專利名稱：：一種改變植物花器官形態的方法及其專用表達載體的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種改變植物花器官形態的方法及其專用表達載體。技術背景雖然通過輻射誘變能夠得到無花粉的不育系，通過雜交能夠得到重瓣花，但是這兩種方法卻都不能一次性達到去除花粉和增加花瓣的目的。輻射育種雖然達到了去除花粉的目的，但也會影響或改變植物的其他性狀，而且輻射產生的誘變呈多向性，多數的性狀改變是對植物不利的；雜交育種需要尋找自然界中存在的重瓣資源，然后需要較長的育種周期才能培育出具有商業價值的觀賞植物品種。花發育的分子生物學研究表明，花萼、花瓣、雄蕊和雌蕊4輪花器官的發育，是由A、B、C三類不同功能的具MADS-box的同源異型基因調控的，即花器官發育的ABC模型。隨著科學的不斷發展，花發育的ABC模型又增加了兩類基因D功能基因和E功能基因，其中D功能基因控制胚珠的發育，而E功能基因在葉片同源變異成花器官的過程中起著重要作用，參與各輪花器官的形態建成。其中C功能基因的突變，將產生雄蕊變瓣和臺閣花等重瓣花型的突變體。Z/細"57cDNA的片段長846bp,包括編碼192個氨基酸的0RF的3，端和長270bp的3，非編碼區(GenBank序列號AY829227)，該片段與玉米、水稻等多種單子葉植物的AG同源基因具有較高的同源性(張云，劉青林，歐陽青，蔡文啟.百合花發育相關MADSBox基因的克隆。園藝學報，2004，31(3):332—336)。Z/廁ZIS3cDNA片段長797bp，編碼200個氨基酸，3，非編碼區長197bp(GeneBank序列號AY826062)，與擬南芥的SEP組基因同源性較高(張云等，2004)。
發明內容本發明的目的是提供一種改變植物花器官形態的方法及其專用表達載體。本發明所提供的用于改變植物花器官形態的表達載體，是下述a)或b)的重組植物表達載體a)在植物表達載體的多克隆位點插入Z/鵬"57基因片段得到的重組正義或反義表達載體；b)在植物表達載體的多克隆位點插入Z/J^"5^基因片段得到的重組正義或反義表達載體。其中，所述Z/細"57基因片段的核苷酸序列具體可為GenBankAccessionNumberAY829227的自5'末端第249bp至745bp，含有部分K-box;所述Z/鵬"5^基因片段的核苷酸序列具體可為GenBankAccessionNumberAY826062的自5'末端第249bp至623bp，含有部分K-box。現有的植物表達載體均可用來構建本發明的用于改變植物花器官形態的表達載體，如pBin438(中國科學院微生物研究所。其結構見李太元、田穎川、秦曉峰等."高效抗蟲轉基因煙草的研究".中國科學(B輯)，1994，24(3):276—282)。所述重組正義表達載體具體可為將Z/y^Z67基因片段插入pBin438的Sail和BamHI位點間得到的重組表達載體pBinZ/湖"57;所述重組反義表達載體具體可為將Z/i^"57基因片段插入pBin438的Sail和BaraHI位點間得到的重組表達載體pBinZ/湖Z57intisense,或為將Z/F^95^基因片段插入pBin438的Sail和BamHI位點間得到的重組表達載體pBinZ^Mfl5"<~antisense。本發明所提供的改變植物花器官形態的方法，是將上述任一種用于改變植物花器官形態的表達載體導入目的植物中，得到花器官形態改變的植物。所述花器官形態改變具體可為花藥缺失，所述用于改變植物花器官形態的表達載體為上述pBin力iMQ57"antisense。所述花器官形態改變具體還可為花萼瓣化，所述用于改變植物花器官形態的表達載體為上述pBinZ/M4"57。所述花器官形態改變具體還可為雄蕊缺失，或苞葉瓣化；所述用于改變植物花器官形態的表達載體可為上述pBin丄f鵬Z5^intisense。