用cd4抗體治療狼瘡的方法

專利名稱：用cd4抗體治療狼瘡的方法
技術領域：
本發明涉及單獨地或與其他化合物組合使用非消耗性 (non-depleting) CD4抗體來治療哺乳動物對象的狼瘡和其他自身免疫性病癥的 方法。
背景技術：
自身免疫性疾病，如系統性紅斑狼瘡(SLE)、重癥肌無力、多發性 硬化癥和特發性血小板減少性紫癜等仍舊是人類的重要臨床疾病。顧名思義， 自身免疫性疾病通過身體自身的免疫系統造成其巨大破壞。盡管各種類型的自 身免疫性疾病的病理學機制不同，但一個共有機制涉及患者血清中存在的某些 抗體(文中稱為自身反應性抗體或自身抗體)與自身核抗原或細胞抗原的結合。狼瘡是一種涉及攻擊結締組織的抗體的自身免疫性疾病。預計有 IOO萬美國人患有這種疾病，其中主要是20-40歲的女性。狼瘡的主要形式是 系統性狼瘡(系統性紅斑狼瘡；SLE)。 SLE與抗核抗體、循環免疫復合物的產 生以及補體系統的活化有關。每700名20-60歲之間女性約有1人發生SLE。 SLE能影響所有器官系統并能造成嚴重的組織損傷。SLE中存在許多不同特異 性的自身抗體。SLE患者產生的自身抗體通常具有抗-DNA、抗-Ro和抗-血小板特異性并能夠引起該病的臨床特征，如腎小球腎炎、關節炎、漿膜炎、新生 兒完全性心臟傳導阻滯和血液學異常。這些自身抗體還可能涉及中樞神經系統
紊亂。Arbuckle等描述了 SLE臨床發作之前自身抗體的產生(Arbuckle等，(2003) N. Engl. J. Med. 349(16): 1526-1533)。存在與雙鏈天然DNA具有免疫反應性 的抗體通常用作SLE的診斷標記。狼瘡不治療可能是致命的，因為它會從攻擊皮膚和關節發展到內部 器官，其中包括肺、心臟和腎臟(主要涉及腎病)。狼瘡主要表現為一系列突然 發作，具有疾病表現較輕或沒有的間隔期。通過尿中蛋白尿的量測定的腎損傷 是SLE中病原性相關損傷的最嚴重區域之一，占該病死亡率和發病率的至少 50%。目前還沒有治療已診斷患有SLE的患者的方法。實際上，醫生通 常采用許多強效的免疫抑制藥物如高劑量皮質激素類，例如，潑尼松或硝基咪 唑硫嘌呤或環磷酰胺，這些藥物在突然發作期間給予，但也可以長期給予經歷 頻繁突然發作的患者。即便有效治療減輕了癥狀并延長了生命，但許多這些藥 物對被治療的患者具有潛在的嚴重副作用。此外，這些免疫抑制藥會干擾個體 產生所有抗體而并非僅自身反應性抗-DNA抗體的能力。免疫抑制藥還能減弱 身體防御其他潛在病原體的能力，從而使患者對感染和其他潛在致命疾病如癌 癥及其易感。 一些此類情況中，目前治療方法的副作用以及疾病的持續低水平 發作會造成嚴重損害和早產兒死亡。最近的治療方案包括環磷酰胺、氨甲喋呤、抗瘧藥、激素治療(例 如，DHEA)和抗-激素療法(例如，抗-促乳素藥溴隱亭)。還描述了涉及抗體的 治療SLE的方法。例如，Diamond等的方法(美國專利號4690905)包括產生針 對抗-DNA抗體的單克隆抗體(該單克隆抗體在其中被稱為抗-獨特型抗體)然后 使用這些抗-獨特型抗體來除去患者系統中的病原性抗-DNA抗體。然而，在治 療時除去大量血液是一種危險而復雜的過程。美國專利號6726卯9披露了治療 SLE的方法，其中將包含純化的抗-DNA抗-獨特型抗體的抗體組合物給予患 者，該給藥要求注射或其他等效的給藥模式進行。高劑量靜脈內免疫球蛋白免疫球蛋白(IVIG)輸注也被用于治療某 些自身免疫性疾病。迄今，用IVIG治療SLE提供了混合效果，其中包括既治療狼瘡腎炎(Akashi等，J. Rheumatology 17: 375-379 (19卯))，而在少數情況中 又會惡化蛋白尿和腎損傷(Jordan等，Clin. Immunol. Immunopathol. 53: S164-169 (1989))。狼瘡患者，如顯示狼瘡腎炎臨床證據的SLE患者和狼瘡腎炎患者 需要經濟且安全的治療方法，該方法將有助于緩解那些最終導致腎衰竭的組織 損傷以及對這些癥狀造成的慢性血液透析和/或腎移植的需求。類似地，其他自 身免疫性疾病，如多發性硬化癥(MS)、類風濕性關節炎、重癥肌無力、銀屑病、 青少年型糖尿病、斯耶格倫病、甲狀腺疾病和炎性腸病患者也需要有效而安全 的治療方法。
發明概述 —類常規實施方式提供了治療哺乳動物對象，如人類對象的狼瘡的 方法。在所述方法中，將治療有效量的非消耗性CD4抗體和至少一種第二化 合物的組合給予所述對象，所述第二化合物選自下組例如環磷酰胺、霉酚酸 酯、CTLA4-Ig和a4-整聯蛋白抗體等。某些實施方式中，所述對象是人。某些 實施方式中，所述第二化合物是環磷酰胺。在一類實施方式中，所述非消耗性CD4抗體具有SEQIDNO:3所 示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 6所示重鏈氨基酸序列、SEQ ID NO: 9所示 輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 12所示重鏈氨基酸序列、SEQ ID NO: 15所示 輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 18所示重鏈氨基酸序列、或SEQ ID NO: 21所 示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 24所示重鏈氨基酸序列。在一類實施方式中，所述非消耗性CD4抗體包含含有以下序列的 抗體的CD4結合片段SEQ ID NO: 3所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 6所 示重鏈氨基酸序列、SEQ ID NO: 9所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 12所示 重鏈氨基酸序列、SEQ ID NO: 15所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 18所示 重鏈氨基酸序列、或SEQ ID NO: 21所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 24所 示重鏈氨基酸序列。在一類實施方式中，所述非消耗性CD4抗體包含圖IA所示輕鏈的 CDR1 (SEQ ID NO: 25)、CDR2 (SEQ ID NO: 26)或優選CDR3 (SEQ ID NO: 27);例如，該抗體可包含

圖1A所示輕鏈的CDR1、 CDR2和CDR3(即，SEQIDNO: 25、 SEQIDNO:26和SEQIDNO:27)。類似地，在一類實施方式中，所述抗 體包含圖1D所示重鏈的CDR1 (SEQ ID NO: 28)、 CDR2 (SEQ ID NO: 29)或優 選CDR3 (SEQ ID NO: 30);例如，該抗體可包含圖ID所示重鏈的CDR1、CDR2 和CDR3(即，SEQ ID NO: 28、 SEQ ID NO: 29和SEQ ID NO: 30)。一實施方式 中，所述抗體包含圖1A所示輕鏈的CDR1、 CDR2和CDR3以及圖ID所示重 鏈的CDR1、 CDR2和CDR3(即，SEQ ID NO: 25-30)。其他示例性抗體包括， 但不限于，與圖l-4中任一所示抗體相同的表位結合的抗體。所述非消耗性CD4抗體可以是人源化抗體，例如，其中要治療的 對象是人。所述抗體可具有非糖基化的(aglycosylated)Fc部分。任選地，所述 抗體不結合Fc受體。某些實施方式中，所述抗體是結合FcRN受體的抗-CD4 變體抗體。該抗體任選在Fc區氨基酸位置270、 322、 326、 327、 329、 313、 333和/或334中的一個或多個位置上包含氨基酸取代，該取代改變了抗體的 Clq結合和/或依賴于補體的細胞毒性(例如，就不包含這種取代的親代抗體而 言)。某些實施方式中，所述抗體包含補救受體結合表位或血清白蛋白結合肽。 任選地，所述抗體包含三個或多個抗原結合位點。