黃嘌呤氧化酶抑制劑的制作方法

專利名稱：黃嘌呤氧化酶抑制劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種黃嘌呤氧化酶抑制劑。
背景技術：
高尿酸血癥導致痛風和腎機能不全且被進一步認為是一種導致冠心病的因素。此外，高尿酸血癥被認為與成年人疾病比如高血壓癥的形成密切相關。因此，對于高尿酸血癥的治療不僅可有效治療痛風而且可有效預防各種與日常營養有關和在年齡增長過程中形成的疾病。
目前，采用可抑制尿酸產生的抑制劑比如別嘌呤醇和排尿酸代謝的促進劑比如苯溴馬隆(benzbromalone)來治療高尿酸血癥。然而，眾所周知別嘌呤醇可導致副作用比如器官損害、肝病和骨髓發生性(myelogenetic)障礙。別嘌呤醇和其代謝產物(羥嘌呤醇)是由腎排泄的。然而，如果尿酸的排泄降低，則這些化合物的排泄也降低，而它們在血液中的濃度增加。因此，導致副作用的機會將增加。
據報導苯溴馬隆還導致肝病。因此，希望開發新的藥物以使開業醫生可以選擇最適當的藥物。
近來，已經報導了下述的不具有嘌呤細胞核的黃嘌呤氧化酶抑制劑比如TMX-67(Teijin公司)，Y-700(Mitsubishi Wellpharma公司)和KT651(Kotobuki公司)
本發明人已經發現含有雙環稠合雜環的下述式(I)的化合物具有黃嘌呤氧化酶抑制作用。基于此發現完成了本發明。
存在已知與本發明的化合物結構類似的化合物，2-苯基吲哚化合物(日本專利臨時公開(特表平11-501024))和2-苯基苯并咪唑化合物(日本專利臨時公開昭56-5465)。前一類化合物在苯環的4位具有一個氨基，顯示出抗癌的作用；而后一類化合物在苯環的4位具有2-羥基-3-N-取代的氨基丙氧基基團，顯示出誘導低血壓的作用。因此，這些化合物在結構和藥理學作用上不同于本發明的化合物。本發明的一個目的是提供具有黃嘌呤氧化酶(XOD)抑制作用的下述式(I)的化合物。
本發明提供下面式(I)的化合物和它們的鹽
其中R1代表具有1-8個碳原子的烷基，被1-3個鹵素原子取代的烷基，OR4，CO2R5，或S(O)nR6；其中R4是氫，或具有1-8個碳原子的烷基，具有一個6-10個碳原子的芳基部分和一個1-4個碳原子的烷基部分的芳烷基，具有2-9個碳原子的烷基羰基基團，具有一個6-10個碳原子的芳基部分的芳基羰基基團，具有一個6-10個碳原子的芳基部分和一個2-5個碳原子的烷基羰基部分的芳烷基羰基基團，或可具有選自鹵素、羥基、硝基和氰基的取代基的具有6-10碳原子的芳基基團；每個R5和R6是氫，或具有1-8個碳原子的烷基，具有一個6-10個碳原子的芳基部分和一個1-4個碳原子的烷基部分的芳烷基，或可能具有選自鹵素、羥基、硝基、氰基和氨基的取代基的6-10個碳原子的芳基基團；和n是0到2的整數；R2是氫，鹵素，硝基，氰基，甲酰基，具有1-8個碳原子的烷基，可被一到三個鹵素取代的具有1-8個碳原子的烷基，或CO2R7，其中R7具有與上述R5相同的含義；R3是氫，鹵素，羥基，氨基，CO2R8，PO3H，PO(OH)(OR9)，S(O)mR10，或具有1-8個碳原子的烷基，或可能具有選自鹵素、羥基、硝基、氰基和氨基的取代基的具有1-8個碳原子的烷基的烷氨基羰基基團；其中每個R8，R9，和R10具有與上述R5相同的含義；m具有與上述n相同的含義；X是NR11，氧，或硫，其中R11是氫，或可能具有選自鹵素、羥基、硝基、氰基和氨基的取代基的具有1-8個碳原子的烷基；和每個Y和Z是CR12或氮，其中R12具有與上述的R3相同的含義。
此外，本發明涉及含有式(I)的化合物或其鹽作為活性組分的黃嘌呤氧化酶抑制劑。
此外，本發明涉及含有式(I)的化合物或其鹽作為活性組分的用于治療高尿酸血癥的藥劑。
下面將對本發明詳細地說明。
對于式(I)中的R1，R2，R3，R4，R5，R6和R11的具有1-8個碳原子的烷基的實例包括甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基和戊基。
對于R1和R2的具有1-8個碳原子的烷基的實例包括甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基和戊基，其可被一到三個氟，氯或溴取代。
對于R4、R5和R6，具有一個6-10個碳原子的芳基部分和一個1-4個碳原子的烷基部分的芳烷基的實例包括芐基和苯乙基。
對于R4，具有2-9個碳原子的烷基羰基基團的實例包括乙酰基和丙酰基。
具有6-10個碳原子的芳基部分的芳基羰基基團的實例包括苯甲酰基。
具有6-10個碳原子的芳基部分和2-5個碳原子的烷基羰基部分的芳烷基羰基基團的實例包括芐基羰基。
對于R4、R5和R6，具有6-10個碳原子的芳基基團的實例包括苯基和萘基。
對于R2，R3，R4，R5，R6或R11，鹵素取代基的實例包括氟，氯和溴。
具有1-8個碳原子的烷基部分的烷氨基羰基的實例包括甲基氨基羰基。
(1)優選其中R1是OR4的式(I)化合物和其鹽。
(2)還優選其中R1是具有1-5個碳原子的烷氧基的式(I)化合物和其鹽。
(3)還優選其中R1是異丁氧基的式(I)化合物和其鹽。
(4)還優選其中R2是硝基、氰基、鹵素或羧基的式(I)化合物和其鹽。
(5)還優選其中R2是硝基或氰基的根據上述(1)到(3)的式(I)化合物和其鹽。
(6)還優選其中R3是氫、氨基、羥基、鹵素或羧基的根據上述(1)到(5)的式(I)化合物和其鹽。
(7)還優選其中X是NH或氧，和每個Y和Z是氮的根據上述(1)到(6)的式(I)化合物和其鹽。
(8)還優選其中X是硫、氧或NH，和Y是CH、C-OH或C-CO2H，和Z是CH的根據上述(1)到(6)的式(I)化合物和其鹽。
(9)還優選其中X是NH，和至少一個Y和Z是氮而另一個是CH的根據上述(1)到(6)的式(I)化合物和其鹽。
式(I)的化合物可以是藥理學可接受的鹽的形式。例如，R5，R7或R8是堿金屬比如鈉，鉀或鋰。
以下舉例說明式(I)的化合物的制備方法。 [式中，X是NH或O，并且每個R1、R2、R3、Y和Z具有如上相同的含義。]式(c)的苯甲酰胺衍生物可以通過式(a)的苯甲酸衍生物與式(b)的苯胺衍生物反應獲得。
該反應可以按照形成酰胺化合物的常規方式進行。例如，首先用亞硫酰氯或草酰氯將式(a)的苯甲酸衍生物轉變為酰氯，而后將酰氯與式(b)的苯胺衍生物在溶劑比如水或THF存在下和在有或沒有堿比如碳酸氫鈉或三乙胺存在下反應。要不然，使式(a)的苯甲酸衍生物與式(b)的苯胺衍生物在縮合劑比如DDC或WSC-HCl存在下反應。
將得到的式(c)的苯甲酰胺與三氯氧化磷反應或加熱，得到式(d)代表的本發明的化合物。 [其中R是氫或鹵素比如氯，并且R1，R2，R3，Y和Z與上述定義相同。]式(f)的苯甲酰胺衍生物可以通過式(a)的苯甲酸衍生物與式(e)的苯胺衍生物反應獲得。
酰胺形成反應可以按照與合成方法1所述相同的方法進行。
式(g)的苯甲硫酰胺衍生物可以由式(f)的苯甲酰胺通過用Lawesson試劑處理來制備。
然后用鐵氰化鉀和氫化鈉處理式(g)的硫代苯甲酰胺衍生物，得到式(h)代表的本發明的化合物。
其它式(I)代表的化合物可以用類似的方式制備。
下面的表1到19舉例說明了本發明的化合物的實例。
(1)下面的表1到7列出了X為NR11的化合物的實例。

表1
表2
表3
表4
表5
表6
表7
(2)下面的表8到13列出了X為O的化合物的實例。
表8
表9
表10
表11
表12
表13
(3)下面的表14到19列出了X為S的化合物的實例。
表14
表15
表16
表17