本發明改變植物花器官形態的方法適合于單子葉植物和雙子葉植物。和Z/i/^^J經序列分析分別屬于C功能和E功能基因，根據花發育理論，將構建的4個植物表達載體pBinZ/M"57、pBi"/廁Z5^、pBinZ/朋"57-antisence和pBinZ/細"^53-antisence轉化煙草后，發生的一系列花器官變異足以證明它們具有改變花型的功能。本發明能夠廣泛應用于觀賞植物的花型育種，從而得到重瓣花等多種花器官變異。而且基因工程育種還具有受體廣泛，不受品種約束；育種時間短；只改變目的性狀而不影響其他性狀的優點，這些優點是輻射育種和雜交育種所不具備的。圖1為pBinZf廁"57、pBi/2Z/廁"5^、pBinA/湖"57intisence禾口pBinZ/湖"5"J-antisence的結構示意2為pBinZ/鵬"57、pBi刀Z/細"5^、pBinZ/M4"57intisence禾口pBinZ/細仍，-antisence的Sail和BamHI雙酶切鑒定圖譜圖3為轉基因煙草的抗性芽及愈傷組織照片圖4為轉pBinZ/掘"57或pBi/Z/JfA05^煙草的PCR檢測圖譜圖5為轉pBinZ/￥^"57~antisence或pBinZ/vMO^-antisence煙草的PCR檢測圖譜圖6為pBinZ/廁"57intisence或pBinZ/￥/^53-antisenceTl代煙草PCR-Southern檢測圖譜圖7為轉基因煙草花器官變異表型照片具體實施方式步驟l載體構建本發明已構建4個植物表達載體pBinZ/細"57、pBinZ/M4/5^、pBin^/湖Z57—an1:isence禾口pBin^/MlflS^—antisence。步驟2轉化目標受體將上述植物表達載體通過電激法轉入具有利福平和卡那霉素抗性的根癌農桿菌LBA4404中(菌種可根據實際情況更換)，培養單菌落，接種到加入利福平和卡那霉素的YEP液體培養基上，于250rpm搖床上28"C過夜。次日，將菌液用共培養液稀釋30—50倍，浸染目標受體，共培養若干天，然后用無菌水沖洗3次，洗掉殘余的根癌農桿菌，轉移至含篩選抗生素Kan和抑菌抗生素Carb的篩選培養基上，每3周更換一次篩選培養基，最后誘導抗性苗生根。步驟3抗性植株的PCR檢測當抗性植株長至3—4cm高時進行基因組DNA的PCR檢測。DNA的提取采用CTAB法。取農桿菌落作陽性對照，未轉化植株DNA和水作陰性對照，和抗性植株的DNA同時進行PCR檢測。步驟4PCR-Southern檢測取PCR檢測陽性的植株的DNA，如上所述設置陽性和陰性對照，再次進行PCR。將PCR產物稀釋103-105倍后，取lul滴于雜交膜上，UV交聯，然后進行以地高辛標記的Southern檢測，最終呈現陽性的植株為轉基因植株。步驟5表型觀測移栽轉基因植株，待開花后觀測轉基因植株的花型變化。5、本發明的工作過程以4個植物表達載體pBinZ/y^必7、pBin^f廁"M、pBin乙/yJ^"57-antisence和pBinZ/M4"6^-antisence的構建、煙草轉化和轉基因煙草的分子檢測為例來說明該發明的工作過程。實施例1、植物表達載體pBinLfMADSl、pBinLfMADS3、pBinLfMADS1-antisence和pBinLfMADS3-antisence的構建以攜帶有Z/鵬"57基因(GenBankAccessionNumber:AY829227)的新鐵炮百合"7i咖X/bim^朋^(北京昌卉景觀園林有限公司)的花蕾中提取總RNA，然后以總RNA反轉錄得到的cDNA為模板，利用引物對Z1:CGGGATCCAGCAACATGAATCTTAGAG和Z2:CAGATTCAGCATAAAACCAC進行PCR擴增用于構建pBinL預ADSl的Z/細"57基因片段，利用引物對Fl和F2進行PCR擴增用于構建pBinZ/#J"57-antisence的Z/湖"57基因片段。