要治療對象的狼瘡通常是系統性紅斑狼瘡(SLE)、皮膚紅斑狼瘡 (CLE)或狼瘡腎炎。要治療的狼瘡在治療開始時可以是早期、中期或晚期疾病。 在治療狼瘡腎炎的實施方式中，所述狼瘡腎炎可以是I-VI級中的任何一種。例 如，要治療的狼瘡可以是II級狼瘡腎炎、III級狼瘡腎炎、IV級狼瘡腎炎或V 級狼瘡腎炎。 一實施方式中，用所述組合開始治療后，與治療開始前對象顯示 的蛋白尿和/或活動性尿沉淀水平相比，所述對象顯示出蛋白尿減輕和/或活動 性尿沉淀減輕。例如，蛋白尿可降低至少25%、至少50%、至少75%或至少 卯％，或蛋白尿可降至低于1 g/天或低于500 mg/天，和/或活動性尿沉淀可降 低至少25%、至少50%、至少75%或至少90%,或者在治療開始后僅有活動 性尿沉淀。 —實施方式中，用所述組合開始治療前，所述對象顯示出蛋白尿， 通過治療改善了這種蛋白尿。例如，治療開始前，所述對象顯示出的蛋白尿高 于500 mg/天、高于1000mg/天、高于2000 mg/天或高于3500 mg/天。治療開始后，蛋白尿可降低至少25%、至少50%、至少75%或至少90%，或蛋白尿 可降至低于l g/天或低于500 mg/天。另一個例子是，治療開始前，所述對象 顯示出的蛋白質與肌酸酐之比高于0.5、高于1或高于2;治療開始后，對象尿 液中的蛋白質與肌酸酐之比可降低至少25%或至少50%，或者該比例可降至低 于1或低于0.5。 —方面，該方法包括用所述非消耗性CD4抗體和所述第二化合物 治療對象以減輕癥狀，然后用所述非消耗性CD4抗體或用所述第二化合物(彼 此不組合)繼續治療該對象以持續緩解癥狀。例如，在一類實施方式中，用所 述組合開始治療后，狼瘡得到改善；然后停止用該組合治療所述對象，而是給 予該對象治療有效量的非消耗性CD4抗體。在另一類示例性實施方式中，用 所述組合開始治療后，狼瘡得到改善；然后停止用該組合治療所述對象，而是 給予該對象治療有效量的第二化合物或者一種或多種其他化合物。另一類常規實施方式還提供了治療哺乳動物對象如人的狼瘡腎炎 的方法。在該方法中，將治療有效量的非消耗性CD4抗體給予所述對象。用 所述非消耗性抗體開始治療后，與治療開始前對象顯示的蛋白尿和/或活動性尿 沉淀水平相比，所述對象顯示腎功能改善、蛋白尿減輕和/或活動性尿沉淀減輕。 例如，蛋白尿可降低至少25%、至少50%、至少75%或至少90%，或者蛋白 尿可降至低于l g/天或低于500 mg/天；蛋白質與肌酸酑之比可降低至少25% 或至少50%，或者該比例可降至低于1或低于0.5;和/或活動性尿沉淀可降低 至少25%、至少50%、至少75%或至少90%，或者在治療開始后僅有活動性 尿沉淀。所述狼瘡腎炎可以是I-VI級中的任何一種。例如，要治療的狼瘡
可以是n級狼瘡腎炎、ni級狼瘡腎炎、iv級狼瘡腎炎或v級狼瘡腎炎。 —實施方式中，治療開始前，所述對象顯示出蛋白尿高于500 mg/ 天、高于1000mg/天、高于2000 mg/天或高于3500 mg/天。 一實施方式中，用 所述抗體開始治療后蛋白尿降低了例如至少25%、至少50%、至少75%或至少 90%，或降至低于lg/天或低于500 mg/天。 一實施方式中，用所述抗體開始治 療后蛋白質與肌酸酐之比降低了例如至少25%或至少50%，或降至低于1或低 于0.5。
所述非消耗性CD4抗體可選自下組a)包含SEQ ID NO: 3所示輕 鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 6所示重鏈氨基酸序列的抗體；b)包含SEQ ID NO: 9所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 12所示重鏈氨基酸序列的抗體；c)' 包含SEQ ID NO: 15所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 18所示重鏈氨基酸序 列的抗體；d)包含SEQ ID NO: 21所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 24所示 重鏈氨基酸序列的抗體；e)包含a)、 b)、 c)或d)的抗體的CD4結合片段的抗 體；f)包含圖1A所示輕鏈的CDR3(SEQIDN0:27)的抗體；g)包含圖ID所 示重鏈的CDR3 (SEQ ID NO: 30)的抗體；h)包含圖IA所示輕鏈的CDRI、 CDR2和CDR3 (SEQ ID NO: 25-27)的抗體；i)包含圖ID所示重鏈的CDRl 、 CDR2和CDR3(SEQIDNO:28-30)的抗體；和j)包含圖1A所示輕鏈的CDR1、 CDR2和CDR3和圖ID所示重鏈的CDRl 、CDR2和CDR3 (SEQ ID NO: 25-30) 的抗體。類似地，所述抗體可以是與圖l-4中任一所示抗體的相同表位結合的 CD4抗體。對于有關的，例如非消耗性抗體和至少一種第二化合物的任選組 合、抗體類型和/或等等而言，上述方法的基本上所有特征也適用于這些實施方 式。例如，在本發明的一個實施方式中，所述非消耗性CD4抗體任選為人源 化抗體，具有非糖基化的Fc部分，不結合Fc受體，包含改變Clq結合和/或 依賴于補體的細胞毒性的氨基酸取代，包含補救受體結合表位，包含血清白蛋 白結合肽，和/或具有三個或多個抗原結合位點。某些實施方式中，所述抗體是 能夠結合FcRN受體的抗-CD4變體抗體。 —類常規實施方式提供了治療哺乳動物對象如人類對象的多發性 硬化癥的方法。在該方法中，將治療有效量的非消耗性CD4抗體和/或至少一 種第二化合物給予所述對象。例如，合適的第二化合物包括，但不限于，例如， 細胞毒劑；免疫抑制劑(例如，環磷酰胺)；B細胞表面標記拮抗劑；B細胞表 面標記的抗體；CD20抗體(例如，利妥昔單抗(Rituximab)); CD5、 CD28或CD40 抗體或阻斷劑；皮質激素(例如，潑尼松)、CTLA4-Ig、 a4-整聯蛋白抗體如那他 珠單抗(natalizumab)(Tysabi^)，霉酚酸酯，他汀，LFA-1或CD-lla抗體或阻斷 齊IJ，白介素-12抗體，卩干擾素(例如，干擾素(3-la如AVonex 或Rebif<^或干 擾素卩-lb如Betaseron ),醋酸格拉默(glatiramer acetate)(C(3paxone )， CD52抗體如阿侖單抗(alemtuzuman)(CamPath )，白介素受體抗體如達珠單抗 (daclizumab)(Zenapax ，白介素-2受體a亞基的抗體)，等等。相關類型的實施方式提供了治療哺乳動物對象(例如，人類對象)某 病癥的方法。所述病癥可以是類風濕性關節炎、哮喘、銀屑病、移植排斥、移 植物抗宿主病、多發性硬化、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、斯耶格倫綜合征或其 他自身免疫性病癥或疾病。在該方法中，將治療有效量的非消耗性CD4抗體 和至少一種第二化合物的組合給予該對象。在一類實施方式中，所述第二化合 物是環磷酰胺、霉酚酸酯或CTLA4-Ig。對于有關的，例如抗體類型、第二化合物的類型和/或等等而言， 上述方法的基本上所有特征也適用于這些實施方式。例如，所述非消耗性CD4 抗體可選自下組a)包含SEQ ID NO: 3所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 6 所示重鏈氨基酸序列的抗體；b)包含SEQ ID NO: 9所示輕鏈氨基酸序列和 SEQ ID NO: 12所示重鏈氨基酸序列的抗體；c)包含SEQ ID NO: 15所示輕鏈 氨基酸序列和SEQIDNO: 18所示重鏈氨基酸序列的抗體;d)包含SEQIDNO: 21所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 24所示重鏈氨基酸序列的抗體；e)包 含a)、 b)、 c)或d)的抗體的CD4結合片段的抗體；f)包含圖1A所示輕鏈的 CDR3 (SEQ ID NO: 27)的抗體；g)包含圖ID所示重鏈的CDR3 (SEQ ID NO: 30)的抗體；h)包含圖lA所示輕鏈的CDRl、CDR2和CDR3(SEQIDNO:25-27) 的抗體；i)包含圖ID所示重鏈的CDR1、 CDR2和CDR3 (SEQ ID NO: 28-30) 的抗體；和j)包含圖1A所示輕鏈的CDR1、 CDR2和CDR3和圖ID所示重 鏈的CDR1、 CDR2和CDR3 (SEQ ID NO: 25-30)的抗體。類似地，所述抗體可 以是與圖1-4中任一所示抗體的相同表位結合的CD4抗體。
