IL-1β結合抗體及其片段的制作方法

專利名稱：：IL-1β結合抗體及其片段的制作方法IL-1(3結合抗體及其片段對相關申請的交叉引用本申請要求2005年6月21日提交的美國臨時申請No.60/692,830的優先權，這里引入其內容作為參考。發明領域本發明涉及IL-1P結合抗體并包括其片段，編碼這些抗體的核酸，以及包含所述抗體或核酸的載體、細胞和組合物，以及它們的應用。發明背景細胞因子的白介素-1(IL-1)家族已經涉及疾病狀態例如類風濕性關節炎(RA)、骨關節炎、克羅恩病(Crohn'sdisease)、潰瘍性結腸炎(UC)、敗血性休克、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、哮喘、移植物抗宿主疾病、動脈粥樣硬化、成人T細胞性白血病、多發性骨髓瘤、多發性硬化癥、中風以及阿爾茨海默病。IL-1家族成員包括IL-lot、IL-1(3和IL-lRa。盡管與它們結合IL-1受體(IL-1R1和IL-1R2)的能力有關，但這些細胞因子的每一種是由不同的基因所表達的，并且具有不同的一級氨基酸序列。而且，這些細胞因子的生理學活性可以被區分。破壞IL-1受體信號傳導的化合物已經被作為治療藥物進行研究以治療IL-1介導的疾病。這些化合物包括重組IL-1Ra(AmgenInc.，ThousandOaks,CA)和IL-1受體"陷阱(trap)"肽(RegeneronInc.,Tarrytown,NY)。結合IL-1細胞因子的動物來源單克隆抗體也已經被研究。然而，由于其免疫原性，因此它們的臨床價值是有限的。例如，已知被給藥小鼠單克隆抗體的人類受試者會產生人抗小鼠抗體(HAMA)。已經報道HAMA會降低單克隆抗體治療的效率，并產生負面反應包括對腎臟的損傷。其它的IL-1p抗體受到它們的結合親和力和/或它們效價(potency)的限制。因此，需要其它能夠阻斷IL-1受體信號傳導的化合物。本發明提供了這類化合物，以及制備和應用這些化合物的方法。簡要概述本發明提供了IL-1P結合抗體或其IL-1p結合片段，其包含SEQIDNO:2的氨基S吏序列。這里還4是供了編碼所述抗體或抗體片段的核酸，以及包含所述核酸的載體，包含所述核酸或載體的細胞，以及包含所述抗體、核酸或載體的組合沖勿。本發明還提供了治療或預防哺乳動物中疾病的方法，其包括為需要治療的哺乳動物給藥有效量的本發明抗體或抗體片段、核酸或載體，這樣在哺乳動物中疾病得到了治療或者預防。本發明提供了一種制備親和力成熟的IL-1(3結合多肽的方法，其包括(a)提供第一核酸和第二核酸，其中所述第一核酸包含編碼IL-1(3結合多肽的核酸序列，所述IL-1P結合多肽包含SEQIDNO:1至SEQIDNO:26中任一項的氨基酸序列，其中所述第二核酸包括與第一核酸序列至少有一個核苷酸不同的核酸序列；(b)進行核酸混編(shuffling)以提供兩種或者多種突變的核酸；(c)選擇編碼突變的核酸，其編碼的多肽(i)以比第一核酸所編碼的多肽高的親和力結合IL-1P,(ii)對于IL-lP具有高于IL-la的選擇性，所述選擇性高于第一核酸所編碼的多肽對IL-1P的選擇性，(iii)對于IL-1P具有比第一核酸所編碼的多肽低的平衡結合解離常數(KD),或者(iv)抑制動物中IL-1P誘導的血清IL-6表達達到高于第一核酸所編碼的多肽高的程度；以及(d)表達所選擇的突變核酸，這樣制備了親和力成熟的IL-1P結合多肽。本發明提供了新型的IL-1P結合抗體或其IL-1P結合片段，其以低于3pM的解離常數結合到人IL-l(3,可選大約2pM或更少，優選大約lpM或更少。這些高親和力抗體祐:設計能夠用于各種治療或者預防IL-1相關的疾病或病癥的方法。可選地，或者另外地，所述IL-lp結合抗體或者IL-ip結合片段結合到IL-1卩抗原決定簇上，這樣所結合的抗體或片段基本上不會防止IL-l卩結合到I型IL-1受體上。可選地，或者另外地，所述IL-1(3結合抗體或者IL-1卩結合片段結合到與這里所描述的示例性抗體的一種或者多種基本上相同的抗原決定簇上，例如被指定為AB7的抗體，其包含重鏈可變區。可選地，或者另外地，所述IL-1卩結合抗體或者IL-1卩結合片段與具有SEQIDNO:11輕鏈可變區以及SEQIDNO:15重鏈可變區的抗體竟爭結合。可選地，或者另外地，本發明包括結合到包含在序列ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE(SEQIDNO:36)中的抗原決定簇的IL-1卩結合抗體或者IL-1(3結合片段。典型的IL-1(3結合抗體包括這里^皮指定為AB5和AB7的抗體。本發明還提供了IL-1結合抗體或其IL-1卩結合片段，其具有小于3pM的解離常數，可選大約lpM或者更低，可選這里所公開的其它解離常數中的任何一種，并且其包含重鏈可變區，其中所述重鏈可變區包含下列氨基酸序列中的一種氨基酸序列SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23或SEQIDNO:24，或者可選地氨基酸序列SEQIDNO:12、SEQIDNO:13或SEQIDNO:21,或者可選地氨基酸序列SEQIDNO:13或SEQIDNO:21，或者可選地氨基酸序列SEQIDNO:8、SEQIDNO:14或SEQIDNO:15，或者可選地氨基酸序列SEQIDNO:8或SEQIDNO:15。所述IL-ip結合抗體或IL-1(3結合片段還可以包含輕鏈可變區，所述輕鏈可變區包含氨基醋列SEQIDNO:9、SEQIDNO:IO或SEQIDNO:11。作為本發明的另一個實施方式，提供了新型的IL-ip結合抗體或其IL-l卩結合片段，其以在大約6pM至大約50pM之間的解離常數結合IL-ip，可選在大約13pM至大約25pM之間，可選大約19pM,其中所述抗體或片段具有小于0.5nM(500pM)的IC5G，可選在大約5pM至大約200pM之間，可選在大約10pM至大約100pM之間，可選大約30pM，以抑制IL-1卩刺激的IL-6從人成纖維細胞中釋放。抑制IL-1卩刺激的IL-6從人成纖維細胞釋放的ICso是指抑制IL-1(3刺激的IL-6從人成纖維細胞釋放的50%所需濃度。典型的抗體包括這里指定為AB1的抗體。本發明還提供了IL-1結合抗體或其IL-ip結合片段，其具有在大約6pM至大約50pM之間的解離常數，并包含重鏈可變區，所述重鏈可變區包含氨基酸序列SEQIDNO:4、SEQIDNO:5或SEQIDNO:6之一，可選地氨基酸序列SEQIDNO:4或SEQIDNO:5之一，可選地是SEQIDNO:4氨基酸序列。設計在某些情況中，具有相對高解離常數的IL-1卩結合抗體或IL-l卩結合片段可以是期望的，例如，用于治療或者預防IL-1相關疾病或者病癥的某些期望相對4交4氐親和力水平的方法。示例性抗體包括被指定為AB1、AB2、AB3、AB4、AB5、AB6、AB7、AB8和AB9的抗體。AB1包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中所述重鏈可變區包含SEQIDNO:4的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:9的氨基酸序歹ll。AB2包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中所述重鏈可變區包含SEQIDNO:5的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。AB3包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中所述重鏈可變區包含SEQIDNO:6的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。AB4包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中所述重鏈可變區包含SEQIDNO:7的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。AB5包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中所述重鏈可變區包含SEQIDNO:8的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。AB6包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中所述重鏈可變區包含SEQIDNO:14的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:IO的氨基酸序列。AB7包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中所述重鏈可變區包含SEQIDNO:15的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:ll的氨基酸序列。AB8包含重鏈可變區和輕《連可變區，其中所述重鏈可變區包含SEQIDNO:25的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:IO的氨基酸序列。AB9包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中所述重鏈可變區包含SEQIDNO:26的氨基S吏序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:ll的氛基*列。本發明包括IL-ip結合抗體或IL-ip結合片段，其具有重鏈可變區，所述重鏈可變區包含在SEQIDNO:2、SEQIDNO:4-8、SEQIDNO:12-15、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23-26、SEQIDNO:28-35或SEQIDNO:42-57中所列序列的任意一種，可選在SEQIDNO:21中所列序列的任意一種，可選在SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7或SEQIDNO:8中所列序列的任意一種，可選在SEQIDNO:12或SEQIDNO:13中所列序列的任意一種，可選在SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:25或SEQIDNO:26中所列序列的任意一種。本發明還包括IL-l卩結合抗體或IL-ip結合片段，其具有輕鏈可變區，所述輕鏈可變區包含在SEQIDNO:l、SEQIDNO:9-11或SEQIDNO:27所列序列中的任意一種，可選在SEQIDNO:1中所列序列的任意一種，可選在SEQIDNO:9中所列序列的任意一種，可選在SEQIDNO:10或SEQIDNO:11中所列序列的任意一種。本發明還包括IL-1卩結合抗體或IL-1卩結合片段，其具有在SEQIDNO:2、SEQIDNO:4畫8、SEQIDNO:12-15、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23曙26、SEQIDNO:28-35或SEQIDNO:42-57中所列序列的重鏈可變區之一，以及在SEQIDNO:1、SEQIDNO:9-ll或SEQIDNO:27中所列序列的輕鏈可變區之一。本發明還包括IL-ip結合抗體或IL-ip結合片段，其具有不會結合IL-ip但代替為用于其它功能的部分，例如循環半衰期、直接細胞毒性作用、可檢測標記或者受體內源補體級聯反應或內源細胞毒性的激活。本發明的抗體可以包括抗體恒定區的全部或者一部分。所述恒定區可以選自任何同種型包括IgA(例如IgAl或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM。例如，所述抗體可以包含IgG2區。除了或者代替包含恒定區外，本發明的抗體或片段可以包括抗原決定簇標簽、補救受體抗原決定簇、用于診斷或純化目的的標記部分，或者細胞毒性部分例如放射性核素或毒素。本發明還包括藥物組合物，其包含IL-ip結合抗體或IL-ip結合片段的任意一種以及藥物上合適的運載體(carrier)、賦形劑或稀釋劑。優選本發明的抗體和化合物能夠以治療有效量為需要這類治療的受試者進行給藥，即其量足以改善與目標蛋白質表達相關的病癥或者紊亂的臨床體癥或癥狀。在相關的實施方式中，所述藥物組合物還包含第二活性藥劑。在另一個相關的實施方式中，提供了藥物組合物，其中所述第二活性藥劑是生長因子或細胞因子的抗體或拮抗劑。在另一個實施方式中，所述第二活性藥劑是另一種抗體。在本發明的另一個實施方式中，設計所述IL-ip結合抗體或IL-1(3結合片段用于制備預防或者減輕與IL-1相關的病癥或者紊亂的藥物。在上述任何應用中，所述藥物可以與使用第二活性藥劑的治療進行組合。在本發明的另一個實施方式中，設計本發明抗體的協同組合在制備治療表現出這里所公開的IL-1相關病癥或紊亂的癥狀的患者的藥物中的應用，其中所述藥物與使用第二活性藥劑的治療進行組合。在相關的實施方式中，所述第二活性藥劑是細胞因子或生長因子的抗體或拮抗劑。設計任何前述應用的實施方式，其中所述IL-1卩結合抗體或片段在所述藥物中的量是以有效降低達到治療效果所需第二活性藥劑劑量的劑量。本發明還設計了試劑盒。在一個實施方式中，試劑盒包含治療或預防有效量的本發明的化合物或組合物(例如抗體、片段、核酸、載體或細胞)，其被包裝在容器中，例如小瓶(vial)或瓶子，并且還包括貼到或者與容器包裝的標簽，該標簽描述該容器的內含物，并提供關于該容器的內含物用于防止或者減輕與目標蛋白質表達相關的病癥或疾病的指示和/或使用說明。附圖某些觀點的簡要說明圖1是一對氨基l^f列，其對應于這里所描述的某些抗體的可變區的輕鏈和重鏈。氨基酸序列中被下劃線標記的部分表示互補性決定區域(CDR);圖2是一組氨基酸序列，其對應于抗體AB1、AB2、AB3和AB4的可變(CDR);圖3是一組氨基酸序列，其對應于抗體AB5、AB5.1和AB5.2的可變區(CDR);圖4是一組氨基酸序列，其對應于抗體AB5.3和AB5.4的可變區的輕鏈和重鏈。氨基酸序列中被下劃線標記的部分表示互補性決定區域(CDR);圖4A是一組氨基酸序列，其對應于抗體AB6和AB7的可變區的輕鏈和重鏈。氨基酸序列中被下劃線標記的部分表示互補性決定區域(CDR);圖4B是一組氨基酸序列，其對應于抗體AB8和AB9的可變區的輕鏈和重鏈。氨基酸序列中被下劃線標記的部分表示互補性決定區域(CDR);圖5是表示體外IL-1卩刺激實驗結果的圖；圖6是顯示體內IL-1卩剌激實驗結果的柱狀圖；圖7是顯示被指定為AB1的抗體動態排斥檢驗(kineticexclusionassay)結果的圖；圖8是顯示^皮指定為AB5的抗體動態排斥4企驗(kineticexclusionassay)結果的圖；圖9是顯示^皮指定為AB7的抗體動態排斥檢驗(kineticexclusionassay)結果的圖；圖IO是顯示被指定為AB1、AB2和AB3的抗體體外IL-ip刺激實驗結果的圖；圖11是顯示被指定為AB1和AB7的抗體體外IL-1卩刺激實驗結果的圖；圖12是顯示被指定為7^5和八87的抗體以及^116化{@體外11^1(3刺激實驗結果的圖；圖13是顯示被指定為AB5和AB1的抗體體內IL-1卩刺激實驗結果的柱狀圖；圖14是顯示被指定為AB5和AB7的抗體體內刺激實驗結果的柱狀圖；圖15是顯示被指定為AB7的抗體與來自獼猴(cynomolgusmonkey)和恒河猴(rhesusmacaque)的IL-1P交叉反應實驗結果的蛋白質印跡(Westernblot);圖16是顯示被指定為AB7的抗體與來自狗、豚鼠、豬和兔的IL-1P交叉反應實驗結果的Western印跡；圖17是顯示被指定為AB7的抗體與重組人、小鼠和大鼠的IL-1P交叉反應實—瞼結果的Western印跡；圖18是顯示被指定為AB7的抗體以及Kineret體外實驗結果的圖，其包括IL-l誘導的IL-8的產生；圖19是顯示檢測是否本發明的抗體防止IL-1p結合到I型IL-1受體的檢驗結果的圖；圖20是表示檢測是否本發明的抗體防止IL-1(3結合到I型IL-1受體示意圖。詳細描述本發明包括新型的IL-1p抗體和片段，其具有期望的親和力和能力。作為本發明的一個方面，提供了IL-1P結合抗體，與已知IL-1p結合抗體相比，其具有出乎意料高的親和力和低解離常數(例如小于3pM,可選大約lpM或更少)。典型的抗體包括這里被指定為AB5和AB7的抗體。作為本發明的另一個方面，提供了IL-1P結合抗體，其具有期望的解離常數(例如在大約6pM至大約50pM之間)以及期望的IC5Q(例如低于500pM)以抑制IL-1(3刺激的從人成纖維細胞釋放IL-6。本發明還包括IL-1P結合抗體或IL-1(3結合片段，其中它們以比其它抗原高的親和力選擇性地結合到IL-1(3。所述IL-1|3結合抗體或IL-1P結合片段可以選擇性地結合到人類IL-1p,但也會可檢測地結合到非人類IL-1(3上。可選地或者另外地，所迷抗體或片段可以結合到人類IL-1P或者至少一種其它哺乳動物(第一哺乳動物)的IL-1P，而不結合到至少一種其它哺乳動物(第二哺乳動物)的IL-1(3。例如，所述抗體或者片段可以結合到嚙齒類IL-1P、靈長類IL-1(3、狗IL-1(3和兔IL-1P中的一種或者多種，而不結合到豚鼠IL-l|3。可選地或者另外地，所述抗體或片段可以以比大鼠IL-l(3高的親和力結合到小鼠IL-1|3。可選地或者另外地，所述IL-l0結合抗體或IL-1P結合片段可以對人類IL-IP和靈長類IL-1^具有相同或者基本相同的能力。可選地或者另外地，所述IL-1|3結合抗體或IL-1(3結合片段可以對重組人類IL-1[3和內源IL-1P具有相同或者基本相同的能力。可選地或者另外地，所述IL-1I3結合抗體或IL-1P結合片段可以中和小鼠IL-1P。這里所使用的，特異性地與目標抗原結合的抗體或片段，是指以比與類似抗原高的親和力與目標抗原結合的抗體。例如，抗體或片段對于其同源的抗原是特異性的，所述抗原或片段以可檢測的優先性識別并結合所述同源的抗原(從其它已知的相同家族多肽中區分該抗原，其通過結合親和力中可檢測的差異，而不管在家族成員之間可能存在的局部序列同一性、同源性或相似性)。能夠理解的是，特異性的抗體和片段也會與其它蛋白質相互作用(例如ELISA技術中的金黃色葡萄球菌(5*.m/M)蛋白質A或其它抗體)，其通過與抗體可變區之外的序列的相互作用，特別的，是所述抗體或片段的恒定區內的序列。用于確定抗體結合特異性的篩選檢驗是本領域中公知的，并且常規實施的。關于對這類檢驗的全面討論，參見Harlow等人(Eds)，抗體實驗室手冊冷泉港實驗室，冷泉港，紐約(J"^o&as」丄Worato^ColdSpringHarborLaboratory;ColdSpringHarbor,NY)(1988)，第6章。本發明的一個方面包括IL-1(3結合抗體及其IL-1P結合片段，其具有意想不到的低解離常數(KD)，例如小于3pM,可選2pM或更少，可選lpM或更少，可選0.8pM或更少，可選0.74pM或更少，可選0.72pM或更少，可選0.7pM或更少，可選0.6pM或更少，可選0.56pM或更少，可選0.5pM或更少，可選0.3pM或更少，可選0.26pM或更少，可選0.24pM或更少，可選0.2pM或更少。因此，在本發明的某些實施方式中，可以參考解離常數范圍的高端值，對IL-1(3結合抗體和片段進行描述。此外或者可選地，在本發明的某些實施方式中，可以參考解離常數范圍的低端值，對IL-1P結合抗體和片段進行描述，諸如例如解離常數為0.07pM或更高的抗體或片段，可選O.lpM或更高，可選O.llpM或更高，可選0.15pM或更高，可選0.2pM或更高，可選0.24pM或更高，可選0.26pM或更高，可選0.3pM或更高，可選0.5pM或更高，可選0.7pM或更高。如上所限定的任何解離較高的常數和較低的解離常數可以被組合以限定解離常數的范圍，只要所選擇較低值等于或者低于所選擇的較高值。本發明的另一方面提供了新型IL-1p結合抗體及其IL-1P結合片段，其以高于6pM并低于或等于50pM的解離常數結合IL-1|3，可選在大約13pM至大約25pM之間，其中所述抗體或片段具有小于0.5nM(500pM)的IC5o,可選在大約5pM至大約200pM之間，可選在大約10pM至大約100pM之間，可選大約30pM,以抑制IL-1(3刺激的IL-6從人成纖維細胞中釋放。設計，可以期望提供一種IL-1P結合抗體或其IL-1p結合片段，其具有前面的結合親和力并具有用于治療或預防IL-1P介導的病癥或疾病的某些方法的能力。典型的抗體包括這里被指定為AB1的抗體。正如通過這里所列舉的解離常數所說明的，本發明的抗體和片段以高親和力結合到IL-1P。鑒定抗體與抗原親和力的親和力常數可以是通過抗原-抗體復合物形成的動力學所檢測的結合常數。可選地，結合親和力可以由解離常數鑒定，其中解離常數是結合常數的倒數。這里所使用的術語Ko是指抗體-抗原相互作用的解離常數。本發明還包括中和抗體或其中和片段，其結合到IL-1P以中和IL-1(3的生物學活性。可以通過檢驗IL-1P生物學活性的一種或者多種指示劑來檢驗IL-1(3生物學活性的中和，例如IL-1(3刺激的IL-6從人成纖維細胞或其它細胞中釋放，IL-1P誘導的IL-8從血細胞中釋放，或者IL-1誘導的T輔助細胞的增殖。優選，本發明的IL-1P結合抗體和片段中和與I型IL-1受體(IL-1RI)的信號傳導功能相關的IL-1P生物學活性，其中所述I型IL-1受體(IL-1RI)結合I型IL-1(3。通常，本發明的中和抗體和片段能夠中和IL-1P的生物學活性，而不管是否IL-1P結合到I型IL-1受體被阻斷。更優選，所述IL-l(3結合抗體或IL-l|3結合片段通過結合到IL-1P中和IL-1|3的生物學活性，而不會實質性地防止IL-1P結合到I型IL-1受體。這些抗體和片段的潛在優點是能夠結合并中和IL-1|3,同時允許IL-1(3結合到IL-1RI。這會導致IL-la以及IL-1|3生物學活性生物學活性的有效降低，因為有更少未結合的IL-lRI位點用于IL-la結合。因此，本發明的IL-1P結合抗體和片段可以用于期望在體外和體內中和IL-1生物學活性的方法中。本發明的抗體或片段可以是中和抗體或片段，其特異性地結合到影響IL-1P生物學活性的IL-1P抗原決定簇上。本發明的抗體或片段能夠結合到IL-1P的中和敏感抗原決定簇上。如果IL-1(3的中和敏感抗原決定簇被本發明的抗體或片段之一結合，則結果是含有所述抗原決定簇的IL-1(3的功能會喪失。在某些實施方式中，所述IL-1P結合抗體或IL-1P結合片段抑制IL-1P刺激的IL-1(3從血細胞的釋放的ICso是低于50pM，可選大約25pM或更低，可選大約10pM或更低，可選大約2pM或更低。抑制IL-1p刺激的IL-1P從血細胞的釋放的IC5o是指抑制50%IL-1P刺激血細胞所釋放IL-8需要的濃度。典型的抗體包括這里被指定為AB7的抗體。本發明還包括含有被改變的氨基酸序列的IL-1|3結合抗體或其IL-1(3結合片段，其中所述被改變的氨基酸包括針對選自SEQIDNO:27或28(或者任何這里所公開的其它序列)的起始氨基酸序列的一個或者至少一個替代、添加或缺失，其中所述被改變的抗體或片段具有與起始氨基酸序列相同或基本相同的抗原決定簇結合的親和力和特異性。設計可以對這里所提供的IL-1P結合抗體或IL-1P結合片段(例如包含SEQIDNO:28和/或SEQIDNO:27的抗體或片段)進行一個或者多個替代、缺失或添加，同時保持與起始抗體或片段相同或基本相同的抗原決定簇結合的親和力和特異性。例如，本發明包括含有被改變的氨基^列的IL-1(3結合抗體或其IL-1P結合片段，其中所述被改變的氨基酸包括針對包含SEQIDNO:8(或者這里所公開的可以用作起始氨基酸序列的任何其它序列)的起始氨基酸序列的一個或者至少一個替代、添加或缺失，其中所述被改變的抗體或片段具有與包含SEQIDNO:8(或者用作起始氨基酸序列的特定序列)的起始氨基酸序列相同或基本相同的抗原決定簇結合的親和力和特異性。措詞"基本相同的"親和力的意思是，在對包含SEQIDNO:28或27的抗體或片段的檢驗中，通過這里的教導所確定的親和力或解離常數，不會提高或降低超過固定的偏差，例如進行所述檢驗3次或者更多次獨立的4企-驗時所觀察到的偏差。措詞"基本相同的"抗原決定簇特異性的意思是，在對包含SEQIDNO:28或27的抗體或片段的檢驗中，通過這里的教導所確定的，與含有所述抗原決定簇的氨基酸序列的結合在固定的偏差范圍內，例如進行所述檢驗3次或者更多次獨立的檢驗時所觀察到的偏差。如果與包含SEQIDNO:28或27的抗體或片段相比，其意思是所述比較需要在被改變的氨基S史序列和進行一個或者多個替代、缺失或添加的所述起始氨基酸序列之間進行，這些起始序列在其它所有的氨基酸上一致。