專利名稱：一種氟標記脂肪酸心肌代謝顯像劑14(r,s)－氟[的制作方法
技術領域：
一種脂肪酸代謝顯像劑14(R，S)-氟[18F]-6-硫十七烷酸的純化方法，涉及一種氟標記脂肪酸心肌代謝顯像劑。
背景技術：
近十年來，正電子發射斷層(PET)顯像在臨床上已廣泛應用于腫瘤、神經精神疾病和心血管疾病等的臨床和基礎研究，并逐步成為基因功能和新藥開發研究的新的科研手段。PET的應用和發展離不開PET正電子放射性藥物，臨床常用的正電子放射性藥物，由于半衰期短，不能依賴從國外進口，要靠自行研制。在醫用短半衰期核素中，18F具有相對較長的半衰期(110min)，可在PET中心以外近距離使用，近年，國外對18F標記的各種正電子放射性藥物的研究異常活躍。
心肌活力估測的問題一直是近年核心臟病學的熱點，雖然201Tl和99mTc-MIBI單光子計算機斷層(SPECT)心肌灌注顯像做了十分有效的工作，但PET方面，葡萄糖(18F-FDG)心肌代謝顯像和13NH3心肌灌注顯像，被公認為判斷心肌活力的“黃金”標準。國外，脂肪酸心肌SPECT代謝顯像的工作已很深入，國內由于不能批量生產123I，該工作無法深入。
脂肪酸是心肌的主要能量來源，心肌脂肪酸代謝與心肌所處的狀態密切相關，在心肌局部缺血時，心肌脂肪酸的攝取和清除也隨之改變，因此氟標記脂肪酸可用于心肌細胞存活的估測。近年來比較成功的有18F-FTHA和18F-FTP，分別在長鏈脂肪酸的6位和4位雜一硫原子，降低了脂肪酸的β氧化速率，明顯延長其在心肌中的滯留時間，研究表明18F標記脂肪酸通過線粒體氧化攝取，心肌放射性濃集速度可反映長鏈脂肪酸的氧化速率，目前已用于臨床非創傷性地測定心肌底物利用狀態，指導臨床藥物治療。
發明內容
本發明的目的是提供一種脂肪酸代謝顯像劑14(R，S)-氟[18F]-6-硫十七烷酸的純化方法，對文獻的合成方法進行改進。
本發明的技術方案FTHA的合成方法 本發明參照文獻(Degrado TR，et al，J.Labelled Comps andRadiopharmaceuticals，Vol.X X IX，No.9；989-995)制備標記前體14(R，S)-對甲苯磺酰基-6-硫-十七烷酸芐酯(FTHA-OTs)，再進行親核置換標記反應，得到18F標記產物18F-FTHA。本發明在于氟標記產物18F-FTHA的純化方法，上述文獻的方法是將反應混合物用HPLC分離制備，得到產品，而本發明改進為標記結束后，采用1)酯水解后立即加入乙酸(50μl)和水(1ml)，傾去水溶液，用乙醇(0.5～1ml)，將吸附在反應管壁上的18F-FTHA沖洗下來，溶解轉移至一潔凈瓶中，得到產品，或2)加入KOH溶液，在90～95℃酯水解5min后，放冷，加入乙酸(50μl)，水(1ml)，反應混合物過預先用乙醇活化的Sep-Pak18C柱，再用注射用水(10ml)沖洗，棄去沖洗液，用乙醇(2.5ml)將吸附在Sep-Pak18C柱上的18F-FTHA溶解至一潔凈瓶中，過0.22μm無菌濾膜，無需用HPLC分離制備。
所用試劑是以標記前體FTHA-OTs為3～10mg計，酯水解物溶解所需試劑乙酸50μl，水1ml，乙醇0.5～1ml；Sep-Pak18C柱沖洗所用水10ml，乙醇2.5ml。
本發明的有益效果親核標記結束后，反應混合物不經過HPLC分離制備，而是1)酯水解后趁熱加入水進行后處理，2)用Sep-Pak18C柱進行分離制備，與文獻相比，本發明采用的后處理方法不僅操作簡單，耗時短，18F-FTHA的放射化學產額和程度也有所提高，而且經紫外和放射性檢測，18F-FTHA和FTHA的保留時間一致。
圖118F-FTHA和FTHA色譜圖具體實施方式
1、18F標記 由18O(p，n)18F反應生成的無載體18F-(740～1850MBq)，富集在陰離子交換柱QMA上，用1ml K2CO3-K2.2.2溶液將其淋洗至反應管中，在氮氣流下于105℃油浴加熱吹干，殘余物繼續用無水乙腈(3×1ml)共沸蒸干。加入14(R，S)-甲苯磺酰基-6-硫-十七烷酸芐酯(3～10mg)的乙腈溶液(1ml)，90～95℃油浴中反應20min。在上述反應管中加入氫氧化鉀(0.2mol/L，0.5ml)，繼續在90～95℃油浴中進行酯水解反應，反應5min后，a)立即加入乙酸(50μl)和水(1ml)，傾去水溶液，用乙醇(0.5～1ml)將吸附在反應管壁上的18F-FTHA溶解轉移至一潔凈的青霉素瓶中；b)反應混合物過Sep-Pak18C柱(預先用乙醇活化)，再用水(10ml)沖洗，棄去沖洗液，用乙醇(2.5ml)將吸附在Sep-Pak18C柱上的18F-FTHA溶解至一潔凈的青霉素瓶中，過0.22μm無菌濾膜。
