰顆粒購自三九醫藥股份有限公司。超氧化物歧化酶（SOD)試劑盒、丙二醛 (MD)試劑盒均購自上海藍基生物科技有限公司。
[0032] 1.3儀器
[0033] 紫外可見分光光度計(型號:UV-2450/2550)，日本島津公司生產。
[0034] 1.4小鼠分組及模型制備
[0035]選取健康小鼠60只（雌雄各半），隨機分為6組，分別為空白對照組、模型對照組、陽 性對照組(三九胃泰顆粒)和氫溴酸加蘭他敏組(80mg · kg<)、化合物（I)組(80mg · kg-4、 氫溴酸加蘭他敏與化合物（I)組合物組【40mg · kg<氫溴酸加蘭他敏+40mg · kg<化合物 (I )】。模型對照組和空白對照組給予生理鹽水，其他給藥連續灌胃IOd。末次給藥后禁食不 進水24h，在最后一次給藥Ih后，除空白對照組外，每只均灌胃給無水乙醇，按0.1mL/10g給 藥。
[0036] 1 · 5胃組織SOD活性、MAD含量測定
[0037]胃大體標本的制備:動物處死后，將其置于冰盒上，快速取全胃，沿胃大彎剪開，用 生理鹽水沖洗胃壁內側，展平置于體顯微鏡下觀察胃粘膜損傷程度。根據試劑盒說明測定 組織SOD活性、MD含量測定。
[0038] 1 · 6胃組織PGE2含量測定
[0039] 取胃組織勻漿2mL，4°C3000rpm離心15min后取上清液，以放射法測定PGE2含量。
[0040] 1.7統計學方法
[0041] 用Excel工作表進行分析，各試驗組與對照組之間采用t檢驗進行比較。
[0042] 2、實驗結果
[0043] 2.1對急性胃粘膜損傷模型小鼠胃組織中S0D、MAD、PGE2含量的影響
[0044] 與空白對照組比，模型對照組SOD含量降低(P〈0.05)、MAD含量升高(P〈0.05)、PGE2 含量降低（P〈 〇 . 〇 5)，說明造模成功；與模型對照組比，陽性對照組S 0 D含量顯著升高（P〈 0.01)、MAD含量顯著降低(P〈0.01)、PGE2含量升高(P〈0.05);與模型對照組比，氫溴酸加蘭 他敏與化合物（I)組合物組SOD含量顯著升高(P〈0.01)、MAD含量顯著降低(P〈0.01)、PGE 2含 量顯著升高(P〈〇. 01);與模型對照組比，氫溴酸加蘭他敏組、化合物（I)組SOD含量升高(P〈 0.05)、MAD含量降低(P〈0.05)、PGE 2含量升高(P〈0.05)。
[0045] 試驗結果見表1。
[0046]表1對急性胃粘膜損傷模型小鼠胃組織中S0D、MAD、PGE2含量的影響
[0048] 急性胃粘膜損傷是臨床常見的急癥，近幾年發現病理機制主要是內源及外源性攻 擊因子和胃粘膜保護機制的平衡關系失衡，目前已證實，〇Η·自由基和0·自由基與多種類 型的胃粘膜損傷有關，研究認為〇 ·自由基既參與組織細胞的損傷過程，也是細胞正常代謝 的中間產物。由于氧自由基與胃粘膜損傷有關，即參與組織細胞的損傷也是細胞正常代謝 產物。MAD含量的高低間接反映了機體受氧自由基攻擊的程度，SOD能消除自由基，其活性高 低間接反映了機體清除氧自由基的能力。PGE2有抑制胃酸分泌的作用，并且能促進胃粘液 分泌并增加胃粘膜血流量而發揮保護作用，所以其含量高低反映了對胃粘膜的保護能力。
[0049] 上述結果表明，氫溴酸加蘭他敏、化合物（I)單獨作用時，對急性胃潰瘍損傷具有 保護作用;氫溴酸加蘭他敏和化合物（I)聯合作用時，對急性胃潰瘍損傷的保護作用進一步 增強，可以開發成治療急性胃潰瘍損傷的藥物。
[0050] 上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物（I)，~' 〇2. -種氨漠酸加蘭他敏的藥物組合物，其特征在于:包括氨漠酸加蘭他敏、如權利要求 1所述的化合物(I)和藥學上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據權利要求2所述的氨漠酸加蘭他敏的藥物組合物，其特征在于:藥學上可W接受 的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸 附載體或潤滑劑。4. 根據權利要求2所述的氨漠酸加蘭他敏的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片 劑、膠囊劑、日服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將淡 竹葉粉碎，用80~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b) 步驟(a)中正下醇取物用大孔樹脂除雜，先用30%乙醇洗脫6個柱體積，再用85%乙醇洗脫 12個柱體積，收集85%洗脫液，減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中85%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為20:1、12:1 和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為88 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~16個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用85%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為D101型 大孔吸附樹脂。8. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲燒代 替乙酸乙醋進行萃取，得到二氯甲燒萃取物。9. 權利要求1所述的化合物（I)在制備治療急性胃潰瘍損傷的藥物中的應用。10. 權利要求2~4任一所述的氨漠酸加蘭他敏的藥物組合物在制備治療急性胃潰瘍損 傷的藥物中的應用。
【文檔編號】A61K31/366GK105963303SQ201610366836
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月28日
【發明人】王昌榮
【申請人】王昌榮