附圖簡述圖1A-1F顯示了 TRX1非消耗性CD4抗體一個實施方式的重鏈和 輕鏈的核苷酸和氨基酸序列。圖IA顯示了輕鏈的核苷酸(SEQ ID NO: l)和氨 基酸(SEQIDNO:2)序列，以及CDR和構架區。圖IB顯示了輕鏈的核苷酸序 列(SEQ ID NO: 1)。圖1C顯示了有(SEQ ID NO: 2)和沒有(SEQ ID NO: 3)前導 序列的輕鏈的氨基酸序列。圖ID顯示了重鏈的核苷酸(SEQ ID NO: 4)和氨基酸(SEQIDNO:5)序列，以及CDR和構架區。圖IE顯示了重鏈的核苷酸序列 (SEQ ID NO: 4)。圖IF顯示了有(SEQ ID NO: 5)和沒有(SEQ ID NO: 6)前導序 列的重鏈的氨基酸序列。圖2A-2F顯示了 TRX1非消耗性CD4抗體一個實施方式的重鏈和 輕鏈的核苷酸和氨基酸序列。圖2A顯示了輕鏈的核苷酸(SEQIDNO:7)和氨 基酸(SEQ ID NO: 8)序列，以及CDR和構架區。圖2B顯示了輕鏈的核苷酸 序列(SEQ ID NO: 7)。圖2C顯示了有(SEQ ID NO: 8)和沒有(SEQ ID NO: 9)前 導序列的輕鏈的氨基酸序列。圖2D顯示了重鏈的核苷酸(SEQ ID NO: IO)和 氨基酸(SEQIDNO: ll)序列，以及CDR和構架區。圖2E顯示了重鏈的核苷 酸序列(SEQIDNO: 10)。圖2F顯示了有(SEQ ID NO: ll)和沒有(SEQ ID NO: 12) 前導序列的重鏈的氨基酸序列。圖3A-3F顯示了 TRX1非消耗性CD4抗體一個實施方式的重鏈和 輕鏈的核苷酸和氨基酸序列。圖3A顯示了輕鏈的核苷酸(SEQIDNO: 13)和 氨基酸(SEQIDNO: 14)序列，以及CDR和構架區。圖3B顯示了輕鏈的核苷 酸序列(SEQ ID NO: 13)。圖3C顯示了有(SEQ ID NO: 14)和沒有(SEQ ID NO: 15)前導序列的輕鏈的氨基酸序列。圖3D顯示了重鏈的核苷酸(SEQIDNO: 16) 和氨基酸(SEQIDNO: 17)序列，以及CDR和構架區。圖3E顯示了重鏈的核 苷酸序列(SEQIDNO: 16)。圖3F顯示了有(SEQ ID NO: 17)和沒有(SEQ ID NO: 18)前導序列的重鏈的氨基酸序列。圖4A-4F顯示了 TRX1非消耗性CD4抗體一個實施方式的重鏈和 輕鏈的核苷酸和氨基酸序列。圖4A顯示了輕鏈的核苷酸(SEQIDNO: 19)和 氨基酸(SEQIDNO:20)序列，以及CDR和構架區。圖4B顯示了輕鏈的核苷 酸序列(SEQ ID NO: 19)。圖4C顯示了有(SEQ ID NO: 20)和沒有(SEQ ID NO: 21)前導序列的輕鏈的氨基酸序列。圖4D顯示了重鏈的核苷酸(SEQIDNO: 22) 和氨基酸(SEQIDNO:23)序列，以及CDR和構架區。圖4E顯示了重鏈的核 苷酸序列(SEQ ID NO: 22)。圖4F顯示了有(SEQ ID NO: 23)和沒有(SEQ ID NO: 24)前導序列的重鏈的氨基酸序列。圖5為SLE的NZBxW Fl臨床前功效模型中疾病進展隨年齡變化 的示意圖。
圖6A-6F示意了對給予非消耗性CD4抗體的反應。圖6A為時間 對進展(蛋白尿為300 mg/dl或死亡)的圖示，圖6B為存活百分數與治療開始后 時間的函數，圖6C為治療5個月時的蛋白尿，圖6D為平均血尿素氮與治療 開始后時間的函數，在動物8個月大時開始治療。圖6E顯示了時間對進展(蛋 白尿為300mg/dl)的關系，圖6F顯示了存活百分數與治療開始后時間的函數， 在動物6個月大時開始治療。圖7A-7B為用非消耗性CD4抗體治療能逆轉嚴重性狼瘡腎炎的圖 示。圖7A顯示了在治療后標示時間時蛋白尿〈300mg/dl的小鼠的百分比。圖 7B顯示了在治療第一個月內從蛋白尿SOO mg/dl中逆轉的小鼠的百分比。圖8A-8D為對給予非消耗性CD4抗體的反應的圖示。圖8A顯示 了募集時的ds-DNA抗體滴度，而圖8B顯示了治療3個月后的滴度。圖8C顯 示了治療3周后在脾臟中發現的CD4+CD69+細胞的數目。圖8D顯示了治療3 周后在脾臟中發現的CD4+CD25+細胞的數目。圖9A-9B顯示了治療6個月時蛋白尿的多重比較分析，圖9A采用 環磷酰胺(Cytoxar^)治療組作為對照組，圖9B采用CD4非消耗性抗體治療組 作為對照組。圖10為通過給作為MS臨床前功效模型的SJL/J小鼠注射PLP肽 而誘導的EAE疾病進展隨時間復發和消退的示意圖。圖11A-11B為對給予非消耗性CD4抗體的反應的圖示。圖11A為 對照抗體、醋酸格拉默(Copaxon^)、 a-4整聯蛋白抗體、CTLA4-Ig和非消耗 性CD4抗體治療組的臨床評分隨時間變化的圖示。圖IIB顯示了這些組的平 均每日臨床評分。圖12A-12B為對給予非消耗性CD4抗體的反應的圖示。圖12A為 對照抗體、CTLA4-Ig和非消耗性CD4抗體治療組的臨床評分隨時間變化的圖 示。圖12B顯示了這些組的平均每日臨床評分。圖13A-13B為對給予非消耗性CD4抗體的反應的圖示。圖13A為 對照抗體、CTLA4-Ig和非消耗性CD4抗體治療組的臨床評分隨時間變化的圖 示。圖13B顯示了這些組的平均每日臨床評分。圖14展示了對照抗體或CD4抗體治療的小鼠的脊髓切片，顯示非消耗性CD4抗體治療降低了 EAE的脫髓鞘。圖15顯示了用對照抗體、非消耗性CD4抗體或CTLA4-Ig治療的 動物每微升血液中IC0ShiCD4或IC0ShiCD8 T細胞的數目。圖16比較了用非消耗性CD4抗體、消耗性(depleting)CD4抗體、 對照抗體、CTLA4-Ig或消耗性CD8抗體治療髓磷脂少突膠質細胞糖蛋白 (MOG)-肽誘導EAE的臨床評分隨時間變化情況。圖17A-17B為對給予非消耗性CD4抗體的反應的圖示。圖17A顯 示了在治療后標示時刻蛋白尿<300 mg/dl的小鼠的百分比。圖17B顯示了從 蛋白尿2300 mg/dl中逆轉的小鼠的百分比。圖18A-18D為對治療的反應的圖示。圖18A為時間和疾病進展(蛋 白尿300 mg/dl或死亡)的關系，圖18B為用非消耗性CD4抗體和50 mg/kg/天 MMF的組合治療的動物的存活百分數與治療開始后時間的函數，用非消耗性 CD4抗體和25 mg/kg/天MMF的組合治療的動物的時間與疾病進展以及存活 百分數的關系分別示于圖18C和圖18D。圖19A-19B顯示了治療2個月時蛋白尿的多重比較分析，采用對 照抗體治療組作為對照組。用每天50 mg/kg MMF(單獨或與非消耗性CD4抗 體組合)治療的組的結果示于圖19A，而用每天25 mg/kg MMF治療的組的結果 示于圖19B。圖20A-20I為對治療的反應的圖示。圖中顯示了用對照抗體、非消 耗性CD4抗體、標示劑量的MMF、或非消耗性CD4抗體和標示劑量的MMF 的組合治療的動物的每微升血液中CD4+ T細胞的數目(圖20A)，每微升血液 中B2B細胞的數目(圖20B)，每個脾中CD4+T細胞的數目(圖20C)，每個脾 中B2 B細胞的數目(圖20D), IgM+漿細胞的數目(圖20E)，同種型-轉換漿細 胞的數目(圖20F)，生發中心細胞的數目(圖20G)，每個脾中漿細胞樣樹突細胞 的數目(圖20H)，以及漿細胞樣樹突細胞的MHC II表達水平(圖201)。圖21A-21B顯示了人CD4的核酸和氨基酸序列。