抗體、人源4匕抗體和人工改造(humanengineered)的抗體本發明的IL-1P結合抗體可以被提供為多克隆抗體、單克隆抗體(mAb)、重組抗體、嵌合抗體、CDR-移植抗體、完全人類抗體、單鏈抗體和/或雙特異性抗體以及片段，包括其變體和衍生物，其可以通過已知的技術包括但不限于酶切、肽合成或重組技術提供。通常抗體包含兩條重鏈多肽和兩條輕鏈多肽，盡管也可以設計具有一條重鏈和一條輕鏈的單結構域抗體以及不含有輕鏈的重鏈抗體。根據重鏈恒定區的氨基酸序列，有5種類型的重鏈，被稱作a、S、s、Y和p。這些不同類型的重鏈產生了五類抗體分別是IgA(包括IgA,和IgA2)、IgD、IgE、IgG和IgM，包括四種IgG的亞類即IgG,、IgG2、IgG3和IgG4。根據恒定區的氨基酸序列，有兩類輕鏈，被稱作卡帕(K)或拉姆達(人)。全長的抗體包括恒定區和可變區。恒定區不需要出現在抗體的抗原結合片段上。這里所公開的抗體的抗原結合片段可以包括Fab、Fab'、F(ab')2和F(v)抗體片段。正如下面更詳細地討論的，IL-1(3結合片段包括會結合IL-1P的抗體片段和抗原結合多肽。抗體或其抗原結合片段的每一條重鏈和輕鏈序列都包括可變區，其具有3個互補性決定區域(CDR)以及非框架區域(FR)。除非以其它方式說明，這里所使用的術語"重鏈"和"輕鏈"的意思分別是重鏈可變區和輕鏈可變區。這里，重鏈CDR被稱作CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。輕鏈CDR被稱作CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。可以(i)根據本領域中已經開發的通用法則，或者(ii)通過將其序列與已知可變區數據庫進行比對來鑒定抗體序列中的可變區和CDR。用于鑒定這些區域的方法被描述在下列中Kontermann和Dubel，eds.，抗體工程，施普林格，紐約(&7g7>em'"g,Springer,NewYork,NY,),2001;以及Dinarello等人，免疫學現代實驗方案(O^reWPratoco/s/附臓wo/og);)，JohnWileyandSonsInc..,霍波肯(Hoboken),NJ,2000。正如在Retter等人，M/c/.v4c/&紐，33(數據庫期):D671-D674(2005)中所描述的，抗體序列的It據庫#L描述并通過www.bioinf.org.ulc/abs的"TheKabatman"(由A.C.Martin在英格蘭倫敦的倫敦大學生物化學和分子生物學系(intheDepartmentofBiochemistry&MolecularBiologyUniversityCollegeLondon,London,England)維持)以及通過www.vbase2.org的VBASE2獲得。"Kabatman"數據庫網站還包括了用于鑒定CDR的常規經驗法則。除非特別說明，術語"CDR"是如在Kabat等人，免疫學感興趣序列(5^we"ceso/7m附w"o/og/ca//"femsf，)第5版，健康和人類月艮務美國部(U.S.DepartmentofHealthandHumanServices),1991中所描述的。本發明包括IL-1P結合抗體，其含有兩條全長的重鏈和兩條全長的輕鏈。可選，所述IL-1(3結合抗體可以為例如具有與IL-1P結合活性的單鏈抗體或"迷你型，，抗體的構建體。這些構建體可以通過本領域中已知的方法進行制備，例如PCR介導的單鏈抗體的克隆和組裝以在大腸桿菌(￡.co//)中進行表達(例如在抗體工禾呈，實踐途徑系列(AntibodyEngineering,Thepracticalapproachseries,J.McCafferty)，H.R.Hoogenboom,和D.J.Chiswell，編輯(editors)，牛津大學出版社(OxfordUniversityPress)，1996中所描述的)。在這種類型的構建體中，從cDNA將抗體分子重鏈和輕鏈的可變部分進行PCR擴增。接著，將所得到的擴增子進行組裝，例如在另一個PCR步驟中，通過連接體DNA，其中所述連接體DNA編碼由氨基酸Gly和Ser構成的柔性蛋白質連接體。該連接體能夠使可變的重鏈和輕鏈部分以重新產生抗原結合槽，并且以通常與起始全長二聚免疫球蛋白分子相當的親和力結合抗原的方式進行折疊。本發明的IL-1P結合抗體和結合片段包括這里所公開的典型抗體、片段和序列的變體。變體包括包含一個或者多個氨基酸序列替代、缺失和/或添加的肽和多肽，其與這里所公開的典型抗體、片段和序列具有相同或基本相同的抗原決定簇結合親和力和特異性。因此，變體包括包含對這里所公開的典型抗體、片段和序列進行的一個或者多個氨基酸序列替代、缺失和/或添加，其中這些替代、缺失和/或添加不會對抗原決定簇結合的親和力和特異性造成實質性變化。例如，抗體或片段的變體可以來自對包含SEQIDNO:l至SEQIDNO:35或SEQIDNO:42至SEQIDNO:57中一個或者多個氨基酸序列的抗體或片段進行一種或者多種改變，其中所改變的抗體或片段與起始序列具有基本相同的抗原決定簇結合親和力和特異性。變體可以是天然存在的，例如等位基因或拼接變體，或者可以是人工構建的。可以從編碼所述變體的相應核酸分子制備這些變體。本發明抗體和IL-1P結合片段的變體可以在輕鏈和/或重鏈氨基酸序列中具有改變，其可以是天然出現的，或者通過使用重組DNA技術對原始序列進行體外改造而引入的。天然出現的變體包括"體細胞"變體，其是在應答外源抗原產生抗體的過程中，在相應的生殖系核香酸序列中體內產生的。IL-ip結合抗體和IL-ip結合片段的變體也可以通過誘變技術進行制備。例如，可以在整個抗體編碼區隨機引入氨基酸改變，并可以對所得到的變體篩選IL-1P的結合親和力或其它性質。可選地，可以在IL-113抗體的選定區引入氨基酸改變，例如在輕鏈和/或重鏈CDR，和/或在框架區內，并可以對所得到的抗體篩選與IL-1P的結合或者某些其它活性。氨基酸改變包括CDR中的一個或者多個氨基酸替代，從對給定CDR如CDR3的單氨基酸差異到引入多個氨基酸置換。在另一種方法中，CDR中每個殘基對IL-1(3結合的貢獻可以通過將CDR中的至少一個殘基替代為丙氨酸來進行檢驗。Lewis等人，(1995)，Mol.Immunol.32:1065-72。借著可以改變對于結合IL-1卩不是最佳的殘基，以確定更佳的序列。還包括通過插入氨基酸以提高CDR如CDR3的尺寸所產生的變體。例如，大多數輕鏈CDR3序列長度為9個氨基酸。通過插入適當的氨基酸以提高CDR的長度，可以優化短于9個氨基酸的抗體輕鏈序列結合IL-1卩。還可以通過對輕鏈或重鏈的"鏈混編(chainshuffling)"制備變體。Marks等人，(1992)，生物技術(5/o/ec/z"o/ogv)10:779-83。一條輕鏈(或重鏈)可以與具有全部重鏈(或輕鏈)的庫進行組合，將所得到的群篩選期望的活性例如結合IL-1(3。這可以篩選比使用全部重鏈和輕鏈要多的不同重鏈(或輕鏈)與一條輕鏈(或重鏈)組合的樣品本發明的IL-1(3結合抗體和片段包括這里所^Hf的典型抗體、片段和序列的衍生物。衍生物包括已經被化學修飾的多肽或肽、或其變體、片段或衍生物。例子包括共價附著一個或者多個聚合物例如水溶性聚合物、N-連接或O-連接的碳水化合物、糖、磷酸和/或其它這類分子。在所附著的分子的類型或位置中，以與天然出現或起始肽或多肽不同的方式對這些衍生物進行修飾。這些衍生物還包括去除一個或者多個在所述肽或多肽上天然出現的化學基團。本發明的IL-1(3結合抗體和片段可以是雙特異性的。雙特異性的抗體可以具有多種構型的。例如，雙特異性的抗體可以組成單個抗體(或抗體片段)但具有兩個不同的抗原結合位點(可變區)。可以通過化學技術(Kranz等人(1981)，扁.」c^/.<SHUSA,78:5807)、通過，,多域(polydoma)"技術(美國專利No.4,474,893)或通過重組DNA技術產生雙特異性的抗體。本至少一個是IL-1(3的抗原決定簇。IL-ip結合抗體和片段也可以是異種抗體。異種抗體是兩種或者多種被連接在一起的抗體或抗體片段(Fab)，每種抗體或片段都具有不同的特異性。作為生產單克隆抗體的用于制造重組DNA版抗原結合區的技術被設計用于本發明的IL-1(3結合抗體和片段。將DNA克隆到細菌表達系統中。適合實施本發明的技術的一個例子使用A噬菌體載體系統，其具有引導序列能夠造成表達的Fab蛋白質遷移到周質間隙中(在細菌的細胞膜和細胞壁之間)或被分泌出。人們能夠快速產生和篩選大量有功能的Fab片段得到能夠結合IL-1卩的。這些IL-1(3結合試劑(具有對IL-ip多肽特異性的Fab片段)被特異性地包括在本發明的IL-1卩結合抗體和片段中。engineered)的抗體。這里所使用的人源化抗體或其抗原結合片段是重組多肽，其包含來自非人類抗體的抗原結合位點部分以及人類抗體的框架和/或恒定區部分。人工改造的抗體或抗體片段是非人類抗體(例如小鼠)，其已經通過在特定位點對氨基酸進行修飾(例如缺失、插入或替代)而被改造以降低或除去被修飾的抗體在人種的所有可檢測到的免疫原性。人源化抗體包括嵌合抗體和CDR移植抗體(CDR-graftedantibody)。嵌合抗體是包括連接到人恒定區的非人類抗體可變區的抗體。因此，在嵌合抗體中，可變區大部分是非人類的，而恒定區則是人類的。嵌合抗體及其制備方法被描述在Morrison，等人，iV"".Jcad5bz'USA，81:6841-6855(1984)、Boulianne，等人A^wre,312:643-646(1984)以及PCT申請公開WO86/01533中。盡管它們比小鼠單克隆抗體具有較低的免疫原性，但給藥嵌合抗體已經與對抗體的非人類部分的免疫應答(HAMA)有關。也已經通過將具有適當抗原結合特異性的來自小鼠抗體分子的基因與來自具有適當的生物活性(如激活人補體以及介導ADCC的能力)的來自人類抗體分子的基因進行拼接而產生嵌合抗體。Morrison等人(1984),尸rac.淑/.^cac/.S"'.，81:6851;Neuberger等人(1984),Atowe，312:604。一個例子是將Fc區替代位不同同種型的Fc區。CDR移植抗體是含有來自非人類的"供體，，抗體的CDR的抗體，其中所述CDR被連接到來自人類"受體"抗體的框架區上。通常，CDR移植抗體包括比嵌合抗體多的人類抗體序列，因為它們含有來自人類抗體的恒定區序列以及可變區序列(框架)。因此，例如本發明的CDR移植人源化抗體可以含有重鏈，其中所述重鏈含有來自人類抗體(例如人類抗體的FR-1、FR-2或FR-3)的連續氨基酸序列(例如大約5個或者更多個、10個或者更多個、甚至15個或者更多個連續的氨基酸殘基)，或者可以選擇的，包含人類抗體整個框架區的大部分或者全部。CDR移植抗體及其制備方法#1描述載Jones等人A^we，321:522-525(1986),Riechmann等人iV^wre，332:323-327(1988)以及Verhoeyen等人Sc/e"ce，239:1534-1536(1988))。可以用于制備人源化抗體的方法也被描述在美國專利4,816,567、5,721,367、5，837，243和6,180,377中。CDR移植抗體是認為與嵌合抗體相比不太可能誘導針對非人類抗體部分的免折疊。因此，如果供體非人類CDR序列被移植到未改變的人類框架序列上，則所得到的CDR移植抗體能夠在某些情況下表現出相對于原始的非人類供體抗體損失結合強度。參見例如Riechmann等人iV"加？,332:323-327(1988)以及Verhoeyen等人5We"ce,239:1534-1536(1988)。人工改造的抗體包括"鑲飾(veneered)"抗體，并使用HUMANENGINEERINGtm技木(XOMA(US)LLC,伯克利(Berkeley),CA)制備這些抗體。HUMANENGINEERING技術是商業上可以獲得的，并且包括改變非人類抗體或抗體片段，例如小鼠或嵌合抗體或抗體片段，其通過對抗體片段的氨基酸序列進行特異改變，以產生在人中免疫原性降低的被銹蝕的抗體，但是仍具有原始非人類抗體的期望結合性能。通常，該技術包括將非人類抗體(例如小鼠)的氨基酸殘基分類為"低風險"、"中等風險"或"高風險"殘基。使用全面風險/回報計算進行這種分類，其相對于取代將影響所得到抗體的折疊和/或抗原結合性能的風險，評價進行特定替代的預計益處(例如對于人體中的免疫原性)。因此，預測為低風險位置的替代是有利的，因為其被預測會降低免疫原性而不會顯著影響抗原結合性能。中等風險位置的替代被預測為會降低免疫原性，但更可能會影響蛋白質折疊和/或抗原結合。高風險位置含有最有可能參與蛋白質折疊或抗原結合的殘基。通常非人類抗體中的低風險位置被人類殘基所替代，高風險位置幾乎不被替代，有時在中等風險的位置進行人源化替代，盡管不是無限制的。非人類抗體可變區中具有脯氨酸的位置通常被分類為至少中等風險的位置。通過將來自非人類抗體可變區的氨基酸序列與特定或多數人抗體序列的相應區域進行比對，可以選擇在非人類(例如小鼠)抗體序列中給定的低風險或中等風險位置所被替代的特定人氨基酸殘基。根據所述的比對，可以將非人類序列中的低風險或中等風險的氨基酸殘基替代為相應的人類抗體序列中的殘基。在Studnicka等人蛋白工程(尸rate/w),7:805-814(1994),美國專利5,766,886、5,770,196、5,821,123和5,869,619以及PCT申請公開WO93/11794中對制備人工改造的蛋白質的技術進行了更詳細的描述。"鑲飾，，抗體是非人類抗體或人源化抗體(例如嵌合抗體或CDR移植抗體)，其已經被改造為替換某些溶劑暴露的氨基酸殘基以進一步降低它們的免疫原性或增強它們的功能。因為嵌合抗體的表面殘基被認為不太可能影響正確的抗體折疊并很可能引發免疫反應，因此對嵌合抗體的鑲飾可以包括例如鑒定在嵌合抗體的非人類框架區中溶劑暴露的殘基，并將它們中的至少一個替換為相應的來自人類框架區的表面殘基。可以通過適當的改造技術包括使用上述的人類工程tm(HUMANENGINEERING)技術完成所述鑲飾。在不同的方法中，可以通過對CDR移植抗體進行"去人源化，，恢復其結合能力。去人源化可以包括將來自供體抗體框架區的殘基重建到CDR移植抗體，這樣恢復了正確的折疊。可以通過(i)在"受體"抗體中包含"供體，，框架區部分，或者(ii)將"供體"抗體框架區部分移植到受體抗體內(與移植的供體CDR)獲得相似的"去人源化"。關于抗體、人源化抗體、人工改造抗體及其制備的進一步討論，參見Kontermann和Dubel,抗體工程(^4油力<9<^),Springer,NewYork,NY,2001。示例性的人源化或人工改造的抗體包括IgG、IgM、IgE、IgA和IgD抗體。本發明可以是任何類型的抗體(IgG、IgM、IgE、IgA和IgD等)或同種型，并且可以看有k或X輕鏈。例如，人體抗體可以含有IgG重鏈或指定的片段例如同種型IgGl、IgG2、IgG3或IgG4種的至少一種。作為進一步的例子，本發明的抗體或片段可以含有IgGl重鏈和IgGl輕鏈。本發明的抗體和片段可以是人類抗體，例如結合IL-ip多肽的抗體，并由人生殖系免疫球蛋白核酸序列天然出現的體細胞變體的核酸序列所編碼的，以及其片段、合成的變體、衍生物和融合。通過本領域中已知的方法生產這類抗體，例如通過使用轉基因動物(例如轉基因小鼠)，在所述轉基因動物中原始的免疫球蛋白的全部能力已經被哺乳動物染色體中的人V-基因所替代。這些哺乳動物似乎進行正常形式的人生殖系抗體基因VDJ重組和體細胞超突變，這樣產生了具有全部人類序列的高親和力抗體。也可以通過體外篩選噬菌體展示抗體庫產生人類抗體。參見Hoogenboom等人(1991),J:Mo/.說o/.227:381;以及Marks等人(1991),Mo/.歷o/.222:581。已經描述了各種含有抗體的噬菌體展示庫，并可以被容易制備。庫可以含有多種人類抗體序列，例如人Fab、Fv和scFv片段，其針對適當的輩巴進行篩選。除了被篩選鑒定IL-1卩的選擇性結合試劑外，噬菌體展示庫可以含有肽或蛋白質。IL-lj3結合抗體和片段可以含有一個或者多個不會結合IL-ip的部分，但其對應于其它的功能，例如循環半衰期、引導細胞毒性效應、可檢測的標記或受體內源補體級聯反應或內源性細胞毒性的激活。所述抗體或片段可以含有恒定區的全部或一部分，并可以是任何同種型，其包括IgA(例如IgAl或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM。除了包含恒定區補救受體抗原決定簇、用于診斷或純化目的的標記部分或者細胞毒性部分例如放射性核素或毒素。本發明的抗體和片段的恒定區可以是yl、y2、y3、y4、p、j32或S或s型的，優選y型，更優選y型，而人輕鏈的恒定區可以是K或X型的(其包括m、、和？13亞型)，優選是K型。變體可以包括含有被修飾的Fc區的抗體，其中所述被修飾的Fc區包含對野生型Fc區至少一個氨基酸的修飾。可以將所述變體Fc區設計成與含有野生型Fc區相當的分子，以便宜更高或更低的親和力結合Fc受體。例如，本發明的IL-1(3結合抗體和片段可以含有被修飾的Fc區。Fc區指自然出現的或合成的多肽，其與通過對IgG進行木瓜蛋白酶而產生的IgGC-末端同源。IgGFc具有大約50kD的分子量。在本發明的抗體和片段中，可以使用整個Fc區，或者僅僅是其增強半衰期的部分。另外，可以接受氨基^列中的許多修飾，因為原始的活性并不是在所有情況中都是必需的或期望的。如果期望的話，可以對Fc區進行突變，以抑制其固定補體并以高親和力結合Fc受體的能力。對于鼠IgGFc，將Ala替代為Glu318、Lys320以及Lys322會使得該蛋白質不能夠引導ADCC。將Glu替代為Leu235會抑制改蛋白質以高親和力結合Fc受體的能力。已知有各種對人IgG的突變(參見例如Morrison等人1994，免疫學家(77ze/wmw"o/og/W)2:119124和Brekke等人1994,The在某些實施方式中，本發明的抗體或片段被提供了被修飾的Fc區，其中天然出現的Fc區被修飾以提高所述抗體或片段在生物環境中的半衰期，例如血清半衰期或根據體外檢驗所得到的半衰期。對IgG的原始形式Fc區進行改變的方法也被描述在美國專利No.6,998,253中。在某些實施方式中，可以期望對抗體進行修飾，以提高其血清半衰期，例如向抗體片段中加入分子例如PEG或其它水溶性聚合物包括多糖聚合物乙提高所述半衰期。這也可以通過例如將補救受體結合抗原決定簇加入到抗體片段中達到(例如，通過將抗體片段中適當區域進行突變，或者通過將抗原決定簇引入到肽標簽中，接著將其與抗體片段在末端或中部進行融合，例如通過DNA或肽合成)(參見國際公開No.W096/32478)。補救受體結合抗原決定簇指IgG分子的Fc區的抗原決定簇(例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4),其對應于提高IgG分子的體內血清半衰期。補救受體結合抗原決定簇可以含有任何一個或多個氨基酸殘基，其被從Fc區的一個或兩個環轉移到抗體片段的類似位置。更優選，轉移來自Fc區的一個或兩個環的三個或更多個殘基。更優選，所述抗原決定簇被從(例如IgG的)Fc區的CH2區取出，并轉移到CH1、CH3或VH區或者該抗體的多個這樣的區。可選地，所述抗原決定簇被從Fc區的CH2區取出，并轉移到所述抗體片段的CL區或VL區或兩者。同樣參見國際申請WO97/34631和WO96/32478，其描述了Fc變體及它們與補救受體的相互作用。Fc受體結合位點內殘基的突變可能導致改變的效應子的功能，例如改變的ADCC或CDC活性，或改變的半衰期。可能的突變包括插入、缺失或替代一個或多個殘基，其包括使用丙氨酸的替代、保守替代、非保守替代、或使用來自不同IgG亞類的在相同位點的相應氨基酸殘基的替換(例如使用在該位點相應的IgG2殘基替換IgGl殘基)。例如，已經報道將IgG4第241位氨基酸的絲氨酸突變成脯氨酸(在IgGl和IgG2中的該位置所發現的)，與原始的嵌合IgG4相比，會導致產生同源抗體，并延長血清半衰期和改善組織分布(Angal等人，M。/7m羅"o/.30:105-8,1993)。優選，本發明的抗體或抗體片段不會與IL-1P以外的任何目標交叉作用。例如，本發明的抗體和片段優選不會可檢測地結合IL-1a。IL-1(3結合抗體或抗體片段抗體片段是完整全長抗體的一部分，例如完整抗體的抗原結合區或可變區。抗體片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片#殳；雙抗體；線性抗體抗體；單鏈抗體分子(例如scFv);多特異性抗體片段如雙特異性、三特異性和多特異性抗體(例如雙抗體、三抗體和四抗體)；微型抗體；螯合重組抗體；三體(tribodies)或雙體(bibodies);內抗體；納米抗體(廳obody);小分子免疫藥物(smallmolecularimmunopharmaceutical,SMIP)、結合域免疫S求蛋白融合蛋白；-格駝化抗體(camelizedantibody);含VHH的抗體；以及由抗體片段形成的其它任何多肽。本發明提供了包含SEQIDNO:2的IL-1卩結合抗體或其IL-1卩結合片段。圖l表示SEQIDNO:2的氨基酸序列。優選，所述抗體或抗體片段包含SEQIDNO:21的氨基酸序列，更優選包含SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7或SEQIDNO:8的氨基酸序列。本發明的抗體還可以包含SEQIDNO:12或SEQIDNO:13的氨基酸序列，優選包含SEQIDNO:14或SEQIDNO:15。典型的，所述抗體或抗體片l爻包含輕鏈可變區和重鏈可變區，所述重鏈可變區包含SEQIDNO:2的氨基酸序列(例如包含SEQIDNO:4-8、12-15或21的氨基酸序列)。優選，所述抗體的輕鏈包含SEQIDNO:l的氨基酸序列，由SEQIDNO:1的氨基酸序列構成，或基本上由SEQIDNO:1的氨基酸序列構成。因此，例如，所述抗體的輕鏈包含SEQIDNO:9、SEQIDNO:IO或SEQIDNO:ll的氨基酸序列，由SEQIDNO:9、SEQIDNO:10或SEQIDNO:11的氨基酸序列構成，或基本上由SEQIDNO:9、SEQIDNO:10或SEQIDNO:11的氨基酸序列構成。同樣優選的是，抗體或抗體片段的重鏈可變區包含SEQIDNO:23或SEQIDNO:24(例如SEQIDNO:25或SEQIDNO:26)的氨基酸序列，由SEQIDNO:23或SEQIDNO:24(例如SEQIDNO:25或SEQIDNO:26)的氨基酸序列構成，或基本上由SEQIDNO:23或SEQIDNO:24(例如SEQIDNO:25或SEQIDNO:26)的氨基酸序列構成的抗體或抗體片段。本發明提供了含有重鏈可變區的IL-1(3結合抗體或其IL-ip結合片段，其中所述重鏈可變區包含SEQIDNO:2、SEQIDNO:23或SEQIDNO:24的氨基商阱列之一，可選SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23或SEQIDNO:24的氨基酸序列之一，可選SEQIDNO:12、SEQIDNO:13或SEQIDNO:21的氨基酸序列之一，或可選SEQIDNO:13或SEQIDNO:21的氨基酸序列，或可選SEQIDNO:8、SEQIDNO:14或SEQIDNO:15的氨基酸序列，或可選SEQIDNO:8或SEQIDNO:15的氨基酸序列。典型的，所述抗體或抗體片段包含輕鏈可變區，優選所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:9、SEQIDNO:10或SEQIDNO:11的氨基酸序列。作為例子，優選的抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中所述重鏈可變區包含SEQIDNO:8的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:11的氨基酸序列。本發明還提供了包含SEQIDNO:28的氨基酸序列之一的IL-1P結合抗體或其IL-1(3結合片段。優選，所述抗體或片段還包括SEQIDNO:27的氨基酸序列之一。本發明還提供了IL-1P結合抗體或其IL-1P結合片段，其包含SEQIDNO:29,由SEQIDNO:29構成，或基本上由SEQIDNO:29構成。優選，所述抗體或抗體片段包含SEQIDNO:31至SEQIDNO:35的氨基酸序列之一，由SEQIDNO:31至SEQIDNO:35的氨基酸序列之一構成，或基本上由SEQIDNO:31至SEQIDNO:35的氨基酸序列之一構成，或者可選所述抗體或抗體片段包含SEQIDNO:31、SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列，由SEQIDNO:31、SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列構成，或基本上由SEQIDNO:31、SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列構成，或者可選所述抗體或抗體片段包含SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列，由SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列構成，或基本上由SEQIDNO:32或SEQIDNO:33的氨基酸序列構成。