雜環芐基氨基衍生物，它們的制備以及作為藥劑的應用的制作方法

專利名稱：：雜環芐基氨基衍生物，它們的制備以及作為藥劑的應用的制作方法雜環芐基氨基衍生物，它們的制備以及作為藥劑的應用本發明涉及抑制蛋白激酶活性的雜環芐基氨基衍生物。蛋白激酶是催化磷酸基團從ATP轉移到氨基酸殘基的酶，所述氨基酸殘基如蛋白質上的酪氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或組氨酸。這些蛋白激酶的調節對于控制廣泛多樣的細胞事件是必需的，所述細胞事件包括增殖和遷移。
背景技術：
：已知酪氨酸激酶的不適當的活化涉及各種各樣的疾病狀態，包括炎性、免疫學、CNS病癥，或腫瘤病癥，或骨病。參見例如Susva，M.,等，TrendsPharmacol.Sci.21(2000)489-495;Biscardi,J.S.,等，Adv.CancerRes.76(1999)61-119。酪氨酸激酶是一類蛋白激酶。Src家族代表胞質蛋白酪氨酸激酶的主要家族，由至少8個成員組成(Src，Fyn,Lyn,Yes,Lck,Fgr,Hck和Blk)，它們參與各種各樣的信號轉導途徑(Schwartzberg,P.L.,Oncogene17(1998)1463-1468)。該酪氨酸激酶家族的原型成員是Src，它參與許多細胞類型的增殖和遷移反應(Sawyer,T.，等，ExpertOpin.Investig.Drugs10(2001)1327-1344)。已經顯示Src活性在不同癌癥中升高，所述癌癥例如乳腺、結腸(>90%)、胰腺(>90%)和肝臟(>90%)腫瘤。高度增加的Src活性還與轉移瘤(>90%)和差的預后相關。反義Src信使在裸鼠中阻止結腸腫瘤細胞的生長(Staley，C.A.,CellGrowthDiffer.8(1997)269-274)，提示Src抑制劑可以延緩腫瘤生長。另外，除了它在細胞增殖中的作用，Src還在包括缺氧應激的應激反應途徑中起作用。具有表達反義Src信使的結腸腫瘤細胞的裸鼠具有減少的血管生成(Ellis,L.M.,等，J.Biol.Chem.273(1998)1052-1057)，這提示Src抑制劑可以抗血管生成以及抗增殖。Src破壞與細胞-細胞相互作用有關的E-鈣粘著蛋白(Avizienyte，E.,等,Nat.CellBiol.4(2002)632-638)。低分子量的Src抑制劑防止這種破壞，由此減少癌細胞遷移(Nam,J.S.，等，Clin.CancerRes.8(2002)2430-2436)。Src抑制劑可以防止由VEGF-介導的血管滲透性增加導致的二次損傷，如在卒中之后所看到的(Eliceiri，B.R,等，Mol.Cell.4(1999)915-924;Paul,R.，等，Nat.Med.7(2001)222-227)。Src的阻斷以與其防止VEGF-介導的VP/水腫相同的動力學防止了包括Flk、VE-鈣粘著蛋白、和(3-連環蛋白的復合物的解離，解釋了在VEGF-介導的滲透性中需要Src并且為Src抑制作為急性心肌梗死患者的治療選擇提供了基礎(Weis，S.,等，J.Clin.Invest,113(2004)885-894)。Src還在骨質疏松癥中發揮作用。被遺傳修飾而缺少Src生成的小鼠被發現顯示骨硬化癥，不能再吸收骨(Soriano,P.,等，Cell64(1991)693-702;Boyce,B.F.，等，J.Clin.Invest.90(1992)1622-1627)。該缺陷的特征在于缺少破骨細胞活性。由于破骨細胞通常表達高水平的Src，Src激酶活性的抑制可能在治療骨質疏松癥中有效(Missbach,M.，等，Bone24(1999)437-449)。在現有技術中廣泛已知蛋白激酶的低分子量抑制劑。對于src抑制，這些抑制劑是基于例如噻吩并-吡啶衍生物(US2004/0242883);吡啶并-嘧啶衍生物(WO04/085436);吡啶并-嘧啶酮衍生物(WO04/041823);嘧啶衍生物(WO03/004492和WO01/00213);喹唑啉衍生物(WO01/94341和WO02/016352);異噁唑衍生物(WO02/083668)和卩比唑衍生物(WO02/092573)。從WO04/024897已知，一些苯基-氮雜-苯并咪唑是IgE-介導的免疫應答的抑制劑和細胞因子以及白細胞的抑制物，具有抗增殖效果。并且從WO03/035065中已知，一些苯并咪唑-吡唑和』引唑是激酶抑制劑，特別是作為針對Kdr、Syk和Itk酪氨酸激酶的抑制劑。WO2005/063747描述了吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物作為激酶抑制劑，用于治療激酶相關疾病，如癌癥，病毒感染，早老性癡呆等。發明概述本發明涉及通式I的雜環芐基氨基衍生物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式I其中，R1和R2獨立地表示氫，卣素，烷基，烷氧基，烷氧基垸氧基或酰氨基；R3是氫或垸基；R4是氫，鹵素，烷氧基或垸基；A是二CH-或二N-;及其所有藥用鹽。根據本發明的化合物顯示作為蛋白激酶抑制劑的活性，特別是作為Src家族酪氨酸激酶的抑制劑，并且因此可以有效用于治療由所述酪氨酸激酶介導的疾病。己知Src家族酪氨酸激酶涉及各種各樣的疾病狀態。