專利名稱：：長耳齒狀藻的親脂提取物在皮膚再生中的用途、組合物和使用該提取物的化妝方法
技術領域：
：本發明涉及長耳齒狀藻((^/0"^/&^"n'to)中的至少一種親脂提取物在制備用于皮膚再生的化妝組合物中的應用，特別是作為防老劑的用途。
背景技術：
：皮膚是聚集成覆蓋全身的堅固且柔軟的組織的細胞集合。其主要功能是建立對抗外界剌激的保護屏障，同時允許內部和外部介質之間一定的交換。這是很多代謝過程通過器官的生理狀況和環境狀況進行調節的地方。皮膚由兩個相連的層(表皮和真皮)形成，各層均連接有皮下組織。表皮的主要功能是保護身體，其構成皮膚的最表層且為皮膚提供不滲透性和強度。其約每4周自我更新一次。各種細胞類型共存于表皮中；主要為角化細胞(90%)。其特征活性是角蛋白的合成，角蛋白占表皮總蛋白的95%。角蛋白為不溶于水的纖維狀蛋白，其為表皮角質層的成分，保護皮膚不受外界刺激，例如熱、冷、脫水等。表皮與真皮通過稱為真皮表皮交界或表皮基底膜(epidermalbasalmembrane)的區域連接。這一結構使真皮與表皮結合，并提供部分參予皮膚緊張的機械支持。其包括基底角化細胞和真皮纖維原細胞，并含有大量IV型膠原，所述膠原涉及錨斑(anchoringplaques)，將基底膜與乳突真皮(papillarydermis)中的錨斑連接。真皮，即皮膚的內層，是纖維彈性結締組織，由細胞、纖維原細胞組成，分散在稱為細胞外基質的復合介質中。該基質由膠原和彈性蛋白纖維、糖蛋白(也就是纖維粘連蛋白和層粘連蛋白)和蛋白聚糖(通過在核心蛋白上加上糖胺聚糖或GAGS而形成)組成。這些組分的性質和量控制皮膚的機械特性，且作為對老化時的皮膚狀況觀察到的明顯病理生理改進的來源。纖維為皮膚提供硬度、強度、彈性和緊張性。糖蛋白和蛋白聚糖構成體積并參與水合。膠原，特別是來自真皮纖維網的纖維膠原I和III，其為構成75%真皮的蛋白質。其通過賦予皮膚大部分的支持和彈性而扮演力學上的角色。其特別的空間排列為真皮結構提供了一定的剛性，因此對其機械性能做出貢獻。其源自前膠原(即由纖維原細胞合成的前體)。分散在真皮結締組織的纖維之間的蛋白聚糖提供皮膚主要的緊張性。其結構(糖胺聚糖和長鏈多糖形成的聚合物)為蛋白聚糖提供捕獲離子、水和各種代謝物的負電，因而主要對皮膚的保濕和抗壓和抗拉作出貢獻。在老化時，皮膚變皺、松弛、含水量減少并且難以自身修復。這些影響外觀或引起皮膚病的臨床標記是由外在過程和內在過程引起的疊加結果，外在過程基本由UV作用和環境因素(例如污染)的侵害所導致，內在過程由20歲開始的慢性老化所造成的。老化一開始發生在表皮。角質化細胞在其基底層中的分裂能力下降，且表面角質層再生時間延長。表皮細胞分裂能力下降還導致與"細胞長壽"相關的酶(SIR2s)族特別是酶SIRTl的降低。細胞成熟不完全且角質化不再產生正常均勻的角質層，導致表皮厚度減少、干燥且表面粗糙。同時，皮膚深層組織化降低。真皮為皮膚提供內聚和營養的基本功能，其是皮膚受損的主要目標。老化時，纖維原細胞(皮膚的組成物質源)消失或轉變為纖維細胞。結果觀察到纖維粘連蛋白的量降低(1)。纖維粘連蛋白在粘結和細胞功能中、以及降低彈性蛋白纖維的數量和質量方面扮演主要的角色以下物質的減少解釋了真皮彈性的降低和皮膚厚度的減少膠原(1%/年)(2)、糖胺聚糖(3)和TIMP1(與皮膚退化有關的金屬蛋白酶的抑制劑)(4)。使真皮細胞連接在一起的連接物柔軟度的損失是在老人中觀察到的各種挫傷和撕裂的根源。這還解釋了出現眼袋和皮膚細紋以及小外傷時真皮損傷的加重。