優選所述抗體或抗體片段還包括輕鏈可變區，其含SEQIDNO:27的氨基酸序列之一，可選SEQIDNO:9、SEQIDNO:10或SEQIDNO:11的氨基酸序列之一。圖2、圖3和圖4列出了本發明典型的重鏈和輕鏈可變區，其序列對應于這里被稱作AB1、AB2、AB3、AB4、AB5、AB5.1、AB5.2、AB5.3和AB5.4的抗體。所述AB5.1、AB5.2、AB5.3和AB5.4序列含有在重鏈CDR3區中被指定為X,和X2的可變位點。這些可變位點可以是任何被指定的氨基酸。優選X,和X2分別是丙氨酸和精氨酸、纈氨酸和精氨酸、苯丙氨酸和精氨酸、賴氨酸和賴氨酸、或者天冬酰胺和精氨酸。AB5.1包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中所述重^T連可變區包含SEQIDNO:12的氨基賄列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:IO的氨基餅歹寸。AB5.2包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中所述重鏈可變區包含SEQIDNO:13的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:11的氨基酸序列。AB5.3包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中所述重鏈可變區包含SEQIDNO:23的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:IO的氨基酸序列。AB5.4包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中所迷重鏈可變區包含SEQIDNO:24的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:ll的氨基酸序列。本發明包括IL-1P結合抗體片段，其包含前述任何一種重鏈或輕鏈序列病結合IL-l(3。這里使用的術語片段指抗體中任何3個或更多個連續氨基酸(例如4個或更多、5個或更多、6個或更多、8個或更多、或者甚至10個或更多個連續氨基酸)，并且包括Fab、Fab'、F(ab')2和F(v)片段或其單獨的輕鏈或重鏈可變區或其部分。IL-1(3結合片段包括例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv和scFv。這些缺少完整抗體的Fc片段，會快速地從循環中被清除，并且可以具有比起按整的抗體低的非特異性組織結合。參見Wahl等人(1983)，■/M/c/.MW.，24:316-25。可以使用公知的方法從完整的抗體產生這些片段，例如通過用酶進行蛋白質水解剪切如木瓜蛋白酶(產生Fab片段)或胃蛋白酶(產生F(ab')2片段)。本發明包括IL-1e結合抗體和其IL-1P結合片段，其選擇性地結合IL-1P配體，但允許或基本上允許被結合的IL-1P配體結合到I型IL-1受體(IL-1RI)(參見實施例14和圖19及圖20)。如實施例14所證明的，與包括許多已知IL-1P結合抗體在內的許多抗體相反，被指定為AB5和AB7的抗體選擇性地結合-1(3配體，但它們不會阻斷或者基本不阻斷IL-1P結合IL-1RI。例如，被指定為AB7的抗體結合IL-1P抗原決定簇，但仍允許被結合的IL-1P結合到IL-1RI。因此，本發明包括能夠結合到IL-1P抗原決定簇的IL-1P結合抗體或片段，這樣所結合的抗體或片段允許或基本允許IL-1P結合I型IL-1受體(IL-1RI)，所述抗體或片段以低于3pM的解離常數結合人IL-iP。在本領域中被充分描述并用于確定IL-1P結合I型IL-1受體的體內基于細胞的檢-驗包括確定存在結合IL-1P或IL-1RI的分子(例如抗體、拮抗劑或其它抑制劑)的檢驗(參見例如Evans等人(1995),生物化學(/脂.Cta).30270:11477-11483;Vigers等人(2000歷o/.C72e附.275:36927-36933;Yanofsky等人(1996),淑/.JcW.USA93:7381-7386;Fredericks等人(2004),蛋白質工程(尸rafe/"Z)饑5W.17:95-106);Slack等人(1993)，所o/.C/ze附.268:2513-2524;Smith等人(2003),7www"砂18:87-96;Vigers等人(1997),7V"似w386:l卯-194;Ruggiero等人(1997),<//wmw"o/.158:3881-3887;Guo等人(1995),/所o/.270:27562-27568;5Wrao"等人(1995),J/附mw"o/.25:2842-2850;Arend等人，(1994),//mwiwo/.153:4766-4774)。用于這類檢驗的重組I型IL-1受體包括人I型IL-1受體是很容易從各種商業來源獲得的(參見例如R&DSystems,SIGMA)。也可以從使用本領域中已知的達。接著可以分離并純化所表達的I型IL-1受體用于結合檢驗中，或者可選直接以細胞結合的形式進行使用。例如，通過固定IL-1P結合抗體，將IL-1P與固定的抗體接觸并確定是否IL-1(3被結合到抗體上，并將可溶形式的IL-IRI與被結合的IL-1|3/抗體復合體進行接觸，并確定是否所述可溶的IL-1RI被結合到復合體上，可以確定IL-1P與I型IL-1受體的結合。該方案還可以包括在于IL-1P接觸之前，將可溶的IL-1RI與固定的抗體進行接觸，以確認可溶的IL-IRI不會結合到所固定的抗體上。可以使用Biacore⑧結合相互作用動力學分析的設備進行該方案。也可以將該方案用于確定是否抗體或其它分子會允許或阻斷IL-1P結合到I型IL-1受體。對于其它的IL-1P/IL-1RI結合檢驗，可以通過將存在或不存在IL-1|3抗體或其IL-1P結合片段時IL-1P與IL-IRI的結合進行比較，而確定對IL-1P與IL-IRI的結合的允許或阻斷。與對照樣品相對，在存在抗IL-1P抗體或其IL-1P結合片段時IL-1P與I型IL-1受體結合的降低被認為是檢驗中所鑒定的阻斷結果，其中所述對照樣品含有相應的緩沖液或稀釋劑而不含有IL-1P抗體或其IL-1(3結合片段。該檢驗結果可以被定量地顯示為表示存在或不存在阻斷，或者可以被定量地顯示為說明由于存在所述抗體或片段而導致的結合的降低百分率或倍數。可選地或額外地，如果IL-1(3結合抗體或IL-1P結合片段基本上阻斷IL-1(3結合IL1RI,則與不存在所述抗體'或片段時，相同濃度的IL-1P與IL1RI的結合相比，IL-l(3結合IL1RI會^皮降低至少10倍，可選至少大約10倍，可選至少大約20倍，可選至少大約504咅，可選至少大約100倍，可選至少大約1000倍，可選至少大約10000倍或更多。作為另一個實施例，如果IL-1(3結合抗體或IL-1P結合片段基本上允許IL-l(3結合到ILIRI,則所述IL-l(3結合到ILIRI是在不存在所述抗體或片段時，相同濃度IL-lP和ILIRI的結合的至少大約90%，可選至少大約，可選至少大約95%,可選至少大約99%,可選至少大約99.9%，可選至少大約99.99%，可選至少大約99.999%,可選至少大約99.9999%，可選基本相同。本發明包括IL-l(3結合抗體或IL-lp結合片段，其與這里所公開的典型抗體結合到相同的抗原決定簇或相同的抗原決定簇。可選或額外，IL-lp結合抗體或IL-l(3結合片段與具有SEQIDNO:11的輕鏈可變區和SEQIDNO:15的重鏈可變區的抗體竟爭結合。可選或額外，本發明包括IL-1P結合抗體和片段，其結合到包含在氨基酸序列ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE(SEQIDNO:36)中的抗原決定簇，該抗原決定簇是被指定為AB5和AB7結合的抗原決定簇。正如這里所設計的，通過使用任何本領域中公知的技術，人們可以容易確定是否IL-lP結合抗體或片段結合到與典型的抗體(諸如例如被標記為AB7)的一種或者多種相同的抗原決定簇或基本相同的抗原決定簇。例如，使用與實施例11中所描述的方法類似的肽陣列可以確定IL-1(3結合抗體或片段所結合的關鍵氨基酸殘基(抗原決定簇)。肽陣列例如PepSpotTM肽陣列(PT多肽技術(PeptideTechnologies,)柏林,德國)可以直接在膜上被合成，其中長度為十二個氨基酸的肽跨越整個IL-1P氨基酸序列，每條肽與之前的一個有11個氨基酸的重疊。接著使用抗原決定簇結合信息所尋找的抗體對攜帶所述肽的膜進行探針標記，如在室溫下以2嗎/ml的濃度進行2小時。使用偶聯HRP的羊抗人(或者在適當的時候為小鼠)二抗，接著進行增強的化學發光(ECL),可以對抗體與結合肽的膜的結合進行檢測。對應于成熟IL-1簇被特定抗體結合的指示。可選或另外，可以進行抗體竟爭實驗，并且這些檢驗是本領域中公知的。例如，為了確定是否抗體或片短結合到包含在含有氨基酸ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE的肽序列中的抗原決定簇，其中氨基酸ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE對應于成熟的IL-lP蛋白質的殘基83至105,該未知特異性的抗體可以與本發明中已知會結合包含在該序列中的抗原決定簇結合的任何典型抗體(例如AB7)進行比較。可以例如通過使用結合相互作用動力學分析81&(^^@設備或者通過酶聯免疫吸附測定(ELISA)進行結合竟爭檢驗。在這類^f企驗中，對抗原決定簇特異性未知的抗體進行評定其對已知比較抗體(例如AB7)竟爭結合的能力。通過與IL-1P抗原決定蔟的結合與已知比較抗體(例如AB7)降低至少大約50%,或者至少大約70%，或者至少大約80%,或者至少大約90%,或者至少大約95%，或者至少大約99%或者100%,并且是結合到基本相同抗原決定簇的指示。IL-1I3結合區域的公開，設計與本發明公開的實施方式類似，可以產生具有類似結合特征和治療或診斷實用性的其它抗體。而且，本發明的IL-1P抗體和片段包括前述具有一個或者多個保守替代(例如l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個保守替代)的輕鏈或重鏈氨基酸序列。根據本發明公開的內容，人們可以確定作為保守替代候選的氨基酸序列的位置，人們可以選擇影響保守替代的合成或天然氨基酸替代任何特定的氨基酸。對選擇保守替代的考慮包括進行特定氨基酸替代的環境，側鏈的疏水性或極性，側鏈的整體大小，具有酸性或堿性特征的側鏈在生理條件下的pK值。例如賴氨酸、精氨酸和組氨酸通常適合相互替代。正如本領域中已知的，這是因為所有這三種氨基酸都具有堿性側鏈，而且賴氨酸和精氨酸側鏈的pK值與組氨酸(大約6)相比相互接近得多(大約10和12)。類似的，甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸通常適合相互替代，限制是甘氨酸通常不適合替代該組中的其它成員。這是因為這些氨基酸中的每一個在被引入到多肽中時，都是相對疏水的，但甘氨酸缺少允許phi和psi轉動角(在a碳周圍)的a碳，因此構型自由使得甘氨酸殘基能夠在構型或二級結構中造成改變，這通常在其它氨基酸互相替代時不會出現。通常適合相互替代的其它氨基酸組包括但不限于由谷氨酸和天冬氨酸所構成的組；有苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸構成的組；以及由絲氨酸、蘇氨酸以及可以選纟奪的酪氨酸構成的組。通過對氨基酸序列進行保守性修飾或對編碼的核苷酸進行相應的修飾，人IL-1(3結合抗體或IL-1P結合片段。相反，在IL-1p結合抗體或IL-1[3結合片段的功能和/或化學特征實質性改變的替代，可以通過選擇在保持(a)替代區域的分子骨架結構例如片層或螺旋構型，(b)目標位置分子的電荷或疏水性或(c)側鏈的體積方面顯著不同的替代而完成。抗體的抗原結合片段包括保持特異性地與抗原結合的能力，通常是由所述抗體的抗原結合區保持的。已經充分建立抗體的抗原結合功能可以通過全長抗體的片段完成。抗原結合區的例子包括(i)Fab片段，其是由VL、VH、CL和CH1結構域構成的單價片段；(ii)F(ab')2片段，其是包含兩個由在鉸鏈區的二硫橋所連接的Fab片段的二價片段；(iii)Fd片段，其是和CH1結構域；Ov)Fv片段，其是抗體單臂的VL和VH結構域；(v)dAb片段(Ward等人，(1989)A^w"341:544-546),其是VH結構域；以及(vi)分離的互補性決定區域(CDR)。單鏈抗體也被包含在術語抗體的抗原決定區的范圍內。本發明的IL-1P結合抗體和片段還包括單價或多價活單體或多聚體(例如四聚體)CDR產生的結合結構域，其具有或沒有支架(例如蛋白質或糖類支架)。本發明的IL-1(3結合抗體或片段可以是較大的免疫黏附分子的一部分，其是通過抗體或抗體部分與一種或者多種其它蛋白質或肽的共價或非共價結合所形成的。這類免疫黏附分子的例子包括使用鏈霉親和素核心區來制備四聚scFv分子(Kipriyanov，S.M.,等人(1995)人類抗體和雜交瘤(a油7o命am/Z/;^nVfomw)6:93-101)，以及使用半胱氨酸、標記物肽和C-末端多聚組氨酸標簽制備二價和生物素化scFv分子(Kipriyanov,S.M.,等人(1994)Mo/./ww柳o/.31:1047-1058)。如這里所述的，通過使用標準的重組DNA技術可以獲得包含免疫黏附分子的抗體。優選的抗原結合區是完整的結構域，或者幾對完整的結構域。本發明的IL-iP結合抗體和片段還包括結構域抗體(dAb)片段(Ward等人Nature341:544-546,1989)，其由VH結構域構成。本發明的IL-1卩結合抗體和片段還包括二價抗體的雙抗體，其中VH和VL結構域被表達在一條多肽鏈上，但使用的連接體非常短以允許相通鏈上的兩個結構域之間的配對，這樣使得這些結構域與其它^1的互補結構域配對，并得到兩個抗原結合位點(參見例如EP404,097;WO93/11161;Holliger等人Ato/.」cadUSA90:6444-6448,1993;和Poljak等人2:1121-1123，1994)。雙抗體可以是雙特異性或單特異性的。本發明的IL-1|3結合抗體和片段還包括結合IL-1P的單鏈抗體片段(scFv)。scFv包含被可操作地連接到抗體輕鏈可變區(VL)的抗體重鏈可變區(VH)，其中所述重鏈可變區和所述輕鏈可變區共同或單獨形成結合IL-l卩的結合位點。scFv可以在氛基末端包含Vh區，在歡基末端包含Vl區。可選，scFv可以在氨基末端包含Vt區，在羧基末端包含VH區。而且，盡管Fv片段的兩個結構域VL和VH是由不同的基因編碼的，但她們可以被使用重組方法通過合成的連接體連接起來，這使得它們能夠被制成但條蛋白質鏈，其中VL和VH區配對形成單價分子(被稱作單鏈Fv(scFv);參見例如Bird等人(1988)5We"ce242:423-426;和Huston等人(1988)Prac.A^//.^c^f.5W.USA85:5879-5883)。可選擇的，scFv還可以在重鏈可變區和輕鏈可變區之間包含多肽連接體。通常這些多肽連接體包含1至50個之間的氨基酸，可選在3至l2個氨基酸之間，可選2個氨基酸。用于連接scFv中的重鏈和輕鏈的連接體肽的例子包括5個氨基酸的序列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQIDNO:37)。其它例子包括一個或者多個該序列的前后重復(例如，包含2至4個Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQIDNO:37)重復的多肽)以形成連接體。本發明的IL-1P結合抗體和片段還包括重鏈抗體(HCAb)。在駱駝(駱駝、單峰駱乾和路馬(camels,dromedariesandllamas);Hamers-Casterman等人1993Atoww363:446;Nguyen等人1998JMo/.S/o/.275:413)、帶紋鯊(Greenberg等人Atoww374:168-73,1995;Roux等人1998Prac.A^.XcadSd.USA95:11804)以及在銀鮫(spottedratfish)(Nguyen,等人"駱駝屬中的重鏈抗體；進化變革的實例(Heavy-chainantibodyinCameidae;acaseofevolutionaryinnovation)，"2002免疫遺傳學(/mmw"oge"e"cs)54(1):39-47)中發現的免疫球蛋白同種型中還出現了不同于傳統抗體的H2L2的結構。這些抗體能夠明顯地僅使用重鏈可變區形成抗原結合區，這些功能型抗體是僅有重鏈的二聚體(被常作"重鏈抗體"或"HCAb，，)。因此，本發明IL-1P結合抗體和片段的某些實施方式可以是特異性結合IL-1P的重鏈抗體(HCAb)。例如術語IgG類別不含有輕鏈的重鏈抗體，其由包括駱駝、單峰駱駝和無峰駝的駱駝屬(Came/Wae)的動物產生(Hamers-Casterman等人自然(A^^re)363:446-448(1993))。HCAb的分子重量為大約95kDa，而通常的IgG抗體的分子量為大約160kDa。它們的結合結構與僅由重鏈可變區構成，其通常被稱作V朋以將它們與通常的Vh迸行區分。Muyldermans等人/Mo/.12:131-140(1999)。有時，重鏈抗體的可變區被稱作納米抗體(nanobody)(Cortez-Retamozo等人腫瘤研究(ie化arc/2)64:2853-57,2004)。從被免疫的單峰駱駝可以產生納米抗體(nanobody)庫，如在Conrath等人C/7ewo//zer45:2807-12，2001)中所述的或使用重組方法。由于缺少第一恒定區(CH1)(由于缺少拼接信號，而在mRNA處理過程中被切除)，可變區(VHH)緊接是鉸鏈區、Ch2和Ch3區(Nguyen等人Mo/,/mw""o/.36:515陽524(1999);Woolven等人/www"oge"幼."50:98-101(1999))。據報道駱駝Vhh與IgG2和IgG3恒定區重組，其含有鉸鏈區、Ch2區和Ch3區，并缺少CH1區(Hamers-Casterman等人見上文)。例如無峰駝IgGl是傳統的(H2L2)抗體同種型，其中vh與含有鉸鏈區、Ch2區和Ch3區的恒定區重組，而無峰駝IgG2和lgG3是僅重鏈的同種型，其缺少CH1區并且不含輕鏈。盡管HCAb不含輕鏈，但它們仍具有抗原結合能力。Nguyen等人爿dv./mmw"o/79:261-296(2001)和Nguyen等人/mmwwoge"e"c;54:39-47(2002)中對HCAb的遺傳產生機制進行了綜述。鯊魚包括鉸口鯊表現出含有相似抗原受體的單體V區。Irving等人《//附ww"o/.AfeAoA248:31-45(2001);Roux等人尸rac.7VW/.」cad<SW.USA95:11804(1998)。Vhh含有的小的完整抗原結合片段(例如大約15kDa,118-136個殘基的片段)。駱駝VHH區已經被發現以高親和力與抗原結合(Desmyter等人/歷o/.C7^肌276:26285-90，2001)，其中VHH親和力通常在納摩范圍內，并且與Fab和SCFv片段相當。Vhh是高度可溶的，并且比SCFv和Fab片段的相應衍生物更穩定。VH片段已經相對難以以可溶形式生成，但溶解度和特異性結合的改善可以在框架殘基被改編成更類似Vhh而荻得。(參見，例如Reichman等人免疫方法雜志(J7mw""o/MeAoA)1999,231:25-38.)VHH攜帶使它們更加親水并防止與BiP(免疫球蛋白重鏈結合蛋白質)長時間反應的氨基酸替代，其中在折疊和組裝過程中，BiP通常結合到內質網(ER)中的H-鏈，直到其被L鏈所替代。由于VHH提高的親水性，提高了從ER的分泌。可以通過對被免疫的駱駝的HCAb進行蛋白質水解切割，通過直接從被免疫的駱駝的B細胞直接克隆Vhh基因得到充足的Vhh，或者從原始庫或合成庫獲得功能性VHH。與Fab或ScFv相比，在噬菌體展示中使用Vhhs更筒羊且更有效，因為僅需要克隆一個結構域并表達以獲得功能性抗原結合片段。Muyldermans,生物技術(B/otec/"o/.)74:277-302(2001);Ghahroudi等人F五^S414:521-526(1997);以及vanderLinden等人/5/ofec/z"o/.80:261-270(2000)。在美國專利公開No.20050136049和20050037421中也描述了產生具有駱駝重鏈的抗體的方法。核糖體展示法可以用于鑒定和分離具有期望的結合活性和親和力的scFv和/或Vhh分子。Irving等人《//wmw"o/.M"/wA248:31-45(2001)。核糖體展示和選擇具有產生和展示大容量庫(1014)的能力。其它實施方式通過^^駝化(camelisation)處理提供Vhh祥分子，其通過對mm-駱駝Vh例如人Vhh以提高它們的溶解度并防止非特異性結合。這是通過使用V冊樣殘基替換Vh的VL側鏈而叨叨的，進而模擬更高溶解度的V冊片段。駱駝Vh片段，特別是基于人框架的，被認為在被體內給藥給患者時，表現出大大降低的免疫反應，因此，被認為具有用于治療應用的顯著優點。Davies等人F五5S丄欲.339:285-290(1994);Davies等人7Voto'"9:531-537(1996);Tanha等人</B/o/.Cfem.276:24774-24780(2001);以及Riechmann等人/;www"o/.Md/wA231:25-38(1999)。可以利用多種表達體系用于產生包含Fab片段、scFv和Vhh的IL-1P片段。例如，原核細胞和真核細胞來源的表達體系都可以被用于大規模生產抗體片段和抗體融合蛋白。特別有利的是允許將大量抗體片段分泌到培養基中的表達體系。在Schoonjans等人(//mww"o/.165:7050-57，2000)和Willems等人(C/zra顧togr57fec/mo/腸,dh/e786:161-76，2003)中描述了制備雙特異性Fab畫scFv("二體")和三特異性Fab-(scFv)(2)("三體")。對于二體或三體，scFv分子凈皮融合到VL-CL(L)和VH-CH!(Fd)鏈的一條或兩條，例如為制備三體，兩條scFv被融合到Fab的C-末端，而在二體中，一條scFv被融合到Fab的C-末端。"微型抗體"是由通過肽連接體(無鉸鏈)或通過IgG鉸鏈融合到CH3的scFv所構成的，這已經在Olafsen，等人尸rafe/"Dm5W.2004Apr;17(4):315-23中被描述。內抗體是單鏈抗體，其表示細胞內表達并能夠處理細胞內蛋白質功能(Biocca,等人五MBOJ9:101-108，1990;Colby等人戶racTV"http://A^/USA.101:17616-21,2004)。可以根據在Mhashilkar等人■/14:1542-51,1995)和Wheeler等人(F^S五SJ17:1733-5.2003)中所描述的來制備包含細胞信號序列的內抗體，其在細胞內區域中保持抗體結構。穿膜抗體(Transbody)是能透過細胞的抗體，其中蛋白轉導域(PTD)被與單鏈可變片段(scFv)抗體相融合Heng等人(MedHypotheses.64:1105-8，2005)。本發明的IL-1p結合抗體和片段還包括抗體，其為對目標蛋白質特異性的SMIP或結合結構域免疫球蛋白。這些構建體是單鏈多肽，其含有與實施抗體效應功能必要的免疫球蛋白結構域融合的抗原結合結構域。參見例如WO03/041600,美國專利公開20030133939和美國專利公開20030118592。本發明的IL-1P結合抗體和片段還包括免疫粘附素。一個或者多個CDR可以被共價或非共價加入到分子中，以使其成為免疫粘附素。免疫粘附素可以引入CDR作為較大的多肽鏈的一部分，可以將CDR共價連接到另一條多肽鏈上，或者可以非共價引入CDR。這里所公開的CDR允許免疫粘附素特異性地結合IL-IP。本發明的IL-1P結合抗體和片段還包括抗體模擬物，其包含在有機或分子支架(例如蛋白質或糖類支架)上建造的一個或者多個IL-1P結合部分。具有相對確定的三維結構的蛋白質，通常被稱作蛋白質支架，可以被用作設計抗體模擬物的試劑。這些支架通常含有一個或者多個易于進行特異或隨機序列改變的區域，通常進行這些區域的隨機化以獲得蛋白質庫，從該庫中可以選擇期望的產品。例如，抗體模擬物可以包含非免疫球蛋白結合多肽，其具有免疫球帶白楊結構域，含有兩個或多個容積暴露環，該環含有與被插入到每個環的親代抗體不同的CDR并表現出對親代抗體所結合的配體的選擇性結合活性。非免疫球蛋白蛋白質支架已經被用于獲得具有新型結合特性的蛋白質(Tramontano等人丄Mol.Recognit.7:9,1994;McCo畫ll和Hoess,J.Mol.Biol.250:460,1995)。