表18
表19
本發明的藥理作用描述如下。
本發明的化合物的黃嘌呤氧化酶抑制作用(體外試驗)通過測定黃嘌呤被黃嘌呤氧化酶氧化的抑制來證實，如實施例13中所描述。由表20可明顯看出，本發明的化合物顯示了極好的黃嘌呤氧化酶抑制作用。
此外黃嘌呤氧化酶抑制作用可通過在體內試驗中測定已經口服給予了本發明化合物的小鼠血漿中的尿酸濃度來證實。見實施例14，表21。
因此，可以預期本發明的式(I)化合物可用于高尿酸血癥和痛風的預防或治療。
本發明的化合物可以通過適當的給藥方法比如口服和腸胃外給藥對人給藥。
本發明的化合物可以制成已知的藥物制劑形式比如小丸，顆粒劑，粉末，膠囊，懸浮液，注射劑和栓劑。對于制劑，可使用通常使用的賦形劑，崩解劑，粘結劑，潤滑劑，著色劑，稀釋劑，等等。賦形劑可以是乳糖，D-甘露糖醇，結晶纖維素或葡萄糖。崩解劑可以是淀粉或羧甲基纖維素鈣(CMC-Ca)。潤滑劑可以是硬脂酸鎂或滑石粉。粘結劑可以是羥丙基纖維素(HPC)，凝膠或聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)。
對于成年人，當以注射的形式給藥時本發明的化合物的劑量通常為大約0.1到100毫克/天，當口服給藥時為大約1到2,000毫克/天。劑量可以根據年齡和臨床狀況加以調整。
本發明可通過下面的非限制性實施例進一步地描述。8-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)-6-氯-嘌呤(A)和6-氨基-8-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)-唑并[4，5-d]嘧啶(B)(1)4-羥基-3-硝基苯甲酸甲酯將4-羥基-3-硝基苯甲酸(10.0克，54.6mmol)懸浮在甲醇(60毫升)中。加入濃硫酸(0.1毫升)后，將懸浮液在回流下加熱過夜。減壓蒸出甲醇。將殘余物溶于乙酸乙酯(40毫升)中，依次用5％碳酸氫鈉水溶液(20毫升X2)和飽和鹽水(20毫升)洗滌，并用無水硫酸鈉干燥。減壓蒸出溶劑，得到淡褐色結晶形式的目標化合物產品6.27克(收率58％)。
M.p.72～73℃1H NMR(CDCl3，400MHz)δ3.95(3H，s)，7.22(1H，d，J＝9Hz)，8.24(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.83(1H，d，J＝2Hz)，10.89(1H，s)。
(2)4-異丁氧基-3-硝基苯甲酸甲酯將異丁基溴(10.5毫升，95.8mmol)加入到4-羥基-3-硝基苯甲酸甲酯(6.26克，31.8mmol)和碳酸鉀(13.2克，95.5mmol)的干燥DMF(40毫升)的懸浮液中。將得到的混合物在90℃下攪拌44小時而后冷卻到室溫。隨后，向冷卻的混合物中加入冰-水(80毫升)。過濾收集由此沉淀出的結晶產物，用水(50毫升)洗滌，并于空氣中干燥30分鐘。然后將干燥了的結晶產物用己烷(40毫升)洗滌，并空氣干燥，得到7.03克(收率87％)目標化合物的淡橙色結晶產物。
M.p.77～77℃1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.07(6H，d，J＝7Hz)，2.1-2.3(1H，m)，3.93(2H，d，J＝7Hz)，3.93(3H，s)，7.09(1H，d，J＝9Hz)，8.18(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.50(1H，d，J＝2Hz)。
(3)4-異丁氧基-3-硝基苯甲酸將4-異丁氧基-3-硝基苯甲酸甲酯(2.50克，9.87mmol)溶于甲醇(10毫升)和THF(10毫升)的混合物中。加入2M氫氧化鈉水溶液(7.5毫升，15.0mmol)后，將溶液在室溫下攪拌18小時。減壓蒸出溶劑，并向殘余物中加入水(20毫升)和3M鹽酸水溶液，調節溶液的pH值到1。通過過濾收集由此沉淀出的結晶產物。將結晶的產物用水(20毫升X2)洗滌并在50℃下減壓干燥4小時，得到2.31克(收率98％)目標化合物的白色結晶產物。
M.p.184-186℃1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.08(6H，d，J＝6Hz)，2.1-2.3(1H，m)，3.95(2H，d，J＝6Hz)，7.13(1H，d，J＝9Hz)，8.24(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.56(1H，d，J＝2Hz)。
(4)4-氨基-6-羥基-5-(4-異丁氧基-3-硝基苯甲酰基)-氨基吡啶在冰冷卻下將4，5-二氨基-6-羥基嘧啶(527毫克，4.18mmol)加入到碳酸氫鈉(3.15克，41.8mmol)的水(10毫升)懸浮液中。隨后，加入4-異丁氧基-3-硝基苯甲酰氯(1.08克，4.18mmol)的乙酸乙酯(10毫升)溶液。在冰冷卻下將得到的混合物攪拌3小時，通過加入6M鹽酸產生酸性，在室溫下減壓蒸出乙酸乙酯，并在室溫下攪拌30分鐘。過濾收集由此沉淀出的固體產物，依次用水和乙醚洗滌，而后依次于空氣中和在減壓下干燥，得到963毫克(收率69％)目標化合物的粉末狀產物。
1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.00(6H，d，J＝6Hz)，2.0-2.1(1H，m)，4.03(2H，d，J＝6Hz)，6.37(2H，寬峰，s)，7.45(1H，d，J＝9Hz)，7.78(1H，s)，8.22(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.44(1H，d，J＝2Hz)，9.18(1H，s)，11.70(1H，s)。
(5)8-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)-6-氯嘌呤(A)和6-氨基-8-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)-唑并[4，5-d]-嘧啶(B)將4-氨基-6-羥基-5-(4-異丁氧基-3-硝基苯甲酰基)氨基吡啶(354毫克，1.07mmol)和三氯氧化磷(6毫升)的混合物在120℃下攪拌4.5小時。減壓蒸出過量的三氯氧磷。加入冰-水后將殘余物攪拌30分鐘。加入0.5M氫氧化鈉水溶液(24毫升)后，過濾除去不溶物質(1)，將濾液攪拌30分鐘。然后過濾除去不溶物質，并通過加入乙酸使水溶液部分成為酸性。過濾收集由此沉淀的固態產物。合并由此收集的固態產物和不溶物質(2)，進行硅膠柱色譜并用乙酸乙酯/正己烷(2/1)洗脫，得到45毫克(收率13％)目標化合物(A)和60毫克(收率17％)目標化合物(B)，兩者都是淺黃色粉末形式的產物。
(A)1H NMR(CDCl3-CD3OD，400MHZ)δ1.10(6H，d，J＝7Hz)，2.2-2.3(1H，m)，3.98(2H，d，J＝7Hz)，7.2 3(1H，d，J＝9Hz)，8.48(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.64(1H，d，J＝2Hz)，8.74(1H，s)。