本發明的化合物可以用作預防和治療例如以下病癥的活性劑移植排斥，炎性腸綜合癥，類風濕性關節炎，銀屑癬，再狹窄，過敏性哮喘，早老性癡呆，帕金森病，卒中，骨質疏松癥，良性增生和癌癥，包括結腸癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌和胰腺癌以及白血病。本發明的目的是式I的化合物和藥用鹽和它們的對映體形式，上述化合物的制備，含有它們的藥物組合物或藥物和它們的制備，以及上述化合物在控制或預防疾病或在制備相應的藥物組合物中的應用，所述疾病特別是以上所述的疾病和病癥。發明詳述本文使用的術語"烷基"表示飽和的、直鏈或支鏈的含有l-6個碳原子、優選1-4個碳原子且更優選1或2個碳原子的烴基，如甲基，乙基，正丙基，異丙基，正-丁基,2-丁基，叔-丁基。本文使用的術語"烷氧基"是指經由氧原子連接的如上定義的烷基基團。實例有例如甲氧基，乙氧基，異丙氧基等。本文使用的術語"烷氧基烷氧基"是指被垸氧基取代的以上定義的垸氧基。實例有例如甲氧基-甲氧基，乙氧基-甲氧基，2-甲氧基-乙氧基，2-乙氧基-乙氧基,4-甲氧基-丁氧基，2-甲氧基-丁氧基，2-乙氧基-丙氧基，3-丙氧基-丁氧基等，優選2-乙氧基-乙氧基。本文使用的術語"酰氨基"是指經由-C(O)-NH-基團連接的如上定義的垸基基團。實例有例如乙酰氨基，丙酰氨基，異丁酰氨基，正丁酰氨基，3-甲基-丁酰氨基，戊酰氨基等。本文使用的術語"鹵素"是指氟，氯，溴和碘，優選氟，氯或溴并且更優選氟和氯。本文使用的術語"治療有效量"的化合物是指化合物的量有效預防、緩解或改善疾病的癥狀或延長被治療受試者的存活時間。確定治療有效量屬于本領域技術范圍內。治療有效量或劑量的根據本發明的化合物可以在寬范圍內變化并且可以以本領域已知的方法測定。該劑量可以根據每個具體病例的個體要求來調整，所述要求包括施用的特定化合物、給藥途徑、被治療的病癥、以及被治療的患者。通常，在口服或腸胃外給藥于體重約70Kg的成人的情形中，約10mg至約10,000mg、優選約200mg至約1,000mg的日劑量應當是適當的，但是當需要時上限可能被超出。所述日劑量可以作為單一劑量或以分劑量施用，或者用于腸胃外給藥，它可以作為連續輸注液提供。如本文使用，"藥用載體"意欲包括任何和所有與藥物給藥相容的材料，包括溶劑，分散介質，包衣材料，抗細菌和抗真菌劑，等滲和吸收延遲劑，和其他與藥物給藥相容的材料和化合物。除了與活性化合物不相容，考慮將任何常規介質或試劑用于本發明的組合物中。輔助的活性化合物也可以被摻入組合物中。優選式I中R4的位置是-(3皿3-皿-鍵的鄰位。本發明的一個實施方案是根據式I的化合物，其中R1是氫，烷氧基垸氧基或酰氨基；R2是氫；和R4是氫或烷基。本發明的另一個實施方案是根據式I的化合物，其中A是；N-。本發明的另一個實施方案是根據式I的化合物，其中R1是氫，烷氧基烷氧基或酰氨基；R2是氫；R4是氫或烷基；和A是N-。本發明的另一個實施方案是根據式I的化合物，其中R1和R2獨立地表示氫或烷基；R3是氫或烷基；R4是氫或烷基；和A是N-o該化合物例如是(1-苯基-乙基)-(2-苯基-3樂咪唑并[4，5-6]吡啶-6-基)-胺。本發明的另一個實施方案是根據式I的化合物，其中R1和R2是氫；R是綜基;R4是氫；和A是N-。本發明的另一個實施方案是根據式I的化合物，其中A是《H-。本發明的另一個實施方案是根據式I的化合物，其中R1是氫，垸氧基垸氧基或酰氨基；R2是氫；R4是氫或垸基；和a是-ch-。本發明的另一個實施方案是根據式I的化合物，其中R1是氫，烷氧基垸氧基或酰氨基；R2是氫；R3是氫；R4是氫或烷基；和a是-ch-。本發明的另一個實施方案是根據式I的化合物，其中R1是氫或烷氧基烷氧基；R2是氫；R3是氫；R4是氫或垸基；和a是k:h-。該化合物例如可以選自由下列各項組成的組(2-甲基-芐基)-(2-苯基-1//-吡咯并[2,3-6]吡啶-5-基)-胺；芐基-{2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-1//-吡咯并[2，3-6]吡啶-5-基}-胺；{2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-1//-吡咯并[2,3-6]吡啶-5-基}-(2-甲基-芐基)-胺；和芐基-(2-苯基-1//-吡咯并[2，3-6]吡啶-5-基)-胺。本發明的另一個實施方案是根據式I的化合物，其中R'是酰氨基；R2是氫；R3是氫；R4是氫或垸基；和a是《h-。該化合物例如可以選自由下列各項組成的組A43-(5-芐基氨基-lH-吡咯并[2,3-W吡啶-2-基)-苯基]-乙酰胺；iV-(3-[5-(2-甲基-芐基氨基)-l/f-吡咯并[2,3-6]吡啶-2-基]-苯基L乙酰胺;胺。AL[4-(5-節基氨基-li7-吡咯并[2，3-6]吡啶-2-基)-苯基]-乙酰胺；禾口,{4-[5-(2-甲基-節基氨基)-1//-吡咯并[2,3-6]吡啶-2-基]-苯基}-乙酰本發明還有另一個實施方案是制備式I化合物的方法，其中(a)式VI的化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>式VI,其中A,R1和R2具有以上在式I中給出的含義，與式VII的化合物反應，式VII，其中R和W具有以上關于式I給出的含義，并且Hal是溴或碘，以獲得各自的式I化合物，(b)從反應混合物中分離所述式I的化合物，和(c)如果需要，轉化為藥用鹽。