圖21A顯示了前 導序列被切除的成熟蛋白質的人CD4氨基酸序列。圖21B顯示了成熟的人CD4 DNA序列。定義除非另有說明，這里使用的技術和科學術語和本發明所屬技術領域 一般技術人員的通常理解有著相同的含義。以下定義對本領域的理解進行了補 充，涉及本申請但不歸于任何相關或無關的情況，例如任何共有的專利或申請。 與文中的那些描述類似或等價的任何方法及材料都可用于實踐測試本發明，文 中描述了非限制性的材料和方法。因此，文中采用的術語僅為了描述特定實施 方式而非限制性的。在本說明書和附加權利要求書中，單數形式"一個"包括復數指代， 文中另有明確說明除外。因此，例如，當提及"一個蛋白質"時包括多個蛋白質； 提及"一個細胞"時包括多個細胞，依此類推。"狼瘡"在文中指涉及攻擊結締組織的抗體的自身免疫性疾病或病 癥。狼瘡的主要形式是系統性狼瘡(SLE)，該病也可累及皮膚。"狼瘡"在文中 包括SLE以及其他類型的狼瘡(包括，例如，皮膚紅斑狼瘡(CLE)、狼瘡腎炎 (LN)、腎外狼瘡、腦炎狼瘡、兒科狼瘡、非腎狼瘡、盤狀狼瘡和脫發性狼瘡)。"對象"在文中通常指人，但也可以是非人哺乳動物。示例性的非人 哺乳動物包括實驗室動物、家養動物、寵物、競技動物和家畜，如小鼠、貓、 狗、馬和牛。通常，能夠對所述對象進行治療，例如治療自身免疫性病癥、組 織移植相關的治療，等等。 一方面，能夠對這種對象進行狼瘡治療。出于本文 的目的，這種符合條件的對象正經歷或曾經歷過一種或多種狼瘡病征、癥狀或 其他標志或者已經被診斷出狼瘡(例如，可以是新診斷出的，或是之前診斷出 又新發作是，或是慢性類固醇依賴性又新發作的，或是有患狼瘡風險)。符合 狼瘡治療條件的對象可通過腎活檢篩選和/或通過檢測例如下述那些自身抗體 的試驗篩選來鑒定，其中，自身抗體的產生被定性，優選定量評估。示例性的 SLE相關自身抗體是抗-核抗體(Ab)、抗-雙鏈DNA(dsDNA)Ab、抗-SmAb、抗 -核核糖核蛋白Ab、抗-磷脂Ab、抗-核糖體PAb、抗-Ro/SS-AAb、抗-Ro Ab 和抗-LaAb。狼瘡的診斷(以及確定治療的適格性)可按照本領域已知方法進行。 例如，可按照美國風濕病學協會(ACR)的標準來診斷SLE。可由不列顛群島狼 瘡活動組織(BILAG， British Isles Lupus Activity Group)的一個"A"標準或兩個BILAG "B"標準來定義活動性疾病，例如，如Brunetta的題為"Method for treating lupus(狼瘡治療方法)"的美國專利申請公開號2006/0024295所采用的標 準。Tan等，(1982) "The 1982 Revised Criteria for the Classification of SLE(1982 年修訂的SLE分類標準)"Arth Rheum 25: 1271-1277采用的用來診斷SLE的
一些病征、癥狀或其他標志可以是面頰疹如臉頰上的疹、盤狀疹、或凸起的 紅疹，光敏感性如對日光的反應(導致皮疹產生或惡化)，口腔潰瘍如鼻或嘴中 的通常不痛的潰瘍，關節炎如涉及兩個或多個末稍關節的非糜爛性關節炎(關 節周圍的骨骼未被破壞的關節炎)，槳膜炎，胸膜炎或心包炎，腎病如尿中有
過多蛋白質(蛋白尿，測試棉簽顯示高于0.5 g (克)/天或3+)和/或細胞管形 (cellular cast)(衍生自尿和/或白細胞和/或腎小管細胞的異常元件)，神經病學病 征、癥狀或其他標志，癲癇發作(抽搐)，和/或不存在藥物時的精神病或已知能 造成這種影響的代謝紊亂，和血液學病征、癥狀或其他標志如溶血性貧血或白 細胞減少(每立方毫米的白血球計數低于4000個細胞)或淋巴細胞減少(每立方 毫米的淋巴細胞低于1500)或血小板減少(每立方毫米的血小板低于100000)。 在兩種或多種情況下一定會檢測到白細胞減少和淋巴細胞減少。在不存在已知 的誘導藥物時一定會檢測到血小板減少。本發明不限于狼瘡的這些病征、癥狀 或其他標志。腎炎性狼瘡發作可定義為1)l個月內Scr增幅30。/。，或2)腎病 綜合征復發或出現，或3)尿蛋白質增加3倍，即基線蛋白尿Mg/24小時或如 美國專利申請公開號2006/0024295所述。對于狼瘡腎炎，可通過按照美國專利 申請公開號2006/0024295所述的腎標準定義的腎炎發作來證實治療適格性。狼瘡腎炎可任選被診斷和分類為ISN/WHOI級、II級、III級、IV 級、V級或VI級狼瘡腎炎，例如，如Weening等(2004)在"The classification of glomerulonephritis in systemic lupus erythematosus revisited(對系統性紅斑狼搭 復發時腎小球腎炎的分類)"Kidney International 65: 521-530中的描述。對象的"治療"在文中指治療性治療以及預防性手段。需要治療的對 象包括已患狼瘡(或其他癥狀或自身免疫性病癥如MS,類風濕性關節炎，或炎 性腸病)的對象以及需要預防狼瘡(或其他病癥)的對象。因此，對象可以已經被 診斷患有狼瘡(或其他病癥)或者傾向于或易于患狼瘡(或其他病癥)。
術語"緩解"在文中指減輕、減少或消除某狀況、疾病、病癥或表型， 包括異常或癥狀。疾病或病癥(例如，狼瘡)的"癥狀"指對象所經歷的并指示疾病的任 何病態現象或者結構、功能或感覺偏離正常。表述"治療有效量"指有效預防、緩解或治療疾病或病癥(例如，狼 瘡，MS，類風濕性關節炎，或炎性腸病)的量。例如，抗體的"治療有效量"指 能有效預防、緩解或治療特定疾病或病癥的抗體量。類似地，抗體和第二化合 物的組合的"治療有效量"指當組合時能有效預防、緩解或治療特定疾病或病癥 的抗體量和第二化合物量。應理解，兩種化合物的"組合"并不是指這兩種化合物要彼此混合地 給予。因此，利用或采用這種組合治療包括給予各化合物的混合物或單獨給予 各化合物，包括在同一天或不同天給予。因此，術語"組合"是指單獨或彼此混 合地用兩種或多種化合物來治療。例如當將抗體和第二化合物組合給予對象 時，對象體內存在抗體之時第二化合物也可存在于對象中，無論所述抗體和第 二化合物是單獨或混合給予該對象。 CD4抗原或"CD4"是一種在T淋巴細胞以及某些其他細胞表面表達 的糖蛋白。CD4在文獻中的其他名稱包括分化蔟4和L3T4。 CD4描述于，例 如，萬維網www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim上人類數據庫(Man database)的在線孟 德爾遺傳(Online Mendelian Inheritance)中的186940條目。 "CD4抗體"是以足夠的親和力和特異性結合CD4的抗體。例如， 任選地，該抗體結合CD4的親和力和特異性與TRX1抗體對CD4的結合親和 力和特異性相當或基本類似。文中，"CD4抗體"、"抗-CD4抗體"和"抗-CD4" 是等價術語并可替換使用。"非消耗性CD4抗體"消耗少于50Q/。 CD4+細胞，優選低于25% CD4+ 細胞，最優選低于10% CD4+細胞的CD4抗體。相反，"消耗性CD4抗體"是 消耗50%或更多CD4+細胞，或者甚至75%或更多或這90%或更多CD4+細胞 的CD4抗體。CD4+細胞的消耗(例如，抗體治療對象中循環CD4+細胞水平的 降低)可通過各種機制獲得，如抗體依賴性細胞介導的細胞毒性，依賴于補體 的細胞毒性，T細胞增殖的抑制，和/或T細胞死亡的誘導。
術語"抗體"在文中以最廣泛含義使用，具體包括單克隆抗體、多克 隆抗體、由至少兩個完整抗體形成的多特異性抗體(例如雙特異抗體)、嵌合抗
體、人抗體、以及顯示出所需生物活性(例如，CD4結合)的抗體片段。抗體是
包含基本上或部分由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因片段編碼的一種或多