(B)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.01(6H，d，J＝7Hz)，2.1-2.2(1H，m)，4.07(2H，d，J＝7Hz)，7.60(1H，d，J＝9Hz)，7.77(2H，寬峰，s)，8.25(1H，s)，8.32(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.55(1H，d，J＝2Hz)。
FAB-MS(m/e)330(M+1)。8-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)-6-羥基嘌呤在攪拌下將8-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)-6-氯嘌呤(30毫克，0.086mmol)在2M鹽酸(4.5毫升)中的懸浮液加熱到120℃，加熱3小時。然后將懸浮液冷卻到室溫。過濾收集由此沉淀的固體產物，用水洗滌，并在空氣中干燥。加入2M鹽酸水溶液(27毫升)后將干燥的產物加熱到100℃。在水溶液部分仍然熱的時候除去不溶物質。將濾液攪拌過夜。過濾收集沉淀的固體產物，用水洗滌，并空氣干燥，得到12毫克(收率43％)目標化合物的黃色粉末狀產物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.00(6H，d，J＝7Hz)，2.0-2.2(1H，m)，4.03(2H，d，J＝6Hz)，7.55(1H，d，J＝9Hz)，8.02(1H，s)，8.39(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.65(1H，d，J＝2Hz)，12.28(1H，s)。
FAB-MS(m/e)330(M+1)。8-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)-1H-苯并咪唑將1，2-苯二胺(1.09g，10.1mmol)溶于THF(20毫升)中。將溶液用冰-水冷卻，并用超過30分鐘的時間向冷卻的溶液中滴加4-異丁氧基-3-硝基苯甲酰氯(1.00mmol)的THF(3毫升)溶液。然后將混合物在冰-水冷卻下攪拌3小時。將溶劑減壓蒸出。將殘余物懸浮在水(20毫升)中，并在室溫下攪拌30分鐘。過濾收集由此獲得的結晶產物，用水(5毫升×3)洗滌，并在室溫下減壓干燥，得到淺黃色結晶形式的目標酰胺產物291毫克(收率88％)。
將酰胺產物(165毫克，0.50mmol)和磷酰氯(3.0毫升)一起回流加熱3小時，而后使其靜置并冷卻到室溫。將反應混合物倒入到冰-水(50毫升)中，并將含水混合物攪拌30分鐘。過濾收集由此獲得的結晶產物，用水(5毫升x5)洗滌，并在室溫下減壓干燥，得到淺黃色結晶形式的目標化合物142毫克(收率91％)。
M.p.235-240℃(分解.)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.02(6H，d，J＝6Hz)，2.0-2.2(1H，m)，4.07(2H，d，J＝6Hz)，7.3-7.4(2H，m)，7.6 3(1H，d，J＝9Hz)，7.7-7.8(2H，m)，8.50(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.75(1H，d，J＝2Hz)。2-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)咪唑并[4，5-b]吡啶(1)2-氨基-3-(異丁氧基-3-硝基苯甲酰基)氨基吡啶在冰冷卻下將碳酸氫鈉(350毫克，4.17mmol)加入到2，3-二氨基吡啶(228毫克，2.09mmol)的水(2毫升)溶液中。向此溶液中進一步加入4-異丁氧基-3-硝基苯甲酰氯(108毫克，2.09mmol)的乙酸乙酯(2毫升)溶液。將混合物在冰冷卻下攪拌2小時。減壓蒸出乙酸乙酯，并向殘余物中加入水。過濾收集得到的固體產物，空氣干燥，進行硅膠柱色譜，用氯仿/甲醇(30/1)洗脫。得到黃色粉末狀產物形式的目標化合物54毫克(收率41％)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.00(6H，d，J＝7Hz)，2.0-2.1(1H，m)，4.04(2H，d，J＝6Hz)，5.83(2H，s)，6.60(1H，dd，J＝5Hz，7Hz)，7.48(1H，J＝9Hz)，7.50(1H，d，J＝5Hz)，7.81(1H，雙寬峰，J＝5Hz)，8.25(1H，雙寬峰，J＝9Hz)，8.52(1H，單寬峰)，9.72(1H，s)。
(2)2-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)咪唑并[4，5-b]-吡啶在攪拌下將2-氨基-3-(4-異丁氧基-3-硝基苯甲酰基)-氨基吡啶(40毫克)和三氯氧磷(2毫升)的混合物加熱到120℃，加熱8小時。減壓蒸出過量的三氯氧磷，并向殘余物中加入冰-水。過濾收集由此沉淀出的固體產物，用水洗滌，而后依次于空氣中和在60℃下減壓干燥，得到42毫克(收率100％)目標化合物的白色粉末狀產物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.01(6H，d，J＝7Hz)，2.1-2.2(1H，m)，4.06(2H，d，J＝6Hz)，7.3-7.35(1H，m)，7.60(1H，d，J＝9Hz)，8.10(1H，單寬峰)，8.40(1H，單寬峰)，8.48(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.73(1H，d，J＝2Hz)。4-羥基-2-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)-1，3-苯并唑(1)2-氨基間苯二酚將2-硝基間苯二酚(1.00g，6.45mmol)溶于乙醇(10毫升)中。然后在室溫下將溶液在10％Pd/C(340毫克，0.32mmol)存在下在氫氣氛圍下攪拌6小時。過濾除去不溶物質，減壓蒸出溶劑，得到779毫克(收率97％)目標化合物的褐色結晶產物。
M.P.153～155℃(分解.)。
1H NMR(CD3OD/CDCl3＝1/20，400MHz)δ6.37(2H，d，J＝8Hz)，6.54(1H，t，J＝8Hz)。
(2)4-羥基-2-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)-1，3-苯并唑將4-異丁氧基-3-硝基苯甲酸(480毫克，2.01mmol)和2-氨基間苯二酚(250毫克，2.00mmol)懸浮在干燥的二氯甲烷(12毫升)中。向懸浮液中加入1-乙基-3-(3′-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(WSC·HCl)(420毫克，2.19mmol)，干燥的THF(6毫升)和干燥的DMF(6毫升)。然后將混合物在室溫下攪拌19小時。加入水(40毫升)和氯仿(20毫升)，并分離出有機部分。然后將有機部分依次用水(20毫升X2)和飽和鹽水(20毫升)洗滌，用無水硫酸鈉干燥，然后減壓蒸出溶劑。將殘余物用硅膠柱色譜法純化(甲醇/氯仿＝1/100)，隨后用氯仿/己烷(1/3，1.6毫升)結晶，得到97毫克(收率14％)N-(2，6-二羥苯基)-4-異丁氧基-3-硝基苯甲酰胺的褐色結晶產物。
將40毫克(0.12mmol)的以上獲得的產物加熱到225-227℃，加熱一小時，用硅膠柱色譜法純化(乙酸乙酯/己烷1/2)，得到13.6毫克(收率36％)目標化合物的淺黃色結晶產物。