以攜帶有乙/v^/tt^基因(GenBankAccessionNumber:AY826062)的新鐵炮百合^7i咖X/b27zo2o;^0(北京昌丼景觀園林有限公司)的花蕾中提取總RNA，然后以總RNA反轉錄得到的cDNA為模板，利用引物對Z3CGGGATCCAAGGACAGTTGACTATCTG和Z4CCAGTCAATTACAAACACTC進行PCR擴增用于構建pBinLfMADS3的Z/朋"5^基因片段，利用引物對F3和F4進行PCR擴增用于構建pBinZ/M4"5^-antisence的Z/鵬Z5^基因片段。將電泳檢測確定正確后的Z/M^57基因片段和Z/t^"W基因片段PCR產物分別與pGEMT-Easy-Vector連接，連接產物電激轉化大腸桿菌DH5a，在涂有X-gal和IPTG的加入50mg/L氨芐青霉素的LB平板上進行篩選，挑取白色單菌落提質粒，進行測序分析，測序結果表明，獲得了具有自GenBankAccessionNumber:AY829227的5'末端第249位-745位脫氧核糖核苷酸的Z/湖"57基因片段，和具有自GenBankAccessionNumber:AY826062的5'末端第249bp位-623位脫氧核糖核苷酸的Z/細"5^基因片段。將含有用于構建pBinZ/鵬"57的Z/湖/tt7基因片段的重組質粒命名為pGEMT-Z/鵬"57，將含有用于構建pBinZ/#^57-antisence的Z/#^7基因片段的重組質粒命名為pGEMT-Z/朋"57-antisence，將含有用于構建pBinZ/細"5^的Z/朋/AS^基因片段的重組質粒命名為pGEMT-Z/鵬ZK,將含有用于構建pBinZ/廁"5^的丄/#力"5^基因片段的重組質粒命名為pGEMT-Z/v^/^J-antisence。將pGEMT-Z/M4"57、pGEMT-Z/#^7-antisence、pGEMT-Z/#y4Z5^和pGEMT-Z/細"5"J"antisence分別用Sail和BamHI雙酶切，按照回收試劑盒中的步驟回收500bp左右的片段，雙元植物表達載體pBin438(中國科學院微生物研究所。其結構見李太元、田穎川、秦曉峰等."高效抗蟲轉基因煙草的研究".中國科學(B輯)，1994，24(3):276—282.)用Sail和BamHI雙酶切，也按試劑盒中的步驟進行回收。將回收的目的基因片段與雙元載體用T4連接酶在14-16'C下連接24小時，即得到植物表達載體pBinZ/￥AflS7、pBi"/朋/5^、pBinZ/M^A57intisence禾口pBinZ/湖"53-antisence(圖l)，將連接產物電激轉化入大腸桿菌JM109，在加有50mg/L卡那霉素的LB培養基平板上進行篩選，挑取單菌落提質粒，用Sail和BamHI雙酶切鑒定，得到了13kb和500bp左右的兩條帶，說明目的基因片段已與雙元載體連接成功(圖2)。圖2中，M:GeneRulerTMDNALadderMix，1:pBinZ/y^"5！的Sail和BamHI雙酶切圖譜；2:pBinZ/湖"53的Sail和BamHI雙酶切圖譜；3:pBin乙/鵬"51-antisence的Sail和BamHI雙酶切圖譜；4:pBinZ/￥A0S3-antisence的Sail和BamHI雙酶切圖譜。