本發明還有另一個實施方案是制備其中R3是氫的式I化合物的方法，射(a)式VI的化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>式VI，其中A,R'和Fe具有以上關于式I給出的含義，與式viii的化合物反應，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>式viii,其中r"具有以上關于式i給出的含義，以獲得其中r3是氫的各自的式i化合物；Cb)從反應混合物中分離所述式i的化合物，和(c)如果需要，轉化為藥用鹽。通式i的衍生物或其藥用鹽，可以通過本領域技術人員已知適用于制備化學相關的化合物的任何方法來制備。這些方法，當用于制備式i的衍生物或其藥用鹽時，作為本發明的另一個特征而提供，并且通過以下反應路線1或反應路線2的代表性實例來舉例說明，其中除非另外指出，rj,r2,r3和r"具有上文關于式i給出的含義，并且在反應路線1中a是二n-，在反應路線2中a是k:h-。必要的原料可以通過有機化學的標準方法獲得。這些原料的制備方法描述于后附的實施例中。備選地，可以采用與屬于有機化學家普通技術范疇內的方法類似的方法獲得必要的原料。反應路線l式i化合物的制備根據式i中"a"的性質不同而不同。其中"a"是:n-的本發明化合物可以按照反應路線1進行制備，并命名為i-a。步驟la<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>反應路線l在反應路線1中，R1，R2，R3和R"具有以上關于式I給出的含義，Y是溴(對于經由步驟2a的路線)或硝基(對于經由步驟2b的路線)，并且Hal是溴或碘。步驟la:式III的芳族醛與式II的2,3-二氨基-吡啶衍生物的縮合可以在60至200°C的升高的溫度下、在適當的溶劑中、任選地在氧化劑的存在下進行，以給出式V-A(其中A是二N-)的化合物，所述溶劑如乙腈、硝基苯、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亞砜(DMSO)、二甲苯或甲氧基乙醇，所述氧化劑如氧或鐵(III)鹽或硫，或2,3-二氯-5，6-二氰基-l,4-苯醌(DDQ)。步驟lb:式IV的芳族羧酸或其適當的衍生物與式II的2，3-二氨基-吡啶衍生物的縮合可以在100-220°C范圍內的溫度下使用縮合試劑如多磷酸、P0C13、或P40u)，任選地與甲磺酸混合來完成，以獲得式V-A(其中A是N-)的化合物。步驟2a:在其中Y是溴的式V-A的化合物中，通過在氨水中在催化劑如CuS04或CuI的存在下加熱，該溴可以被氨基替代，以獲得式VI-A的化合物。可以加入增溶共溶劑如N-甲基-吡咯烷酮(NMP)或二甲基乙酰胺，并且該反應在100-180°C的溫度下在密封容器中進行。備選地，氨基官能度可以以被保護的形式如叔丁氧羰基氨基取代基經過偶聯，在標準Hartwig/Buchwald條件下(例如，使用堿如叔丁醇鈉和鈀催化劑如Pd2(dba)3和膦配體如三叔丁基膦(phosphane))引入。步驟2b:對于其中Y是硝基的式V-A的化合物，硝基基團的還原是通過標準條件完成的如在溶劑如甲醇、乙醇、四氫呋喃(THF)或乙酸乙酯中，在室溫或高達80。C下，用披鈀木炭作為催化劑多相氫化；或在溶劑如甲醇中在回流條件下，用Pd催化劑和甲酸三乙銨多相氫化。該還原也可以用堿金屬如鐵或錫，在酸性介質如乙酸或HC1水或醇溶液中，在室溫至120。C下進行。另一種適當的還原劑是水或甲醇中的硫化銨，或二甲基甲酰胺(DMF)或HC1水溶液中的氯化錫(II)。該還原反應產生相應的式VI-A的化合物。步驟3a:式VI-A化合物之上的氨基部分的垸基化可以用適當的式VII的芐基溴或芐基碘，在惰性溶劑如二甲基甲酰胺、二氯甲烷、甲苯、四氫呋喃(THF)、二甲基甲酰胺(DMF)、或二甲基乙酰胺中，任選地在堿如吡啶、三乙胺、或二異丙基乙胺的存在下完成，獲得式I-A的化合物。適當的溫度是在-20。C至100。C的范圍內。步驟3b:備選地，對于其中R3是氫的式VI-A化合物，在還原性烷基化的條件下可以使用適當的苯甲醛，例如在還原劑如硼氫化鈉或氰基硼氫化鈉的存在下，在溶劑如四氫呋喃(THF)、甲醇、二甲基甲酰胺(DMF)中，或在金屬如鋅或錫的存在下在乙酸中。也可以形成中間體席夫堿并且在單獨步驟中從醛和雜環胺中分離，例如通過在通過甲苯磺酸的酸催化下在甲苯、苯或氯仿中縮合，共沸去除水，或者通過在三氟化硼或四氯化鈦的存在下縮合。席夫堿可以隨后通過上述還原劑，或通過乙醚或THF中的氫化鋁鋰，或通過在惰性溶劑如THF、乙酸乙酯或甲醇中的鈀催化劑上的催化氫化來還原。因此，獲得其中R3是氫的式I-A化合物。反應路線2式I化合物的制備根據式I中"A"的性質不同而不同。其中"A"是二CH-的本發明的化合物可以按照反應路線2進行制備，并且命名為I-B。<formula>complexformulaseeoriginaldocumentpage15</formula>反應路線2在反應路線2，R1,R2,W和I^具有以上關于式I給出的含義并且Hal是溴或碘。