延長壽命同時欲保持年輕外表的想法促使了對老化過程中皮膚結構變化的研究。皺紋和細紋的出現主要歸究于皮膚的結構性組織，也就是結締組織、角質層和纖維原細胞組織。在其成分中，膠原、彈性蛋白和角蛋白在改善皮膚表面形態方面扮演著重要的角色。抗衰老化妝產品對上述的某些起作用。市場上的許多"提拉"面部處理和項目的目的在于減少皺紋并改善皮膚彈性。這些通常在皮膚表面上作用或僅在上述靶蛋白之一上作用；其效果是暫時的且僅部分地令人滿意。而且，很多施用的化合物不是完全無毒且其慢性使用會引起皮膚問題，例如刺激。其一般使用化學合成或從天然物質萃取而得到，然而化學合成或萃取兩者均十分費時且成本高昂。由于這些原因，需要沒有上述缺點的化合物或組合物，即，無毒、易得且同時作用在幾個靶蛋白上。
發明內容令人驚奇地，申請人發現長耳齒狀藻的親脂提取物可以同時作用在真皮和表皮中的幾個靶點上，并因而可以同時在幾個水平上發揮作用。這樣的提取物還具有可以簡單分離和簡單使用的優點。而且，由于其性質，即親脂性，其尤其富含固醇，這樣的提取物對有機體而言毒性非常低或沒有毒性。長耳齒狀藻的脂質提取物是已知的(CTFA12540)，且在法國專利文件FR-A-2795958中說明了其在抗肥胖方面的用途。因此，本發明涉及長耳齒狀藻中的至少一種親脂提取物在制備用于皮膚再生或防止皮膚變性試劑中的用途。特別是，本發明涉及長耳齒狀藻的親脂提取物在制備用于防止皮膚內在或外在老化的試劑的組合物中的用途，特別是改善皮膚彈性和緊張性和/或防止、減少和/或克服皮膚上出現皺紋或細紋。在另一方面，本發明涉及長耳齒狀藻的親脂提取物在制備用于磨皮、化學去皮或激光磨削后的皮膚再生或改善皮膚再生的試劑中的用途。更確切地說，本發明涉及長耳齒狀藻的親脂提取物在制備用于改善和/或刺激前膠原、纖維粘連蛋白、糖胺聚糖和/或SIRTl合成的試劑中的用途。進而，本發明涉及化妝用組合物或皮膚病用組合物，其包括長耳齒狀藻的親脂提取物和透皮載體媒介(transdermalvectorvehicle)。透皮媒介介質為納米膠體型或納米顆粒型，優選納米膠體型。可提及的納米膠體型透皮載體的實例為納米乳液、脂質體和環糊精。最后，本發明還涉及用于護理和/或處理和/或防止皮膚衰老或皮膚變性的化妝方法，其中將化妝組合物施加在皮膚上，所述化妝組合物包括長耳齒狀藻中的至少一種脂質提取物和化妝可接受的媒介。優選地，長耳齒狀藻的脂質提取物以納米膠體形式存在于媒介中。本發明的最佳實施方式通過以下詳細說明，特別是實施例，說明包含長耳齒狀藻的親脂提取物或這樣的提取物的化妝用組合物的用途，其可以刺激人皮膚的表皮結構，導致受處理的外植體(treatedexplants)中活細胞層數目的增加和表皮厚度的增加。進而，在測量有絲分裂指數或GAGs、纖維粘連蛋白或去乙酰化酶(sirtuins)的表達的具體測試中，利用本發明的親脂提取物得到正結果，即，有絲分裂指數隨著在乳突真皮上的控制或作用而增加，特別是在沿著真皮表皮交界的區域，且在纖維原細胞中的GAGs增加，在受處理皮膚的活組織檢查中SIRT1和纖維粘連蛋白密度高。這意味著表皮和真皮已在長耳齒狀藻的親脂提取物的作用下再生。根據本發明，可以使用任何長耳齒狀藻的親脂提取物，其為藍藻菌、微藻或浮游生物。得到的浮游生物以常用方法處理，得到親脂提取物。這些長耳齒狀藻的親脂提取物可以例如利用己垸或二氯甲烷等有機溶劑常規提取得到。還可以使用任何可以提取長耳齒狀藻脂質相的方法或任何從浮游生物提取親脂提取物的方法。