1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.05(6H，d，J＝6Hz)，2.0-2.2(1H，m)，4.07(2H，d，J＝7Hz)，6.79(1H，dd，J＝1Hz，7Hz)，7.1-7.3(2H，m)，7.59(1H，d，J＝9Hz)，8.37(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.58(1H，d，J＝2Hz)。
IR(KBr)cm-12962，2933，1624，1527，1506，1489，1470，1350，1273，1244，1169，1007。
FAB-MS(m/e)329(M+1)。6-氨基-8-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)嘌呤(1)4，6-二氨基-5-(4-異丁氧基-3-硝基苯甲酰基)氨基-吡啶在冰冷卻下將4-異丁氧基-3-硝基苯甲酰氯(538毫克，2.09mmol)的1，4-二氧六環(2毫升)溶液滴加到4，5，6-三氨基嘧啶硫酸鹽(466毫克，2.09mmol)與1M氫氧化鈉(4.18毫升)水溶液的懸浮液中。將得到的混合物在相同的溫下攪拌4小時。向反應混合物中加入水(12毫升)。過濾收集沉淀的固體產物，在空氣中干燥，并進行硅膠柱色譜分離。用氯仿/甲醇(10/1)洗脫，得到144毫克(收率20％)目標化合物的黃色粉末狀產物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.00(6H，d，J＝7Hz)，2.0-2.1(1H，m)，4.03(2H，d，J＝7Hz)，5.99(4H，s)，7.45(1H，d，J＝9Hz)，7.76(1H，s)，8.23(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.49(1H，d，J＝2Hz)，9.26(1H，s)。
(2)6-氨基-8-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)嘌呤在攪拌下將4，6-氨基-5-(4-異丁氧基-3-硝基苯甲酰基)氨基吡啶(40毫克，0.115mmol)和三氯氧化磷(2毫升)的混合物加熱到120℃，加熱8小時。減壓蒸出過量的三氯氧磷。向殘余物中加入冰-水。過濾收集沉淀的固體產物，用水洗滌，并在空氣中干燥。向干燥的產物中加入甲醇(1.5毫升)，并將混合物在室溫下攪拌2小時。過濾收集由此沉淀的固體產物，在空氣中干燥，得到20毫克(收率74％)目標化合物的黃色粉末狀產物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.00(6H，d，J＝6Hz)，2.0-2.1(1H，m)，4.08(2H，d，J＝6Hz)，7.63(1H，d，J＝9Hz)，8.38(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.58(1H，5)，8.64(1H，d，J＝2Hz)。4-羥基-2-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)-1H-苯并咪唑將2，3-二氨基苯酚(1.86g，15.0mmol)懸浮在干燥的THF(150毫升)中。向此懸浮液中用不超過30分鐘的時間滴加加入4-異丁氧基-3-硝基苯甲酰氯(2.50mmol)的THF(10毫升)溶液。將得到的混合物在冰冷卻下攪拌3.5小時。將溶劑減壓蒸出。將殘余物懸浮在水(150毫升)中，并在室溫下攪拌一小時。過濾收集結晶產物，用水(20毫升x5)洗滌，并在室溫下減壓干燥。將由此獲得的粗產品用硅膠柱色譜法(甲醇/氯仿＝1/25)純化，得到250毫克(收率29％)的酰胺化合物的褐色結晶形式產物。
將由此獲得的酰胺產物(225毫克)加熱到185℃，加熱15分鐘。使加熱的產物降為室溫。將由此獲得的粗產品用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯/己烷＝1/1)純化，得到83毫克(收率39％)的目標化合物的褐色結晶形式的產物。
M.p.244-249℃(分解.)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.01(6H，d，J＝6Hz)，2.0-2.2(1H，m)，4.03(2H，d，J＝6Hz)，6.58(1H，bs)，6.9-7.1(2H，m)，7.54(1H，d，J＝9Hz)，8.42(1H，bs)，8.69(1H，bs)，9.76(1H，bs)，12.86(1H，bs)[實施例8]2-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)苯并唑-7-羧酸(1)3-氨基水楊酸甲酯將3-氨基水楊酸(690毫克，4.51mmol)、甲醇(45毫升)和濃硫酸(0.9毫升)混合，并加熱回流55小時。減壓蒸出甲醇。向殘余物中加入冷水。在冰冷卻下將殘余物水溶液通過加入飽和碳酸氫鈉水溶液加以堿化。過濾收集由此沉淀的結晶產物，用兩份水洗滌，并在40℃下真空干燥40分鐘，得到710毫克淺粉紅色結晶產物。將產物懸浮在氯仿(35毫升)中，然后過濾除去不溶物質。將濾液用硫酸鈉干燥，而后減壓濃縮，得到181毫克(收率25.9％)的目標化合物的褐色結晶形式的產物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ3.88(2H，單寬峰)，3，94(3H，s)，6.71(1H，dd，J＝8Hz，8Hz)，6.87(1H，d，J＝8Hz)，7.24(1H，m)，10.88(1H，s)。
(2)3-(4-異丁氧基-3-硝基苯甲酰氨基)水楊酸甲酯將4-異丁氧基-3-硝基苯甲酸(259毫克，1.08mmol)和3-氨基水楊酸甲酯(181毫克，1.08mmol)溶于干燥的二氯甲烷(25毫升)中。向得到的溶液中加入WSC·HCl(207毫克，1.08mmol)。然后將混合物在室溫下攪拌14小時。在室溫下將溶劑減壓蒸出。向殘余物中加入水，并將含水的殘余物用乙酸乙酯進行萃取。將乙酸乙酯部分依次用2M鹽酸、水、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌，并用硫酸鈉干燥。減壓蒸出溶劑，得到320毫克棕色油。將得到的油進行硅膠柱色譜分離。用乙酸乙酯/己烷(1/4)將油從柱上洗滌，而后用乙酸乙酯/己烷(1/2)洗脫，得到115毫克(收率27.4％)的目標化合物的白色結晶形式的產物。
M.P.142-144℃。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.08(6H，d，J＝7Hz)，2.1-2.3(1H，m)，3.95(2H，d，J＝6Hz)，3.99(3H，s)，6.96(1H，dd，J＝8Hz，8Hz)，7.16(1H，d，J＝9Hz)，7.61(1H，dd，J＝2Hz，8Hz)，8.09(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.40(1H，d，J＝2Hz)，8.51(1H，單寬峰)，8.67(1H，dd，J＝2Hz，8Hz)，11.40(1H，s)IR(KBr，cm-1)3320，1700，1645，1620，1545，1530，1435，1340，1270.