步驟1:式IX的乙炔基-芳烴可以與2-氨基-3-溴-5-硝基吡啶在所謂的Sonogashira反應的標準條件下，使用銅催化劑如Cul或CuCl和鈀催化劑如PdCl2(PPh3)2或PdCl2(PhCN)2/PtBu3以及堿如三乙胺或二異丙基胺，在惰性溶劑如四氫呋喃(THF)、二噁烷、二甲基甲酰胺(DMF)或乙腈中偶聯。該反應在室溫或可達160°C的更高溫度下進行，獲得相應的式X的化合物。備選地，式IX的乙炔基-芳烴可以通過本領域已知的方法首先轉化為更為活性的炔基-Zn或-Sn衍生物該乙炔基-芳烴用強堿如丁基鋰去質子化，形成炔基-Li中間體，其與ZnCl2或Bu3SnCl反應，獲得所需的鋅或錫中間體。這些可以隨后在標準交叉偶聯條件下與溴吡啶偶聯，例如在諸如二甲基乙酰胺、THF或甲苯的溶劑中通過鈀膦復合物如Pd(PPh3)4或PdCl2(PPh3)2或Pd2(dba)3/PtBu3催化。步驟2:式X的炔烴中間體的環化以獲得式V-B的吡咯，這可以通過在惰性溶劑如N-甲基-吡咯烷酮(NMP)、四氫呋喃(THF)、二甲基甲酰胺(DMF),或乙醇中，在室溫至回流的溫度下，用堿如叔丁醇鉀、氫化鉀或乙醇鈉處理來實現。備選地，堿可以用催化劑如CuI替代。獲得的式V-B的吡咯然后可以根據步驟3和步驟4a或4b轉化為式I-B的化合物。步驟3,步驟4a和步驟4b:這些步驟類似于在以上反應路線1中描述的步驟2b,步驟3a和步驟3b。某些式I-A或I-B中的取代基可以對上述合成系列的條件不是惰性的，因此可能要求通過本領域己知的標準保護基進行保護。例如，氨基可以作為叔丁氧羰基衍生物進行保護。備選地，一些取代基可以在反應系列結束時由其它衍生。例如，可以合成攜帶硝基取代基的式I化合物，該取代基最終通過標準方法轉化為酰氨基取代基。通式I的化合物可以含有一個或幾個手性中心并且因此可以以外消旋或旋光形式存在。該外消旋物可以按照已知方法分離成對映體。例如，通過與旋光酸反應，從外消旋混合物形成非對映體鹽，其可以通過結晶法分離，所述旋光酸如例如D-或L-酒石酸，苦杏仁酸，蘋果酸，乳酸或樟腦磺酸。備選地，對映體的分離也可以通過使用可商購的手性HPLC-相上的色譜法實現。本發明的化合物可以以其藥用鹽形式存在。術語"藥用鹽"指的是保持式I化合物的生物有效性和特性且由適宜的非毒性有機酸或無機酸或有機堿或無機堿形成的常用酸加成鹽或堿加成鹽。酸加成鹽包括例如來源于無機酸和那些來源于有機酸的那些酸加成鹽，所述的無機酸諸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸；所述的有機酸諸如對-甲苯磺酸、水楊酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、富馬酸等。堿加成鹽包括來源于銨、鉀、鈉和季銨氫氧化物，諸如氫氧化四甲基銨，特別是鈉的那些。將藥物化合物化學改性成鹽是藥物化學工作者眾所周知的技術，目的是為使化合物獲得改善的物理和化學穩定性、吸濕性、流動性和溶解性。例如，在Stahl，PH.和Wermuth,G.,(編輯)，HandbookofPharmaceuticalSalts,VerlagHelveticaChimicaActa(VHCA)，Zurich,(2002)或Bastin,RJ.等，OrganicProc.Res.Dev.4(2000)427-435中描述了該項技術。可以將本發明的化合物及其藥用鹽作為藥劑使用，例如以藥物組合物的形式。可以通過口服，例如以片劑、包衣片、錠齊U、硬明膠膠囊和軟明膠膠囊、溶液、乳劑或混懸劑形式給予所述藥物組合物。然而，還可以通過直腸、例如以栓劑形式或通過胃腸外、例如以注射液形式進行給藥。可以通過用藥物上可接受的無機或有機載體加工本發明的化合物，得到上述藥物制劑。例如，可以將乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽等用作片劑、包衣片、錠劑和硬明膠膠囊的載體。用于軟明膠膠囊的適宜載體有例如植物油、蠟、脂肪、半固體和液體多元醇類等。然而，隨活性物質特性的不同，就軟明膠膠囊而言通常不需要載體。用于生產溶液和糖漿劑的適宜載體例如有水、多元醇類、甘油、植物油等。用于栓劑的適宜載體例如有天然或硬化油、蠟、脂肪、半固體或液體多元醇類等。此外，藥物組合物可以含有防腐劑、增溶劑、穩定劑、濕潤劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、調味劑、用于改變滲透壓的鹽、緩沖劑、掩蔽劑或抗氧化劑。它們還可以含有其它治療上有價值的物質。本發明的一個實施方案是藥物組合物，其含有一種或多種按照式I的化合物作為活性成分、以及藥用載體。本發明的另一個實施方案是藥物組合物，其用于治療由src家族酪氨酸激酶的不適當激活介導的疾病。本發明的另一個實施方案是藥物組合物，其用于治療炎性-、免疫學-、CNS病癥，或骨病。本發明的另一個實施方案是藥物組合物，其用于治療癌癥。本發明的另一個實施方案是藥物組合物，其用于治療結直腸癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、黑素瘤、成神經細胞瘤、宮頸癌、腎臟癌或腎癌，白血病或淋巴瘤。本發明的另一個實施方案是一種或多種按照式I的化合物在制備藥物組合物中的應用，所述藥物組合物用于治療癌癥。