因此，FR-A-2795958說明了利用超臨界流體(例如二氧化碳)的萃取方法。最后，長耳齒狀藻油可購自Codif。這些脂質提取物是親脂的。在任何油、或硅油或其他化妝可接受的親脂物質中的其他親脂提取物都適用于本發明。長耳齒狀藻的親脂提取物在本發明的組合物中的量為組合物總重的0.00150wt%，優選為0.5~20wt%，特別優選為0.110wt%。本發明中所用的術語"透皮載體媒介"指可以使提取物滲透皮膚的媒介。特別是，這樣的媒介為納米膠體。術語"納米膠體"是指任何納米級的、單分散的、尺寸小于約200nm的非固體形式。其通常是表面活性劑類乳液。納米膠體通常包括納米乳液(單層表面活性劑)，但還可包括小尺寸脂質體(至少一個天然磷脂類雙層表面活性劑)或籠分子，例如a-、卩-、或Y-環糊精，其可形成包合絡合物。本發明所用的化妝用組合物為局部施用，且可以任何這類應用中常用的蓋倫制劑形式(galenicalforms)提供，特別是水包油乳液(0/W)、油包水乳液(W/0)、油/水/油三重乳液(o/w/o)或水/油/水乳液(w/o/w)、水凝膠、或水性溶液、水醇溶液或油溶液。因此，透皮載體可以包括OAV、W/0、W/O/W、O/W/O乳液、凝膠或親脂液體。其或多或少為流體，為白色或有色乳霜、潤發油(或發蠟(pomade))、乳液(milk)、洗液(lotion)、漿液(semm)、糊、泡沬或兩相液體。其可以為固態，例如棒狀，或為氣溶膠形式。除了親脂長耳齒狀藻以外，本發明所用的組合物還包含一種或多種賦形劑，其選自與配方中的活性成分有良好相容性的化合物。實例為水溶性天然聚合物，例如多糖(黃原膠、角豆膠、果膠等)或多肽、甲基纖維素類纖維素衍生物、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素或合成的聚合物、泊咯沙姆(poloxamers)、卡波姆(carbomers)、或聚丙烯酸乙烯酯(PVA)或聚乙烯比咯烷酮(PVP)類膠凝劑。最后，本發明的組合物還可以含有各種其他助溶劑類賦形劑(例如乙醇、甘油、苯甲醇)、濕潤劑(例如甘油)、擴散助劑(例如尿素)或抗菌防腐劑(例如0.15%對羥基苯甲酸甲酯)。其還可以含有表面活性劑、穩定劑、乳化劑、增稠劑、其他可以具有補充或可能的協同作用的活性物質、奧立多元素、精油、芳香劑、著色劑、防腐劑、膠原蛋白、化學濾器或礦物濾器、增濕劑或溫水(thermalwater),上述賦形劑可任選加入，如果加入時，可加入其中的一種或多種，本領域技術人員可根據需要選擇其加入量。長耳齒狀藻提取物可以與至少一種其他活性物質組合，例如水化劑。本發明的方法通過局部施用本發明的組合物以常用的方式實行，例如每日一次，每日兩次或于每次皮膚清潔后使用，或在脫皮、磨損和激光處理后加強使用。該方法適用于所有皮膚可以將本發明的組合物涂在臉上，但是也可以涂在身體的其他部位；配方可根據區域的不同而不同和/或可以特定對某一區域。以下實施例僅用于說明本發明，但不限制其范圍。活性測試研究含有長耳齒狀藻的親脂提取物的制劑的再生和抗衰老活性。這項研究可以在從對49歲女性進行的腹部皮膚整形手術獲得的36塊人類皮膚外植體上進行。將所有的外植體在培養基中保持存活4天。將油溶劑(辛酸/癸酸甘油三酸酯(capryliccaprictriglyceride)，"Myritol318NeutralOil"，COGNIS出品)中稀釋并沉積在無菌紙表面的30ul長耳齒狀藻的脂質提取物(Codif)每日涂在外植體上。在處理的第0天和第4天(D0和D4)，從每批取3個外植體(對照10%脂質提取物，1%脂質提取物)制備用于組織研究。