表1引物序列Z15'CGGGATCCAGCATGAATCTTAACAGAG3，Z25'CAGATTCAGCATAAAACCAC3，；Z35'CGGGATCCAAGGACAGTTGACTATCTG3'Fl5，GCGTCGACTAGACTAGCTGAAACAAC3，F35，GCGTCGACTGCTCTAGTCAGCACAAAG3'Z45'CCAGTCAATTACAAACACTC3'F25'CGGGATCCAGATTCAGCATAAAACCAC3'F45，CGGGATCCTCAAGAGCCTCATTACATC3，實施例2、培育花器官形態改變的煙草1、轉化煙草pBinZ/i"57、pBi/Z/掘"6^、pBinZ/掘"57intisence禾口pBinZ/朋"5^-antisence分別電激轉化具有利福平和卡那霉素抗性的根癌農桿菌LBA4404，然后將轉化產物涂抹在加入20mg/L利福平和50mg/L卡那霉素的YEP平板培養基上，28"培養3天后，長出單菌落，選擇利用表l中相應的引物PCR，鑒定陽性的單菌落重新劃到YEP平板培養基上，28。C培養至長出菌落。挑取長出的單菌落接種到加入20mg/L利福平和和50mg/L卡那霉素的YEP液體培養基上，于250rpm搖床上28。C搖菌過夜。次日，將農桿菌培養液用共培養培養基(MS+BA1.Omg/L+NAAO.Olmg/L)稀釋30—50倍。以無菌培養的煙草(yw'co"s朋f^ac咖'SR1，)組培苗葉片為外植體。將幼嫩葉片切去邊緣，并用刀片在葉片表面劃一些傷口，放入共培養培養基中，侵染5分鐘。取出葉片，用無菌濾紙吸干剩余的菌液，放入不含抗生素的愈傷組織誘導培養基MS+BA1.0mg/L+NAA0.01mg/L+瓊脂7g/L的平板上，使葉片邊緣切口與培養基充分接觸，然后用Parafilm膜封口，25"C光培養3天。當葉片邊緣出現白色的菌落時，將共培養的外植體取出，用無菌水沖洗3次，洗掉殘余的根癌農桿菌，無菌濾紙吸干，轉移至含100mg/LKan(卡那霉素)和100mg/LCarb(羧芐青霉素)的YEP培養基上，25"光照培養。外植體在培養1周一2周后見愈傷組織發生，2周一4周后愈傷組織上再生抗性小芽體。每3周在選擇培養基上繼代培養一次。將叢生芽分株后轉入生根培養基(MS+BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+Kanl00mg/L+Carb200mg/L+瓊脂7g/L)誘導生根。轉基因煙草的抗性芽及愈傷組織如圖3所示。同時，將含有pBin438的轉入煙草(Mco^"ara6acwmcv'SR1')，作為對照。2、轉基因煙草的PCR檢測當再生苗長至3—4cm高時進行基因組DNA的PCR檢測。煙草基因組DNA的提取采用CTAB法，取煙草葉片約50mg，在200uLCTAB提取液中研磨，再加入300uL提取液，輕輕打勻后，65。C水浴30min，然后加入500wL4。C預冷的氯仿，輕微打勻并振蕩。10000rpm離心5min，吸取上清至另一離心管中，加入等體積4。C預冷的異丙醇，輕微顛倒直至DNA沉淀。10000rpm離心5min，棄上清，加入4'C預冷的70%乙醇，用槍頭輕輕打散沉淀。10000rpm離心5min，棄上清。待管內液體徹底干燥后，用20—50nLddH20溶解DNA，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測后，置于-2(TC冰箱中保存備用。提取的基因組DNA用ddH20稀釋10倍，取0.5uL(約25ng)作為PCR反應的模板。以特異性引物Z1和Z2;Z3和Z4;F1和F2;F3和F4(表1)分別進行PCR擴增，PCR反應體積均為10yL，同時設水對照、陽性對照(pBinZ/M^157、pBi/3Z/iZ^J、pBinZ/鵬"^57intisence或pBinZil^A5^-antisence)和轉pBin438的煙草對照各一個。PCR的反應條件為94。C預變性4min;94匸變性lmin，53。C退火lrain30s，72。C延伸lmin，共30個循環；72°。延伸10min。PCR反應完成后，取8nL產物在1%瓊脂糖膠上電泳檢測。轉pBi"/鵬"57、pBi刀Z/湖AS^、pBinZ/#^67intisence或pBinZf掘"53-antisence植株在500bp左右處有條帶出現，而轉pBin438的煙草沒有條帶出現(圖4、5)。