(3)2-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)苯并唑-7-羧酸甲酯將3-(4-異丁氧基-3-硝基苯甲酰氨基)水楊酸甲酯(115毫克，0.3mmol)和三氯氧磷(1.1毫升)混合，并在110℃下攪拌4小時。然后將攪拌的混合物冷卻到室溫，倒在冰塊上，用乙酸乙酯提取。將乙酸乙酯部分依次用水、飽和水溶液和飽和鹽水洗滌，并用硫酸鈉干燥。減壓蒸出溶劑，得到97毫克淺黃色結晶產物。將得到的產物用乙酸乙酯(2毫升)重結晶，得到40毫克目標化合物的白色結晶形式的產物。將母液濃縮，并將殘余物用乙酸乙酯-己烷重結晶，得到42毫克目標化合物的白色結晶形式的產物。合計82毫克(收率73％)。
M.P.128-129℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.09(6H，d，J＝7Hz)，2.1-2.3(1H，m)，3.98(2H，d，J＝6Hz)，4.07(3H，s)，7.22(1H，d，J＝9Hz)，7.44(1H，dd，J＝8Hz，8Hz)，7.95(1H，dd，J＝1Hz，8Hz)，8.01(1H，dd，J＝1Hz，8Hz)，8.45(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.75(1H，d，J＝2Hz)。
IR(KBr，cm-1)1720，1625，1520，1345，1315，1300，1285。
(4)2-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)苯并唑-7-羧酸將2-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)苯并唑-7-羧酸甲酯(22毫克，0.96mmol)懸浮在甲醇(1.8毫升)中。向懸浮液中依次加入四氫呋喃(2.4毫升)和1M NaOH(0.6毫升)，并將混合物在50℃下攪拌2小時。通過過濾除去少量不溶物，并將濾液減壓濃縮。將殘余物懸浮在水中，通過加入2M鹽酸(0.6毫升)產生酸性，并用乙酸乙酯提取。將乙酸乙酯部分依次用水和飽和鹽水洗滌，并用硫酸鈉干燥。減壓蒸出溶劑，得到21毫克淺黃色結晶產物。將由此得到的產物用乙酸乙酯-己烷(4毫升-8毫升)重結晶，得到15毫克(收率70％)的目標化合物的淺黃色結晶形式的產物。
M.P.258-260℃。
1H NMR(CDCl3)δ1.10(6H，d，J＝7Hz)，2.1-2.3(1H，m)，3.99(2H，d，J＝6Hz)，7.25(1H，d J＝9Hz)，7.48(1H，dd，J＝8Hz，8Hz)，8.01(1H，dd，J＝1Hz，8Hz)，8.07(1H，dd，J＝1Hz，8Hz)，8.47(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.78(1H，d，J＝2Hz)。2-(4-異丁氧基-3-硝基苯基)-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶將4-異丁氧基-3-硝基苯甲酸(240毫克，1.00mmol)和3，4-二氨基吡啶(153毫克，1.40mmol)溶于干燥的DMF(10毫升)中。在冰冷卻下向溶液中加入DCC(227毫克，1.10mmol)。然后將溶液在室溫下攪拌3天。加入冰-水(30毫升)，過濾沉淀出的結晶產物，并用水(3毫升X3)洗滌。將由此獲得的殘余物用硅膠柱色譜分離(甲醇/氯仿＝1/15)，得到13毫克(收率4％)的酰胺化合物的淡褐色結晶形式的產物。
隨后，將8毫克(0.024mmol)的酰胺產物加熱到190℃，加熱15分鐘，并使其降至室溫。將由此獲得的粗產品用薄層色譜法(甲醇/氯仿＝1/10)純化，得到5毫克(收率66％)的目標化合物的黃色結晶形式的產物。
1H NMR(CDCl3/CD3OD＝20/1，400MHz)δ1.09(6H，d，J＝7Hz)，2.1-2.3(1H，m)，3.97(2H，d，J＝7Hz)，7.25(1H，d，J＝9Hz)，7.64(1H，d，J＝6Hz)，8.30(1H，d，J＝6Hz)，8.44(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.66(1H，d，J＝2Hz)，8.93(1H，s)。2-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)-1，3-苯并噻唑-7-羧酸(1)3-氰基-4-異丁基苯甲酸乙酯將4-硝基苯甲酸乙酯(50.0克，256mmol)和氰化鉀(51.2克，786mmol)加入到DMSO(380毫升)中，在100℃下攪拌4小時，冷卻到室溫。蒸出DMSO，并向殘余物中加入冰-水(200毫升)。將含水的殘余物用乙酸乙酯(100毫升)洗滌。向混合物中加入濃鹽酸，使混合物的pH值為1。然后將混合物用乙酸乙酯(200毫升)提取，用飽和鹽水(50毫升)洗滌，用無水硫酸鈉干燥，然后減壓蒸出溶劑。得到51.4克3-氰基-4-羥基苯甲酸乙酯粗產品。
將異丁基溴(56.1毫升，512mmol)加入到3-氰基-4-羥基苯甲酸乙酯粗產品(51.4克)和碳酸鉀(70.8克，512mmol)于干燥的DMF(200毫升)中的懸浮液中，在100℃下攪拌10小時，冷卻到室溫。然后向冷卻的懸浮液中加入冰-水(500毫升)。將含水的混合物用乙酸乙酯(200毫升x2)提取。將乙酸乙酯部分依次用水(500毫升X2)和飽和鹽水(200毫升)洗滌，用無水硫酸鈉干燥，然后減壓蒸出溶劑。將殘余物用硅膠柱色譜法(乙酸乙酯/己烷＝1/4)分離。在加熱下將得到的結晶產物溶于乙酸乙酯(50毫升)中。保持熱的狀態，加入己烷(100毫升)。攪拌己烷溶液并冷卻到室溫，進一步在冰冷卻下攪拌10分鐘。過濾收集由此沉淀的結晶產物，依次用乙酸乙酯/己烷(1/5，60毫升)混合物和己烷(500毫升)洗滌，并于空氣中干燥，得到20.8克(收率33％)的目標化合物的淺黃色結晶形式的產物。
M.P.105.6-106.4℃。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.09(6H，d，J＝7Hz)，1.39(3H，t，J＝7Hz)，2.1-2.3(1H，m)，3.90(2H，d，J＝7Hz)，4.37(2H，q，J＝7Hz)，6.98(1H，d，J＝9Hz)，8.19(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.25(1H，d，J＝2Hz)。