本發明的另一個實施方案是一種或多種按照式I的化合物在制備藥物組合物中的應用，所述藥物組合物用于治療結直腸癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、黑素瘤、成神經細胞瘤、宮頸癌、腎臟癌或腎癌，白血病或淋巴瘤。本發明的另一個實施方案是一種或多種按照式I的化合物在制備藥物組合物中的應用，所述藥物組合物用于治療炎性-、免疫學-、CNS病癥，或骨病。本發明的另一個實施方案是一種或多種按照式I的化合物作為src家族酪氨酸激酶抑制劑的應用。本發明的另一個實施方案是一種或多種按照式I的化合物作為細胞信號轉導-調節劑和抗增殖劑的應用。本發明的另一個實施方案是一種或多種按照式I的化合物用于治療炎性-、免疫學-、CNS病癥，或骨病的應用。本發明的另一個實施方案是一種或多種按照式I的化合物用于治療癌癥的應用。本發明的另一個實施方案是一種藥物組合物，其包含治療有效量的按照式I的化合物作為活性成分、以及藥用載體。本發明的另一個實施方案是一種治療癌癥的方法，該方法包括向需要其的個人施用治療有效量的按照式I的化合物。本發明的另一個實施方案是一種治療以下疾病的方法結直腸癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、黑素瘤、成神經細胞瘤、宮頸癌、腎臟癌或腎癌，白血病或淋巴瘤，該方法包括向需要其的個人施用治療有效量的按照式I的化合物。例如通過使用以下方法得到藥物制劑1.將4.0g玻璃珠稱入定制的4cmGL25管(珠填充半支管)。2.加入50mg化合物，用刮刀(spatulum)分散并渦旋。3.加入2ml明膠溶液(珠:明膠溶液重量比=2:1)并渦旋。4.加蓋并用鋁箔包封以避光。5.為研磨物制備平衡重。6.在Retsch研磨機中以20/s研磨4小時(對某些物質以30/s研磨達24小時)。7.通過以400g離心2分鐘，在與接收小瓶連接的過濾儲蓄器上用兩層濾膜(IOOpm)從珠上提取混懸劑。8.將提取物移入量筒。9.用小體積反復洗滌(本文為lml步驟)至達到終體積或提取物澄清。10.用明膠填充至終體積并勻化。上述描述的制備方法產生具有110pm顆粒大小的式I化合物的微混懸劑。該混懸劑適合于口服且用于下述體內藥動學測試。藥理學活性通過使用下列試驗證實本發明化合物作為src-家族酪氨酸激酶抑制劑的活性。SRC-抑制劑-試驗參數:反應混合物ATP肽(Ro+Jal33-Ro):Jal33-RoRoPT66試驗緩沖液l制劑:5)iM10196nM9.8|iM230ng/ml4mMMgC122mMTCEP50mMHEPESO，l%吐溫20pH7.32.5U/ml最大值25pM最小值0.42nM材料Eu-標記的磷酸酪氨酸抗體:-LckCisbioMabPT66-K;-SrcEG&GWallacPT66Eu-W1024(均可商購)。肽類:Ro:NH2-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH2;和Jal33-Ro:Jal33-G-氨基辛酸-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E陽A-K-K-K-K-CONH2，其中Jal33為LightCyder-Red640-N-羥基琥珀酰亞胺酯；由此通過最優化固相肽合成方案(Merrifield,Fed.Proc.Fed.Amer.Soc.Exp.Biol.21(1962)412)，用ZinsserSMP350肽合成儀合成兩種肽類。簡單的說，通過反復偶聯20倍過量的氨基酸將所述肽組裝在160mg(22.8pmol級)Rink-接頭改性的聚苯乙烯固相上，其中所述的氨基酸隨側鏈官能團的不同而各自被臨時的哌啶不穩定的Fmoc-和永久的酸不穩定的叔-Bu-、BOC-和O-叔-Bu-基團保護。底物序列AEEEIYGEFEAKKKK在N-末端還固定有間隔基氨基酸，即氨基辛酸和甘氨酸。在裂解N-末端臨時保護基后，用1.5倍量的LightCycler-Red640-N-羥基琥珀酰亞胺酯(購自RocheDiagnosticsGmbH)和三乙胺標記仍然連接和被保護的肽。3小時后，用二甲基甲酰胺和異丙醇洗滌樹脂，直到藍色樹脂的洗脫液變無色為止。從固相中去除被完全保護和標記的肽，并通過用80%三氟乙酸、10%乙二硫醇、5%硫代茴香醚和5%水的混合物處理使其從永久保護基上釋放。最終通過制備型反相HPLC純化分離底物。該純化步驟得到12.2mgRP-HPLC單峰的純藍色物質(凍干物)。通過MALDI質譜證實同一性[2720.0]。塵UpstateLck(p56lek,活性)、UpstateSrc(p60e-src,部分純化)購自UBI,UpstateBiotech公司。時間分辨熒光試驗:讀出器PerkinElmer,WallacViktor1420-040多標記計數器；液相操作系統BeckmanCoulter,Biomek2000。ATP、吐溫20、4-(2-羥基乙基)-l-哌嗪乙磺酸(HEPES)購自RocheMolecularBiochemicals;MgC2和MnCl2購自MerckEurolab;三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)購自Pierce,384孔低體積熒光板購自Falcon。分析描述首先將所述酶在15。