其它的蛋白質已經-陂作為框架進行測試，并已經-故用于在a螺旋表面(Nord等人淑.S/Wec/z"o/.15:772,1997;Nord等人尸rato.w8:601,1995)、a螺旋表面束中a螺旋之間的環(Ku和Schultz，A^/.^c^/.5W.USA92:6552，1995)以及由二硫鍵所限定的環例如小蛋白酶抑制劑(Markland等人生物化學(所oc/zem&^y)35:8045，1996;Markland等人5z'oc/ze附^^y35:8058,1996;Rottgen和Collins,164:243,1995;Wang等人■/說o/.C/zew.270:12250,1995)上展示隨機化的殘基。將支架用于抗體模擬物的方法被公開在美國專利5,770,380和美國專利公開2004/0171116、2004/0266993和2005/0038229中。因此可以產生多種IL-1P結合抗體和片段，其包含抗體重鏈可變區或輕鏈可變區的一個、兩個和/或三個CDR(優選SEQIDNO:1-26的CDR中的一個或者多個)。本發明優選的抗體或片段與IL-1P結合，其以(i)根據酶聯免疫吸附檢驗(ELISA)所確定的大約0.5nM或更低(例如大約0.4或更低，大約0.3或更低，或甚至大約0.2或更低)的IC5G，(ii)相對于其結合IL-la高至少大約100倍(例如至少大約150倍，至少大約200倍，或甚至至少大約250倍)的親和力(即對IL-1P具有比IL-Ia高至少大約100倍(例如至少大約大約150倍，至少大約200倍，或甚至至少大約250倍)的選擇性)，和/或(iii)對于IL-1P平衡結合(KD)大約為20pM或更低(例如大約15pM或更低，大約10pM或更低，或者甚至大約5pM或更低)。同樣優選的本發明的抗體或片段能夠抑制IL-1(3誘導的血清IL-6在動物中的表達，與未給藥本發明抗體或片段的IL-1P刺激的動物中血清IL-6的水平相比，抑制至少50%(例如至少60%,至少70%或甚至至少80%)。因此，在相關的方面，本發明提供了IL-1|3結合抗體或IL-1(3結合抗體片段，其具有至少一個前述的特征。盡管本發明此處已經描述了IL-1P結合抗體及其片段(例如包含輕鏈和重鏈)，但本發明還提供了不同于IL-1(3結合抗體或抗體片段的多肽，例如單鏈多肽(包括融合多肽、嵌合多肽、共軛物等)。因此，在這點上，本發明提供了包含SEQIDNO:1-26中任一氨基酸序列的多肽，或者其功能上等價的片段或變體。本發明還提供了包含SEQIDNO:27-35或42-57中任一氨基酸序列的多肽，或者其功能上等價的片段或變體。可以通過任何適當的方法制備這里所描述的抗體和抗體片段。用于制備這類抗體和抗體片段的適當方法是本領域中已知的。制備抗體和抗體片段的其它方法在這里被描述作為發明的一部分。如這里所描述的，本發明的抗體、抗體片段或多肽可以被分離或純化到任何程度。如這里所使用的，所分離的化合物是已經從自然環境中被去除的化合物。純化的化合物純度已經被提高，這樣該化合物比其存在于(i)自然環境中，或(ii)在實驗條件下起始合成和/或擴增時更純的形式存在，其中"純度"是相對的術語并且不必要意味著"絕對純"。如這里所述，前述本發明的所有抗體、抗體片段或多肽都能夠被人源化或人工改造。制備IL-1(3抗體或片段的方法本發明提供了一種用于制備親和力成熟的IL-1P結合多肽如抗體或抗體片段(包括抗體區(例如其輕鏈或重鏈可變區或任何部分例如CDR))的方法，該方法包括(a)提供第一核酸和第二核酸，其中第一核酸包含編碼IL-1P結合多肽的核S臾序列，其中所述IL-1(3結合多肽包含SEQIDNO:l-26任一項的氨基酸序列，其中第二核酸序列包含與第一核酸序列至少有一個核苷酸不同的核酸序列；(b)進行核酸混編以提供兩種或者更多種突變的核酸；以及(c)選擇突變的核酸，其編碼以下多肽，該多肽能夠(i)以比第一核酸所編碼的多肽高的親和力與IL-1P結合，(ii)對IL-l卩具有高于IL-la的選擇性，該選擇性大于第一核酸所編碼的多肽的選擇性，(iii)對于IL-ip具有低于第一核酸所編碼的多肽的平衡結合解離常數(Kd)，或者(iv)抑制IL-ip誘導的動物中血清IL-6的表達的程度比第一核酸所編碼的多肽高；以及(d)表達所選擇的突變核酸以提供親和力成熟的IL-1P多肽。優選，所述多肽是抗體或抗體片段，例如這里所描述作為本發明一部分的任何抗體或抗體片段。制備親和力成熟的IL-1P多肽的方法可選擇地還包括重復步驟(b)和(c)一次或多次，其中使用(i)至少一種步驟(c)所選擇的的突變核酸和(ii)至少一種核酸，其具有與所選擇的突變核酸有至少一個核苷酸不同的核s吏序列進行步驟(b)的核酸混編。優選，重復步驟(b)和(c)直到選擇到最佳的核酸。如果不再可能選擇到一種核酸，其編碼的多肽具有優于之前所選擇的核酸所編碼的多肽的對IL-1(3的結合特征(例如步驟(c)的特征(i)-(iv))的多肽，則選到了最佳的核酸。期望地，重復步驟(b)和(c)直到選擇一種核酸，其編碼具有下列特征中至少一種的多肽(i)根據酶聯免疫吸附檢驗(ELISA)所確定的大約0.5nM或更低(例如大約0.4或更低，大約0.3或更低，或甚至大約0.2或更低)的IC50;(ii)相對于其結合IL-la高至少大約IOO倍(例如至少大約150倍，至少大約200倍，或甚至至少大約250倍)的親和力(即對IL-1(3具有比IL-lcc高至少大約IOO倍(例如至少大約大約150倍，至少大約200倍，或甚至至少大約250倍)的選擇性)；(iii)對于IL-1P平衡結合(KD)大約為20pM或更低(例如大約15pM或更低，10pM或更低，5pM或更低，3pM或更低，2pM或更低，lpM或更低，0.7pM或更低，0.5pM或更低，0.3pM或更低，或0.2pM或更低)；或(iv)抑制IL-iP誘導的動物中IL-6的表達，與未給藥本發明抗體或片段地IL-1P刺激的動物中血清IL-6的水平相比，抑制至少50%(例如至少60%,至少70%或甚至至少80%)。通過適當的方法可以進行選擇編碼具有期望性能的多肽的突變核酸。這里公開了表達所編碼的多肽，檢驗多肽結合親和力、結合選擇性、平衡結合常數以及抑制IL-1卩誘導的IL-6表達的方法(參見實施例)。其它的方法是本領域中已知的。如果通過步驟(b)所提供的突變核酸所編碼的多肽不是抗體或全部抗體片段(例如Fab)，則必須提供含有該多肽的抗體以確定是否該多肽滿足選擇標準。因此，本發明制備親和力成熟的IL-1(3多肽的方法還可以包括提供包含所述突變核酸所編碼的多肽的抗體的步驟，其中選擇編碼具有期望性能的多肽的突變核酸的步驟是通過對所述抗體進行檢驗而進行的。這里所使用的核酸混編的意思是將兩個或多個核酸序列進行分段以提供隨機的核酸片段庫，將所述片段進行重新組裝以形成兩個或多個突變的核酸。適當的方法進行核酸混編。許多適當的方法是本領域中已知的，例如在美國專利6,489,145;6,773,900;6,764,835;6,740，506;6,713,282;6,713,281;6,713,279;6,709,841;6,696,275;6,677,115;6，673，552;6,656,677;6,605,449;6,566,050;6，562，594:6,555,315;6,537,776;6,528,249;6,479,258;6,455,254;6,440,668;6,368,798;6,361,974;6,358,709;6,352,842;6,344,328;6,335,179;6,280,926;6,238,884;6,174,673;6，171，820;6,168,919;6,057,103;6,054,267;6,030,7796,001,574;5,965,408;5,958,672;5,939,250;5,763,239;6,395,547;6,376,246;6,372,497;6,368,861;6,365,408;6,365,377;6,358,740;6,358,742;6,355,484;6，344，356;6,337,186;6,335,160;6，323,030;6,319,714;6,319,713;6,303,344;6,297,053;6,291,242;6,287,861;6,277,638;6,180,406;6,165,793;6,132,970;6,117,679;5,834,252;5,830,721;5,811,238;5,605,793中所描述的。核酸本發明的抗體、抗體片段和多肽可以由單條核酸(例如包含抗體輕鏈和重鏈多肽鏈的核苷酸序列的單條核酸鏈)所編碼，或者由兩條或更多條單獨的核酸所編碼，其中每一條編碼抗體或抗體片段的不同部分。在這一點上，本發明提供了一種或者多種核酸，其編碼任何前述的抗體、抗體片段或多肽(例如前述任意一種的輕鏈或重鏈可變區)。根據本發明的一個方面，本發明提供了一種核酸，其編碼抗體的重鏈可變區或其一部分。典型的核酸序列是在SEQIDNO:39和SEQIDNO:40中所提供的，其分別編碼SEQIDNO:15的重鏈可變區以及SEQIDNO:11的輕鏈可變區。在這一點上，本發明提供了一種編碼多肽(例如抗體的重鏈可變區)的核酸，所述多肽包含SEQIDNO:2的氨基酸序列，可選SEQIDNO:28的氨基酸序列，期望編碼一種包含SEQIDNO:21氨基酸序列的多肽(例如包含SEQIDNO:4-8任一氨基酸序列的多肽)。更優選的是編碼一種多肽(如重鏈可變區)，所述多肽包含SEQIDNO:12或SEQIDNO:13的氨基酸序列(例如包含SEQIDNO:14-15任一氨基酸序列的多肽)，或者包含SEQIDNO:23或SEQIDNO:24(例如SEQIDNO:25或SEQIDNO:26)的氨基酸序列。可選或另外，本發明的核酸可以包含一種核酸序列，其編碼抗體的輕鏈可變區或其一部分。在這一點上，本發明提供了一種核酸，其編碼包含SEQIDNO:1的氨基酸序列的多肽(例如輕鏈可變區)。例如，所述核酸序列能夠編碼包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的多肽。更優選，所述核酸編碼包含SEQIDNO:10或SEQIDNO:11的氨基酸序列的多肽。本發明還包括一種核酸，其編碼包含一個或者多個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個保守替代)保守替代的任何前述輕鏈或重鏈的氨基S1^列，正如對本發明的抗體和抗體片段所進行的討論，其中包含替代的抗體和片段具有與這里所公開的示例性抗體的一種或者多種相同或基本相同的抗原決定簇結合親和力和特異性。通過任何適當的方法，可以從這里所描述的抗體、抗體片段和輕鏈或重鏈可變區的氨基酸序列確定核酸序列，例如通過使用遺傳密碼將該氨基酸序列轉化成相應的核酸序列。編碼這些氨基酸序列(例如這里所描述的氨基酸序列)的核酸可以使用本領域中已知的方法進行制備(例如分離或合成的核酸序列)，例如在如Sambrook等人，分子克隆實驗室手冊(Mo/ecw/orC7om'"g,a丄a60rato7M朋wa/)，第3版，冷泉港出版社，冷泉港，紐約(ColdSpringHarborPress,ColdSpringHarbor,NY)，2001;Ausubel等人，分子生物學現代實驗方案(Cw庁eW尸ratoco/sAfo/ecw/ar),才各瑞尼出片反十辦會(GreenePublishingAssociates)和JohnWiley&Sons，紐約(NewYork),NY，1994;以及Herdewijn等人，寡聚核苷酸合成方法及應用(分子生物學方法)(CV^"wc/eW/&分威as7's:Mef/zodsa"c/^p//cariorarMe^%fe〖wMo/ecw/ar所o/ogy力，HumanaPress,Totowa,NJ,2004中所描述的方法。這里所描述的核酸可以被分離或純化到任何程度。如這里所使用的，所分離的化合物是已經從自然環境中被去除的化合物。純化的化合物純度已經被提高，這樣該化合物比其存在于(i)自然環境中，或(ii)在實驗條件下起始合成和/或擴增時更純的形式存在，其中"純度"是相對的術語并且不必要意味著"絕對純"。可以使用多種技術對所述核算進行純化，其包括但不限于制備型凝膠電泳或等電聚焦、親和、免疫親和或離子交換層析、分子篩層析、聚焦層析或高壓液相層析。載體(vector)這里所描述的核酸可以被插入到載體中，例如核酸表達和/或靶向載體。可以以各種方式利用這些載體，例如用于在細胞或轉基因動物中表達IL-10結合抗體或抗體片段。因此，本發明提供了一種載體，其包含本發明的任何一種或者多種核酸。"載體"是任何具有攜帶核酸進入適當的寄住細胞的能力的分并優選，載體是被使用本領域中已知的重組DNA技術進行改造的核酸，以引入期望的核酸序列(例如本發明的核酸)。期望，所述載體是由DNA構成的。適當的DNA基基因轉移載體的例子包括質粒和病毒載體。例如，適當的病毒載體包括腸炎病毒基載體(例如腺相關病毒(AAV)基載體)、反轉錄病毒載體、單純皰滲病毒(HSV)基載體、AAV-腺病毒嵌合載體、HIV病毒基載體以及腺病毒基載體。所有的這些載體都可以通過標準的重組DNA技術進行制備，所述技術被描述在例如Sambrook等人,w/ra，和Ausubel等人，swpra中。然而，不是基于核酸的載體例如脂質體也是本領域中已知的，能夠用于本發明中。所發明的載體可以基于單一的核酸類型(例如質粒)或非核酸分子(例如脂類或聚合物)。可選，所述載體可以是核酸和非核酸的結合(即"嵌合"載體)。例如，攜帶所述核酸的質粒可以使用脂或聚合物作為傳遞媒介被制備。這類載體在這里分別^f皮稱作"質粒-脂復合體，，以及"質粒-聚合物"復合體。所發明的基因轉移載體可以被整合到寄主細胞基因組中，或者能夠以游離基因的形式出現在寄主細胞中。本發明的核酸可以被插入到免疫球蛋白表達載體中，例如在McLean等人，Mo/./mm朋o/"37:837-45(2000);Walls等人，M/c/e/cTas.，21:2921-9(1993);以及Norderhaug等人，《//附wm打o/.Afe仇，204:77-87(1997)中所描述的載體。通常選擇在將使用所述載體的細胞中有功能的載體(與寄主細胞機制兼容的載體，這樣可以發生基因的擴增和/或表達)。可以在原核細胞、酵母、昆蟲(桿狀病毒系統)和/或真核寄主細胞中擴增/表達編碼IL-1P結合抗體或的核酸。對所述寄主細胞的選擇將部分依賴于是否所述IL-1(3結合抗體或片段會被進行轉換后修飾(例如糖基化和/或磷酸化)。如果有，則優選酵母、昆蟲或哺乳寄主細胞。在Meth.Enz,v.185(1990;Goeddel,ed.),AcademicPressInc.,SanDiego，Calif可以得到關于表達栽體的進一步信息。通常表達載體含有下列組分中的一個或多個啟動子、一個或者多個增強子序列、復制起點、翻譯終止序列、含有供體和受體切割位點的完整內含子序列、分泌的引導序列、核糖體結合位點、多聚腺苷酸序列、多聚連接體區以插入要表達的多肽、以及可選擇的標記物元件。載體組分可以是同源的(來自與寄主細胞相同的種和/或抹)、異源的(來自與寄主細胞種或抹不同的種)、雜交的(來自多種來源的不同序列的組合)、合成的或者原是序列，其通常的功能是調節免疫球蛋白的表達。載體組分的來源可以是任何原核或真核生物，任何脊推生物或無脊推生物，或者任何植物，只要這些組分能夠在寄主細胞機制中發揮功能，并被寄主細胞機制所激活。根據用于表達的寄主細胞的類型選擇復制的起點。作為例子，來自質粒pBR322(ProductNo.303-3s,新英格蘭生物實驗室(NewEnglandBiolabs),伯克利(Beverly),Mass.)的復制起點可以用于大部分革蘭氏陰性菌中，而來自SV40、多瘤病毒、腺病毒、泡狀口腔炎病毒(VSV)或乳頭狀瘤病毒(如HPV或BPV)的各種起點可以用于哺乳細胞中的克隆載體。通常，哺乳細胞表達載體(例如通常使用SV40起點，因為期含有早期的啟動子)不需要復制起點組分。轉錄終止序列通常位于多肽編碼區的3'末端。原核細胞中的轉錄終止序列通常包括富含G-C的片段，接著是多聚T序列。可以從作為載體一部分的商業購買或使用核酸合成方法(如上所述)的庫克隆轉錄終止序列。可選擇的標記物基因編碼對于寄主細胞在選擇培養基上存活或生長所必須的蛋白質。典型的選擇標記物基因編碼蛋白質，所述蛋白質(a)提供對抗生素或其它毒素的抗性例如對于原核寄主細胞的青霉素、四環素或卡那霉素；(b)補充細胞的營養缺陷型；或(c)補給不能從復合培養基中獲得的關鍵營養物。優選的選擇標記物是卡那霉素抗性基因、青霉素抗性基因以及四環素抗性基因。新霉素抗性基因也可以用于在原核寄主細胞和真核寄主細胞中進行選擇。其它選擇基因可以用于擴增將要表達的基因。擴增是一種過程，其中需要大量生長必需的蛋白質的基因被在重組細胞的連續傳代的染色體內被反復復制。哺乳動物的選擇標記物包括二氯葉酸還原酶(DHFR)和胸苷激酶。所述哺乳細胞轉化體^^皮置于選擇壓力下，僅有唯一通過載體上所出現的標記物的轉化體會存活。通過將轉化的細胞在培養基中選擇試劑的濃度連續變化的條件下進行培養而提供選擇壓力，這樣達到了選擇基因以及編碼IL-1(3抗體或片段的DNA的擴增。結果，從擴增的DNA合成了提高量的抗體。通常存在核糖體結合位點以起始mRNA翻譯。例如，該位點的特征是Shine-Dalgarno序列(原核細胞)或Kozak序歹'j(真核纟田胞)。該元件通常位于啟動子的3'，或要表達的多肽的編碼區的5，。所述Shine-Dalgarno序列是可以變化的，但通常是多聚噤呤(具有高A-G含量)。許多Shine-Dalgamo已經被鑒定，每一種都能夠使用上述的方法容易進行合成并用于原核載體中。引導序列或信號序列可以被用于引導多肽的分泌。信號序列可以被定為在多肽編碼區的內部，或直接定位在多肽編碼區的5'末端。已經鑒定了許多信號序列，并可以基于用于表達的寄主的進行選擇。信號序列與編碼需要表達的蛋白質(例如抗體或抗原結合片段)的核酸序列可以是同源的(自然出現的)或異源的。所選的異源信號序列需要是能夠被寄主細胞識別并處理(被信號肽酶所切割)的。對于不會識別并處理原始抗體信號序列的原核細胞，所述信號序列被所選擇的原核信號序列所替代，例如所述原核信號序列選自堿性磷酸酶、青霉素酶或熱穩定腸毒素II引導子的組。對于酵母分泌，原始抗體信號序列可以被酵母轉化酶、a因子或酸性磷酸酶引導子所取代。在哺乳細胞中，表達原始信號臺通常是令人滿意的，盡管其它哺乳信號序列可以是適合的。在大部分情況中，從寄主細胞分泌抗體或抗原結合片段將導致從抗體或片段去除信號肽。因此，成熟的抗體或片段將缺少任何引導或信號序列。在某些情況中，例如真核寄主細胞表達系統中期望糖基化的情況中，人們可以操作各種前導序列(pres叫uence)以提高糖基化或產率。例如，人們可以改變信號肽的肽酶切割位點，或增加前導序列(pres叫uence),這也可以會影響糖基化。最終的抗體或片段在-l位置(相對于成熟蛋白質的第一個氨基酸)可以具有一個或者多個額外的易于表達的氨基酸，其可以不用被完全去除。例如，最終抗體或片段可以具有在肽酶切割位點發現的一個或多個連著N-末端的氨基酸。可選，如果酶在成熟抗體或片段的這些區域內進行切割，則使用某些酶切位點可以導致稍微截短形式的期望抗體或片段。通常所述表達載體將含有能夠被寄主生物所識別的啟動子，并被可操作地連接到編碼IL-1P結合抗體或抗原結合片段的核酸分子上。原始啟動子或異源啟動子可以被使用，這依賴于用于表達的寄主細胞和期望的產率。用于原核寄主細胞的啟動子包括(3-內酰胺酶和乳糖啟動子系統；堿性磷酸酶，色氨酸(trp)啟動子系統；以及雜交啟動子例如tac啟動子。還適合其它已知的細菌啟動子。它們的序列已經被公開，并且它們能夠^^連接到期望的核酸序列，其使用期望補充限制性位點的連接體或接頭。用于酵母寄主的啟動子也是本領域中已知的。酵母增強子被有利地與酵母啟動子進行使用。適合用于不如細胞的啟動子是公知的，并且包括從病毒如多瘤病毒、鳥痘病毒、腺病毒(例如腺病毒2)、牛乳頭狀瘤病毒、禽類肉瘤病毒、細胞巨化病毒、反轉錄病毒、乙型肝炎肝炎病最優選猿病毒40(SV40)的病毒基因組的啟動子。其它適當的哺乳動物啟動子包括異源哺乳動物啟動子如熱休克啟動子和肌動蛋白啟動子。可以用于表達本發明選擇性結合試劑的附加啟動子包括但不限于SV40早期啟動子區(Bernoist和Chambon，A^wm,290:304-310,1981);CMV啟動子；包含在魯斯氏肉瘤病毒的3'長末端重復中的啟動子(Yamamoto等人(1980),CW/22:787-97);皰滲胸苷激酶啟動子(Wagner等人(1981)，尸rac.iVw/.5W.U.S.A.78:1444-5);金屬硫蛋白基因的調解序列(Brinster等人Nature,296;39-42,1982);原核表達載體例如卩-內酰胺酶啟動子(Villa-Kamaroff，等人，尸rac.淑/.>SW.U.S.A.,75;3727-3731，1978);或tac啟動子(DeBoer，等人(1983)，扁.v4cW.>SW.U.S.A.,80:21-5)。同樣感興趣的是下列動物轉錄控制區，其表現出組織特異性并已經用于轉基因動物中彈性蛋白酶I基因控制區，其在胰腺泡細胞中是有活性的(Swift等人(1984)，CW/38:639-46;Ornitz等人(1986),OWTfo^w^w/.所o/.50:399-409;MacDonald(1987),肝臟病學(T7e/"to/ogy)7:425-515);胰島素基因控制區,其在胰腺卩細胞中是有活性的(Hanahan(1985),胸廳315:115-22);免疫球蛋白基因控制區，其在淋巴細胞中是有活性的(Grosschedl等人(1984),CW/38;647-58;Adames等人(1985),胸置318;533-8;Alexander等人(1987),Mo/.CW/.歷o/.7:1436-44);小鼠乳房腫瘤病毒控制區，其在睪丸、胸部、淋巴和肥大細胞中是有活性的(Leder等人(1986),Ce〃45:485-95);白蛋白基因控制區，其在肝中是有活性的(Pinkert等人(1987)，基因及發育(Ge"esaw/Z)eve/.)1:268-76);a-胎曱球蛋白基因控制區，其在肝中是有活性的(Krumlauf等人(1985),Mo/.Ce//.所o/.5:1639-48;Hammer等人(1987),^SWewce,235:53-8);al-抗胰蛋白酶基因控制區，其在肝中是有活性的(Kelsey等人(1987),Ge恥saw/Deve/.1:161-71);(3-球蛋白基因控制區，其在骨髓細胞中是有活性的(Mogram等人，胸訓，315338-340，1985;Kollias等人(1986),Cell46:89-94);髓磷脂堿性蛋白基因控制區，其在腦中的少突細胞中是有活性的(Readhead等人(1987)，Cell,48:703-12);肌球蛋白輕鏈-2基因控制區，其在骨骼肌中是有活性的(Sani(1985),淑,，314:283-6);以及刺激生殖腺的釋放激素基因控制區，其在下丘腦中是有活性的(Mason等人(1986),Sde"ce234:1372-8)。可以將增強子序列插入到載體中以提高在真核寄主細胞中的轉錄。已知許多可以從哺乳動物基因(例如球蛋白、彈性蛋白酶、白蛋白、a-胎甲球蛋白和胰島素)獲得的增強子序列。然而通常將使用來自病毒的增強子。SV40增強子、細胞巨化病毒早期啟動子增強子、多瘤病毒增強子和腺病毒增強子是激活真核啟動子的示例性增強元件。盡管增強子可以被切割到多肽編碼區的5，或3M立置的載體中，但通常位于啟動子的5'位點。表達核酸的載體包括與細菌、昆蟲和哺乳寄主細胞兼容的載體。這些載體除了其它的以外還包括pCRII、pCR3以及pcDNA3.l(印威疇根公司(InvitrogenCompany)，SanDiego,Calif.)、pBSII(斯推塔基因公司(StratageneCompany),拉霍亞(LaJolla),Calif.)、pET15(諾瓦根(Novagen),麥迪遜(Madison),威斯康星州(Wis.))、pGEX(法瑪西亞生物技術公司(PharmaciaBiotech)，皮斯卡塔韋(Piscataway),N丄)、pEGFP-N2(克隆技術(Clontech),帕洛阿爾托(PaloAlto)，Calif.)、pETL(BlueBacII;Invitrogen)、pDSR-a(PCT公開No.WO90/14363)以及pFastBacDual(吉伯克(Gibco/BRL)，格蘭德島(GrandIsland)，N.Y.)。其它可能的載體包括但不限于柯斯質粒(Cosmid)、質粒或被修飾的病毒，但所述載體系統必須要與所選擇的寄主細胞兼容。這些載體包括但不限于質粒如811168^^1@質粒衍生物(高拷貝數ColEl-基噬菌體質粒(phagemid)，斯推塔基因克隆系統公司StmtageneCloningSystemsInc.,LaJollaCalif.)、用于克隆Taq-擴增PCR產物的PCR克隆質粒(例如TOPO.TACloningKit,PCR2.1質粒衍生物Invitrogen,卡爾斯巴德(Carlsbad)，Calif.)