(2)3-氰基-4-異丁基苯甲酸將3-氰基-4-異丁氧基苯甲酸乙酯(20.0克，80.9mmol)溶于乙醇(100毫升)和THF(100毫升)的混合物中。向得到的溶液中加入2M氫氧化鈉水溶液(45毫升，90.0mmol)，并將混合物在30℃下攪拌4小時。將溶劑減壓蒸出。向殘余物中加入水(100毫升)，并進一步加入2M鹽酸水溶液，得到pH值為1的含水的混合物。過濾收集沉淀出的結晶產物，用水(200毫升x2)洗滌，并于空氣中干燥，得到17.5克(收率99％)的目標化合物的白色結晶形式的產物。
M.P.220.4-221.6℃。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.09(6H，d，J＝6Hz)，2.1-2.3(1H，m)，3.91(2H，d，J＝6Hz)，7.00(1H，d，J＝9Hz)，8.21(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.27(1H，d，J＝2Hz)。
(3)3-氨基-2-氯苯甲酸甲酯將3-氨基-2-氯苯甲酸(500毫克，2.91mmol)、濃硫酸(6毫升)和甲醇(150毫升)的混合物加熱回流24小時，然后減壓蒸出溶劑。將殘余物通過加入飽和碳酸氫鈉水溶液加以中和。將中和的混合物用甲苯提取，用無水硫酸鎂干燥，并減壓蒸出溶劑。得到497毫克(收率92％)目標化合物的暗棕色油。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ3.91(3H，s)，4.23(2H，單寬峰)，6.89(1H，dd，J＝1Hz，8Hz)，7.10(1H，dd，J＝8Hz，8Hz)，7.16(1H，dd，J＝1Hz，8Hz)。
(4)2-氯-3-(3-氰基-4-異丁氧基苯甲酰基氨基)苯甲酸甲酯在冰冷卻下將草酰氯(889毫克，7.0mmol)滴加到3-氰基-4-異丁氧基苯甲酸(767毫克，3.5mmol)的二氯甲烷(10毫升)溶液中。隨后，加入催化量的DMF。然后將混合物在室溫下攪拌一小時，回流加熱3小時，而后減壓蒸出溶劑。向殘余物中加入甲苯，并減壓蒸出溶劑。向殘余物中加入THF(10毫升)，并進一步加入3-氨基-2-氯苯甲酸甲酯(497毫克，2.68mmol)和三乙基胺(1.39毫升，10mmol)的THF(10毫升)溶液。將得到的混合物在室溫下攪拌14小時，而后加入甲苯和1M鹽酸水溶液。分出有機部分，用1M鹽酸水溶液和飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，然后用無水硫酸鎂干燥，并在減壓下蒸餾出溶劑。將殘余物用硅膠柱色譜(乙酸乙酯/甲苯＝1/20)分離，得到900毫克(純度82％，收率71％)的目標化合物的油。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.06(6H，d，J＝6Hz)，2.1-2.4(1H，m)，3.87(2H，d，J＝6Hz)，3.95(3H，s)，6.93(1H，d，J＝9Hz)，7.1-7.3(2H，m)，7.83(1H，dd，J＝2Hz，8Hz)，7.89(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，7.98(1H，d，J＝2Hz).
(5)2-氯-3-(3-氰基-4-異丁氧基苯甲酰基氨基)苯甲酸甲酯將2-氯-3-(3-氰基-4-異丁氧基苯甲酰基氨基)苯甲酸甲酯(1.07克，純度82％，2.27mmol)和Lawesson試劑(1.23克，2.77mmol)在甲苯(20毫升)中的溶液加熱回流5小時，并在減壓下蒸餾出溶劑。將殘余物用硅膠柱色譜(乙酸乙酯/甲苯＝1/40)分離，得到670毫克(收率73％)目標化合物的油。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.09(6H，d，J＝7Hz)，2.2-2.3(1H，m)，3.92(2H，d，J＝7Hz)，3.96(3H，s)，7.01(1H，d，J＝9Hz)，7.1-7.3(1H，m)，7.43(1H，dd，J＝8Hz，8Hz)，7.78(1H，dd，J＝1Hz，8Hz)，8.10(1H，d，J＝9Hz)，8.15(1H，d，J＝1Hz)。
(6)2-(3-氰基-4-異丁氧基)-1，3-苯并噻唑-7-羧酸甲酯在冰冷卻下將2-氯-3-(3-氰基-4-異丁氧基苯甲酰基氨基)苯甲酸甲酯(670毫克，1.66mmol)的THF(5ml)溶液滴加到在THF(5毫升)中的氫化鈉(200毫克，4.98mmol)的懸浮液中。將混合物在室溫下攪拌2小時，傾倒在冰-水中，并用甲苯提取。將甲苯部分用無水硫酸鎂干燥，并減壓蒸出溶劑。將殘余的結晶產物用己烷重結晶，得到288毫克(收率47％)目標化合物的結晶產物。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.11(6H，d，J＝6Hz)，2.1-2.3(1H，m)，3.93(2H，d；J＝6Hz)，4.05(3H，s)，7.08(1H，d，J＝9Hz)，7.59(1H，dd，J＝8Hz，8Hz)，8.13(1H，dd，J＝2Hz，8Hz)，8.24(1H，dd，J＝2Hz，8Hz)，8.27(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.39(1H，d，J＝2Hz)。
(7)2-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)-1，3-苯并噻唑-7-羧酸將2-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)-1，3-苯并噻唑-羧酸甲酯(288毫克，0.786mmol)溶于甲醇/乙醇/THF(2/1/2)的混合溶劑(50毫升)中，然后在加入氫氧化鉀(281毫克，5mmol)的水(10毫升)溶液后，在室溫下攪拌一小時。通過加入1M鹽酸使混合物呈酸性，并減壓蒸出溶劑。將殘余物用氯仿提取。然后將氯仿部分用元水硫酸鎂干燥，并減壓蒸出溶劑。將殘余的結晶產物用甲苯重結晶，得到230毫克(收率83％)目標化合物的白色結晶產物。
M.p.268-270℃。
1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ1.04(6H，d，J＝7Hz)，2.0-2.2(1H，m)，4.05(2H，d，J＝7Hz)，7.44(1H，d，J＝9Hz)，7.69(1H，dd，J＝8Hz，8Hz)，8.10(1H，dd，J＝1Hz，8Hz)，8.30(1H，dd，J＝1Hz，8Hz)，8.41(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.47(1H，d，J＝2Hz)。