種多肽的蛋白質。已知的免疫球蛋白基因包括k、 X、 a、 Y、 5、 e和p恒定區 基因，以及無數免疫球蛋白可變區基因。"抗體片段"包含完整抗體的一部分，優選包含其抗原結合區。抗體 片段的例子包括Fab、 Fab'、 F(ab')2和Fv片段；雙特異抗體；線性抗體；單鏈 抗體分子；和由抗體片段形成的多特異性抗體。"完整抗體"是包含重鏈-和輕鏈-可變結構域以及Fc區的抗體。
"天然抗體"通常是由兩個相同輕(L)鏈和兩個相同重(H)鏈構成的約 150,000道爾頓的異四聚(heterotetrameric)糖蛋白。各輕鏈通過一個共價二硫鍵 與重鏈相連，而不同免疫球蛋白同種型重鏈之間的二硫鍵數目不同。各重鏈和 輕鏈還具有規則隔開的鏈內二硫橋。各重鏈的一端為可變結構域(vh)，接著多 個恒定結構域。各輕鏈的一端為可變結構域(vl)，另一端為恒定結構域；輕鏈 的恒定結構域與重鏈的第一個恒定結構域對齊，同時輕鏈可變結構域與重鏈的 可變結構域對齊。據信，特定氨基酸殘基形成了輕鏈和重鏈可變結構域之間的 界面。術語"可變"指可變結構域某些部分的序列在抗體之間變化很大并 可用于各特定抗體與其特定抗原的結合和特異性這一事實。然而，可變性在抗 體的可變結構域中不是均勻分布的。它集中于輕鏈和重鏈可變結構域中稱為超 變區的三個區段。可變結構域更保守的部分稱為構架區(FR)。天然重鏈和輕鏈 的可變結構域各包含通過三個超變區(形成連接(3-片層結構的環，而在某些情 況下形成部分(3-片層結構)相連的四個FR(多采取P-片層構型)。各鏈中的超變 區通過FR緊密結合在一起，并與其他鏈的超變區結合，形成抗體的抗原結合 位點(參見Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest(感興趣的免 疫蛋白的序列)，第五版，Public Health Service, National Institutes of Health(國 立衛生研究院公眾健康服務部)，Bethesda(貝思達)，Md.(馬里蘭州)(1991))。恒 定結構域不直接參與抗體與抗原的結合，但顯示出各種效應物功能，如抗體參與抗體依賴性細胞介導的細胞毒性。木瓜蛋白酶消化抗體產生兩個相同的抗原-結合片段，稱為"Fab"片 段，它們各自具有一個抗原結合位點，和剩下的"Fc"片段，這個名稱反映出它 易于結晶。胃蛋白酶處理產生F(ab')2片段，該片段具有兩個抗原結合位點并能 夠與抗原交聯。 "Fv"是含有完整抗原識別和抗原結合位點的最小抗體片段。該區域 由緊密、非共價連接的一個重鏈和一個輕鏈可變結構域的二聚體構成。在這種 構型中，各可變結構域的三個超變區相互作用從而在Vh-Vl二聚體表面形成抗 原結合位點。總之，六個超變區賦予抗體了抗原結合特異性。然而，即便是一 個可變結構域(或僅包含三個抗原特異性的超變區的半個Fv)也能夠識別并結 合抗原，盡管其親和力低于完整的結合位點。 Fab片段還含有輕鏈的恒定結構域和重鏈的第一個恒定結構域 (CH1)。 Fab'片段與Fab片段的不同之處在于在重鏈CH1結構域的羧基末端加 入了若干殘基，其中包括抗體絞鏈區的一個或多個半胱氨酸。Fab'-SH在文中 被稱為Fab'，其中恒定結構域的半胱氨酸殘基帶有至少一個游離巰基。F(ab')2 抗體片段最初由一對Fab'片段形成，它們之間具有絞鏈半胱氨酸。抗體片段的 其他化學偶聯也是已知的。有關其他抗體片段的詳細描述可參見，例如， Fundamental Immunology(基礎免疫學)，W.E. Paul編，Raven Press(雷芬出版社)， N.Y. (1999)。盡管各種抗體片段是通過消化完整抗體來定義的，但技術人員將了 解，也可通過化學方法或利用重組DNA法從頭合成這些片段。因此，術語"抗 體"在文中包括通過修飾完整抗體或利用重組DNA法從頭合成而產生的抗體 或其片段。任何脊椎動物抗體(免疫球蛋白)的"輕鏈"可根據它們恒定結構域的 氨基酸序列指定為兩種可明確區分的類型，稱為K和X，中的一種。根據重鏈恒定結構域的氨基酸序列可將抗體分為不同種類。完整抗 體主要有五類IgA、 IgD、 IgE、 IgG和IgM，其中一些可進一步分成亞類(同 種型)，例如IgGl、 IgG2、 IgG3、 IgG4、 IgA和IgA2。對應于不同抗體種類的 重鏈恒定結構域分別稱為a、 5、 s、 Y和p。不同種類免疫球蛋白的亞基結構和三維構型是熟知的。"單鏈Fv"或"scFv"抗體片段包含抗體的Vh和VL結構域，其中，這 些結構域存在于單個多肽鏈中。優選地，Fv多肽在Vh和V^結構域之間還包 含多肽接頭，這使得scFv能夠形成結合抗原所需的結構。scFv的綜述可參見 Rosenburg禾q Moore編的The Pharmacology of Monoclonal Antibodies(單克隆抗 體藥理學)，第113巻，Springer-Verlag，紐約(1994)'第269-315頁中Pluckthun 的論述。術語"雙特異抗體"指具有兩個抗原結合位點的小抗體片段，該片段
在同一多肽鏈中包含與輕鏈可變結構域(vl)相連的重鏈可變結構域(vh)
(Vh-Vl)。通過使用短到不能在同一鏈的兩個結構域之間形成配對的接頭，該 結構域被迫與另一鏈的互補結構域配對并形成兩個抗原結合位點。雙特異抗體 更加完整描述于，例如，EP 404097; WO 1993/11161;和Hollinger等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA， 90: 6444-6448 (1993)。術語"單克隆抗體"在文中指從基本均質的抗體群獲得的抗體，即構 成該群體的各抗體相同和/或結合相同表位，但在制備單克隆抗體時可能產生變 體，這種變體通常以最小量存在。與多克隆抗體制品(通常包括針對不同決定 子(表位)的不同抗體)不同，各單克隆抗體只針對抗原上的一個決定子。除了它 們的特異性，單克隆抗體的優點在于，它們污染有其他免疫球蛋白。修飾語"單 克隆"表明該抗體的特征是從基本均質的抗體群獲得的，但不能解釋為需要通 過任何特定方法制備這種抗體。例如，本發明使用的單克隆抗體可通過最早由 Kohler等，Nature, 256: 495 (1975)描述的雜交瘤法制造，或者可通過重組DNA 法制造(參見，例如，美國專利號4816567)。"單克隆抗體，，也可采用例如Clackson 等，Nature, 352: 624-628 (1991 )和Marks等，J. Mol.Biol.， 222: 581-597 (1991) 描述的技術從噬菌體抗體文庫分離。這里所述的單克隆抗體具體包括"嵌合"抗體(免疫球蛋白)，其中一 部分重鏈和/或輕鏈與衍生自特定種類或屬于特定抗體類別或亞類的抗體中的 相應序列相同或同源，但鏈的其余部分與衍生自另一種類或屬于另一抗體類別 或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，以及包括這種抗體的片段，只要它們 顯示出所需生物活性(美國專利號4816567; Morrison等，Proc. Natl. Acad. Sci.USA， 81: 6851-6855 (1984))。文中，感興趣的嵌合抗體包括"靈長類化 (primatized)"抗體，其包含衍生自非人靈長類(例如舊世界猴，如狒狒、恒河猴 或獼猴)的可變結構域抗原結合序列和人恒定區序列(美國專利號5693780)。非人(例如，鼠科)抗體的"人源化"形式屬于嵌合抗體，它含有極少 衍生自非人免疫球蛋白的序列。人源化抗體的大部分是人免疫球蛋白(受者抗 體)，其中受者超變區的殘基被非人種類(供者抗體)如小鼠、大鼠、兔或具有所 需特異性、親和力和能力的非人靈長類超變區的殘基替代。 一些情況中，人免 疫球蛋白的構架區(FR)殘基被相應的非人殘基替代。此外，人源化抗體可包含 未在受者抗體或供者抗體中發現的殘基。作出這些修飾進一步優化抗體性能。 通常，人源化抗體將包含基本上所有或者至少一個、通常為兩個可變結構域， 其中所有或基本上所有的超變環對應于非人免疫球蛋白的超變環，所有或基本 上所有的FR是人免疫球蛋白序列的FR，但上述FR取代除外。