和哺乳動物、酵母或病毒載體如桿狀病毒表達系統(pBacPAK質粒衍生物，Clontech,PaloAlto,Calif.)。可以通過轉化、轉染、電轉或其它已知技術將重組分子引入到寄主細胞中。寄主細胞及其應用本發明還提供了包含本發明的核酸或載體的細胞(例如分離的或純化的細胞)。所述細胞可以是能夠被轉化本發明的核酸或載體以生產其所編碼的多肽的所有細胞類型。優選所述細胞是哺乳細胞例如人，更優選是雜交瘤細胞、胚胎干細胞或受精卵。為了表達IL-1P結合或片段，編碼如上述獲得的部分或全長輕鏈和重鏈的DNA被插入到表達載體中，因此這些基因被可操作地連接到轉錄和翻譯控制序列中。在本文中，術語"可操作地"的意思是抗體基因被連接到載體中，這樣載體內的轉錄和翻譯控制序列提供了它們期望的調節所述抗體基因轉錄和翻譯的功能。所述表達載體和表達控制序列被選擇為與所使用的表達寄主細胞兼容。抗體輕鏈基因和抗體重鏈基因可以被插入到不同的載體中，或者更典型的，兩個基因被插入到相同的表達載體中。通過標準的方法將這些抗體基因插入到表達載體中(例如通過連接抗體基因片段和載體上的互補限制性位點，或者如果沒有限制性位點存在則平末端連接)。在插入輕鏈或重鏈序列之前，所述表達載體可以已經攜帶抗體恒定區序列。例如，一種將所逸定的VH和VL序列轉化成全長抗體基因的方法是將它們分別插入到已經編碼重鏈恒定區和輕鏈恒定區的表達載體中，這樣所述VH部分被可操作地連接到載體內的CH部分中，VL部分被可操作地連接到載體內的CL部分。另外或可選，所述重組表達載體可以編碼信號肽，其輔助抗體鏈從寄主細^^分泌。所述抗體鏈基因可以被克隆到載體內，這樣信號肽被符合閱讀框地連接到抗體鏈基因的氨基末端。所述信號肽可以是免疫球蛋白信號肽或異源信號肽(即來自非免疫球蛋白蛋白質的信號肽)。除了抗體鏈基因外，本發明的重組表達載體可以攜帶調節序列，其控制抗體鏈基因在寄主細胞中的表達。術語調節序列是為了包括控制抗體鏈基因的轉錄或翻譯的啟動子、增強子和其它表達控制元件(例如多聚腺苷酸信號)。這些調控序列被描述在例如Goeddel;基因表達技術酶學方法(￡jc;m^o"T^c/mo/ogy,jW^/zoA5Vz2ymo/ogy)185,學院出片反3土(AcademicPress),圣地亞哥(SanDiego),加利福尼亞(Calif).(1990)中。可以理解的是，對表達載體的設計，包括對調控序列的選擇將依賴于這些因素例如對進行轉化的寄主細胞的選擇、期望的蛋白質的表達水平，以及其它的考慮。哺乳寄主細胞表達的優選調節序列包括引導哺乳細胞中高水平蛋白質表達的病毒元件。除了所述抗體鏈基因和調節序列外，本發明的重組表達載體還可以攜帶額外的序列，例如調節寄主細胞中載體復制的序列(例如復制的起點)以及可選擇的標記物基因。所述可選擇的標記物基因輔助選擇已經引入載體的寄主細胞(參見例如美國專利No.4,399,216,4,634,665和5,179,017，全部是Axel等人的)。例如，通常可選擇標記物基因為已經引入載體的寄主細胞提供了對藥物的抗性，例如G418、潮霉素或甲氨蝶呤。優選的可選擇標記物基因包括二氳葉酸還原酶(DHFR)基因(用于dhfr-寄主細胞，使用甲氨蝶呤進行選擇/擴增)以及neo基因(用G418進行選擇)。將核酸和載體引入到所分離的細胞和培養中，以及在體內外選擇所轉化的寄主細胞的方法是本領域中已知的，并且包括使用氯化鈣介導的轉化、轉導、偶聯、三親抹雜交、DEAE、葡聚糖介導的轉染、感染、與脂質體的膜融合、使用覆蓋DNA的基因槍彈進行高速轟擊、直接微注射倒但細胞內以及電轉(參見例如Sambrook等人，見上文；Davis等人，分子生物學基本方法(B必/cM"/wA/"Mo/ecw/w所o/ogy),第2版，McGraw-HillProfessional,1995;以及Neumann等人，五AffiO人l:841(1982))。所述包含本發明的核酸或載體的細胞能夠被用于生產IL-1P結合抗體、其片段或其一部分(例如由所述核酸或載體所編碼的重鏈序列或輕鏈序列)。將本發明的核酸或載體引導到細胞中后，在適合表達所編碼序列表達的條件下對細胞進行培養。接著可以從細胞分離所述抗體、抗原結合片段或抗體的一部分。在某些實施方式中，可以將兩種或者多種共同編碼IL-1|3結合抗體或其抗原結合片段的載體51入到細胞中。例如編碼重鏈可變區或完整重鏈序列的第一載體可以被引入到寄主細胞中，編碼輕鏈可變區或完整輕鏈序列的第二載體也被引入到寄主細胞中。接著在適合表達第一和第二載體所編碼的兩條序列的條件下，對細胞進行培養。如果必要，可以接著將所分離的多肽在促進它們聯合和組合成IL-13結合抗體或其抗原結合片段的條件下將所分離的多肽進行組合。可選，所述第一和第二載體能夠被引入到不同的細胞中，并可以從各自細胞分離產品，并連接以提供IL-1P結合抗體或其抗原結合片段。用于促進抗體鏈和和組合成抗原結合多肽的方法在本領域中已經被描述。類似的，分離抗體、其抗原結合片段或重鏈和輕鏈片段的方法是本領域技術人員所已知的。含有本發明的核酸或載體的胚胎干細胞可以被用于產生轉基因非、人動物。用于制備轉基因動物的方法被描述在Hofker等人,轉基因小鼠方法和實驗方案(分子生物學方法)(7hmsgew'cMme..Me決oiis1尸ortoco/^fMe^o<iy/"Mo/ecw/ar5wfogy力，HumanaPress,Clifton,NJ，2002中。這里所公開的含有核酸或載體的轉基因非人動物可以被用與表達所編碼的抗體、抗原結合片段或所述抗體的一部分。接著可以從該動物分離抗體、抗原結合片段或所述抗體的一部分。接著可以對抗體的一部分進行重新構建(與抗體其它部分進行組合)成本發明的IL-1(3結合抗體或抗體片段。所述寄主細胞可以是原核寄主細胞(例如大腸桿菌)或真核寄主細胞(例如酵母細胞、昆蟲細胞或脊推動物細胞)。在適當的條件下培養時，所述寄主細胞表達IL-1P結合抗體或片段，接著可以從培養基中被收集(如果寄主細胞將其分泌到培養基中)，或者直接從生產它的細胞中被收集(如果不被分泌)。選擇適當的寄主細胞將依賴于各種因素，例如期望的表達水平、對于活性是期望或必要的多肽修飾如糖基化或磷酸化、以及容易折疊成生物學上有活性的分子。在本領域中已知許多適合的寄主細胞，并可以從美國典型培養物庫(ATCC)Manassas,Va獲得。例子包括哺乳動物細胞例如中國倉鼠卵巢細胞(CHO)(ATCCNo.CCL61)CHODHFR-細胞(Urlaub等人7Vaf/.爿cadUSA97，4216-4220(1980))、人胚胎腎(HEK)293或293T細胞(ATCCNo.CRL1573)、3T3細胞(ATCCNo.CCL92)或PER.C6細胞。對適當哺乳動物寄主細胞的選擇，以及轉化、培養、擴增、篩選和產物生產以及純化的方法是本領域中已知的。其它適當的哺乳動物細胞系是猴COS-l(ATCCNo.CRL1650)和COS-7細胞系(ATCCNo.CRL1651)以及CV-1細胞系(ATCCNo.CCL70)。其它的典型哺乳寄主細胞包括靈長類細胞系、鳥類細胞系和嚙齒類細胞系，包括被轉化的細胞系。正常的二倍體細胞，來自體內原代培養組織的細胞主以及原代外植體也是適當的。候選的細胞可以在選擇基因上基因型缺陷，或者可以含有顯性發揮作用的選擇基因。其它適合的哺乳動物細胞包括但不限于小鼠成神經細胞瘤N2A細胞、HeLa、小鼠L-929細胞、來自SwissBalb-c或NIH小鼠的3T3系、BHK或HaK倉鼠細胞系，其可以從美國典型培養物庫Manassas,Va獲得。這些細胞系中的每一種都是蛋白質表達領域的技術人員知道并可以得到的。類似可以用作本發明的寄主細胞是細菌細胞。例如各種大腸桿菌(￡.co/n抹(例如HB101、(ATCCNo.33694)DH5a、DH10以及MC1061(ATCCNo.53338))是在生物
技術領域：
中公知的寄主細胞。枯草桿菌(及sw6"fc)、假單萬包菌(尸化"do附o"oy《pp.)、其它4干菌(S"c/〃附j//.)、鏈霉菌(5!^epto;3[ycay)等的各種林都可以用于本發明中。為了表達輕鏈和重鏈，編碼重鏈和輕鏈的表達載體被通過標準技術轉染到寄主細胞中。轉染包括多種通常用于將外源DNA引入到原核或真核寄主細胞中的多種技術，例如電轉、磷酸4丐沉淀、DEAE-葡聚糖轉染等。盡管理論上可以在原核或真核寄主細胞中都能夠表達IL-1p結合抗體或片段，但優選在真核寄主細胞中表達所述抗體或片段，最優選在哺乳動物寄主細胞中，因為真核細胞特別是哺乳動物細胞比原核細胞更可能組裝和分泌被正確折疊并且具有免疫學活性的抗體。用于表達本發明重組抗體的哺乳寄主細胞包括中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞)(包括dhfKCHO細胞，其在Urlaub和Chasin，(1980)Prac.7Vaf/.^c"dSW.USA77:42164220中被描述，使用DHFR作為可選擇的標記物，例如在R.J.Kaufman和P.A.Sharp(1982)M/.歷o/.159:601-621中所描述的)，NSO骨髓瘤細胞、COS纟田胞和SP2纟田胞。如果編碼抗體基因的重組表達載體被引入到哺乳動物寄主細胞中，則通過將該寄主細胞培養一段時間來制備所述抗體，其中所述時間足以允許在寄主細胞中表達抗體，或者更優選將所述抗提分泌到寄主細胞生長的培養基中。使用標準的蛋白質純化方法可以從培養基中回收所述抗體。許多本領域中已知的酵母細胞抹也可以用作表達抗體和片段的寄主細胞。優選的細胞包括例如釀酒酵母(&cc/7ara^ycracev&ae)。另外，如果期望，可以利用昆蟲細胞。這些系統可以被描述在例如Kitts等人(5/otec/m/^",14,810-817(1993))，Lucklow(CWk(9;/".歷o/ec/wo/"4,564-572(1993))以及Lucklow等人U67,4566-4579(1993))中。優選的昆蟲細胞是Sf-9和Hi5(Invitrogen，Carlsbad,Calif.)。可以通過公知的方法包括氯化釣法、電轉法、微注射法、脂質體轉染法或DEAE-葡聚糖法，將編碼IL-1P結合抗體或片段轉化或轉染到選定的寄主細胞中。所選擇的方法將部分依賴于所使用的細胞類型。這些方法和其它適當的方法是公知的，并且在Sambrook等人見上文中被列出。轉基因動物也可以用于表達糖基化抗體和片段。例如，人們可以使用轉基因的產奶動物(例如牛和羊)并在動物奶中得到糖基化的結合試劑。可選地，人們可以使用植物來生產糖基化的選擇結合試劑。可以使用本領域中已知的培養基培養含有編碼IL-1P結合抗體或片段的表達載體的寄主細胞。所述培養基通常含有細胞生長和存活所必須的所有營養物。用于培養大腸桿菌細胞的培養基的例子包括LuriaBroth(LB)和/或TerrificBroth(TB)。用于培養真核細胞的適當培養基是RPMI1640、MEM、DMEM，其可以被補充血清和/或培養特定細胞系所期望的生長因子。典型的昆蟲培養基是格雷斯氏培養基，其被補充了酵母粉、乳白蛋白水解產物和/或胎牛血清作為必需品。可以用于被轉染細胞或轉化細胞的選擇性生長的抗生素或其它化合物可以被加入到培養基中作為補充物。根據在轉化細胞的質粒上所出現的選擇標記物，對該化合物進行選擇。例如，如果所述可選擇的標記物元件是卡那霉素抗性，則加入到培養基中的化合物將是卡那霉素。用于選擇性培養的其它化合物包括青霉素、四環素和新霉素。通過使用本領域已知的方法可以確定寄主細胞所產生的IL-1P結合抗體或片4炎的量。這些方法包括但不限于蛋白質印跡(Westernblot)分析、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、非變性凝膠電泳、HPLC分離、免疫沉淀和/或活性檢驗。對已經被分泌到細胞培養基中的IL-1(3結合抗體或片段的純化，可以通過使用許多技術完成包括親和、免疫親和或離子交換層析、分子篩層析、制備型凝膠電泳或等電聚焦、聚焦層析和高壓氣相色譜。例如，可以通過親和層析使用蛋白質A純化含有Fc區的抗體，其中蛋白質A選擇性地結合Fc區。可以制備在其羧基或氨基末端具有親和標簽包括六聚組胺酸或其它小肽如FLAG(EastmanKodakCo.,NewHaven,Conn.)或myc(Invitrogen)的被修飾形式的抗體或抗原結合片段，接著通過一步親和柱進行純化。例如多聚組胺酸以高親和力和特異性結合鎳，因此鎳柱的親和力(例如Qiager^.鎳柱)可以被用于純化具有多聚組胺酸標簽的選擇結合試劑(參見例如Ausubel等人eds.,CWe"f尸ratoco/sMo/ecw/w腸/ogy，Section10.11.8，JohnWiley&Sons,NewYork(1993))。在某些情況中，可以采用多步純化。在原核寄主細胞中表達的IL-1(3結合抗體或片段可以以可溶形式出現在細胞質的周質間隙中，或者以不溶形式作為細胞內含體的一部分。IL-1|3結合抗體或片段可以被從寄主細胞中提取出來，其使用本領域中已知的任何適當技術。例如，所述寄主細胞可以被裂解以釋放外周胞質/細胞質的成分，其通過弗氏壓碎(Frenchpressure)、勻漿和/或超聲接著離心。可以使用本領域已知的方法，對在細胞質中出現或從細胞周質間隙釋放的可溶形式的IL-ip結合抗體或片段進行進一步的純化，例如通過滲透壓休克技術從細菌周質間隙釋放Fab片段。如果已經形成了含有抗體或片段的內含體，則它們通常會結合到細胞膜的內壁和/或外壁上，因此會最初在離心后的沉淀材料中被發現。接著在pH極限下或使用離液劑如去污劑、胍或胍衍生物、尿素或尿素衍生物在存在還原劑如二硫蘇糖醇在堿性pH下或三羧乙基磷在酸性pH下對沉淀材料進行處理，以釋放、分離和溶解內含體。接著可以將可溶的抗體或片段使用凝膠電泳、免疫沉淀等進行分析。如果希望可溶的抗體或抗原結合片段，則可以使用標準的方法如在下面和在Marston等人(M威￡"z.，182:264-275(1990))中所描述的方法進4亍分離。在某些情況中，在分離后，IL-1P結合抗體或片段可能不具有生物學活性。可以使用許多用于"重新折疊"或將多肽轉化成其四級結構并生成二疏4建的方法以恢復其生物學活性。這些方法包括將溶解的多肽在存在特定濃度的離液劑時暴露到通常高于7的pH下。對離液劑的選擇非常類似于用于內含體溶解的選擇，但通常離液劑凈皮以較低的濃度使用，并且不必要與溶解時所使用的離液劑相同。在大多數情況中，重新折疊/氧化溶液將還含有還原劑或以特定比例的還原劑和其氧化形式，以得到特定的氧化還原勢能，以能夠使二石克鍵混編在所形成的蛋白質半胱氨酸橋中出現。某些通常使用的氧化還原對包括半胱氨酸/胱胺、谷胱甘肽(GSH)/二硫二GSH、氯化銅、二硫蘇二醇(DTT)/二瘞烷DTT以及2-巰基乙醇(bME)/二-硫代-b(ME)。在許多情況中，可以使用助溶劑來提高重新折疊的效率，用于該目的通常使用的試劑包括甘油、不同分子量的聚乙二醇、精氨酸等。也可以通過化學合成方法(例如固相肽合成)制備本發明的IL-113結合抗體或片段，其使用本領域中已知的技術，例如在Merrifield等人(1963)，J.」w.CTze附.Soc，85:2149,Houghten等人(1985),iVociV^/爿cadSc/.USA,82:5132，以及Stewart和Young(1984)，固相肽合成(5b/W/Vza^P^/6fe^^wAas/s,)皮爾斯化學公司(PierceChemicalCo.)，羅克福德(Rockford),111中所列出的。這些抗體或片段可以被合成為在氨基末端具有或者沒有曱硫氨酸。化學合成的抗體和抗原結合片段可以使用在這些參考文獻中所列出的方法被氧化以形成二硫橋。這樣制備的抗體和片段將保持與原始或重組產生的IL-1P結合抗體或片段相關的至少一種生物學功能。藥物組合物可以將本發明的IL-1P結合抗體、抗體片段、核酸或載體配制在組合物中。這類組合物包含治療或預防有效量的本發明的IL-1(3結合抗體、抗體片段、核酸或載體，其與適當的運載體混合例如藥物上可以接受的試劑。通常，在配制到藥物組合物之前，本發明的IL-1P結合抗體、抗體片段、核酸或載體被充分純化用于為動物給藥。用于本發明藥物組合物的藥物上可以接受的試劑包括運載體、賦形劑、稀釋劑、抗氧化劑、防腐劑、著色劑、芳香劑和稀釋試劑、乳化劑、溶劑、填充劑、膨脹劑、緩沖液、傳輸載體、張度劑、助溶劑、潤濕劑、絡合劑、緩沖試劑、抗菌劑和表面活性劑。中性緩沖鹽或與血清蛋白混合的鹽是典型的適當運載體。所述藥物組合物可以含有抗氧化劑例如抗壞血酸；低分子量多肽；蛋白質如血清白蛋白、凝膠或免疫球蛋白；親水聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸例如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它糖類包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑如EDTA;糖醇如甘露醇或山梨醇；形成鹽的帶相反電荷的離子例如鈉；和/或非離子表面活性劑例如Tween、普盧蘭尼克(Pluronic)或聚乙二醇(PEG)。同樣，作為例子，適當的張力增強劑包括石咸金屬卣化物(優選氯化鈉或氯化鉀)、甘露醇、山梨醇等。適當的防腐劑包括苯曱烷氯化銨、硫汞撒、苯乙醇、對羥基苯曱酸甲酯、對羥基苯曱酸丙酯、氯己定、山梨酸等。過氧化氫也可以被用作防腐劑。適當的助溶劑包括甘油、丙二醇和PEG。適當的絡合劑包括咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、(3-環糊精或羥基-丙基-p-環糊精。適當的表面活性劑或濕潤基包括山梨聚糖酯、聚山梨醇酯如聚山梨醇酯80、氨丁三醇、卵磷脂、膽固醇、泰洛沙泊等。緩沖液可以是傳統的緩沖液例如醋酸鹽、硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽、石灰酸氬鹽或Tris-HCl。醋酸鹽緩沖液可以是大約pH4-5.5,Tris緩沖液可以是大約pH7-8.5。在雷明頓氏藥物科學(/em/"gto"'si^armacew/fca/5Wewc&s)，第18片反,A.R.Gennaro，ed.,馬克出W反公司(MackPublishingCompany)，1990中列出了其它的藥物試劑。所述組合物可以是液體形式，或者是凍干或冷凍干燥的形式，并可以含有一種或多種凍干保護劑、賦形劑、表面活性劑、高分子量結構添加劑和/或膨脹劑(參見例如美國專利6,685,940、6,566,329和6,372,716)。在一個實施方式中，含有凍干保護劑，其是非還原糖如蔗糖、乳糖或海藻糖。通常所含的凍干保護劑的量是，通過重新構建，所得到的制劑將是等滲的，盡管高滲或稍微高滲的制劑也可以是適當的。另外，凍干保護劑的量需要足以防止由于凍干出現不能接受的變性和/或聚集的量。在預先凍干的制劑中典型凍干保護劑糖(例如蔗糖、乳糖或海藻糖)的濃度是大約10mM至大約400mM。在另一個實施方式中，含有表面活性劑，例如如非離子表面活性劑和離子表面活性劑如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80);泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188);聚(乙二醇基)苯醚(例如Triton);十二烷基硫酸鈉(SDS);月桂烷基硫酸鈉；辛烷基糖香鈉；月桂烷基-、肉豆蔻基-、亞油烯基-或硬脂酰基-磺基甜菜堿；月桂烷基-、肉豆蔻基-、亞油烯基-或硬脂酰基-肌氨酸；亞油烯基-、肉豆蔻基-或鯨蠟基甜菜堿；月桂酰胺丙基-、椰油酰胺丙基-、亞油烯基酰胺丙基-、肉豆蔻基酰胺丙基-、棕櫚酰胺丙基-或異硬脂酰胺丙基-甜菜堿(例如月桂酰胺丙基)；肉豆蔻基酰胺丙基-、棕櫚酰胺丙基-或異硬脂酰胺丙基-二曱胺；椰油曱基牛磺酸鈉或曱基ofeyl牛磺酸二鈉(methylofeyl-taurate);以及MONAQUAT系列(MonaIndustries,Inc.,Paterson,N丄)、聚乙二醇、聚丙二醇以及乙二醇和丙二醇的共聚物(例如Pluronics、PF68等)。在預先凍干的制劑中表面活性劑的典型量是大約0.001-0.5%。高分子量結構添加劑(例如填充劑、粘合劑)可以包括例如阿拉伯樹膠、白蛋白、褐藻酸、磷酸鈣(二鹽)、纖維素、羧甲基纖維素、羧曱基纖維素鈉、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基曱基纖維素、微晶纖維素、葡聚糖、糊精、葡萄糖結合劑、蔗糖、曱基纖維素、預膠凝淀粉、硫酸鈣、直鏈淀粉、甘氨酸、膨潤土、麥芽糖、山梨醇、乙基纖維素、磷酸氫二鈉、磷酸二鈉、焦亞硫酸二鈉、聚乙烯醇、凝膠、葡萄糖、瓜爾樹膠、液狀葡萄糖、可壓縮糖、硅酸鎂鋁、麥芽糊精、聚氧乙烯、聚曱基丙烯酸酯、聚維酮、藻酸鈉、黃芪膠微晶纖維素、淀粉和玉米蛋白。高分子量結構添加劑的典型濃度是O.l重量％至10重量％。在其它實施方式中，可以包含膨脹劑(例如甘露醇、甘氨酸)。組合物可以適合腸胃外給藥。適合通過任何路線注射或灌注進入動物的典型組合物是本領域技術人員可以得到的，例如關節內、皮下、靜脈內、肌內、腹膜內、大腦內(實質內)、腦室內、肌內、眼內、動脈內或損傷內路線。腸胃外給藥的制劑通常是無菌、無熱原、等滲的水溶液，可選擇地含有藥物上可以接受的防腐劑。非水溶劑的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油、可注射的有機酯如油酸乙酯。含水運載體包括水、醇/水溶液、乳化劑或懸浮液包括鹽水和緩沖介質。腸胃外給藥媒介包括氯化鈉溶液、林格氏右旋糖、右旋糖和氯化鈉、乳酸林格氏液或固定性油。靜脈內給藥的媒介包括液體和營養補充物、電解液補充物例如基于林格氏右旋糖的等。也可以存在防腐劑和其它添加劑，例如抗菌劑、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體等。通常，參見i^m/"gto"'s戶/armGcew"ca/5We"ce，第16版，MackEds.,1980，這里將其引入作為參考。這里所描述的藥物組合物可以被配制成可控釋放或持續釋放，其以提供局部產品濃度(例如團塊(bolus)、積存作用)和/或在特定局部環境中提高半衰期的方式。該組合物可以含有本發明的IL-1I3結合抗體、抗體片段、核酸或載體的制劑，其具有微粒聚合化合物配制品如聚乳酸等、聚乙醇酸以及諸如生物可降解基質、可注射微球、微膠嚢顆粒、微膠嚢、生物蝕解的顆粒珠、脂質體和可植入釋放設備，其提供對所述活性試劑的可控或持續釋放，接著其可以作為積存注射被釋放。用于配制這類持續釋放或可控釋放的方法是已知的，并且許多聚合物已經被開發并用于控制釋放和傳輸藥物。通常這些聚合物是生物可降解的和生物兼容的。聚合物水凝膠包括通過對映體聚合物的或多肽部分的絡合、具有溫度或pH敏感性能的水凝膠可以期望用于提供藥物積存作用，因為在捕獲生物活性蛋白脂藥物(例如抗體)中有關的潮濕和含水的條件。參見，例如在PCT專利申請WO93/15722中關于釋放多孔聚合物微顆粒用于傳輸藥物組合物。用于此目的的適當材料包括聚交酯(參見，例如美國專利3,773,919)、聚(a-羥基羧酸)聚合物，例如聚-D-(-)-3-羥基丁酸(EP133,988A)、L陽谷氨酸和，乙基丄-谷氨酸鹽的共聚物(Sidman等人，生物高聚物(說o;o/j;w^s)，22:547-556(1983))、聚(2-羥乙基-甲基炳烯酸脂)(Langer等人,/S/owedi仏，15:167-277(1981)以及Langer,CTzew.rec/.,12:98-105(1982))、乙烯-乙酸乙烯酯或聚-D(-)-3羥基丁酸。其它生物可降解聚合物包括聚(內酯)、聚(乙縮醛)、聚(原酸酯)以及聚(原碳酸酯)。持續釋放的組合物還可以包含脂質體，其可以通過任何本領域已知的方法被制備(參見，例如Eppstein等人扁.如d5W.USA，82:3688-92(1985))。運載體自身或其降解產物在目標組織中應該是無毒的，并且不應該進一步使病癥惡化。這可以通過在目標失調的動物模型中直接篩選而確定，或者如果沒有這類模型，則在正常動物中進行。用于持續釋放的對重組蛋白的微膠嚢化已經成功地應用于人生長激素(rhGH)、干擾素-(rhIFN—)、白介素-2和畫rgpl20。Johnson等人，A^,.M^/.,2:795-799(1996);Yasuda,TTzm,27:1221-1223(1993);Hora等人B/o/:rec/2wo/ogv.8:755-758(1990);Cleland,"使用聚交酯聚乙二醇微球體系統的單免疫疫苗的i殳"H"和制備(DesignandProductionofSingleImmunizationVaccinesUsingPolylactidePolyglycolideMicrosphereSystems)、"在疫苗設計中亞單位和輔劑途徑(inVaccineDesign:TheSubunitandAdjuvantApproach)，PowellandNewman,eds,(PlenumPress:NewYork,1995),pp.439-462;WO97/03692，WO96/40072，WO96/07399;和美國專利No.5,654,010。由于其生物兼容性和生物可降解性能的寬范圍，使用乳酸-乙二醇酸共聚物(PLGA)開發這些蛋白質的持續釋放的制劑。