C下的含有相應量本發明抑制劑的水溶液中預保溫15分鐘。然后通過加入含有ATP、肽和PT66的反應混合物且隨后進行振搖，啟動磷酸化反應。立即使用時間分辨熒光光譜在合適的孔平板讀出器上監測反應的進行情況。可以通過使用非線性曲線擬合(XLfit軟件(IDBusinessSolutionLtd.,Guilford,Surrey,UK))由反應速率得到ICso值。<table>complextableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>下列實施例是為了幫助理解本發明而提供的，本發明的實際范圍由后附權利要求所述。應理解，可以在不偏離本發明精祌的情況下對于所述方法進行修改。實驗方法原料2-苯基-3H-咪唑并4，5-bl吡啶-6-基胺a)6-硝基-2-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶將在250mL硝基苯中的14.05g2,3-二氨基-5-硝基吡啶和9.68g苯甲醛加熱至140-150。C達15小時。通過真空蒸餾去除溶劑，將殘余物分散在乙酸乙酯中，過濾，將過濾殘余物用乙酸乙酯充分洗滌。產率16.0gb)2-苯基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-6-基胺將12.0g6-硝基-2-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶溶解在1L乙酸中。加熱18g鐵粉，在攪拌下將混合物加熱至80。C。在2小時后，將混合物冷卻至室溫，通過硅藻土過濾。用甲醇洗滌硅藻土墊，蒸發合并的濾液。將殘余物溶解在甲醇/二氯甲垸1:1中并通過硅膠過濾。將濾液濃縮至100ml體積，獲得的沉淀通過過濾收集并用甲醇洗滌。產率7.68g取代的苯基-乙炔通過US4,162,265A所述的文獻方法，通過酰化3-或4-氨基-苯基乙炔，或者通過文獻方法將3-或4-羥基苯基乙炔烷基化來制備取代的苯基-乙炔。例如，3-(2-甲氧基乙氧基)苯基乙炔將3-羥基苯基乙炔(237mg，2mmol)與2-溴乙基甲基醚(0.23mL,2.4mmo1)和碳酸鉀(322mg,2.4mmo1)在丙酮(5mL)中在微波爐(CEMDiscover)中加熱至110。C達45分鐘。將水(lmL)加入混合物，整個用二氯甲烷(2x25mL)萃取。合并的有機物通過MgS04干燥，過濾并真空濃縮，獲得棕色油。將油通過柱色譜法(Si02,二氯甲烷)純化，獲得3-(2-甲氧基乙氧基)苯基乙炔，為無色油(247mg,70。/。產率)。'H-NMR(400MHz;CDC13):7,23(1H,dd，J8.8，8.0),7.08(1H，dt,J7.6,1.2)，7.04(1H，dd,/1.48,2.7),6.94(1H,ddd,J1.0,2,6,8.3),4.11(2H，f,J4.6),3.74(2H,t,/4.6),3.45(3H,s),3.05(1H,s)。備選地，如在Tsuji,M.,J.Org.Chem.68(2003)9589-9597-輔助信息S.l-36-http:〃pubs.acs.org/subscribe/journals/joceah/suppinfo/jo035090f/jo035090fsi20030918_025110.pdf中關于4-甲氧基苯基乙炔所述，通過Sonogashira偶聯，由相應的碘苯和三甲基甲硅烷基乙炔制備4-(2-甲氧基乙氧基)苯基乙炔。3-(乙酰氨基)苯基乙炔將乙酐(13.8mL,144mmol)滴加到3-乙炔苯胺(14.0g，120mmol)禾卩4-(二甲基氨基-)吡啶(DMAP)(1.5g,12mmoI)在四氫呋喃(300mL)中的溶液。將混合物在室溫下攪拌2小時，將水(100mL)加入混合物，整個用二氯甲烷(2x250mL)萃取。合并的有機物用10%檸檬酸(100mL)、接著飽和碳酸氫鈉溶液(100mL)洗滌，通過MgS04干燥，過濾并真空濃縮，獲得3-(乙酰氨基)苯基乙炔，為黃色固體(18.3g,96。/。)。)H-NMR(400MHz;CDCL3):7.62(1H,s)，7.53(1H,d，J7.7)，7.41(1Hbr.s),7.28-7.22(2H,m),3.06(1H，s)，2.17(3H,s)。實施例1-1:(l-苯基-乙基V(2-苯基-3仏咪唑并[4,5-W吡啶-6-基V胺將來自以上b)的100mg2-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基胺溶解在1mL無水二甲基甲酰胺(DMF)中，室溫下加入92mg1-苯基乙基溴。攪拌混合物18小時，真空去除DMF，將殘余物通過硅膠色譜法純化，首先用二氯甲烷、然后二氯甲烷/甲醇(60:1)、然后二氯甲烷/甲醇虔(60丄0,2)逐步洗脫。富集含有產物的級分，并通過制備HPLC-MS進一步純化。產率17，4mg標題產物。化麗R(400MHz,D6-固S0):8.08(d;2H);7.93(s,1H);7.53-7.43(m:6H);7.33(t，2H);7.20(t，1H);6.79(brs,1H);6.40(brs,1H);4.55(brs,1H);1.49Cd，3H)。