人源化抗體還 任選包含至少一部分免疫球蛋白恒定區，通常是人免疫球蛋白恒定區。更詳細 描述可見Jones等，Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann等，Nature 332: 323-329 (1988);禾卩Presta， Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992)。術語"超變區"當用于本文時是指負責抗原結合的抗體的氨基酸殘 基。超變區包含來自"互補決定區"或"CDR"的氨基酸殘基(參見，例如，Kabat 等，S叫uences of Proteins of Immunological Interest(感興趣的免疫蛋白的序列)， 第五版，Public Health Service, National Institutes of Health(國立衛生研究院公 眾健康服務部)，Bethesda(貝思達)，Md.(馬里蘭州)(1991))和/或來自"超變環" 的那些殘基(參見，例如，Chothia和Lesk J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987))。"構 架"或"FR"殘基是除文中所定義的超變區殘基之外的那些可變結構域殘基。術語'Tc受體"和"FeR"用來描述結合抗體Fc區的受體。FcR的綜述 見Ravetch和Kinet (1991) Annu. Rev. Immunol 9: 457-92; Capel等，(1994) Immunomethods 4: 25-34;和de Haas等，(1995) J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41。 其他FcR,包括未來鑒定的那些，也包括在本文所用術語"FcR"當中。該術語 還包括新生兒受體，FcRn，其負責將母體的IgG轉移給胎兒(Guyer等，(1976) J. Immunol. 117: 587和Kim等，(1994) J. Immunol, 24: 249)。抗體的"CD4結合片段"是保留結合CD4的能力的抗體片段。如上所述，該片段是任選通過消化完整抗體或從頭合成產生的。
"表位"是抗原分子上結合抗體的特定區域。短語"基本類似"或"基本相同"在文中指兩個數值(通常一個與本發 明抗體有關，另一個與參比/比較抗體有關)之間的相似度足夠高，因而就通過
所述值(例如，Kd值)測得的生物學特征而言，本領域技術人員認為這兩個值在
生物學和/或統計學意義上的差異極小或沒有。作為參比/比較抗體的值的函數，
所述兩個值之間的差異優選低于約50%，優選低于約40%，優選低于約30%， 優選低于約20%，優選低于約10%。"結合親和力"通常指分子(例如，抗體)的單個結合位點與其結合伴 侶(例如，抗原)之間非共價相互作用總和的強度。除非另有說明，文中，"結合 親和力"指內在結合親和力，它反應了結合對(例如，抗體和抗原)成員之間的 l:l相互作用。分子X對其伴侶Y的親和力通常用解離常數(Kd)表示。親和力 可通過本領域已知的常規方法測定，其中包括本文所述的那些方法。低親和力 抗體通常緩慢結合抗原并有易于解離的趨勢，而高親和力抗體通常較快結合抗 原并有保持長期結合的趨勢。測量結合親和力的各種方法是本領域已知的，其 中的任何一種都可用于本發明的目的。具體的示例性實施方式在下文中描述。 —實施方式中，本發明的"Kd"或"Kd值"是通過放射性標記的抗原 結合試驗(RIA)采用感興趣抗體的Fab形式及其抗原測定的，該試驗按下述試 驗描述進行在存在未標記抗原的滴定系列時用最小濃度的[125I]-標記的抗原 平衡Fab，然后用抗-Fab抗體-包被的平板捕獲結合的抗原來檢測Fab對抗原的 分辨結合親和力(solution binding affmity)(Chen等，(1999) J. Mol Biol 293: 865-881)。為建立試驗條件，用50 mM碳酸鈉(pH 9.6)配制的5 ug/ml捕獲抗-Fab 抗體(Cappel Labs)包被微滴定板(Dynex)過夜，隨后用PBS配制的2。/。 (w/v)牛 血清白蛋白在室溫(約23°〇)封閉2-5小時。在非吸附平板(Nunc #269620)上混 合100 pM或26 pM [1251]-抗原和感興趣Fab的連續稀釋液(例如，與Presta等， (1997) Cancer Res. 57: 4593-4599中抗-VEGF抗體、Fab-12的評估一致)。然后 將感興趣的Fab培育過夜；然而可以繼續培育較長時間(例如，65小對)以確保 達到平衡。之后，將混合物轉移到捕獲平板室溫培育(例如，培育1小時)。然 后除去溶液并用PBS配制的0.1% Tween-20將平板洗滌8次。將平板晾干之后加入150 ul/孔閃爍體(MicroScint -20; Packard),用Topcount y記數儀 (Packard)計數平板10分鐘。選擇獲得低于或等于最大結合的20%的各Fab濃 度進行競爭性結合試驗。根據另一個實施方式，Kd或Kd值是采用表面等離振 子共振試驗測定的，測定在25。C進行，使用BIAcore -2000或BIAcore -3000 (BIAcore， Inc.,皮斯卡塔韋(Piscataway)，紐約州)及固定抗原CM5芯片，反 應單位(RU)約為10。簡言之，根據供應商的說明用N-乙基-N，-(3-二甲基氨基 丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基化的葡聚 糖生物傳感器芯片(CM5， BIAcore Inc.)。抗原用10mM乙酸鈉，pH 4.8稀釋 至5ug/ml (約0.2uM)，然后以5ul/分的流速注射以獲得約10個偶聯蛋白的反應 單位(RU)。注射抗原之后注入1M乙醇胺以封閉未反應的基團。動力學測量時， 25。C時以約25ul/分的流速將Fab的兩倍連續稀釋液(0.78 nM-500 nM)注射入含 0.05% Tween 20 (PBST)的PBS中。用簡單的一對一 Langmuir結合模型 (BIAcore⑧評價軟件，版本3.2)通過同時擬合結合或解離sensorgram來計算結合 速率(kon)和解離速率(koff)。平衡解離常數(Kd)計算為koff/kon比值。參見，例 如，Chen等，(1999) J. Mol Biol 293: 865-881。如果通過上述表面等離振子共 振試驗計算出的結合速率超過106 M—1 S"，則可采用熒光猝滅技術測定結合速 率，該技術利用光度計測量25'C，存在濃度漸升的抗原時PBS(pH 7.2)配制的 20nM抗-抗原抗體(Fab形式)的熒光發射強度增加或降低(激發=295 nm;發射 =340 nm， 16 nm帶通)，所述分光計如裝有截流裝置的分光光度計(Aviv Instruments)或具有攪拌比色皿的8000系列SLM-Aminco 分光光度計 (ThermoSpectronic)。"氨基酸序列"是氨基酸殘基的聚合物(蛋白質、多肽等)或代表氨基 酸聚合物的字符串，根據上下文而定。術語"免疫抑制劑"在文中指治療時是指用來抑制或掩蔽被治療的 哺乳動物的免疫系統的物質。它包括抑制細胞因子產生、下調或抑制自身抗原 表達或掩蔽MHC抗原的物質。