進行一般形態說明，即有絲分裂指數和不含酸基的糖胺聚糖表達的評價，得到以下結果。I.一般形態利用PGanter禾口GJolles,pub.GautierVillars(1970)"Histochimienormaleetpathologique"[正常和病理組織化學]中公開的方法進行觀察。對所有外植體進行觀察并顯示從處理的第4天開始，2種測試濃度的稀釋的長耳齒狀藻的脂質提取物的施用誘導了對上皮結構的刺激，導致活細胞層的增加。在涂了10%長耳齒狀藻的脂質提取物后，表皮的厚度增加得更多。II有絲分裂指數禾U用"Effectofraloxafeneonbreastcancercells畫Ki67apoptosis",MDowsett,publishedinCancerEpidemiologyBiomarkers,September(2001)中說明的方法測量有絲分裂指數。在活組織檢測切片上，有絲分裂中的細胞用抗-Ki67、單克隆抗體克隆7B11、小鼠IgGl標記。在丙酮中固定后，在冷凍切片上進行標記。在PBS中將抗-Ki67稀釋到1/100并在室溫下將其涂2小時。用VectastainRTUuniversalvectorrevealingkit(VectastainRTU萬會g載體顯不盒)顯不，參照PK-7200。用物鏡為40的光學顯微鏡觀察，結果為平均每厘米表皮長度。在Gl,S，G2和M相中用抗-Ki67標記細胞表I<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>如表I所示，在D4，用脂類提取物長耳齒狀藻處理的皮膚的活組織檢查觀察到的有絲分裂指數的值高于由未處理的對照組和由稀釋提取物的溶劑得到的值。該值隨著提取物劑量的增加而增加。III.糖胺聚糖(GAGs)的表達用JeanChevreau,JacquelineBellot禾口Marie-JoseCabanier，publishersMaloine，1956在"Formulairedetechniqueshistologiques"[組織學技術文集]中公開的方法研究GAGs的表達。用阿爾新藍PAS(對沒有酸基的GAGs具有特異性)對皮膚外植體的組織切片進行染色，顯示用2種測試濃度的長耳齒狀藻的脂質提取物處理外植體后，皮膚上這些組分顯著增加。在D4清楚顯示的效果用乳突真皮中(特別是在真皮表皮交界處一帶)PAS染色陽性纖維原細胞數目的增加，以及纖維原細胞中GAGs的增加表征。IV纖維粘連蛋白和去乙酰化酶sirtuins(SIRTl)的表達用Fy體dO在ActaDermVenereol1979;59(6):487-92"Studiesonfibronectinintheskin.III.Indirectimmunofluorescencestudiesinlichenplanus(皮膚中纖維粘連蛋白的研究，III.扁平苔蘚中間接免疫熒光研究)"中公開的方法評價纖維粘連蛋白的表達，以檢測纖維粘連蛋白，用DalFarraC禾口DomlogeN在SocCosmChemAnnualSciMeeting,"SIRT1,thehumanhomologuetoSir2etc(SIRT1，Sir2等的人類同類物)",2005,65-66中公開的方法評價去乙酰化酶(SIRT1)的表達，以檢測SIRT1。