實施例2-1:芐基42-3-(2-甲氧基-乙氧基V苯基l-m-吡咯并f2，3-bl吡啶-5-基卜胺a)3-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基乙炔基]-5-硝基-吡啶-2-基胺將3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基乙炔(6.3g,36mmol)加入2-氨基-3-溴-5-硝基吡啶(4g,18mmol)、PdCl2(PPh3)2(966mg，1.38mmol)和Cul(262mg，1.38mmol)在無水四氫呋喃(80mL)中的在暗處的溶液中。室溫下攪拌混合物48小時，然后真空濃縮并再溶劑化在二氯甲烷(150mL)中。用水(25mL)洗滌有機溶液，通過MgS04千燥，過濾并真空濃縮為其20%的原始體積，然后加入庚垸(20mL)。將獲得的黃色固體過濾并干燥，獲得3-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基乙炔基]-5-硝基-卩比啶-2-基胺(4.2g,74%產率)。)H-麗R(400MHz;d6-DMSO):8.89(1H，d,8.34(1H,d，".7)，7.39(1H，m),7.35(1H,d，/8.0),7.30(1H，dt,幾O,7.6)，7.04(1H,ddd,J1.0,2.6,8.2)，4.15(2H,t,J4.5),3.69(2H，t,/4.5)，3.34(3H,s)。MS:M=(ES+)314(M+H)，355(M+乙腈)終產物b)2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-5-硝基-lH-吡咯并[2，3-b]吡啶將叔丁醇鉀(1.18g,10.5mmol)加入3-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基乙炔基]-5-硝基-吡啶-2-基胺(1.57g,5mmol)在四氫呋喃和二甲基甲酰胺的2:1混合物(75mL)中的溶液。將混合物加熱至70。C達16小時，然后真空去除四氫呋喃。將混合物倒在硅膠墊上，用乙酸乙酯、然后乙酸乙酯中的10%甲醇洗脫。真空濃縮有機物至它們原體積的5%，加入水(30mL)。過濾獲得的橙色固體并干燥，獲得2-[3-(2-甲氧基-乙氧萄-苯基]-5-硝基-lH-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.3g，83%)。'H-NMR(400MHz;d6-DMSO):12.88(1H,s)，9.04(1H，d，/2.6)，8.77(1H，d,J2.6),7.52-7.50(2H,m),7.36(1H，app.t,J8.1,7.8)，7.18(1H,s)，6.95(1H,dd,/1.8,8.1),4.15(2H，t，J4.6),3.65(2H,t,J4.6)，3.25(3H,s)。MS:M=(ES+)314(M+H),355(M+乙腈)c)2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-lH-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基胺向2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-5-硝基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(7.1mmo1,2.2g)和鐵粉(6.7g)在乙醇(50mL)中的混合物加入HC1(濃)(0.7mL)和水(5mL)。將混合物在70°C加熱3小時，然后冷卻和過濾通過Celite。真空去除溶劑，將殘余物再溶劑化在乙酸乙酯(30mL)中，用飽和碳酸氫鈉(15mL)洗滌，通過MgS04干燥，過濾和真空濃縮。通過柱色譜法(Si02,乙酸乙酯)純化粗產物，獲得2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-lH-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基胺(1.2g，60%)。'H-NMR(400MHz;d6-DMSO):11.62(1H，s),7.78(1H,d，J2.0),7.53-7.50(2H,m),7.38(1H，app.t,J8.0),7.13(1H,d,J"2.3),6,93(1H,dd,J1.7,8.0),6.75(1H,d，/2.0),4.8(2H,br.s),4.24(2H,t,J4.6),3.76(2H,t,J4.6),3.40(3H,s)。MS:M=(ES+)284(M+H)d)芐基-{2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-111-吡咯并[2，3七]吡啶-5-基}-胺將聚合物支撐的氫硼化物(706mg，1.8mmol)加入2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-lH-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基胺(50mg,0.18mmol)和苯甲醛(18mg,0.18mmol)在甲醇(3mL)中的混合物。