IR(KBr，cm-1) 2966，2875，1608，1518，1477，1471，1396，1306，1282，1240，1238，1211，1155，1009。2-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)苯并咪唑-7-羧酸(1)3-硝基鄰苯二酰胺(phthalamine)將3-硝基苯甲酸酐(9.65克，50mmol)分成三部分，并在冰冷卻下分批加入到氨水(28％)中。將混合物在60℃下攪拌12小時，并減壓蒸出溶劑。通過加入12M鹽酸水溶液使殘余物呈酸性。過濾收集由此沉淀的結晶的產物，用水洗滌，并空氣干燥，得到9.86g(收率94％)目標化合物的白色結晶形式的產物。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.65(1H，單寬峰)，7.78(1H，dd，J＝8Hz，8Hz)，8.06(1H，單寬峰)，8.18(1H，dd，J＝1Hz，8Hz)，8.24(1H，dd，J＝1Hz，8Hz)。
(2)3-硝基鄰氨基苯甲酸在冰冷卻下將溴(2.56毫升，48mmol)滴加到氫氧化鉀水溶液(24.1克，430mmol于110毫升)中。將得到的溶液加入到3-硝基鄰苯二酰胺(9.86克，47mmol)中，并將混合物在60℃下攪拌3小時，隨后在室溫下攪拌12小時。過濾收集由此沉淀出的橙色結晶產物，溶于水(50毫升)中，并通過加入6M鹽酸水溶液使之呈酸性。過濾收集由此沉淀的結晶產物，用若干份水洗滌，并空氣干燥，得到6.0克(收率70％)目標化合物的黃色結晶形式的產物。
(3)3-硝基鄰氨基苯甲酸甲酯在冰冷卻下將亞硫酰氯(14.6毫升，200mmol)滴加到甲醇(150毫升)中。向得到的溶液中加入3-硝基鄰氨基苯甲酸(3.65克，20mmol)，回流加熱23小時，而后在減壓下蒸餾出溶劑。向殘余物中加入甲苯和飽和碳酸氫鈉水溶液。分出有機部分，用無水硫酸鎂干燥，并減壓蒸出溶劑。得到2.68克(收率68)目標化合物的黃色結晶形式的產物。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ3.92(3H，s)，6.66(1H，dd，J＝8Hz，8Hz)，8.24(1H，dd，J＝2Hz，8Hz)，8.38(1H，dd，J＝2Hz，8Hz)。
(4)3-氨基鄰氨基苯甲酸甲酯向3-硝基鄰氨基苯甲酸甲酯(1.44克，7.34mmol)的甲醇(50毫升)溶液中加入10％Pd/C(300毫克)，并將得到的混合物在室溫下在氫氣氛圍下攪拌12小時。除去10％Pd/C，減壓蒸出溶劑，得到1.22(定量收率)目標化合物的褐色結晶產物。
(5)3-(3-氰基-4-異丁氧基苯甲酰基氨基)-鄰氨基苯甲酸甲酯依次向3-氰基-4-異丁氧基苯甲酸(1.53克，7.0mmol)的二氯甲烷(15毫升)溶液中加入亞硫酰氯(3.06毫升，42mmol)和催化量的DMF。將混合物在回流下加熱4小時，并減壓蒸出溶劑。在冰冷卻下向殘余物中加入THF(20毫升)。然后將殘余物溶液滴加到3-氨基-鄰氨基苯甲酸甲酯(1.22克，7.34mmol)和三乙胺(2毫升)的THF(20毫升)溶液中，并將混合物在45℃下攪拌5小時。過濾收集沉淀的結晶產物，用若干份乙酸乙酯洗滌，得到2.11克(收率82％)目標化合物的淺綠色結晶形式的產物。
1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ1.03(6H，d，J＝7Hz)，2.0-2.2(1H，m)，3.82(3H，s)，4.02(2H，d，J＝7Hz)，6.5-6.7(3H，m)，7.35(1H，dd，J＝2Hz，8Hz)，7.39(1H，d，J＝9Hz)，7.72(1H，dd，J＝2Hz，8Hz)，8.2 5(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.41(1H，d，J＝2Hz)，9.74(1H，s)。
(6)2-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)苯并咪唑-7-羧酸將3-(3-氰基-4-異丁氧基苯甲酰基氨基)鄰氨基苯甲酸甲酯(341毫克，0.93mmol)的冰醋酸(10毫升)溶液在回流下加熱2小時，冷卻，并在減壓下蒸餾出溶劑。向殘余物中加入氫氧化鈉(240毫克，10mmol)的甲醇(20毫升)溶液，并將混合物在室溫下攪拌5小時。通過加入1M鹽酸水溶液使反應混合物呈酸性，并減壓蒸出溶劑。向殘余物中加入乙酸乙酯和水。分出有機部分，用無水硫酸鎂干燥，并減壓蒸出溶劑。將殘余物用熱的甲苯洗滌，得到300毫克(收率96％)目標化合物的淺黃色結晶產物。
M.p.299-302℃。
1H NMR(DMSO-d6，400MHZ)δ1.04(6H，d，J＝7Hz)，2.0-2.2(1H，m)，4.03(2H，d，J＝7Hz)，7.32(1H，dd，J＝8Hz，8Hz)，7.42(1H，d，J＝9Hz)，7.82(1H，d，J＝8Hz)，7.91(1H，d，J＝8Hz)，8.58(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.79(1H，單寬峰)，12.46(1H，單寬峰)，13.48(1H，單寬峰)。
IR(KBr，cm-1)3319，1500，1498，1433，1302，1281，1238，1209，1147，762。2-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)-7-羥基-1，3-苯并噻唑(1)3-氰基-4-異丁氧基-N-(3-甲氧基苯基)苯甲酰胺將二氯甲烷(20毫升)加入到3-氰基-4-異丁氧基苯甲酸(2.19克，10mmol)，間甲氧基苯胺(1.85克，15mmol)，1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(WSC·HCl，3.83克，20mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(244毫克，2.0mmol)的混合物中。然后將得到的混合物在室溫下攪拌21小時。向混合物中加入1M鹽酸水溶液(30毫升)，并將得到的混合物用乙酸乙酯(40毫升)提取。將乙酸乙酯部分用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，并減壓蒸出溶劑。將殘余物用甲苯重結晶，得到2.87克(收率89％)目標化合物的結晶產物。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.09(6H，d，J＝6Hz)，2.1-2.3(1H，m)，3.83(3H，s)，3.90(2H，d，J＝6Hz)，6.72(1H，dd，J＝1Hz，8Hz)，7.03(1H，d，J＝8Hz)，7.12(1H，dd，J＝1Hz，8Hz)，7.2-7.3(1H，m)，7.40(1H，dd，J＝2Hz，2Hz)，7.92(1H，單寬峰)，8.0-8.2(1H，m)。