圖4中，M:200bpladder分子量標記，8:水對照，7:轉pBin438的煙草對照。左側圖片為轉pBinZ/i^"67煙草；6為pBinZ/廁"57陽性對照；1-5為轉pBinZ/y^"57煙草，將其分別命名為Z/廁"57-厶Z/鵬Z67-么Z/廁"57-J、Z/細A57-^和Z/廁"57-5。右側圖片為轉pBinZ/鵬Z5^煙草；6為pBinZ/鵬ZK陽性對照；1-5為轉pBinZ/M4"5^煙草，將其分別命名為ZiM"5"<-厶Z/鵬"5"J-么Z/鵬"5^-3、Z/M"5^-4和Z/朋"5^-5。圖5中，M:200bpladder分子量標記，8:水對照，7:轉pBin438的煙草對照。左側圖片為轉pBinZ/淑"Wintisence煙草；6為pBin丄/鵬"57intisence;l-5為轉pBinZ/#AftS7intisence煙草，將其分別命名為Z/#y^S7intisence-1、Z/層57mtisence-2、Z/層67，tisence-3、Z滿"57mtisence-4禾口Z/廁"57"antisence-5。右側圖片為轉pBinZ/#^96^^intisence煙草；6為pBi"/掘"5^;1-5為轉pBinZ/鵬"5^intisence煙草，將其分別命名為Z/層5"hntisence-l、Z/磨5"hntisence-2、爐藩hntisence-3、Lf層5^ntisence-4禾卩Z扁脂，tisence-5。3、PCR-Southern檢測收獲植株L預ADS1-1、L預ADS1-2、LfMADSl-3、LfMADSl-4、L預ADS1-5、LfMADS3-1、LfMADS3-2、LfMADS3-3、LfMADS3-4、L預ADS3-5、LfMADSl-antisence-1、Lf膽S卜antisence-2、LfMADSl-antisence-3、LfMADSl-antisence-4、L預ADS1-antisence-5、LfMADS3-antisence-l、LfMADS3-antisence-2、LfMADS3-antisence-3、LfMADS3-antisence-4和LfMADS3-antisence-5的種子，播種于不添加任何激素和抗生素的MS培養基上，l個月后，取不同植株上的葉片，采用CTAB法提取煙草基因組DNA，取煙草葉片約50mg，在200uLCTAB提取液中研磨，再加入300uL提取液，輕輕打勻后，65。C水浴30rain，然后加入500uL4°C預冷的氯仿，輕微打勻并振蕩。10000rpm離心5min，吸取上清至另一離心管中，加入等體積4X:預冷的異丙醇，輕微顛倒直至DNA沉淀。10000rpm離心5min，棄上清，加入4。C預冷的70。/o乙醇，用槍頭輕輕打散沉淀。10000rpm離心5min，棄上清。待管內液體徹底干燥后，用20—50uLddH20溶解DNA，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測后，置于-2(TC冰箱中保存備用。按照如下方法利用Southern雜交袋(購自鼎國公司)，DigHighPrimeDNALabelingandDetectionStarterKitII(購自Roche公司)Hybond-N+尼龍膜(AmersharaBiosciences)和X-光片(Kodak)進行以地高辛標記的PCR-Southern檢測將提取的煙草基因組DNA用ddH20稀釋10倍，作為PCR的模板。分別以LfMADSl-antisence-l、Lf膽Sl-antisence-2、LfMADSl-antisence-3、LfMADSl-antisence-4和LfMADSl-antisence-5煙草的基因組DNA為模板，用引物Fl和F2PCR擴增Z/yl/^757基因片段。