2、18F-FTHA注射液制備注射前，將上述樣品加至4～6％的HSA(或BSA)溶液中，于37℃孵育30min后，過0.22μm無菌濾膜即得。
3、RCP測定TLC將產品18F-FTHA點樣于硅膠紙一端，以乙醚為展開劑上行展開，晾干后分段測量，計算RCP。18F-FTHA的Rf為0.9～1.0，游離18F-的Rf值為0.0。
HPLCC-18反相柱(3.9×150mm)，流動相為85％乙腈，流速1.0ml/min。取產品18F-FTHA 10μl(計數約10K)進樣，分別用放射性檢測器和紫外檢測器(λ＝210nm)測定18F-FTHA和FTHA，觀察非標記FTHA的保留時間與標記物的放-射峰的保留時間是否一致，18F-FTHA的Rt為8.78min，游離18F-的Rt值為3.42min，FTHA的Rt為8.00min。
4、18F-FTHA穩定性考察將所得注射液在室溫(25℃)下放置，分別于1h、2h和3h，測定標記物的RCP。
5、PC的測定取標記物(RCP＞90％，5×104cpm)分別加入正辛醇-磷酸鹽緩沖液(0.1mo/LpH7.00和7.40)二相系統(V/V＝3/3)中，混勻，渦旋振蕩3×1min后，4000轉/分離心分離5min，于兩管中分別取1ml正辛醇和1ml水溶液測計數，再取1ml正辛醇注入3.0ml磷酸鹽緩沖液/2.0ml正辛醇二相系統中，如此重復多次，計算[cpm有機相/cpm水]的比值，直至恒定，PC＝1g[cpm有機相/cpm水]6、18F-FTHA體外血漿蛋白結合將18F-FTHA(不加BSA，放射性計數5×104cpm)，加至1ml人血清白蛋白(HSA，10g/L，pH7.40，PBS)中，分別于37℃孵育15s、30s、1min、3min、5min、10min、30min、1h、1.5h和2h后，加入10％的三氯醋酸1ml，離心20min(4000轉/min，)，計算18F-FTHA的體外蛋白結合率。
7、18F-FTHA小鼠體內分布昆明小鼠，體重20～22g，每組3只，共6組。尾靜脈注入18F-FTHA溶液0.2ml(約3.7MBq)后，不同時間斷頭處死，取血、心、肝、脾、肺、腎和骨等臟器，稱重，同時按注射劑量配制標準管，跟蹤測量，計算各主要臟器的放射性占總注射劑量的百分比值(％ID/g濕組織)。
8、大鼠血藥清除動力學SD大鼠4只，從股靜脈注入18F-FTHA注射液0.2ml(14.8MBq)，在注藥后1min、3min、5min、8min、10min、15min、20min、30min、45min、60min、90min、120min和1 80min，從大鼠尾靜脈取血20μl，用γ計數器測放射性，同時按注射劑量配制標準管，跟蹤測量，計算并換算成％ID/ml血，作放射性活度---時間曲線。
9、異常毒性實驗昆明小鼠(18-20g)3只，尾靜脈注入18F-FTHA注射液0.2ml(人用量的1/5)，常規飼養48小時，并由每公斤小鼠接受的量與每公斤人接受的最大量之比計算安全倍數。
權利要求
1.一種氟標記脂肪酸心肌代謝顯像劑14(R，S)-氟[18F]-6-硫十七烷酸的純化方法，其特征是，最終標記物14(R，S)-氟[18F]-6-硫-十七烷酸的純化進行了改進，采用1)加入KOH溶液，在90～95℃酯水解5min后，立即加入乙酸和蒸餾水，用乙醇將吸附在反應管壁上的18F-FTHA溶解轉移至一潔凈瓶中，或2)加入KOH溶液，在90～95℃酯水解5min后，放冷，加入乙酸，水，反應混合物過預先用乙醇活化的Sep-Pak18C柱，再用注射用水沖洗，棄去沖洗液，用乙醇將吸附在Sep-Pak18C柱上的18F-FTHA溶解至一潔凈瓶中，過0.22μm無菌濾膜。
2.根據權利要求1所述的純化方法，其特征是以標記前體FTHA-Ots為3～10mg計，酯水解物溶解所需試劑乙酸50μl，水1ml，乙醇0.5～1ml；Sep-Pak18C柱沖洗所用水10ml，乙醇2.5ml。
全文摘要
一種氟標記脂肪酸心肌代謝顯像劑14(R，S)－氟[
文檔編號C07C319/00GK1528743SQ20031010609
公開日2004年9月15日 申請日期2003年10月17日 優先權日2003年10月17日
發明者吳春英, 陸春雄, 紀書仁, 林祥通, 張政偉, 陳正平, 蔣泉福, 傅榕賡, 張同興, 李曉敏, 王頌佩, 朱鈞清, 曹國憲, 項景德, 薛方平, 管一暉, 趙軍, 劉興黨, 劉平 申請人:江蘇省原子醫學研究所