PLGA的降解產物，乳酸和乙二醇酸可以在人體內被快速清除。而且，該聚合物的降解能力能夠依賴于其分子量和組成。Lewis,"來自交酯/糖脂類聚合物的生物活性試劑的受控釋放(Controlledreleaseofbioactiveagentsfromlactide/glycolidepolymer),"在(in:)M.Chasin和R.Langer(Eds.)，生物所能降解的聚合物作為藥物遞呈系統(尸o/拜eraasZ>wgDe/zVe/j加&,)(MarcelDekker:NewYork,1990)，pp.1-41。其它持續釋放組合物的例子包括例如EP58,481A、美國專利No.3,887,699、EP158,277A、加拿大專利No.1176565、U.Sidman等人，腸/o/少證j22,547[1983],R.Langer等人，C72e附.7k^2.12，98[1982],Sinha等人，控釋(CoWra/.ie/e緩)90,261[2003],Zhu等人，淑臉ec/mo/.18,24[2000]，以及Dai等人，膠體Swr/B生物界面(O〃o/A6W/S歷oz'"ter/aces)41,117[2005]。生物粘合劑聚合物也被期望用于本發明的組合物中，或者與本發明的組合物共同使用。生物粘合劑是合成和天然出現的材料，其能夠長時間附著到生物基質上。例如，卡波姆和聚卡波非都是聚(丙烯酸)的合成交聯衍生物。基于天然物質的生物粘合劑傳輸系統包括例如透明質酸，也被稱作透明質烷(hyaluronan)。透明質酸是天然的黏多糖，其由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰基-D-氨基葡萄糖的殘基構成。透明質酸是在脊推動物的細胞外組織基質中被發現的包括在結締組織中以及在滑液中和在眼睛的玻璃質和水狀液中。透明質酸的酯衍生物已經被用于生產用于生物兼容的和生物可降解的傳輸中的微球(參見例如Cortivo等人，歷omate^7/s(1991)12:727-730;歐洲公開No.517,565;國際公開No.WO96/29998;Ilium等人,J!Co^ra〃Wie/.(1994)29:133-141)。含有本發明組合物的典型透明質酸含有透明質酸酯聚合物，其量為IL-1(3結合抗體或片段相對透明質酸聚合物為大約0.1%(w/w)至大約40%(w/w)。生物可降解和非生物可降解基質都可以被用于傳輸本發明的組合物，這類聚合物基質可以含有天然或合成聚合物。優選生物可降解的基質。釋放出現的時間基于對該聚合物的選擇。通常在幾個小時到12個月的范圍內的釋放經歷的時間是最優選的。可以用于形成生物可降解傳輸系統的典型聚合物包括乳酸和乙二醇酸的聚合物、聚酰胺、聚^5友酸酯、聚烯烴、聚亞烷基二醇、聚亞烷基氧化物、聚亞烷基對苯二甲酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯酯、聚乙烯卣化物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙醇酸、聚硅氧烷、聚酐、聚氨酯及其共聚物、聚(丁酸)、聚(戊酸)、烷基纖維素、羥烷基纖維素、纖維素醚、纖維素酯、硝基纖維素、丙烯酸酯和曱基丙烯酸酯的聚合物、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥、基-丙基甲基纖維素、羥丁基曱基纖維素、纖維素醋酸酯、纖維素丙酸酯、纖維素醋酸丁酸酯、纖維素醋酸鄰苯二曱酸酯、羧乙基纖維素、纖維素三醋酸酯、纖維素硫酸鈉鹽、聚(甲基丙烯酸曱酯)、聚(曱基丙烯酸乙酯)、聚(曱基丙烯酸丁酯)、聚(曱基丙烯酸異丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(曱基丙烯酸異癸酯)、聚(曱基丙烯酸月桂酯)、聚(曱基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸曱酯)、聚(丙烯酸異丙酯)、聚(丙烯酸異丁酯)、聚(丙烯酸十八烷基酯)、聚乙烯、聚丙烯、聚乙二醇、聚(氧乙烯)、聚(乙烯對苯二酸酯)、聚(乙烯醇)、聚乙烯醋酸酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯和聚乙烯吡咯烷酮。典型的天然聚合物包括藻酸鹽和其他多糖包括葡聚糖和纖維素、膠原及其化學衍生物(取代、增加化學基團如烷基、烯基、羥基化、氧化和由本領域技術人員直接進行的其它修飾)、白蛋白和其它親水蛋白質、玉米蛋白和其它醇溶谷蛋白以及疏水蛋白質、它們的共聚物和混合物。通常，這些材料會通過酶水解或在體內暴露到水、通過表面或體(bulk)侵蝕而被降解。可選擇的，所述聚合物是以水凝膠的形式(參見例如WO04/009664、WO05/087201、Sawhney,等人，Macramo/eoJ^，1993，26,581-587,),其能夠在水中吸收最高達到其重量的大約卯％,可選擇地其進一步與多價離子或其它聚合物進行交聯。傳輸系統還包括非聚合物系統，其為脂類包括固醇如膽固醇、膽固醇酯和脂肪酸或其它中性脂肪如甘油單酸酯、甘油二酸酯甘油和三酸酯；水凝膠釋放體系；肽基系統；石蠟涂層、使用傳統的粘結劑和賦形劑的壓縮片；部分融合的植入物等。具體的例子包括但不限于(a)侵蝕系統，其中包含在基質內的形式的所述產品，如在美國專利No.4,452,775、4,675,189和5，736，152中所描述的；和(b)擴散系統，其中產品以可控的速率從聚合物滲透例如在美國專利No.3,854,480、5,133,974和5,407,686中所描述的。通過已知的方法可以制備含有所述產品的脂質體，諸如例如(DE3，218，121;Epstein等人，ZVoc.Wa//.v4cad5W.USA，82:3688-3692(1985);Hwang等人，7Vw/.Jc^/.USA,77:4030-4034(1980);EP52，322;EP36,676;EP88,046;EPi43，949;EP142,641;日本專利申請83-118008;美國專利No.4，485，045和4，544，545;以及EP102,324)。可選或額外，所述組合物可以被局部給藥，其通過將已經吸附或封裝本發明的IL-1P結合抗體、抗體片段、核酸或載體的膜、海綿或其它適當材料植入到受影響的區域內。如果使用植入設備，則所述設備可以被植入到任何適當的組織或器官中，本發明的IL-1P結合抗體、抗體片段、核酸或載體的釋放可以直接通過該設備經過推注(bolus)或經過連續給藥，或經過使用連續灌輸的導管進行。含有本發明的IL-1P結合抗體、抗體片段、核酸或載體的藥物組合物可以被配制為吸入藥諸如例如作為干粉。吸入藥溶液也可以被配制在液體推進藥中進行氣霧劑傳輸。在另一種制劑中，溶液可以被制成噴霧狀。用于肺部給藥的其它藥物組合物包括例如在PCT申請公開WO94/20069中所描述的，其公開了肺部傳輸化學修飾的蛋白質。為了進行肺部傳輸，粒度應該適合傳輸到肺部末端(distallung)。例如，所述粒度可以為lpm至5nm;然而，可以使用更大的顆粒例如如果每個顆粒都完全是多孔的。某些含有本發明的IL-1P結合抗體、抗體片段、核酸或載體的制劑可以被口服給藥。以這種形式給藥的制劑可以使用或不使用通常用于固體劑型如藥片和膠嚢的組合中的那些運載體進行給藥。例如，如果生物利用度被最大化，前藥降解(pre-systemicdegradation)被最小化，則膠嚢可以被設計為在腸胃道中的位置釋放該制劑的活性部分。可以包含其它的藥物以促進選擇性結合劑的吸附。稀釋劑、調味劑、低熔點蠟、植物油、潤滑劑、懸浮劑、藥片崩解劑，還可以采用粘結劑。另一種制劑可以含有有效量的本發明的IL-1P結合抗體、抗體片段、核酸或運載體與適合制備藥片的無毒賦形劑的混合。通過將所述藥片溶解在無菌水中，或者其它適當的運載體中，可以以單位劑型制備該溶液。適當的賦形劑包括但不限于惰性稀釋劑如碳酸鉤、碳酸鈉或碳酸氫鈉、乳糖或磷酸鉤；或粘結劑如淀粉、凝膠或阿拉伯樹膠；或乳化劑如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。考慮到這里的公開內容以及配制技術的公知技術，根據所期望的給藥路線、傳輸方式以及期望的劑量，可以確定適當的和/或優選的藥物制劑。不管給藥方式如何，根據患者體重、體表面積或器官大小可以計算有效的劑量。對確定采用這里所描述的每一種制劑用于治療的適當劑量的計算的進一步改進是本領域中常規進行的，并且在本領域中常規完成的任務范圍內。通過使用適當的劑量響應數據可以確定適當的劑量。根據本發明的公開內容其它的制劑將是明顯的，其包括含有與一種或者其它治療藥物組和的本發明的IL-lp結合抗體、抗體片段、核酸或載體的制劑。例如，在某些制劑中，本發明的IL-1P結合抗體、抗體片段、核酸或載體被配制為IL-1信號通路的第二抑制劑結合。代表性的第二抑制劑包括但不限于抗體、抗體片段、肽、多肽、化合物、核酸、載體和藥物組合物例如如在US6899878、US2003022869、US20060094663、US20050186615、US20030166069、WO/04022718、WO/05084696和WO/05019259中所描述的。例如，該組合物可以含有與IL-1P結合抗體、片段或編碼這類抗體或片段的載體的核酸或載體結合的本發明的IL-1P結合抗體、抗體片段、核酸或載體。所述藥物組合物可以包含與其它活性試劑結合的IL-1(3結合抗體或片段。這些組合是可以用于它們期望目的的。下面列出的活性試劑是為了說明的目的，并不是為了限制。作為本發明一部分的組合可以使本發明的抗體和片段以及至少至少選自下表中的一種額外的試劑的組合。如果該組合被形成能夠進行其期望的功能的組合物的話，該組合還可以包含多種額外的試劑例如兩種或三種。活性試劑或與本發明抗體或片段的組合包括非類固醇抗炎藥物(NSAID)例如阿斯匹林、布洛芬和其它丙酸衍生物(阿明洛芬、苯噍.洛芬、氯環己苯酰丙酸、卡洛芬、芬布芬、非諾洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、吲哚布洛芬、酮基布洛芬、咪洛芬、萘普生、奧沙普嗪、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫噁洛芬)、醋酸衍生物(p引咮美辛、阿西美辛、阿氯芬酸、環氯茚酸、雙氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、弗洛芬那(fuirofenac)、異丁芬酸、伊索克酸、奧斯皮納(oxpinac)、舒林酸、硫平酸、托爾米汀、齊多美辛和佐美酸)、滅酸衍生物(氟芬那酸、曱氯滅酸、曱滅酸、尼氟滅酸和托芬那酸)、聯苯羧酸衍生物(迪夫尼沙(difiunisal)和氟苯柳)、昔康類(伊索昔康、吡羅昔康、舒多昔康和替諾昔康)、水楊酸鹽(乙酰水楊酸酯、柳氮磺胺吡啶)和吡唑啉酮類(阿扎丙宗、本扎披派瑞隆(bezpiperylon)、非普拉宗、莫非布宗、羥基保泰松、保泰松)。其它組和包括環氧合酶-2(COX-2)抑制劑。其它用于組合的活性試劑包括類固醇例如氫化波尼松、強的松、甲基氬化波尼松、倍它米松、地塞米松或氫化可的松。這類組合可以是特別有利的，因為在使用本發明的抗體和片段地組合進行治療患者時，通過將逐漸所需的膽固醇劑量的量可以減少甚至消除一種或者多種副作用。例子包括細胞因子抑制性抗炎藥物(CSAIDs);其它人細胞因子或生長因子的抗體或拮抗劑，其中所述細胞因子或生長因子例如TNF、LT、IL-lp、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF或PDGF。所述IL-1(3結合抗體和片段可以與細胞表面分子的抗體組合，其中所述細胞表面分子例如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80(B7.1)、CD86(B7.2)、CD90或其配體包括CD154(gp39或CD40L)。活性試劑的優選組合可以在自體免疫及后續炎癥級聯反應中的不同點干擾；優選的例子包括TNF拮抗劑例如嵌合、人源化或人TNF抗體、D2E7、cA2(Remicade)、CDP571、抗-TNF抗體片段(例如CDP870)以及可溶p55或p75TNF受體、其衍生物、(p75TNFRIgG(Enbrd)或p55TNFRIgG(Lenercept)、可溶IL-13受體(sIL-13)以及TNFa轉化酶(TACE)抑制劑;類似的，由于相同的理由，IL-1抑制劑(例如白介素-l轉化酶抑制劑如Vx740或IL-1RA等)可以是有效的。其它優選的組合包括白介素11、抗-P7s和p-選擇素糖蛋白配體(PSGL)。另一種組合是自體免疫反應的其它關鍵參與物，其可以與IL-1(3發揮類似功能、依賴IL-1P或與IL-1P—致發揮功能。可以與抗體或抗體結合部分組合以治療克羅恩病的活性試劑包括TNF拮抗劑例如抗TNF抗體、D2E7、cA2(Remicade)、CDP571、抗-TNF抗體片段(例如CDP870)、TNFR-Ig構建體(p75TNFRIgG(Enbrel)和p55TNFRIgG(Le跳ept))、抗-P7、p-選擇素糖蛋白配體、可溶IL-13受體(sIL-13)以及PDE4抑制劑。IL-1|3結合抗體或片段可以與皮質甾類組合如布地縮松和地塞米松。所述IL-1(3結合抗體或片段也可以與諸如下列的試劑組合柳氮磺胺吡啶、5-氨基水楊酸和奧沙拉嗪以及干擾促進炎癥的細胞因子如IL-1的合成或功能的試劑例如IL-1轉化酶抑制劑(例如Vx740)和IL-1ra。IL-1P結合抗體或片段也可以與T細胞信號傳導抑制劑共同使用，例如酪氨酸激酶抑制劑6-巰基噤呤。IL-1P結合抗體或片段可以與IL-11組合。可以與抗體或抗體結合部分組合以治療多發性」哽化癥的活性試劑的其它例子包括皮質甾類；波尼松龍；曱基波尼松龍；咪唑石克嘌呤；環磷酰胺；環孢霉素；甲氨蝶呤；4-氨基吡啶；替扎尼定；干擾素-pia(Avonex;Biogen);干擾素-卩lb(Betaseron;Chiron/Berlex);共聚物1(Copolymer1)(Cop-l;可巴+〉(Copaxone);泰瓦制藥工業^>司(TevaPharmaceuticalIndustries,Inc.));高壓氧；靜脈注射免疫球蛋白；克拉比彬(clabribine);其它人細胞因子或生長因子的抗體或拮抗劑，其中所述人細胞因子或生長因子如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL國7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF和PDGF。TheIL-1P結合抗體或片段可以與細胞表面分子的抗體結合，其中所述細胞表面分子如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、CD86、CD90或它們的配體。IL-1P結合抗體或片段可以與試劑組合，例如甲氨蝶呤、環孢霉素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸酯(mycophenolatemofetil)、來氟米特、NSAID例如布洛芬、皮質甾類例如潑尼松龍、磷酸二酯酶抑制劑、腺苷拮抗劑、抗血栓形成試劑、補體抑制劑、釋放腎上腺素的藥物、干擾促進炎癥的細胞因子如TNFa或IL-1的信號傳導的試劑(如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制劑)、IL-1(3轉化酶抑制劑(例如Vx740)、抗-P7、p-選擇素糖蛋白配體(PSGL)、TACE抑制劑、T-細胞信號傳導抑制劑例如激酶抑制劑、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮磺胺吡啶、咪唑硫嘌呤、6-巰基噤呤、血管收縮素轉化酶抑制劑、可溶細胞因子受體及其衍生物(例如可溶p55或p75TNF受體、sIL-lRI、sIL-lRII、sIL-6R、可溶IL-13受體(sIL畫13))和抗炎細胞因子(例如IL-4、IL陽IO、IL-13和TGF卩)。可以與抗體或抗體結合部分組合以治療多發性硬化癥的活性試劑的優選例子能夠包括干擾素-P例如IFNpia和IFN(31b;Copaxone、皮質甾類、IL-1抑制劑、TNF抑制劑和CD40配體和CD80的抗體。藥物組合物可以含有治療有效量或預防有效量的本發明的IL-1P結合抗體或片段。治療有效量是指以該劑量持續必要的時間能夠有效達到期望的治療效果的量。抗體或抗體部分的治療有效量可以根據許多因素而變化例如疾病狀態、年齡、性別、個體重量以及抗體或抗體部分在個體中表現出期望響應的能力。治療有效量還是治療有益效果超過所述抗體或抗體部分的所有毒性或有害效果的量。預防有效量是指以該劑量持續必要的時間能夠有效達到期望的預防效果的量。通常，由于預防劑量是在受試者中在疾病之前或疾病早期使用的，因此預防有效量將低于治療有效量。可以單獨釆用本發明的IL-1(3結合抗體、抗體片段、核酸或載體，或者與其它活性試劑組合應用，其可以是相同的藥物組合物，也可以是不同的藥物組合物。例如，這些其它的活性藥物可以包括(i)IL-1拮抗劑(例如重組IL-lRa或IL-trap);(ii)白介素-1受體拮抗劑；(iii)可溶TNF受體-l;(iv)可溶TNF受體-2(例如依那西普)；(iv)TNF抑制劑(例如抗體如D2E7);和/或(v)癌癥治療試劑。因此，這些組分中的一種或多種可以結合本發明的IL-1P結合抗體、抗體片段、核酸或載體被包含在本發明的組合物中。在某些情況中，可以期望以離體的方式使用包含本發明的IL-1(3結合抗體、抗體片段、核酸或載體的藥物組合物。在這種情況中，已經從患者中取出的細胞、組織或器官被暴露到含有本發明的IL-1P結合抗體、抗體片段、核酸或載體的藥物組合物中，之后，接著所述將細胞、組織和/或器官植入回患者中。在某些情況中，可以通過植入患者已經被基因改造的這里所述的細胞以表達和分泌多肽、選擇性結合試劑、片段、變體或衍生物，而傳輸含有IL-1(3結合抗體、抗體片段、核酸或載體的組合物。這些細胞可以是動物或人細胞，并且可以來自患者自身組織或者從其它來源無論是人還是非人類來源。可選擇的，這些細胞可以是被固定的細胞。然而，為了降低免疫反應的機會，優選這些細胞被封裝以防止滲透到周圍的組織中。封裝材料通常是生物兼容的、半滲透聚合物包裝或者是能夠允許蛋白質產物釋放但防止細胞被患者免疫系統或其它來自周圍組織的破壞性因子所破壞的膜。用于對細胞進行膜封裝的方法是已知的，制備被封裝的細胞以及將它們植入患者內也已經被描述，例如在美國專利4,892,538、5,011,472和5,106,627中。PCT申請公開WO91/10425中描述了用于封裝或細胞的系統。用于配制多種其它持續或可控傳輸方式的技術例如脂質體載體、生物可侵蝕的顆粒或珠也是本領域技術人員已知的，并被描述。被封裝或未被封裝的細胞可以被植入到患者適當的身體組織或器官中。含有本發明的IL-1P結合抗體、抗體片段、核酸或載體的藥物組合物的治療有效量或預防有效量將依賴于例如所述組合物被用于的癥狀、給藥路線何受試者的病癥。以治療或預防有效的量給藥藥物組合物以治療IL-1相關病癥。"治療有效量或預防有效量，，的本發明的IL-1(3結合抗體、抗體片段、核酸或載體是能夠治療或防止一種或多種受試者中IL-1相關疾病的癥狀的量。因此，期望對本發明的IL-1P結合抗體、抗體片段、核酸或載體進行滴定，并根據能夠獲得最佳的治療效果修改給藥路線。根據上面所提到的因素，劑量范圍包括大約0.1ng/kg至大約100mg/kg或更多(每單位體重被給藥活性試劑的受試者的活性試劑的量)。在其它實施方式中，劑量范圍是大約0.1嗎/kg至大約100mg/kg，大約lpg/kg至大約100mg/kg,大約5Mg/kg至大約100mg/kg，大約0.5mg/kg至大約100mg/kg，大約lmg/kg至大約100mg/kg。其它的劑量也可以是適當的。可以以單次劑量，或經過一段時間兩次或多次劑量(其可以含有或可以不含有相同量的本發明的IL-1P結合抗體、抗體片段、核酸或載體)，或者通過例如植入設備或導管進行連續灌注。應用方法本發明的抗體、抗體片段、核酸、載體、細胞和組合物(統稱為"本發明的化合物和組合物")可以被用于任何目的。例如，本本發明的化合物和組合物可以被用于研究IL-1相關機制以及與IL-1相關機制有關的疾病和病癥。然而，本發明的化合物和組合物對于治療需要治療IL-1相關病癥如自體免疫或炎癥疾病或失調的受試者(如哺乳動物或人)是特別有用的。因此，本發明提供了一種治療或預防哺乳動物中疾病的方法，該方法包括為需要的哺乳動物給藥有效量的本發明的抗體或抗體片段、核酸或載體，這樣在哺乳動物中對所述疾病進行了治療或預防。術語"有效量"指的是建立預防或治療效果所需的本發明的抗體或抗體片段、核酸或載體的量。正如這里所使用的，治療疾病或病癥被定義為暫時或永久減少或消除疾病或病癥的癥狀或進展。類似的，預防疾病或病癥的意思是暫時或永久抑制、減慢或防止疾病或病癥(或疾病或病癥的癥狀)的開始。本發明的方法可以用于治療或防止IL-1相關的疾病或病癥。例如，本發明的抗體和片段被設計為用于預防和治療IL-1介導的疾病或醫學癥狀例如炎癥病癥、過敏或過敏癥狀、癌癥、超敏性反應、自體免疫疾病、嚴重感染和器官或組織移植排斥。IL-1相關的病癥包括類風濕性關節炎(RA)、骨關節炎、克羅恩病(Crohn'sdisease)、潰瘍性結腸炎(UC)、敗血性休克、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、哮喘、移植物抗宿主疾病、動脈粥樣硬化、成人T細胞性白血病、多發性骨髓瘤、多發性硬化癥、中風以及阿爾茨海默病。本發明的抗體和片段也可以用于防止新生兒多系統炎癥性疾病(NOMID/CINCA)、全身性幼年特發性關節炎(systemiconsetjuvenileidiopathicarthritis)、斯蒂爾病(Stillsdisease)、CAPS或穆-韋二氏綜合癥(Muckle-Wellssyndrome)。通常，如果與體液或組織中提高的IL-1(3水平相關，或者如果從身體取出的細胞或組織在培養中產生提高水平的IL-1(3,則該疾病或病癥被認為是IL-1卩相關疾病或病癥。例如，本發明的方法可以被用于治療或防止新生兒多系統炎癥性疾病(NOMID/CINCA)、全身性幼年特發性關節炎(systemiconsetjuvenileidiopathicarthritis)、CIAS1相關周期性綜合癥(CAPS)、斯蒂爾病(Stillsdisease)或Muckle-Wells綜合癥。作為另一個實施例，本發明可以被用于治療或者防止類風濕性關節炎、骨關節炎、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、敗血性休克、慢性阻塞性肺部疾病、哮喘、移植物抗宿主疾病、動脈粥樣硬化、成人T細胞性白血病、多發性骨髓瘤、多發性硬化癥、中風以及阿爾茨海默病。發寸生關節炎(systemiconsetjuvenileidiopathicarthritis)、類風濕寸生關節炎、骨關節炎、動脈粥樣硬化或重癥肌無力。IL-ip相關病癥的其它例子是急性胰炎；ALS;厭食-惡病質綜合癥包括AIDS-誘導的惡病質；哮喘和其它肺部疾病；自體免疫脈管炎；CIAS1相關周期性綜合癥(CAPS);慢性疲乏綜合癥；破傷風相關疾病包括破傷風相關的腹瀉；心臟病癥和征兆包括充血性心力衰竭、冠狀動脈再次狹窄、心肌梗死、心肌機能障礙(例如與敗血癥相關)以及冠狀動脈旁路搭橋；癌癥例如多發性骨髓瘤和骨髓性(例如AML和CML)和其它白血病以及腫瘤轉移；糖尿病(例如胰島素性糖尿病)；子宮內膜異位；家族性寒冷型自身炎癥綜合癥(FCAS);家族性地中海熱(FMF);發燒；肌纖維瘤；腎小球性腎炎；移植物抗宿主病/抑制物排斥；出血性休克；痛覺過敏；炎癥性腸病；炎癥性關節病包括牛皮癬關節炎(以及骨關節炎和類風濕性關節炎)；炎癥性眼病；也可以與下列相關如角膜移植；局部缺血包括大腦局部缺血(例如外傷、癲癇、出血或休克所引起的腦部損傷，每一種都可能引起神經退行性疾病)；Kawasaki氏疾病；認知缺陷；肺病(例如ARDS);肌病(例如肌肉蛋白代謝疾病特別是在敗血癥中)；神經毒性(例如HIV所誘導的)；骨質疏松癥；疼痛包括癌癥相關的疼痛；帕金森病；牙周疾病；未足月產；牛皮癬；再灌注損傷；輻射治療的副作用；睡眠障礙；暫時顎關節疾病；腫瘤壞死因子受體相關周期發熱綜合癥(TRAPS);葡萄膜炎；或者來自過度疲勞、扭傷、軟骨損傷、外傷、整形外科手術、感染和其它疾病過程的炎癥病癥。本發明的抗體和片段還被設計用于治療心臟、肺、聯合心臟-肺、肝、腎、胰、皮膚或角膜移植的受體，其包括同種異體移植物排斥或異種移植物排斥，或者為了防止移植物抗宿主病例如在骨髓移植之后，或器官移植相關的動脈硬化。炎癥病癥其病源包括自體免疫組分如關節炎(例如類風濕性關節炎、慢性進育型關節炎(arthritischronicaprogrediente)和關節炎和風濕疾病包括炎癥疾病和具有骨損失、炎癥疼痛、超敏(包括氣道超敏和皮膚超敏)的風濕疾病或過敏。