用特異性抗SIRT1和抗纖維粘連蛋白抗體標記的結果顯示，與用溶劑處理的組織檢測切片或未處理的對照比較，在D4時，用長耳齒狀藻的脂質提取物處理的皮膚得到的組織檢測切片中這些SIRT1和纖維粘連蛋白分子的密度較高。結論上述觀察表明在長耳齒狀藻的脂質提取物的作用下，表皮和真皮發生重建。這些改進表示了更年輕或復原的皮膚的標準。配方實例按照本領域技術人員的標準方式制備以下配方，配方中的百分比(％)表示基于組合物總重量的各組分的重量百分比。在實施例l-4中，加熱至80。C后，通常在強烈攪拌下混合水相和油相，將其乳化。長耳齒狀藻的脂質提取物由Codif提供。實施例l:用于老化皮膚的再生霜A-水相水qsp(sufficientquantityto)100%甘油2.0%戊二醇3.0%黃原膠0.5%防腐齊Uqs(sufficientquantity)卡波姆0.35%B-油相異三十烷(Squalane)15%十六醇2%二十醇/二十二醇/二十垸基葡糖苷1%硬脂酸甘油酯5%長耳齒狀藻的脂質提取物1%水1.5%NaOH0.35%防腐劑+芳香劑qs實施例2:用于中性皮膚的保濕霜A-油相鯨蠟硬脂醇聚醚-2(Ceteareth-2)3.5%鯨蠟硬脂醇聚醚-2124%麥芽油3%<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實施例5:用于成熟皮膚的卸妝水<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實施例6:用于脆弱的和缺乏營養的皮膚的再生油<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實施例7:長耳齒狀藻納米膠體抗衰老液-1-長耳齒狀藻脂類提取物納米膠體的制備將溶解在油(Myritol318-辛酸癸酸甘油三酯)中的長耳齒狀藻的脂質提取物(10%)用乳化劑(AxolC62-硬脂酸檸檬酸甘油酯，Degussa出品，食品級，植物基(onavegetablebase)，HLB為12)穩定。乳化劑相對于油相的比例為0.1。用含有10%甘醇和0.1。/。抗壞血酸鈉的礦泉水(SourceSteAlix,Brittany)按1:3的比例將海水/礦泉水水相(海泉水(marinespringwater)，SOMAIG出品，lieGrande)稀釋。其按照如下生產:用轉子/定子(RAYNERIVMITURBOTEST)將乳化劑分散到熱水相中3分鐘。在高壓下將該第一混合物均勻化700巴(1次)(Lab1000，APV)。冷卻到室溫。加入添加劑和熱敏感的長耳齒狀藻的親脂提取物，用轉子/定子均勻化。再將混合物在高壓下均勻化(700巴，1次)。用光衍射技術(MASTERSIZERHYDRO2000S,MALVERNINSTRUMENTS激光粒度計)驗證顆粒粒徑和單分散性顆粒粒徑為200nm數量級。-2-長耳齒狀藻納米膠體抗衰老液的組成<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實施例長耳齒狀藻納米膠體抗衰老液的人體試驗。對兩組15人(3060歲)進行研究一組(平均年齡41歲)早晚使用安慰劑(即實施例7(-2-)的長耳齒狀藻納米膠體液的賦形劑)49天不間斷；一組(平均年齡45歲)早晚使用實施例7(-2-)的長耳齒狀藻納米膠體抗衰老液49天不間斷。處理的最后，對人做問巻調査，所得反應示于表II中，表示為a%。