這種試劑的例子包括2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧 啶(參見美國專利號4665077);非甾類抗炎藥(NSAID);更昔洛韋，他克莫司， 糖皮質激素類如考的松或醛固酮，抗炎劑如環加氧酶抑制劑，5-脂肪氧化酶抑 帝ij劑，或白三烯受體拮抗劑；嘌呤拮抗劑如硝基咪唑硫嘌呤或霉酚酸酯(MMF);烷化劑如環磷酰胺；溴隱亭；達那唑；氨苯砜；戊二醛(掩蔽MHC抗原，如美 國專利號4120649所述)；MHC抗原和MHC片段的抗-獨特型抗體；環孢菌素 A;類固醇如皮質激素或糖皮質激素或糖皮質激素類似物，例如，潑尼松，甲 潑尼龍和地塞米松；二氫葉酸還原酶抑制劑如氨甲喋呤(口服或皮下)；羥氯替 平(hydroxycloroquine);柳氮磺吡啶；來氟米特；細胞因子或細胞因子受體抗體 包括抗-干擾素-a， -|3，或-y抗體，抗-腫瘤壞死因子-a抗體(英夫利昔單抗或阿 達木單抗)，抗-TNF-a免疫粘附素(依那西普)，抗-腫瘤壞死因子-|3抗體，抗-白介素-2抗體和抗-IL-2受體抗體；抗-LFA-l抗體，包括抗-CDlla和抗-CD18 抗體；異源抗-淋巴細胞球蛋白；泛-T抗體，優選抗-CD3;含LFA-3結合結構 域的可溶性肽(1990/7/26公布的WO 1990/08187);鏈激酶；TGF-(3;鏈道酶； 宿主的RNA或DNA; FK506; RS-61443;脫氧精胍菌素；雷帕霉素；T細胞 受體(Cohen等，美國專利號5114721); T細胞-受體片段(Offner等，Science, 251: 430-432 (1991); WO 1990/11294; Ianeway， Nature, 341: 482 (1989); 和WO 1991/01133);和T細胞-受體抗體(EP340109)如T10B9。術語"細胞毒劑"在文中指抑制或防止細胞功能和/或造成細胞破壞 的物質。該術語包括放射性同位素(例如At211、 I131、 I125、 Y9Q、 Re186、 Re188、 Sm153、 Bi212、 P^和Lu的放射性同位素)，化療劑，以及細菌、真菌、植物或 動物來源的毒素如小分子毒素或酶活性毒素，或其片段。"化療劑"是通常用于治療癌癥的化合物。化療劑的例子包括垸化 劑如塞替派和CYTOXAN 環磷酰胺；烷基磺酸鹽如白消安，英丙舒凡，和哌 泊舒凡；氮丙啶如苯并多巴(benzodopa)，卡波醌，美妥替哌(meturedopa)，和 烏瑞替派(uredopa);氮雜環丙烷和亞甲基蜜胺(methylamelamine)包括六甲密胺， 三亞胺嗪，三亞乙基磷酰胺(trietylenephosphoramide)，三亞乙基硫代磷酰胺 (triethiylenethiophosphoramide)禾口三羥基甲蜜胺(trimethylolomelamine); 多聚乙 酰(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone));喜樹堿(包括合成 類似物托泊替康)；苔蘚抑素；卡利他汀(callystatin); CC-1065 (包括其阿多來 新，卡折來新，和比折來新合成類似物)；隱藻素(cryptophycins)(尤其是隱藻素 1和隱藻素8);多拉司他汀；多卡霉素(duocarmycin)(包括合成類似物，KW-2189 和CB1-TM1);軟珊瑚醇；水鬼蕉堿(pancratistatin);薩科迪汀(sarcodictyin);海綿抑制素(spongistatin);氮芥如苯丁酸氮芥，萘氮芥，膽汁磷酰胺 (cholophosphamide)，雌莫司汀，異環磷酰胺，雙氯乙基甲胺，鹽酸氧化雙氯乙 基甲胺，美法侖，新氮芥，苯芥膽甾醇，潑尼莫司汀，氯乙環磷酰胺，尿嘧啶 氮芥；亞硝基脲(nitrosureas)如卡莫司汀，氯脲菌素，福莫司汀，洛莫司汀， 尼莫司汀，和雷莫司汀；抗生素如烯二炔類抗生素(enediyne antibiotics)(例如， 剌孢霉素，尤其是刺孢霉素Y1I和剌孢霉素coll (參見，例如，Agnew， Chem Intl. Ed. Engl.， 33: 183-186 (1994));蒽環類抗生素，包括蒽環類抗生素A; 二膦 酸鹽，如氯膦酸鹽；埃斯培拉霉素(esperamicin);以及新制癌菌素生色團和相 關色蛋白烯二炔類抗生素生色團，阿克拉霉素(aclacinomysin)，放線菌素，奧 斯米星(authramycin)，偶氮絲氨酸，博來霉素，放線菌素C，卡柔比星(carabicin)， 洋紅霉素，嗜癌霉素，色霉素(chromomycinis)，放線菌素D，柔紅霉素，地托 比星，6-重氮-5-氧-L-正亮氨酸，ADRIAMYCnS^阿霉素(包括嗎啉代-阿霉素， 氰基嗎啉代-阿霉素，2-吡咯啉代(pyrrolino)-阿霉素，和脫氧阿霉素)，表柔比星， 依索比星，伊達比星，麻西羅霉素，絲裂霉素如絲裂霉素C，霉酚酸，諾拉霉 素，橄欖霉素，培洛霉素，泊非霉素(potfiromycin)，嘌呤霉素，三鐵阿霉素， 羅多比星，鏈黑菌素，鏈唑霉素，塊菌素，烏苯美司，凈司他丁，佐柔比星； 抗-代謝藥如氨甲喋呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);葉酸類似物如二甲葉酸，氨甲喋呤， 蝶羅呤，三甲曲沙；嘌呤類似物如氟達拉濱，6-巰嘌呤，硫咪嘌呤，硫鳥嘌呤； 嘧啶類似物如安西他濱，氮雜胞苷，6-氮尿苷，卡莫氟，阿糖胞苷，雙脫氧尿 苷(dideoxyuridine)，去氧氟尿苷，依諾他濱，氟尿苷；雄激素類如卡普睪酮， 丙酸屈他雄酮，環硫雄醇，美雄垸，睪內酯；抗-腎上腺素和氨魯米特，米托 坦，曲洛司坦；葉酸補充劑如亞葉酸(frolinic acid);乙酰葡醛酸內酯；醛磷酰 胺糖苷(aldophosphamideglycoside);氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；倍曲 比新(bestmbudl);比生群；依達曲沙；地磷酰胺；地美可辛；地吖醌；依弗米 星(dformithine);依利醋銨(elliptinium acetate);埃博霉素(epothilone);依托格 魯；硝酸鎵；羥基脲;磨茹多糖；氯尼達明；美登醇類如美登素和安絲菌素； 米托胍腙；米托蒽醌；莫哌達醇(mopidanmol);根瘤菌劑；噴司他丁；蛋氨氮 芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基肼；丙卡巴肼；PSK⑧多糖復合物(JHS 天然產物公司(JHS Natural Products),尤金市，俄勒岡州)；雷佐生；根霉素；西佐喃；鍺螺胺；細格孢氮雜酸；三亞胺醌；2,2',2"-三氯乙胺；單端孢霉烯族 毒素類(尤其是T-2毒素，粘液霉素(verracurin) A，桿孢菌素A和安概丁 (anguidine));烏拉坦；長春地辛；達卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴 衛矛醇；哌泊溴垸；蓋托星(gacytosine);阿糖胞苷("Ara-C");環磷酰胺；塞替 派；紫杉垸，例如，TAXOI^紫杉醇(布里斯托-美時施貴寶腫瘤學公司 (Bristol-Myers Squibb Oncology),普林斯頓，紐約州)，ABRAXANtm不含克列 莫佛，紫杉醇的白蛋白工程化毫微粒制劑(美國藥物伴侶公司(American Pharmaceutical Partners),山姆堡(Schaumberg)，伊利諾伊州)，禾卩TAXOTERE 多烯紫杉醇(RPR公司(Rhone-PoulencRorer)，安東尼(Antony)，法國)；瘤可寧 (chloranbucil); GEMZAR②吉西他濱；6-硫代鳥嘌呤；巰嘌呤；氨甲喋呤；鉬類 似物如順鉑和卡鉑；長春堿；鉬；依托泊苷(VP-16);異環磷酰胺；米托蒽醌； 長春新堿；NAVELBINE 長春瑞濱；諾消靈；替尼泊苷；依達曲沙；柔紅霉素； 氨基蝶呤；希羅達；伊班膦酸鹽；CPT-11;拓撲異構酶抑制劑RFS 2000; 二 氟甲基鳥氨酸(difluorometlhylornkhine) (DMFO);類視黃醇如維甲酸；卡培他 濱；和上述任何一種的藥學上可接受的鹽、酸或衍生物。