(包括例如溶血性貧血、再生障礙性貧血、純紅細胞性貧血和先天性血小板減少)、系統性紅斑狼瘡、多軟骨炎、硬化癥、Wegener肉芽腫病、慢性活動性肝炎、重癥肌無力、牛皮癬、，斯-瓊氏綜合癥(Steven-Johnsonsyndrome)、先天性脂肪瀉、自體免疫發炎性腸病(包括例如潰瘍性結膜炎、克羅恩病和過壽丈性腸綜合癥)、內毒素Graves病、肉狀瘤病、多發性硬化癥、原發性膽汁性肝硬化、青少年糖尿病(I型糖尿病)、葡萄膜炎(前部和后部)、干性角膜結膜炎和春季角膜結膜炎和間質纖維化、牛皮癬關節炎或腎d、球性腎炎(具有和不具有腎病綜合癥例如包括先天性腎病綜合癥或微小病變腎病)。本發明的抗體和片段還被設計用于治療、防止或改善哮喘、支氣管炎、肺塵病、肺氣腫以及其它氣道的梗阻性或炎癥疾病。用于治療不期望的急性和超急性IL-la介導的炎癥反應的抗體或片段包括產生特別是促進IL-1的TNF釋放，例如急性感染例如敗血性休克(例如內毒性休克和成人呼吸窘迫綜合癥)、腦膜炎、肺炎；和重度燒傷；以及用于治療惡病質或感染、癌癥或器官機能障礙之后與病態TNF釋放相關的消耗綜合癥，特別是AIDS-相關的或由于HIV感染所引起的惡病質。本發明的抗體和片段還被設計為用于骨代謝疾病中，其包括骨關節炎、骨質疏松癥和其它的炎性關節炎皮滲和整體的骨損失包括年齡相關的骨損失，特別是牙周疾病。本發明的抗體和片段還被設計為用于治療或防止CIAS1相關周期性綜合癥(CAPS),包括新生兒多系統炎癥性疾病(NOMID)、Muckle-Wells綜合癥(MWS)以及家族性寒冷型自身炎癥綜合癥(FCAS)。基因CIAS1中的圖片目前被識別為對三種罕見的遺傳綜合癥負責新生兒多系統炎癥性疾病(NOMID)、Muckle-Wells綜合癥(MWS)以及家族性寒冷型自身炎癥綜合癥(FCAS)。(Hoffman等人200129:301-305;FeWmann等人2002/Ge恥/71:198-203;Aksentijevich等人2002爿^;^.他i/2ewm46:3340-3348)。這三種病癥被統稱為"CAPS"。CIAS1編碼一種被稱作NALP3的蛋白質，NALP3是"發炎體(inflammasome)"的組分，發炎體是一種酶復合物，其調節半胱天冬酶1(caspasel)的活性。Caspasel是將無活性的促進炎癥反應的細胞因子IL-1的前體形式切割成其生物活性形式的酶(Agostini等人2004見上文)。CIAS1中的突變會導致IL-1生成的提高。通常本發明的抗體或抗體片段、核酸或載體^皮作為含有本發明的抗體或抗體片段、核酸或載體以及藥物上可以接受的運載體的藥物組合物為哺乳動物或人進行給藥。適合用于治療或防止疾病的藥物組合物是如前面所描述的。本發明的抗體或抗體片段、核酸或載體可以作為主要的活性試劑或者與一種或者多種會破壞IL-1受體信號傳導的試劑聯合為哺乳動物進行給藥。破壞IL-1受體信號傳導的試劑可以是任何抑制IL-1(3和IL-1受體之間相互作用的化合物或組合物。例如，破壞IL-1受體信號傳導的試劑包括結合IL-1p或結合IL-1受體的抗體、重組IL-IRa(例如來自艾姆根公司(AmgenInc.),ThousandOaks，CA)以及IL-1受體"陷阱"肽(例如來自再生公司(RegeneronInc.),塔利頓(Tarrytown)，NY)。如果使用兩種或更多種破壞IL-1受體信號傳導的試劑，則它們可以被共同給藥(例如在一種藥物組合物中)，或者可以分別將每一種進行給藥(例如在分別的藥物組合物中)。本發明的抗體、片段、核酸或載體可以被給藥給哺乳動物，其與一種或者多種其它的活性試劑組合或聯合，以治療或防止IL-1介導的上述病癥或疾病。診斷應用除了治療應用夕卜，本發明的抗體和片段還可以用于檢測IL-1P的診斷方法中(例如，在生物樣品如血清或血漿中)，其使用傳統的免疫檢驗例如酶聯免疫吸附檢驗(ELISA)、放射免疫檢驗(RIA)或組織免疫化學。用于在生物樣品中檢測IL-1(3的方法可以包括步驟將生物樣品與一種或者多種本發明的抗體或片段進行接觸，檢測結合IL-1P的抗體或片段，或者未結合的抗體或片段，進而檢測生物樣品中的IL-1|3。所述抗體或片段可以被直接或間接使用可4企測的物質進行標記以輔助檢測結合或未結合的抗體。適當的可檢測的物質包括各種酶、輔基、熒光材津+、發光材料和放射性材料。適當的酶的離子包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、p-半乳糖苷酶或乙酰膽堿酯酶；適當的輔基復合物的例子包括抗生蛋白鏈菌素/生物素和抗生物素蛋白/生物素；適當的熒光材料的例子包括傘形花內酯、熒光素、異硫氰酸熒光素、若丹明、二氯三哌嗪胺熒光素、丹磺酰氯或藻紅蛋白；發光材料的例子包括魯米諾(luminol);適當的放射性材料的離子包括1251、1311、"S或311。除了標記抗體外，通過利用被標記可檢測物質的IL-1(3標準和未標記的抗IL-ip抗體進行的竟爭免疫檢驗也可以在生物液中對IL-ip進行才會驗。在該才全驗中，生物樣品、#皮標記的rIL-l(3標準和抗IL-1卩抗體^皮組合在一起，并確定結合到未標記的抗體的被標記的IL-ip標準的量。生物樣品中IL-ip的量與結合到抗IL-1(3抗體上的被標記的IL-ip的量成反比。實施例下面的實施例進一步說明本發明，當然其不能被認為以任何方式限制發明的保護范圍。在下面的實施例中，本發明參考的各種抗體包括被指定為AB1、AB5和AB7的抗體。如上所提到的，AB1含有重鏈區和輕鏈區，其中所述重鏈區包含SEQIDNO:4的氨基酸序列，所述輕鏈區包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。AB5含有重鏈區和輕鏈區，其中所述重鏈區包含SEQIDNO:8的氨基S炎序列，所述輕鏈區包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。AB7含有重鏈區和輕鏈區，其中所述重鏈區包含SEQIDNO:15的氨基酸序列，所述輕鏈區包含SEQIDNO:11的氨基酸序列。對于下列實施例中的各種比較，參考被指定為AB-對照的抗體，其是可以商業獲得的具有對IL-1P相對高親和力的抗體。AB-對照是鼠抗體，其被認為具有重鏈和輕鏈，其中所述重鏈區包含SEQIDNO:40的氨基酸序列，所述輕鏈區包含SEQIDNO:41的氨基*列。這些鼠的序列被列在美國專利申請公開No.2003/0026806在圖6A和圖6B中。在下面的幾個實施例中，AB5和AB7顯示與人IL-1卩具有比AB-對照與人IL-1卩意想不到高的親和力。實施例1本實施例1說明本發明的某些抗體與IL-1P的結合親和力。使用抗體KTNEXATM設備(來自薩匹迪恩儀器公司(SapidyneInstrumentsInc.),博伊西(Boise),ID)對指定為AB1和AB5的抗體進行檢驗與IL-1p的結合性能。圖2和圖3中提供了抗體AB1和AB5的重鏈和輕鏈可變區的氨基酸序列。商業購買的與IL-ip具有相對高親和力的抗體(這里被稱作AB-對照)被檢驗用于比4交。表l中總結了IL-1卩結合檢驗結果。KD值表示每種抗體-IL-1(3復合物的解離常數。K。被計算為"離開速率"(抗體-IL-l卩復合物解離的速率)與"結合速率，，(抗體-lL-l卩復合物的組合速率)的比例。較低的KD比例是較高抗體親和力的指示。表l:IL-1卩結合結果<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>這些實驗的結果顯示AB1和AB5以高親和力結合IL-ip。本發明的抗體對IL-1卩的親和力與AB-對照對IL-1卩的親和力相當，或者更好。實施例2本實施例表示^^用本發明的抗體體外抑制IL-1卩。使用檢測IL-1(3刺激的從人成纖維細胞釋放的IL-6的生物檢驗，評估AB1和AB5抗體(參見實施例1)抑制IL-1卩的能力。如實施例1中的，AB-對照被用作對照樣品。在Dinarello等人，免疫學現有實驗方案(Ozrm^Pratoco/sZ"/畫歸/ogy)，Ch.6.2.1-6.2.7,JohnWileyandSonsInc.，Hoboken，NJ，2000中描述了該檢驗的細節。簡單的講，在多孔板中將來自美國典型培養物庫(ATCC)馬納薩斯(Manassas),VA的人MRC5人成纖維細胞(ATCC#CCL-171)培養至匯合。使用經過滴定劑量的AB5抗體對細胞進行處理。接著將細胞接觸(i)100pg/mlIL-1卩或(ii)100pg/mlIL"卩和AB1或AB5抗體(來自實施例1)。不使用IL-ip對陰性對照細胞刺激。使用來自BD法米根(BDPharmingen)(富蘭克林湖(FranklinLakes)，NJ)IL-6ELISA試劑盒根據制造商的使用說明檢測每組中被處理的細胞中所釋放的IL-6。圖5中表示了ELISA結果，并總結在表2中。ICso是抑制由IL-1(3刺激所釋放的IL-6的50%所需要的抗體濃度。表2ELISA結果<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>這些結果證明了本發明的抗體體外抑制IL-1(3的能力。而且，對MRC5中IL-1卩刺激的細胞因子釋放的抑制已經顯示與該試劑抑制IL-1介導的體內活性有關。因此，這些結果說明本發明的抗體將在體內具有IL-1(3抑制效力。實施例3本實施例說明使用本發明的抗體對IL-ip的體內抑制。為了確認AB5的體內效力，在小鼠中對AB5阻斷人IL-1卩生物學活性的能力進行測試。該檢驗的細節被描述在Economides等人，天然醫藥(A^ww編.)，9:47-52(2003)中。簡單的講，將雄性C57/B16小鼠(Jackson實驗室柵海港，緬因州(JacksonLaboratoryBarHarbor，Maine))經腹膜注射經滴定計量的AB5(實施例1)、AB-對照(實施例1)或對照IgG(Jackson免疫研究實驗室(JacksonImmunoResearchLaboratories),WestGrove,PA)。注射抗體24小時后，給小鼠皮下注射計量為lug/kg的重組人IL-1(3(rhIL-ip)(來自PeproTechInc.,RockyHill，NJ)。注射rhIL-l卩后2小時(IL-6反應峰時間)，將小鼠處死，收集血液并處理得到血清。通過ELISA(BDPharmingen，FranklinLakes,NJ)根據制造商的方案檢驗血清IL-6水平。通過實驗動物血清中所檢測到的IL-6與對照中所檢測到的IL-6的比例計算抑制百分比(乘以100)。結果列在圖6中。抑制體內IL-1卩活性的能力被評定為IL-l卩刺激的血清中IL-6水平的函數。如圖6所表示的，對于抑制人IL-1卩的活性，即使AB5抗體不比AB-對照更有效，AB5也是有效的。在該檢驗中，3嗎AB5與IO昭AB-對照的效力相同。因此，這些結果說明所測試的抗體可以用于在體內抑制IL-1卩活性。這些結果還顯示單次注射AB5能夠阻斷IL-ip長時間刺激的系統性作用。實施例4下面的實施例表示根據本發明制備抗體。使用HUMANENGINEERINGTM技術產生許多人工改造的抗體序列，其如在Studnicka等人，Prate/"￡"g/"een>g,7:805-814(1994)和在美國專利5,766,886、5,770,196、5，821，123和5,869,619以及PCT申請公開WO93/11794。所產生的人工改造抗體序列包括AB5.1、AB5.2、AB5.3和AB5.4。如圖3和圖4所示，這些序列中的每一條都在CDR-3H區中含有標記為Xi和X2的兩個可變位點。因此，在這些人工改造的每一個抗體的某些實施例中，CDR3的Xj和X2分別對應丙氨酸和精氨酸、纈氨酸和精氨酸、苯丙氨酸和精氨酸、賴氨酸和賴氨酸、或者天冬酰胺和精氨酸。實施例5對被指定為AB5和AB7的抗體(人工改造的抗體序列)檢驗其IL-10結合性能，其使用以類似實施例1中所描述類似的方式，在開奈夏TM(KINEXATM)設備上進行的動態排斥檢驗。其它關于KINEXATM設備和抗體鑒定的描述可以從制造商獲得，并可以在公開的文獻中得到例如美國專利No.6,664,114(Sapidyne，Inc.);以及Darling等人"動力排除檢測技術分子相互作用特征(KineticExclusionAssayTechnology:CharacterizationofMolecularInteractions)."沖企測及藥物開發4支術(J5"5^Fawt/Z>wg￡>eve/o/me"frec/mo/og/M),2004,2,647-657。所述KINEXATMi殳備進^f亍動態排斥檢驗，并將數據符合各種理論曲線，這樣確定了Kd以及其它的性能例如Kd的95%置信區間。對于親和力特征的分析例如解離常數和"離開速率"，KINEXATM設備比其它的設備(如比阿考(BiaCore)設備)更靈敏。圖3和圖4A分別提供了AB5和AB7的重鏈和輕鏈可變區的氨基酸序列。表3中總結了IL-1P結合檢驗。如同實施例1，K。被計算為"離開速率"與"結合速率"的比值,并且較低的Ko比例是較高抗體親和力的指示。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>這些實驗的結果顯示AB5(與實施例1中所觀察到的結果一致)和AB7以意想不到高的親和力與IL-1卩結合，這是由它們的解離常數意想不到的低數值所表示的。圖7、圖8和圖9分別顯示被指定為AB1、AB5和AB7的抗體的結合親和力，其是從一個對每種蛋白使用KINEXA分析是代表性實驗所確定的。圖7反映在表1中所列出的結果，而圖8和圖9則反映表3中所列出的結果。除了表3中所列的數值外，KINEXA^r驗結果還表示低的和高的95%置信區間(Kd-低和Kd-高)。對于AB5，Kir低是0.07pM，Knr高是0.72pM。對于AB7，Kd-低是0.11pM,Kcr高是0.74pM。在實施例1中所列的檢驗中發現了類似的KD-低和KD-高的數值。對于AB-對照，KD-低是1.62pM,Ko-高是5.23pM。對于ABl,KD-低是13.38pM,KD-高是24.84pM。對于AB5，KD-低是0.11pM,Ko-高是0.56pM。KINEXA驗結果顯示AB5和AB7具有比AB-對照意想不到低的解離常數。實施例6該實施例表示體外抑制IL-1(3刺激的IL-6釋放。下面對本發明的多種抗體，檢驗了抑制IL-1卩刺激的IL-6從成纖維細胞中釋放的IC50。以類似實施例2中所描述的方法，評估AB5和AB7抑制IL-1卩的能力，其使用檢測IL-1|3刺激的從人成纖維細胞釋放的IL-6的生物檢驗。圖10至12顯示對于每種檢驗對各種抗體的結合曲線。圖IO顯示被指定為ABI、AB2和AB3的抗體抑制IL-6從人成纖維細胞的釋放，這3種單獨纟企—驗的結果說明AB1的IC5o是0.029nM(29pM)、AB2的ICso是0.076nM(76pM)、AB3的IC50是0.2MnM(214pM)。圖11在另外的檢驗中，被指定為AB1和AB7的抗體抑制IL-6從人成纖維細胞的釋放。圖12表示AB5和AB7以及商業上可以獲得的幻1^^1@的抗體抑制11^-6從人成纖維細胞的釋放。這些緒果顯示，關于抑制IL-ip，根據在這些檢驗中確定的IC50,AB5和AB7基本上具有比開奈瑞特(Kineret)⑧更好的能力。Kineret⑧是人造蛋白質，其類似于在人體中被稱作白介素-l受體拮抗劑(IL-lra)的天然出現的蛋白質。圖10至圖12表示，按照IL-6的抑制百分比抗體或無抗體的幻!^化1@的能力的單獨檢驗結果，表4顯示從這些單獨的檢驗中所計算的IC5Q。ICso是抑制由IL-ip刺激所釋放的IL-6的50%所需要抗體或116^@的濃度。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>除了在表2和表4中所報道以及圖6、圖10、圖11和圖12中所顯示的單獨檢驗結果外，對AB1、AB7和AB-對照進行其它的單獨檢驗。可以從單獨的檢驗結果計算平均的IC5Q。AB1的平均ICso是66.7pM，其是從35pM、30pM、150pM(該數值也被顯示在表2中)和52pM的單獨檢驗結果計算得到的。AB7的平均ICso是5.6pM，其是從7.3pM、4.2pM、4.5pM、4.4pM(該數值也被顯示在表4中)、6.0pM、5.0pM和7.8pM的單獨檢驗結果計算得到的。AB-對照的平均IQo是5.6pM,其是從5.0pM、17.0pM(該數值也被顯示在表2中)和4.9pM的單獨檢驗結果計算得到的。這些結果證明AB1、AB5和AB7體外抑制IL-ip的能力。而且，抑制IL-1卩刺激的細胞因子在人成纖維細胞中的釋放與該抑制試劑抑制IL-1介導的體內活性有關。因此，這些結果說明本發明的抗體將在體內具有IL-ip抑制效力。實施例7該實施例表示使用IL-ip結合抗體對IL-1(3的體內抑制。以類似于實施例3中所描述類似的方式，在小鼠中檢測AB5、AB1和AB7的體內效力，以及它們阻斷人IL-1(3生物活性的能力。測試AB5和AB1的結果被列在圖13中，測試AB5和AB7的結果被列在圖14中。抑制體內IL-ip活性的能力被評定為IL-1卩刺激的血清中IL-6水平的函數。如圖13和圖14所表示的，AB5、AB1和AB7抗體能有效抑制人IL-ip的體內活性。這些結果顯示所測試的抗體能用于體內抑制IL-1卩的活性。實施例8本實施例表示至少某些根據本發明的IL-1I3結合抗體與來自非人類的某些哺乳動物的IL-lj3交叉反應，而與其它的非人類步入動物的IL-1卩不發生交叉反應。檢驗被指定為AB7的抗體(以高親和力結合人IL-1卩的抗體)其與來自非人類的哺乳動物的IL-ip的結合即恒河猴(rhesusmacaque)、獼猴(cynomolgusmonkey)、狗、豚鼠和兔。來自恒河猴(rhesusmacaque)、獼猴(cynomolgusmonkey)、狗、脈鼠和兔的新鮮的肝素化全血是從查爾斯河實4全室(CharlesRiverLabs)獲得的。通過Ficoll密度梯度臨新分離全血，并分離外周血單核細胞(PBMC)。對于每種物種的PBMC,將2.5xl05細胞/ml孵育在外周培養基中，其含有或不含50ng/ml脂多糖LPS(大腸桿菌Co"055:B5),在刺激后收集上清。LPS被認為刺激PBMC產生IL-1P。將2ml的每種上清與2路AB7釁育3個小時，接著加入50(xl蛋白質A-瓊脂糖珠漿以免疫沉淀AB7/IL-1(3復合物。將人IL-1卩(Peprotech)摻入到RPMI中，并作為免疫沉淀AWestern印跡的對照進行電泳。離心并清洗蛋白質A-瓊脂糖珠后，將所有的樣品上樣到SDS-PAGE凝膠上，并在120V下電泳1個小時。在22V下轉移到穩定素-P(Immobilon-P)膜過夜并使用5%脫脂牛奶封閉之后，將AB7以2(ig/ml與該膜孵育2小時。在清洗步驟后，加入偶聯辣根過氧化物酶(HRP)的羊抗人IgG二抗，檢測是使用一步四甲基聯苯胺(TMB)溶液。圖15和圖16顯示從該方法得到的Western印跡。在圖15中印跡左側(泳道1至3)是對照，其中不同量(5ng、10ng和20ng)的人IL-1卩被加入到RPMI培養基中。在該印跡的底部附近，可以在每條泳道中對應大約17kDa的分子量區域觀察到帶。這些帶是AB7結合人IL-lj3的指示。中間的泳道(泳道4)是RPMI培養基。在圖15中所顯示的印跡的右側(泳道5至泳道8)，顯示了來自獼4吳(cynomolgusmonkey)和恒河《吳(rhesusmacaque)的沖羊品的結果。泳道5和泳道6分別是不含LPS的獼猴(cynomolgusmonkey)樣品和含有50ngLPS力口入到RPMI培養基中的獼猴(cynomolgusmonkey)樣品。泳道7和泳道8分別是不含LPS的恒河猴(rhesusmacaque)樣品和含有50ngLPS加入到RPMI培養基中的恒河猴(rhesusmacaque)樣品。在該印跡的底部附近，可以在泳道6和泳道8(加入LPS的樣品)中對應大約17kDa的分子量區域觀察到帶。泳道6和泳道8中的這些帶是AB7與靈長類IL-ip(即來自獼猴(cynomolgusmonkey)和恒河浙吳(rhesusmacaque)的IL-1卩)交叉反應的指示。圖16顯示來自狗、豚鼠和兔的對照和樣品的Western印跡。在圖16中印跡左側(泳道1至4)是對照，其中不同量(5ng、10ng、50ng和200ng)的人IL-lp被加入到RPMI培養基中。在該印跡的底部附近，可以在每條泳道中對應大約17kDa的分子量區域觀察到帶。這些帶是AB7結合人IL-1卩的指示。圖15中的泳道5是RPMI培養基。泳道6至泳道8是來自狗PBMC的樣品的結果，分別是不含LPS、含50ngLPS和200ngLPS。泳道9和泳道10是來自豚鼠PBMC的樣品的結果，分別是不含LPS和含50ngLPS。泳道9和泳道10是來自兔PBMC的樣品的結果，分別是不含LPS和含50ngLPS。在該印跡的底部附近，可以在泳道7、泳道8和泳道12(加入LPS的狗和兔樣品)中對應大約17kDa的分子量區域觀察到帶。泳道7、泳道8和泳道12中的這些帶是AB7與狗IL-1卩以及兔IL-1卩交叉反應的指示。在泳道10(加入50ngLPS的豚鼠PBMC)中缺少可見的帶說明AB7與豚鼠IL-1卩不發生交叉反應。這些結果說明AB7與來自某些非人類哺乳動物的il-lf3發生交叉反應即恒河浙吳(rhesusmacaque)、獼、l"吳(cynomolgusmonkey)、狗和兔,{旦與來自至少一種其它的非人類哺乳動物的il-1卩不發生交叉反應即豚鼠。實施例9非人類的其它某些哺乳動物的il-1卩交叉反應。檢^r抗體ab7結合來自非人類哺乳動物即小鼠和大鼠的il-1卩。將重組人、小鼠和大鼠的IL-lp(派普泰克(Peprotech))在還原條件和非還原條件下上樣到SDS-PAGE凝膠上，并在120V下電泳1小時。在22V下轉移到Immobilon-P膜過夜并使用5%脫脂牛奶封閉之后，將AB7以2ng/ml與該膜孵育2小時。在清洗步驟后，加入偶聯HRP的羊抗人IgG二抗，檢測是使用一步tmb溶液。圖17顯示根據前述方法所獲得的Western印跡。泳道1和泳道2分別是非還原的和還原的人IL-ip。泳道3和4分別是非還原的和還原的小鼠IL-1卩。泳道5和6分別是非還原的和還原的大鼠IL-lp。在該印跡的底部附近，可以在每條泳道中對應大約17kDa的分子量區域觀察到帶。這些帶是存在IL-1卩的指示，接著是AB7結合人IL-1(3、小鼠IL-1卩和大鼠IL-1卩的指示。這些結果說明AB7與嚙齒類IL-1(3交叉反應。實施例10本實施例還說明本發明的至少某些本發明的IL-ip結合抗體是來自人類和至少某些非人類哺乳動物的IL-1(3的抑制劑。檢驗AB7抑制由人、恒河猴(rhesusmacaque)、小鼠和大鼠IL-ip刺激的D10細胞的增殖。D10.G4.1(D10)細胞是鼠T輔助細胞，其對來自蛋白的伴清蛋白有特異性。該細胞系來自AKR/J小鼠(H-2kMHC單倍型)并需要IL-1和抗原受體激活進行生長、增殖和存活。D10細胞系對IL-1高度敏感，并能對來自多種物種(包括人、猴、小鼠和大鼠)的IL-1做出反應，這^f吏得可以檢測IL-1P結合抗體或片段如AB7的交叉反應中和能力。D10的增殖不受LPS的影響，也不受來自巨噬細胞的細胞因子如IL-6和TNF-a的影響。結果，D10檢驗可以用于抬1全來自內源的特異性IL-1活性(即LPS-激活的巨噬細胞)。在存在或不存在多種濃度的AB7的情況下，使用刀豆球蛋白A(ConA)和穩定水平的重組或原始IL-1對D10細胞進行激活。以2xl0V孔將細胞進行鋪板，并使用2.5|ig/mlConA和不同濃度的IL-1卩進行刺激。將細胞培養72小時，并通過在培養的最后8至14小時中加入氧化還原能力染料阿拉瑪(Alamar)藍并檢測0.0.57()-6()()來檢測增殖。為了檢測AB7的能力和物種交叉反應，使用下列濃度的重組或原始IL-lj3進行DIO生物檢驗10pg/ml重組人IL-ip;10pg/ml重組恒河猴IL-1P;10pg/ml小鼠IL-ip;以及100pg/ml大鼠IL-113。對于采用內源人IL-1(3的D10檢驗，使用1:360稀釋的來自LPS激活的人PBMC上清。使用每種IL-1P對不同濃度的AB7進行測試。使用GraphpadPrism確定IC5o的測量值。使用MicrosoftExcel計算IC5。的標準偏差(SD)和標準誤差(SEM)。表5總結了來自D10檢驗的結果，其包括平均IC5Q和SEM(基于4次重組人IL-1卩實驗和3次其它來源的IL-1卩實驗)。AB7在中和重組人IL-ip和內源產生的(原始)人IL-1卩中高度有效。AB7在中和重組恒河猴IL-1卩中也高度有效。AB7以較低的效力中和重組小鼠IL-lj3，其ICso比人高1000倍。在該檢驗中，AB7不具有針對對大鼠IL-1卩的顯著活性。表5ELISA結果IC50(pM)SEM(pM)重組人IL-l(32.4±0.52內源產生的(天然)人IL-1卩2.6±0.11重組恒河猴IL-lP2.7±0.73重組小鼠IL-1p2618±60.9這些結果顯示AB7是針對人IL-l(3的高度有效的中和抗體，其具有對重組和原始形式的該細胞因子的類似效力。對非人靈長類恒河猴IL-1P的活性與對人IL-1P的活性相似。