表II<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>參考文獻(1)Ageingoftheextracellularmatrixanditspathology(細胞夕卜基質的老化及其病理學)，Labat-RobertJandRobertL，ExpGerontol1988,23(1):5-18.(2)Theageingdermis:themaincausefortheappearanceofoldskin(老化的真皮皮膚出現衰老的主要原因)，byLapiereCM,BrJdermato11990,122,Suppl35:5-11.(3)Age-relatedchangesofwatercontentintheratskin(鼠類皮膚的含水量與年齡相關的變化)，byJungJWetal，JDermatolSci1997,145(1):12-9.(4)DownregulationofTissueInhibitorofMatrixmetalloprotease-1(TIMP-1)inagedhumanskincontributestomatrixdegradationandimpairedcellgrowthandsurvival(在老年人皮膚中基質金屬蛋白酶-l(TIMP-l)的組織抑制劑的減量調節對基質退化和受損細胞生長和存活的貢獻)，HomebeckW,PatholBiol2003，51(10):569-73.權利要求1.長耳齒狀藻的親脂提取物在制備用于皮膚重建或防止皮膚變性的試劑中的用途。2.根據權利要求1所述的用途，其為抗內在皮膚或外在皮膚的老化。3.根據權利要求1或2所述的用途，其為改善皮膚的彈性和/或緊張性、和/或防止、減少和/或阻止皮膚出現皺紋或細紋。4.根據權利要求1所述的用途，其為改善磨皮、化學去皮或激光磨削后的皮膚再生。5.根據權利要求14中任一項所述的用途，其為改善和/或刺激前膠原、纖維粘連蛋白、糖胺聚糖和/或SIRTl的合成。6.化妝用組合物或皮膚病用組合物，其包括長耳齒狀藻的親脂提取物和納米膠體類透皮載體媒介。7.根據權利要求6所述的化妝用組合物或皮膚病用組合物，其包括長耳齒狀藻的親脂提取物和納米乳液類透皮載體媒介。8.根據權利要求6所述的化妝用組合物或皮膚病用組合物，其包括長耳齒狀藻的親脂提取物和脂質體類透皮載體。9.根據權利要求6或7所述的化妝用組合物或皮膚病用組合物，其包括長耳齒狀藻的親脂提取物和環糊精類透皮載體。10.根據權利要求6~9中任一項所述的化妝用組合物或皮膚病用組合物，其中所述的透皮載體包括油包水、水包油、水/油/水或油/水/油乳液、凝膠或親脂液體。11.根據權利要求610中任一項所述的化妝用組合物或皮膚病用組合物，其中所述的長耳齒狀藻的親脂提取物的量為組合物總重的0.01~10wt%，優選為0.055wt。/。，更優選為0.1~2wt%。12.用于護理和/或處理和/或防止皮膚衰老或皮膚變性的化妝方法，其中在皮膚上施加化妝用組合物，所述化妝用組合物包括至少一種長耳齒狀藻的親脂提取物和化妝可接受的媒介。全文摘要本發明涉及具有至少一種長耳齒狀藻的親脂提取物的組合物的化妝用途，其用于皮膚再生或對抗皮膚變性。本發明還涉及新配方，其包括作為活性成分的長耳齒狀藻的親脂天然提取物和化妝或皮膚病學合適的透皮納米-膠體類媒介。本發明還涉及對抗皮膚老化或皮膚變性和/或用于皮膚再生的化妝護理方法。文檔編號A61Q19/00GK101357113SQ20081013579公開日2009年2月4日申請日期2008年7月14日優先權日2007年7月13日發明者戴爾芬·東吉,杰勒德·雷濟尼克申請人:太平洋創生公司