分別以LfMADS3-antisence-1、Lf腸S3-antisence-2、LfMADS3-antisence-3、LfMADS3-antisence-4禾口L預ADS3-antisence-5煙草的基因組DNA為模板，用引物F3和F4PCR擴增基因片段。同時設質粒陽性、野生型煙草和水作為對照。PCR反應體系為在冰上向0.5ml離心管中依次加入，混勻后以20ul礦物油覆蓋。PCR反應體系組成如下ddH2010XPCRbufferdNTP(10mmol/L)上游引物(10umol/U下游引物(10umol/L)模板(煙草基因組DNA)7.6u11.0u10.2u14.0ul0.4u10.3y1TaqDNAPolymerase(5U/y1)0.1y1總體積10.0y1PCR反應參數如表2所示:表2PCR反應參數程序溫度時間循環數194。C4min1294°C30s3057°C30s72°C30s372'C10min14_￡2_^_1將pBinZ/#J"67intisence或pBinZ/湖"5^-antisence質粒DNA，用限制性內切酶SalI禾nBamHI切下500bp左右的ZiM^67基因片段或Z/y^"5^基因片段，將該Z/細"57基因片段或Z/湖"5^基因片段進行變性并用地高辛標記，作為探針。將探針分別與上述相應的PCR產物進行Southern雜交。結果表明外源基因Z/M4"57和ZiW^5^確實已經轉入煙草基因組DNA，并在基因分離的基礎上能夠穩定遺傳(圖6)。因為未添加抗生素，不含外源基因的T1代煙草部分植株也能正常存活。所以在檢測結果中也出現了陰性植株。圖6中，2、10水對照；3、11為轉pBin438的Tl代煙草。左側圖片為轉pBinZ/朋"57intisenceTl代煙草；9為pBinZ/#^57intisence;4-8分別為株系Z/#^057nitisence-2中的一株Tl代植株、丄/細"57"antisence-3中的一株Tl代植株、Z/y^"57intisence-l中的一株T1代植株、Z/#y4"57intisence-4中的一株Tl代植株和Z/;M"57intisence-5中的一株Tl代植株。右側圖片為轉pBinZi￥^5^^ntisenceTl代煙草；1為pBinZ/i^"5^;12-16分別為株系Z/#J"5>antisence-1中的一株T1代植株、Zi￥^05^~antisence-2中的一株T1代植株、Z/i^"5"Jintisence-3中的一株T1代植株、ZiM^S^intisence-4中的一株Tl代植株和Z/M4"5^intisence-5中的一株Tl代植株。4、轉基因煙草花器官的表型變化表3Z/鵬"W,3基因對煙草的轉化率及其變異率<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>分別將￡/細"67-antisene，Z/蒯Z^7,antisence，Z/細"5^株系的當代植株(TO代)植株的組培苗42、48、36、33株進行實驗，根長到2cm左右時，移至光照培養箱中培養，白天26t:，夜間2(TC，光照16小時。觀察轉基因煙草開花時間、花器官及植株其他性狀的表型變異。結果表明，在42株轉pBinZ/湖"57-antisene的T。代Z/MZ57intisence株系植株中，共有1株的1朵花中雄蕊變的極短，并且花藥缺失；在48株轉pBi"/#/^S7的T。代Z/J/^57株系植株中，共有1株的1個花萼與花瓣嵌合的花朵，嵌合體部分具有花瓣的特征；在36株轉pBi/i/:/湖flS3-antisence的T。代株系Z/掘/5^intisence植株中，共有1株的1枚雄蕊完全缺失，另外有1株的苞葉部分瓣化，花柄變短；在48株轉pBin438的T。