因此，至少某些本發明的抗體和片段包括抗體和片段，其具有針對人IL-lP和靈長類IL-l(3基本相同的效力，和/或具有針對重組人IL-lP和內源人IL-l(3基本相同的效力。這些結果還說明AB7也會中和小鼠AB7。實施例11本實施例說明了本發明的至少某些抗體(例如被指定為AB7的抗體)所結合的IL-lP抗原決定簇的圖譜。P印SpotTM肽陣列(JPT多肽技術(JPTPeptideTechnologies),柏林，德國)被用于鑒定參與AB7結合的IL-1|3關鍵氨基酸序列(抗原決定簇)。將一系列十二個氨基酸的肽直接合成在膜上。其中所述一系列十二個氨基酸的肽跨越了整個IL-l卩氨基酸序列，每條肽與前一條有11個氨基酸的重疊。使用AB7以2pg/ml在室溫下對攜帶這些肽的膜標記2小時。使用偶聯HRP的羊抗人二抗，接著進行增強的化學發光(ECL)檢測AB7與膜所結合肽的結合。對應IL-1J383至105位殘基的肽點被評分為與AB7陽性結合。該圖譜說明AB7結合對應成熟的IL-ip蛋白質中第83至105位殘基的序列內的抗原決定簇。該序列包含氨基酸ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNK正，AB7是能夠結合該序列內的抗原決定簇的典型抗體。期望被指定為AB6、AB8、AB9的抗體和其它諸如具有SEQIDNO:29重鏈和SEQIDNO:27輕鏈的抗體也結合包含在該序列內的抗原決定簇。實施例12本實施例說明在細胞基檢驗IL-8中使用本發明的抗體對IL-1(3的體外抑制。從健康的供體收集新鮮的肝素化外周血。將180^1全血接種在96孔板中，并與各種濃度的抗體AB7和lOOpMrhIL-1(3進行孵育。對于^!^化1@處理的樣品，在混合之前，將Kineret⑧和rhIL-lp按1:1組合。在37。C下5%的C02中將樣品孵育6個小時。接著使用2.5%50^1TritonX-100將全血細胞進行裂解。通過ELISA(QuantikinehumanIL-8ELISA試劑盒，R&DSystems),根據制造商的使用說明對清澈的裂解液中白介素-8(IL-8)的濃度進行檢驗。將AB7和幻!^^1@處理的樣品中IL-8的含量與使用抗KLH對照處理的對照樣品進行比較。圖18反映了這些結果，并總結在表6中。IC5o是指抑制由IL-1P剌激所引起的IL-8的50%所需要的抗體量。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage81</column></row><table>根據對IL-1J3刺激IL-8釋放的抑制所檢測的，這些結果證明了AB7的體外能力。與幻!16^1@相比，顯示更強能力的結果說明本發明的抗體將具有體內抑制IL-1(3的能力。實施例13本實施例說明本發明的抗體與具有類似序列的抗體相比具有令人吃驚的高親和力。將AB5與AB-對照在序列和結合親和力方面進行比較。AB5含有在SEQIDNO:8中所列出的重鏈可變區以及在SEQIDNO:9中所列出的輕鏈可變區。AB-對照被認為具有在SEQIDNO:38中所列出的重鏈可變區以及在SEQIDNO:39中所列出的輕鏈可變區。美國專利申請公開No.2003/0026806中在圖6A和圖6B中列出了這些序列。AB5和AB-對照在它們的重鏈和輕鏈可變區中具有相同的互補性決定區。它們的重鏈在框架區3中位于SEQIDNO:8和SEQIDNO:38中位置68、74和86的三個氨基酸處有區別。它們各自的輕鏈在框架3中位于SEQIDNO:9和SEQIDNO:39中位置72的一個氨基酸處有區別。盡管在它們重鏈和輕鏈可變區序列中的相似性包括相同的CDR,AB5和AB-對照在它們的結合親和力方面顯著并出人意料地不同。正如在上面實施例1和5中所討論的，發現AB5具有低于0.3pM的解離常數(Kd-低是0.11pM,Ko-高是0.56pM),發現AB-對照具有3pM的解離常數(KD-低是1.62pM,Kd-高是5.23pM)。考慮到氨基S菱序列中的湘西行，令人驚奇的是AB5具有一個數量級高的親和力。如實施例4中所述，使用HUMANENGINEERINGTM技術產生AB7。AB7的輕鏈和重鏈包括AB5的輕鏈和重鏈序列中的低風險和中等風險位點。AB7包含在SEQIDNO:15中所列出的重鏈可變區以及在SEQIDNO:11中所列出的輕鏈可變區。將AB7與AB5、AB-對照在序列和結合親和力方面進行比較。AB7和AB-對照在它們的重鏈和輕鏈可變區中具有相同的互補性決定區。它們的重鏈在框架區3中AB5與AB-對照不同的3個氨基酸位置中有2個氨基酸不同(SEQIDNO:15和38中位置74和86);而在SEQIDNO:15中的位置68中，AB7具有與AB-對照相同的氨基酸。在AB7的輕鏈中，SEQIDNO:11中位置72與AB-對照和AB5都不同。如果利用HUMANENGINEERINGTMi藝與AB-對照和AB5進行比較，則AB7含有許多其它的不同。盡管在中等風險的位點含有改變，特別是考慮到AB7和AB5相比在重鏈可變區中的位置68以及輕鏈可變區中的位置72有改變，AB7和AB5具有相似的解離常數，但AB7和AB-對照在結合親和力方面顯著地并意想不到地不同。如在上面實施例5中所討論的，發現AB7具有0.3pM的解離常數(Kd-低是0.1lpM，Kq-高是0.74pM)。發現AB5具有0.24pM的解離常數(Kd-低是0.07pM,Kd-高是0.72pM)。考慮到在中等風險位置所作的改變以及氨基酸序列中的整體相似性特別是在CDR中，令人吃驚的是AB7與AB5具有相似的親和力，但具有比AB-對照高一個數量級的親和力。實施例14本實施例顯示至少一種本發明的抗體結合IL-1(3的抗原決定簇，這樣所結合的抗體基本上不會防止所結合的IL-1卩結合I型IL-1受體。該實施例采用Biacore⑧動力學分析設備檢測是否結合到本發明的一種抗體(AB7)的IL-lp仍能夠結合I型IL-1受體。對于該實施例，如下AB7被固定在Biacore設備中的CM-5傳感器芯片的表面上。使用HBS-EP(Biacore,Inc.)作為電泳緩沖液，將溫度設定為25。C,流速設定為10pL/分鐘，流體通道被導向為僅流動細胞2。將135pL的每種NHS和ECD溶液(Biacore,Inc.)進4亍混合，并立刻將70|iLNHS/ECD溶液注射到流體通道中。接著注射卯^LAB7溶液(在醋酸鈉緩沖液中大約20pg/ml(Biacore,Inc.))，接著注射70(iLlM乙醇胺(Biacore,Inc.)。這樣固定了大約5650RU的AB7。為了制備參照表面，將流體通道改變為僅流動細胞1。將135pL的每種NHS和ECD溶液(Biacore,Inc.)進行混合，并立即在流體通道中注射70(jLNHS/ECD溶液，接著注射70^L1M乙醇胺(Biacore,Inc.)。接著將Biacore⑧設備準備好用于分析是否結合到AB7的IL-1卩仍會結合I型IL-1受體。為進行該分析，使用可溶I型IL-1受體(IL-1sRI),并將IL-lsRI與復合物AB7/IL-1卩的結合。IL-1sRI(RnDSystemscat#269-lR-100/CF)和IL-l卩(Peprotech,cat#200-01B)被分別在HBS-EP中被稀釋成10pg/ml。流速被設置成10^iL/分鐘。流體通道被設置為流動細胞1和2以及參照，從流動細胞1減去流動細胞2被用于確定反應差別。圖19顯示經過分析過程從Biacore設備所檢測的反應差別。圖20提供了對該分析中所使用步驟的說明，其說明依次分別向流動細胞加入(A)IL-1sRI、(B)IL-1卩以及(C)IL-1sRI。在第200秒，注射20j^LIL-1sRI以確認不存在直接結合到固定的AB7(在圖19和圖20中的注射A)。如圖19所示，IL-1sRI不會提高反應單位，這說明IL-1sRI不會直接結合被固定的AB7。在第600秒，大約1000RU的IL-1卩被AB7結合，這在芯片表面上形成了AB7/IL-1(3復合物(圖19和圖20中的注射)。反應單位的提高說明IL-ip被結合到固定的AB7上。接著在1200秒注射20|iLIL-1sRI以測試IL-1sRI與AB7和IL-l卩復合物的結合。大約1500RUIL-1sRI被結合到AB7/IL-1(3復合物(在圖19和圖20中的注射C)。這種反應單位中的提高說明IL-1sRI結合到IL-ip/AB7復合物。該實施例說明IL-1sRI結合IL-ip但不會結合AB7,AB7結合IL-ip的抗原決定簇，這樣AB7基本上不會防止IL-1卩結合IL-1sRI。所有的參考包括這里所引用的出版物、專利申請和專利在這里被引入作為參考，達到與將每一份參考單獨和具體地指出以作為參考引入并將其全部內容在這里列出同樣的程度。在本發明的描述中(特別是后面的權利要求中)，術語"a"和"an"被認為是覆蓋單數和復數，除非這里以其它方式表示或在文中明顯矛盾。術語"包括"、"具有"、"包含"和"含有"被認為是開放式的術語(即意思是"包括單不限于")，除非以其它方式說明。無論在何處使用開放式術語對本發明的特征或元件進行描述，其都被具體認為封閉式的術語可以被用于替換該開放式術語，而不離開本發明的主旨和范圍。這里所引用的數值范圍僅僅作為單獨引用每個落入該范圍內單獨數值的簡略的表達方法，除非以其它方式說明，因此每個單獨的數值都被引入到說明書中，就像其在這里被單獨引用一樣。這里所描述的所有方法都能夠以任何適當的順序進行，除非這里以其它方式表示或在文中明顯矛盾。對這里所提供的任何和全部例子或者示范語言(例如"諸如")的使用僅僅被認為是更好地說明本發明，而不會對本發明的保護范圍造成限制。說明書中沒有語言被認為是說明任何沒有請求保護的元素是實施本發明所必須的。這里描述了本發明的優選實施方式包括實施本發明的最佳模式。對于本領域技術人員在閱讀了前述說明書后，對這些優選實施方式的改變是顯而易見的。本發名人認為本領域技術人員能夠在適當時采用這些變化，并且本發明人希望本發明被實施，而不是這里所具體描述的。因此，本發名包括了所有的惡修飾和主題內容的等價，其被記錄在后面的權利要求書中，只要被適用的法律所允許。而且，在其所有可能的變化中，上述元素的任何組合都被本發名所包括，除非這里以其它方式表示或在文中明顯矛盾。權利要求1.一種IL-1β結合抗體或其IL-1β結合片段，其包含SEQIDNO28的氨基酸序列。2.根據權利要求1所述的抗體或抗體片段，其中，所述的抗體或片段包含SEQIDNO:2、SEQIDNO:23或SEQIDNO:24的氨基酸序列。3.—種IL-1P結合抗體或其IL-1P結合片段，其中，所述抗體或片段以大約lpM或更低的解離常數結合人IL-l|3。4.根據權利要求1至3中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或片段以大約0.3pM或更低的解離常數結合人IL-1卩。5.根據權利要求1至3中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或片段以大約0.24pM的解離常數結合人IL-1P。6.根據權利要求1至3中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或片段以大約O.llpM的解離常數結合人IL-1P。7.—種IL-1P結合抗體或其IL-1(3結合片段，其中，所述抗體或片段結合到IL-1P抗原決定簇上，這樣所結合的抗體或片段基本上允許IL-1P結合到I型IL-1受體上(IL-1RI)，并且所述抗體或片段以低于lpM的解離常數結合人IL-1p。8.—種IL-113結合抗體或其IL-1(3結合片段，其中，所述抗體或片段以低于lpM的解離常數結合人IL-1P，并且所述抗體或片段結合與具有SEQIDNO:11輕鏈可變區和SEQIDNO:15重鏈可變區的抗體所結合的基本上相同的抗原決定簇。9.一種IL-1卩結合抗體或其IL-1(3結合片段，其中，所述抗體或片段以低于lpM的解離常數結合人IL-ip,并且所述抗體或片段與具有SEQIDNO:11輕鏈可變區和SEQIDNO:15重鏈可變區的抗體竟爭結合。10.根據權利要求8所述的抗體或片段，其中，所述的抗體或抗體片段結合包含在序列ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE(SEQIDNO:36)中的抗原決定簇。11.根據權利要求1至9中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段是人源化的或人工改造的。12.根據權利要求1至9中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述的抗體或抗體片段是人抗體或人抗體片段。13.根據權利要求1至12中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段是中和抗體。14.根據權利要求1至13中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段包含入輕鏈。15.根據權利要求1至13中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段包含IgG2區。16.根據權利要求1至13中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段是Fab、F(ab')2、Fv、單鏈抗體片段，或者這些抗體或片段中任一種的變體或衍生物。17.根據權利要求1至13中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段是多特異性抗體、雙抗體、三抗體和四抗體、微型抗體、線性抗體、螯合重組抗體、三體、雙體、內抗體、納米抗體、小分子免疫藥物(SMIP)、結合域免疫球蛋白融合蛋白、駱駝化抗體、含Vhh的抗體，或者這些抗體或片段中任一種的變體或衍生物。18.根據權利要求1至17中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段包括含有SEQIDNO:27氨基i^列的輕鏈可變區。19.根據權利要求1至17中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，所述重鏈可變區包含SEQIDNO:8、SEQIDNO:14或SEQIDNO:15的氨基酸序列之一，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:9、SEQIDNO:10和SEQIDNO:11的氨基酸序列之一。20.根據權利要求1至17中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，所述重鏈可變區包含SEQIDNO:8的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。21.根據權利要求1至17中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，所述重鏈可變區包含SEQIDNO:15的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:11的氨基酸序列。22.根據權利要求1至17中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，所述重鏈可變區包含SEQIDNO:14的氨基酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:10的氨基酸序列。23.根據權利要求1或2所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段具有低于3pM的解離常數。24.根據權利要求1或2所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段具有大約2pM或更低的解離常數。25.—種IL-ip結合抗體或其IL-ip結合片段，其中，所述抗體或抗體片段(i)具有用于抑制由IL-ip刺激從人成纖維細胞釋放IL-6的大約0.5nM或更低的ICso，(ii)以大約lpM或更低的解離常數結合IL-1(3，以及(iii)與未給藥抗體或抗體片^a的IL-ip刺激的動物中血清IL-6水平相比，在以有效量對動物給藥所述抗體或抗體片段時，抑制動物中IL-lp誘導的血清IL-6表達的至少50%。26.—種IL-ip結合抗體或其IL-lp結合片段，其中，所述抗體或抗體片段以大約6pM至大約50pM的解離常數結合人IL-ip，并且其中所述抗體具有用于抑制由IL-1卩刺激從人成纖維細胞釋放IL-6的大約5pM至大約200pM的IC50。27.根據權利要求26所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段以大約13pM至大約25pM的解離常數結合人IL-l卩。28.根據權利要求26-27所述的抗體或抗體片段，其中，所述重鏈可變區包含SEQIDNO:4的氨基酸序列。29.根據權利要求26-28所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段包含輕鏈可變區，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。30.根據權利要求1-28中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段不會可^r測地結合IL-kx。31.根據權利要求1-30中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段不會與IL-1P以外的靶交叉反應。32.根據權利要求1-31中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段結合嚙齒類IL-1卩、靈長類IL-1(3、狗IL-1(3和兔IL-1P中的一種或多種。33.根據權利要求1-31中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或片段以比大鼠IL-1P高的親和力結合小鼠IL-1P。34.根據權利要求1-33中任一項所述的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或片段不結合豚鼠IL-1P。35.—種IL-1P結合抗體或其IL-1P結合片段，其中，所述抗體或片段包含對SEQIDNO:28氨基酸序列的一個或多個替代、缺失或添加，并且所述抗體或片段具有與在SEQIDNO:28中所列氨基酸序列相同或基本相同的抗原決定簇結合親和力和特異性。36.—種IL-1(3結合抗體或其IL-ip結合片段，其中，所述抗體或片段包含對SEQIDNO:27氨基酸序列的一個或多個替代、缺失或添加，并且所述抗體或片段具有與在SEQIDNO:27中所列氨基酸序列相同或基本相同的抗原決定簇結合親和力和特異性。37.—種核酸，其編碼權利要求1-35中任一項所述的抗體或抗體片段。38.根據權利要求37所述的核酸，其中，所述核酸包含SEQIDNO:38的序列。39.根據權利要求37所述的核酸，其中，所述核酸包含SEQIDNO:39的序列。40.—種核酸，其包含編碼抗體重鏈可變區的核酸序列，其中，所述重鏈可變區包含SEQIDNO:28的氨基酸序列。41.根據權利要求40所述的核酸序列，其中，所述核酸編碼包含SEQIDNO:2、SEQIDNO:23或SEQIDNO:24的氨基酸序列的重鏈可變區。42.—種核酸，其包含編碼抗體輕鏈可變區的核酸序列，所述輕鏈可變區包含SEQIDNO:27的氨基酸序列。43.—種載體，其包含權利要求37-41中任一項所述的核酸。44.一種細胞，其包含權利要求37-41中任一項所述的核酸或權利要求42所述的載體。45.根據權利要求44所述的細胞，其中，所述細胞是胚胎干細胞或受精卯。46.—種轉基因動物，其包含權利要求44或45所述的細胞。47.—種雜交瘤，其產生權利要求1-34中任一項所述的抗體或抗體片段。48.—種組合物，其包含(a)權利要求1-34中任一項所述的抗體或抗體片段、權利要求37-41中任一項所述的核酸或權利要求42所述的載體；以及(b)適當的運載體。49.根據權利要求48所述的組合物，其中，所述運載體是藥物上可以接受的運載體。50.根據權利要求49所述的組合物，其中，所述組合物是適合關節內、皮下、靜脈內、腹膜內、大腦內(實質內)、腦室內、肌內、眼內、動脈內、損傷內、口服或吸入給藥的形式。51.根據權利要求49所述的組合物，其中，所述組合物含有凍干保護劑、表面活性劑、填充劑、粘合劑和/或膨脹劑。52.根據權利要求49所述的組合物，其中，所述組合物是可控釋放或持續釋放的藥物組合物。53.—種治療或預防哺乳動物中IL-1相關疾病或病癥的方法，其包括為需要治療的哺乳動物給藥有效量的(a)權利要求1-34中任一項所述的抗體或抗體片段、(b)權利要求37-41中任一項所述的核酸、(c)權利要求42的載體或(d)權利要求48-54任一項所述的組合物，這樣哺乳動物中的疾病得到治療或預防。54.根據權利要求53所述的方法，其中，所述IL-1相關疾病或病癥是炎癥疾病、自體免疫疾病或癌癥。55.根據權利要求53或54所述的方法，其中，所述IL-1相關疾病或病癥選自類風濕性關節炎、骨關節炎、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、敗血性休克、慢性阻塞性肺部疾病、哮喘、移植物抗宿主疾病、動脈粥樣硬化、成人T細胞性白血病、多發性骨髓瘤、多發性硬化癥、中風或阿爾茨海默病。56.根據權利要求53-55中任一項所述的方法，其中，所述IL-1相關疾病或病癥是新生兒多系統炎癥性疾病(NOMID/CINCA)、全身性幼年特發性關節炎、CIAS1相關周期性綜合癥(CAPS)、斯蒂爾病或穆-韋二氏綜合癥。57.根據權利要求53-56中任一項所述的方法，其中，所述IL-1相關疾病或病癥是全身性幼年特發性關節炎、類風濕性關節炎、骨關節炎、動脈硬化或重癥肌無力。58.根據權利要求53-56中任一項所述的方法，其中，所述哺乳動物是人類。59.根據權利要求54-58中任一項所述的方法，其中，與不存在抗體的血清IL-6水平相比，所述有效量的所述抗體或抗體片^^有效抑制動物中IL-ip誘導的血清IL-6表達的至少50%。60.—種制備親和力成熟的IL-1卩結合多肽的方法，其包括(a)提供第一核酸和第二核酸，其中第一核酸包含編碼IL-1P結合多肽的核S臾序列，其中所述IL-1P結合多肽包含SEQIDNO:22的氨基酸序列，其中第二核酸序列包含與第一核酸序列至少有一個核苷酸不同的核酸序列；(b)進行核酸混編以提供兩種或者更多種突變的核酸；(c)選擇突變的核酸，其編碼以下多肽，所述多肽能夠或者(i)以比第一核酸所編碼的多肽高的親和力與IL-1(3結合，(ii)對IL-1卩具有高于IL-la的選擇性，該選擇性大于第一核酸所編碼的多肽的選擇性，(iii)對于IL-1卩具有低于第一核酸所編碼的多肽的平衡結合解離常數，或者(iv)抑制IL-1卩誘導的動物中血清IL-6的表達的程度比第一核酸所編碼的多肽高；以及(d)表達所選擇的突變核酸，以提供親和力成熟的IL-1P多肽。61.根據權利要求60所述的方法，其還包括在選擇突變的核酸之前提供以下抗體，所述抗體包含由所述突變的核酸所編碼的多肽，其中通過對所述抗體進行檢驗來進行對突變的核酸的選擇。62.根據權利要求60或61所述的方法，其中，重復步驟(b)和(c)，其中使用(i)至少一種步驟(c)所選擇的的突變核酸和(ii)至少一種核酸，其具有與所選擇的突變核酸有至少一個核苷酸不同的核酸序列，來進行步驟(b)的核酸混編。63.根據權利要求60-62中任一項所述的方法，其中，重復步驟(b)和(c)直到選擇到最佳的核酸。64.根據權利要求60-63中任一項所述的方法，其中，所述第一核酸編碼含有SEQIDNO:1-26中任一氨基酸序列的多肽。65.根據權利要求60-64中任一項所述的方法，其中，所述第一核酸編碼含有SEQIDNO:27-35或SEQIDNO:42-57中任一氨基酸序列的多肽。66.根據權利要求60-65中任一項所述的方法，其中，重復步驟(b)和(c)直到選擇到編碼以下多肽的核酸，所述多肽(i)具有用于抑制IL-1(3刺激從人成纖維細胞釋放IL-6的大約0.5nM或更低的IC5Q;(ii)以低于3pM的解離常數結合IL-ip;以及(iii)與未給藥抗體或片段的IL-1卩刺激的動物中血清IL-6水平相比，抑制動物中IL-1卩誘導的血清IL-6表達的至少50%。全文摘要IL-1β結合抗體或其IL-1β結合片段，其含有SEQIDNO2氨基酸序列和相關的核酸、載體、細胞核組合物及使用它們用于治療疾病的方法，以及制備親和力成熟的IL-1β結合多肽的方法。提供了IL-1β結合抗體或其IL-1β結合片段，其具有期望的親和力和效力。文檔編號C07K16/24GK101228188SQ200680026551公開日2008年7月23日申請日期2006年6月21日優先權日2005年6月21日發明者瑪麗·哈克-弗倫茲喬,琳達·馬薩特,阿諾德·霍維茨,剛陳,馬里納·勒爾申請人:佐馬技術有限公司