(2)3-氰基-4-異丁氧基-N-(3-甲氧基苯基)硫代苯甲酰胺將3-氰基-4-異丁氧基-N-(3-甲氧基-苯基)苯甲酰胺(972毫克，3.0mmol)和Lawesson試劑(808毫克，2.0mmol)的甲苯(5毫升)溶液在回流下加熱3.5小時。加入甲苯(近似20毫升)后，使加熱的溶液在室溫下過夜，使溫度遞減。過濾收集由此沉淀的結晶產物，得到900毫克(收率88％)目標化合物的黃色結晶產物。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.08(6H，d，J＝7Hz)，2.1-2.3(1H，m)，3.83(3H，s)，3.89(2H，d，J＝7Hz)，6.8-7.0(2H，m)，7.0-7.8(2H，m)，7.8-8.2(2H，m)，8.8-8.6(1H，m)。
(3)2-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并噻唑將二氧六環(70毫升)和水(70毫升)加入到3-氰基-4-異丁氧基-N-(3-甲氧基苯基)硫代苯甲酰胺(900毫克，2.64mmol)，鐵氰化鉀(2.61克，7.93mmol)和氫氧化鉀(892毫克，15.9mmol)的混合物中。將得到的混合物在室溫下攪拌20小時。然后將混合物在減壓下蒸出溶劑，并用乙酸乙酯(50毫升)提取。將乙酸乙酯部分用水洗滌，用無水硫酸鎂干燥，并減壓蒸出溶劑。將殘余物用硅膠柱色譜(乙酸乙酯/甲苯＝1/20-1/10)分離，得到322毫克(收率36％)目標化合物的淺黃色結晶形式的產物。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.10(6H，d，J＝6Hz)，2.1-2.3(1H，m)，3.92(2H，d，J＝6Hz)，4.02(3H，s)，6.85(1H，d，J＝8Hz)，7.06(1H，d，J＝9Hz)，7.45(1H，dd，J＝8Hz，8Hz)，7.68(1H，d，J＝8Hz)，8.23(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.30(1H，d，J＝2Hz)。
(4)2-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)-7-羥基-1，3-苯并噻唑將乙硫醇(0.45毫升，6.08mmol)加入到金屬鋰(14毫克，2.02mmol)中，并將混合物在室溫下攪拌一小時。然后向混合物中加入干燥的DMF(5毫升)和2-(3-氰基-4-異丁氧基苯基)-7-甲氧基-1，3-苯并噻唑(150毫克，0.44mmol)。將得到的混合物在80℃下攪拌8.5小時，冷卻到室溫，并在加入冰-水(10毫升)后，通過加入1M鹽酸水溶液使之pH值為7。然后將混合物用乙酸乙酯(20毫升)提取。將乙酸乙酯部分依次用水(10毫升)和飽和鹽水(10毫升)洗滌，用無水硫酸鈉干燥，然后減壓蒸出溶劑。將殘余物用硅膠柱色譜(乙酸乙酯/己烷＝1/3)分離，并懸浮在己烷中。過濾收集由此得到的結晶產物，用己烷洗滌，并空氣干燥，得到17毫克(收率12％)目標化合物的淺黃色結晶形式的產物。
M.p.200-202℃。
1HNMR(DNSO-d6，400MHz)δ1.04(6H，d，J＝6Hz)，2.0-2.2(1H，m)，4.03(2H，d，J＝6Hz)，6.87(1H，d，J＝8Hz)，7.36(1H，dd，J＝8Hz，8Hz)，7.42(1H，d，J＝9Hz)，7.51(1H，d，J＝8Hz)，8.33(1H，dd，J＝2Hz，9Hz)，8.38(1H，d，J＝2Hz)。
IR(KBr，cm-1)3319，2960，2873，2231，1579，1470，1392，1281，1022，787。藥理學實驗1(體外試驗)1.試樣的制備將試驗化合物溶于二甲亞砜中，用50mM磷酸鹽緩沖液(pH7.5)稀釋，得到預先確定濃度的溶液。
2.測定將250微升各自具有不同濃度的試驗化合物的溶液加入到1毫升黃嘌呤(SIGMA，300μM)的50mM磷緩沖液(pH7.5)溶液中。然后將混合物在37℃下預孵化10分鐘。隨后，向預孵化的混合物中加入250毫升用50mM磷酸鹽緩沖液(pH7.5)稀釋的牛乳黃嘌呤氧化酶(Roche)中，得到30mU濃度的溶液。然后將混合物在37℃下保持15分鐘來完成反應。通過加入1N鹽酸終止反應。隨后，借助于分光光度計(HITACHI U-2000)測定吸光度(OD 290mm)，得到抑制比率。
根據下面的公式計算抑制比率抑制比率(％)＝[1-(B-C)/(A-C)]×100A對照物的吸光度B在用試驗化合物的情況下測定的吸光度C空白的吸光度3.試驗結果試驗結果列于表20中。
表20
由表20可明顯地看出，本發明的化合物顯示了優于別嘌呤醇的黃嘌呤氧化酶抑制作用。藥理學實驗2(體內試驗)1.試驗動物和分組使用ICR小鼠(Japan Charles River Co.，Ltd.，6W)作為試驗動物。一組包括5只小鼠，且對于每個實驗設置一個賦形劑對照組。
2.試驗化合物的制劑和給藥將試驗化合物懸浮在0.5％甲基纖維素水溶液中用于給藥。
對于每個對照組和全部測試組，劑量為3毫克/10毫升/千克。通過單一口服的方式給藥。
3.實驗程序將試驗化合物口服給藥一次，一小時后在肝素的存在下從大動脈收集全血。以常規的方式由收集的全血中分離出血漿，通過酶法借助于自動分析儀器(HITACHI 7060E)對血漿進行尿酸值測定。
根據下面的公式計算抑制比率抑制比率(％)＝(100-A/B)×100
A在給予了試驗化合物的小組中的血漿中的平均尿酸值。
B在賦形劑對照組中的血漿中的平均尿酸值。
4.試驗結果試驗結果見表21。
表21
由表21可明顯地看出，本發明的化合物甚至在體內實驗中都顯示了顯著的黃嘌呤氧化酶抑制作用。
權利要求
1.下式(I)的化合物或其可藥用鹽 其中R1代表OR4，其中R4是具有6-10個碳原子的芳基，該芳基可以具有選自鹵原子、羥基、硝基和氰基的取代基；R2是硝基或氰基；R3是羥基；X是硫；和Y和Z均為氮。
2.根據權利要求1的化合物或其鹽，其中R4是苯基。
3.含有根據權利要求1或2的化合物或其可藥用鹽作為活性組分的黃嘌呤氧化酶抑制劑。
4.含有根據權利要求1或2的化合物或其可藥用鹽作為活性組分的治療高尿酸血癥的藥物。
全文摘要
本發明涉及下式(I)的化合物或它們的鹽，其中R
文檔編號C07D471/04GK101092400SQ20071013695
公開日2007年12月26日 申請日期2002年11月14日 優先權日2001年11月16日
發明者吉田慎一, 天童溫, 小林邦夫, 望月信孝, 山川富雄, 筱原従子 申請人:日本化學醫藥株式會社