代植株中，沒有一朵花的花器官發生變異(圖7)。這些結果表明構建的植物表達載體pBinZ/F^K7、pBinZ/i^Z57-antisence和pBinZ/廁Z5^-antisence轉化植物后能夠有效干擾內源基因的表達，從而改變花器官的形態。圖7中，1、轉pBin438煙草；2、轉pBinZ/掘"57花萼瓣化；3、轉pBinZ/M^57-antisene花藥缺失；4、轉pBi/Z/J^i05^-antisence雄蔬部分缺失；5、轉pBi"Z/崩仍3-antisence複葉瓣化正面圖；6、轉pBi"Z/湖ZZ53-antisence苞葉瓣化反面圖。權利要求1、一種用于改變植物花器官形態的表達載體，下述a)或b)的重組植物表達載體a)在植物表達載體的多克隆位點插入LfMADS1基因片段得到的重組正義或反義表達載體；b)在植物表達載體的多克隆位點插入LfMADS3基因片段得到的重組正義或反義表達載體。2、根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于所述ZiM^67基因片段的核苷酸序列為GenBankAccessionNumberAY829227的自5'末端第249bp至745bp，；所述^/#^95^基因片段的核苷酸序列為GenBankAccessionNumberAY826062的自5'末端第249bp至623bp。3、根據權利要求l所述的表達載體，其特征在于所述植物表達載體為pBin438;所述重組正義表達載體為將Z/M4"57基因片段插入pBin438的Sail和BamHI位點間得到的重組表達載體pBinZ/湖/^7;所述重組反義表達載體為將Z/vM"57基因片段插入pBin438的Sail和BamHI位點間得到的重組表達載體pBinZ/v^iOS7intisense，或為將Z/鵬/^基因片段插入pBin438的Sail和BamHI位點間得到的重組表達載體pBinZ/y^"5^intisense。4、一種改變植物花器官形態的方法，是將權利要求1至3中任一所述的用于改變植物花器官形態的表達載體導入目的植物中，得到花器官形態改變的植物。5、根據權利要求4所述的方法，其特征在于所述花器官形態改變為花藥缺失。6、根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述用于改變植物花器官形態的表達載體為權利要求3所述的pBinZ/鵬"57intisense。7、根據權利要求4所述的方法，其特征在于所述花器官形態改變為花萼瓣化。8、根據權利要求7所述的方法，其特征在于所述用于改變植物花器官形態的表達載體為權利要求3所述的pBir^/￥ym57。9、根據權利要求4所述的方法，其特征在于所述花器官形態改變為雄蕊缺失，或苞葉瓣化；進一步，所述用于改變植物花器官形態的表達載體可為權利要求3所述的pBinLfiW"5"J"antisense。10、根據權利要求4至9中任一所述的方法，其特征在于所述植物為雙子葉植物。全文摘要本發明公開了一種改變植物花器官形態的方法及其專用表達載體。本發明所提供的用于改變植物花器官形態的表達載體，下述a)或b)的重組植物表達載體a)在植物表達載體的多克隆位點插入LfMADS1基因片段得到的重組正義或反義表達載體；b)在植物表達載體的多克隆位點插入LfMADS3基因片段得到的重組正義或反義表達載體。本發明能夠廣泛應用于觀賞植物的花型育種，從而得到重瓣花等多種花器官變異。而且基因工程育種還具有受體廣泛，不受品種約束；育種時間短；只改變目的性狀而不影響其他性狀的優點，這些優點是輻射育種和雜交育種所不具備的。文檔編號C07H21/04GK101130784SQ20071011943公開日2008年2月27日申請日期2007年7月24日優先權日2007年7月24日發明者劉青林,云張,彌志偉,趙印泉申請人:中國農業大學