攪拌混合物16小時，過濾，真空濃縮并通過制備HPLC純化，獲得芐基-(2-[3-(2陽甲氧基-乙氧基)-苯基]-lH畫吡咯并[2,3七]吡啶-5-基}-胺(4.4mg,7%)MS:M=(ES+)374(M+H),415(M+乙腈)，747(2M+H)使用以上報道的實驗條件(實施例2-l)和適當的原料，制備下列衍生物<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>在通過環化反應制備實施例2-5至2-8的中間體7V-[3-(5-硝基-lH-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-苯基]-乙酰胺中，需要比實施例2-1所需的更高等摩爾量的堿(叔丁醇鉀)。制備N-[3-(5-硝基-lH-吡咯并[2，3-b]吡啶-2-基)-苯基-乙酰胺將叔丁醇鉀(2.25g,20mmol)加入W-[4-(2-氨基-5-硝基誦卩比啶-3-胺乙炔基)-苯基]-乙酰胺(1.48g,5mmol)在四氫呋喃和二甲基甲酰胺的2:1混合物(75mL)中的溶液。將混合物在70。C下加熱16小時，然后真空去除四氫呋喃。將混合物倒在硅膠墊上，用乙酸乙酯中的10%甲醇洗脫。真空濃縮有機物為它們原體積的5%，加入水(30mL)。過濾并干燥獲得的橙色固體，以提供A43-(5-硝基-lH-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-苯基]-乙酰胺(l.Olg,68%)。!H-畫R(400MHz;d6-DMSO):12.97(1H，s)，10.17(1H,s)，9.16(1H,d,8.94(1H，d，J2.5),8.24(1H,s),7.70(1H,d,".8),7.63(1H，d，《/8.2),7.50(1H,app.t，J7.9),7.10(1H,s),2.15(3H，s)。MS:M=(ES+)297(M+H)，338(M+乙腈)，593(2M+H),889(3M+H)權利要求1.式I的化合物，其中，R1和R2獨立地表示氫，鹵素，烷基，烷氧基，烷氧基烷氧基或酰氨基；R3是氫或烷基；R4是氫，鹵素，烷氧基或烷基；A是＝CH-或＝N-；及其所有藥用鹽。2.根據權利要求1的化合物，其中R1是氫，垸氧基烷氧基或酰氨基；R2是氫；和R4是氫或烷基。3.根據權利要求1的化合物，其中R1和R2獨立地表示氫或垸基；R3是氫或烷基；R4是氫或烷基；并且A是,-。4.根據權利要求1或2任何一項的化合物，其中R1是氫，垸氧基垸氧基或酰氨基；R2是氫；R3是氫;R4是氫或烷基;并且A是=CH-。5.根據權利要求l的化合物，其選自由下列各項組成的組(1-苯基-乙基)-(2-苯基-3//-咪唑并[4，5-6]吡啶-6-基)-胺；芐基-{2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-1//-吡咯射2,3-6]吡啶-5-基}-胺；{2-[3-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-1//-吡咯并[2，3-6]吡啶-5-基}-(2-甲基-芐基)-胺；芐基-(2-苯基-1//-吡咯并[2，3-6]吡啶-5-基)-胺；(2-甲基-芐基)-(2-苯基-1樂吡咯并[2,3-6]吡啶-5-基)-胺；A43-(5-芐基氨基-1仏吡咯并[2，34]吡啶-2-基)-苯基]-乙酰胺；AL{3—[5_(2—甲基-芐基氨基)-^—吡咯并[2，3-6]吡啶-2-基]-苯基)-乙酰胺；N-[4-(5-芐基氨基-1//-吡咯并[2,3-6]吡啶-2-基)-苯基]-乙酰胺；禾口^-{4-[5-(2-甲基-芐基氨基)-1//-吡咯并[2,3-6]吡啶-2-基]-苯基}-乙酰胺。6.制備按照權利要求1的其中R3是氫的式I的化合物的方法，其中(a)式VI的化合物，<formula>seeoriginaldocumentpage3</formula>式VI,R'其中A,R1和R2具有以上在權利要求1中關于式I給出的含義,與式VIII的化合物反應，<formula>seeoriginaldocumentpage3</formula>式VIII，其中R"具有以上在權利要求l中關于式I給出的含義，以獲得權利要求i的各自的式i的化合物，其中R3是氫；(b)從反應混合物中分離所述式I的化合物，和(C)如果需要，轉化為藥用鹽。7.—種藥物組合物，其含有根據權利要求1至5的一種或多種化合物作為活性成分、以及藥用載體。8.根據權利要求7的藥物組合物，用于治療癌癥。9.根據權利要求1至5的一種或多種化合物在治療癌癥中的應用。全文摘要本發明的目的是式(I)的化合物，它們的藥用鹽，對映體形式，非對映異構體和外消旋物，上述化合物的制備，含有它們的藥物組合物和它們的制備，以及上述化合物在控制或預防諸如癌癥的疾病中的應用。文檔編號C07D471/04GK101208339SQ200680022962公開日2008年6月25日申請日期2006年7月28日優先權日2005年8月1日發明者喬納森·格里德利,康拉德·霍諾爾德,弗雷德里克·布魯克菲爾德,斯蒂芬·沙伊布勒赫,愛德華·博伊德,雷蒙德·勞申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司