該定義還包括調節或抑制激素作用的抗-激素劑，如抗-雌激素類和 選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，包括，例如，他莫昔芬(包括NOLVADEX 他莫昔芬)，雷洛昔芬，屈洛昔芬，4-羥泰米芬，曲沃昔芬，雷洛昔芬(keoxifene)， LYI17018，奧那司酮，和FARESTON 托瑞米芬；抑制芳香酶的芳香酶抑制劑， 它能調節腎上腺中雌激素的產生，例如有4(5)-咪唑，氨魯米特，MEGASE⑧醋 酸甲地孕酮，AROMASIN②依西美坦，福美斯坦(formestanie)，法倔唑，RIVISOR 伏氯唑，FEMARA⑧來曲唑和ARIMIDEX⑧阿那曲唑；和抗-雄激素如氟他胺， 尼魯米特，比卡魯胺，亮丙瑞林，和戈舍瑞林；以及曲沙他濱(l,3-二氧戊烷核 苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，尤其是那些抑制涉及異常細胞增殖的信號 傳導途徑中基因表達的反義寡核苷酸，如PKC-a， Raf，和H-Ras;疫苗如基 因療法疫苗，例如，ALLOVECTIN⑧疫苗，LEUVECTIN⑧疫苗，和VAXID⑧疫 苗；PROLEUKIN rIL-2; LURTOTECAN⑧拓撲異構酶1抑制劑；ABARELIX rmRH;和上述任何一種的藥學上可接受的鹽、酸或衍生物。術語"細胞因子"是由一種細胞群釋放的作為胞間介質作用于其他細胞的蛋白質。這種細胞因子的例子有淋巴因子，單核因子；白介素(IL)如 IL-1， IL-la， IL-2， IL-3， IL-4， IL-5， IL-6， IL-7， IL-8， IL-9， IL-ll， IL-12, IL-15;腫瘤壞死因子如TNF-a或TOF-(3;和其他多肽因子包括LIF和kit配體 (KL)。文中，術語細胞因子包括來自天然來源或來自重組細胞培養物的蛋白質 以及天然序列細胞因子的生物活性等價物，包括合成制得的小分子實體及其藥 學上可接受的衍生物和鹽。術語"激素"指通常由具有導管的腺器官分泌的多肽激素。激素包 括，例如，生長激素如人生長激素，N-甲硫氨酰人生長激素，和牛生長激素； 甲狀旁腺激素；甲狀腺素；胰島素；胰島素原；松弛素；松弛素原(prorelaxin); 糖蛋白激素如促卵泡激素(FSH)，促甲狀腺激素(TSH)，和黃體化激素(LH); 促乳素，胎盤催乳激素，小鼠絨促性素相關肽，抑制素；激活素；米勒管抑制 物；和血小板生成素。在文中，術語激素包括來自天然來源或來自重組細胞培 養物的蛋白質以及天然序列激素的生物活性等價物，包括合成制得的小分子實 體及其藥學上可接受的衍生物和鹽。術語"生長因子"指促進生長的蛋白質，其包括，例如，肝生長因子； 成纖維細胞生長因子；血管內皮生長因子；神經生長因子如NGF-(3;血小板衍 生生長因子；轉化生長因子(TGF)如TGF-a和TGF-p;胰島素樣生長因子-I和 -II;紅細胞生成素(EPO);骨誘導性因子；干擾素如干擾素-a、 -(3和-y;和集落 刺激因子(CSF)如巨噬細胞-CSF(M-CSF);粒細胞巨噬細胞-CSF(GM-CSF);和 粒細胞-CSF(G-CSF)。文中，術語生長因子包括來自天然來源或來自重組細胞 培養物的蛋白質以及天然序列生長因子的生物活性等價物，包括合成制得的小 分子實體及其藥學上可接受的衍生物和鹽。出于本文的目的，"腫瘤壞死因子-a(TNF-a)"指人TNF-a分子，其 包含Pennica等，Nature, 312: 721 (1984)或Aggarwal等，JBC， 260: 2345 (1985)
所述的氨基酸序列。 "TNF-a抑制劑"在文中指一般通過結合TNF-a并中和其活性從而在 一定程度上抑制TNF-a的生物學功能的試劑。TNF抑制劑的例子在文中具體 包括依那西普(ENBREL )，英夫利昔單抗(REMICADE )和阿達木單抗 (HUMIRATM)。
"非甾類抗炎藥，，或"NSAID"的例子有乙酰水楊酸，布洛芬，萘普生， 吲哚美辛，舒林酸，托美汀，包括其鹽或衍生物等。術語"整聯蛋白"指允許細胞結合和響應胞外基質并參與傷口愈合、 細胞分化、腫瘤細胞歸巢和細胞凋亡等各種細胞功能的受體蛋白。它們是參與 細胞-胞外基質和細胞-細胞相互作用的細胞粘附受體大家族的一部分。功能性 整聯蛋白由非共價結合的稱為ot和(3的兩個跨膜糖蛋白亞基構成。(x亞基彼此 均有一定同源性，P亞基亦是如此。受體總含有一條a鏈和一條p鏈。例子包 括ct6131， a3(31， a7pi， LFA-1等。在文中，術語整聯蛋白包括來自天然來源或 來自重組細胞培養物的蛋白質以及天然序列整聯蛋白的生物活性等價物，包括 合成制得的小分子實體及其藥學上可接受的衍生物和鹽。"(x4-整聯蛋白"是在除 中性白細胞之外的白細胞表面表達的a4-(31和a4-|37整聯蛋白的a4亞基。"整聯蛋白拮抗劑或抗體"的例子在文中包括LFA-1抗體，如購自基 因技術公司(Genentech)的依法利珠單抗(efalizumab) (RAPTIVA ),或a4整聯蛋 白抗體(例如，"a4-整聯蛋白抗體"是結合cx4-整聯蛋白的抗體)如購自拜爾金公 司(Biogen)的那他珠單抗(Tysabri )，或二氮雜環苯丙氨酸衍生物(WO 2003/89410)，苯丙氨酸衍生物(WO 2003/70709， WO 2002/28830， WO 2002/16329和WO 2003/53926)，苯基丙酸衍生物(WO 2003/10135)，烯胺衍生 物(WO 2001/79173)，丙酸衍生物(WO 2000/37444)，鏈烷酸衍生物(WO 2000/32575)，取代的苯基衍生物(美國專利號6677339和6348463)，芳香胺衍 生物(美國專利號6369229)， ADAM解聚素結構域多肽(US 2002/0042368)， avp3 整聯蛋白抗體(EP 633945)，氮雜-橋二環氨基酸衍生物(WO 2002/02556)，等等。"皮質激素"指一些具有甾類的通用化學結構、能夠模擬或增強天然 產生的皮質激素的作用的合成或天然產生的物質中的任何一種。合成皮質激素 的例子包括潑尼松，潑尼松龍(包括甲潑尼龍)，地塞米松曲安西龍，和倍他米 松。 "B細胞表面標記"或"B細胞表面抗原"在文中指在B細胞表面表達 的、能夠被與其結合的桔抗劑尋耙的抗原。示例性的B細胞表面標記包括 CDIO， CD19, CD20， CD21， CD22, CD23， CD24， CD37， CD40， CD53, CD72， CD73， CD74， CDw75， CDw76， CD77， CDw78， CD79a， CD79b，CD80, CD81， CD82， CD83, CDw84， CD85，和CD86白細胞表面標記(有關 描述可參見The Leukocyte Antigen Facts Book(白細胞抗原事實叢書)，第二版， 1997， Barclay等編，學術出版社(Academic Press), HB公司(Harcourt Brace & Co.),紐約)。其他B細胞表面標記包括RP105, FcRH2， B細胞CR2， CCR6， P2X5， HLA-DOB， CXCR5， FCER2， BR3， Btig， NAG14， SLGC16270， FcRHl， IRTA2， ATWD578， FcRH3， IRTA1, FcRH6， BCMA，和239287。特別感興 趣的B細胞表面標記是相比哺乳動物的其他非B細胞組織優先在B細胞上表 達、并可在B細胞前體和成熟B細胞上表達的標記。"結合B細胞表面標記的抗體"是在與B細胞表面標記結合后能破壞 或消耗哺乳動物體內的B細胞和/或干擾一種或多種B細胞功能的分子，例如， 通過減弱或防止B細胞引起的體液反應。所述抗體優選能夠消耗用其處理的哺 乳動物體內的B細胞(即降低循環B細胞水平)。這種消耗可通過各種機制實現， 如抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)和/或依賴于補體的細胞毒性 (CDC)、抑制B細胞增殖，和/或誘導B細胞死亡(例如通過細胞凋亡)。"拮抗劑"指能夠中和、阻斷、抑制、消除、降低或干擾具體或特定 蛋白質活性的分子，所述活性包括以配體為例其與一種或多種受體的結合或者 以受體為例其與一種或多種配體的結合。拮抗劑包括抗體及其抗原-結合片段， 蛋白質，肽，糖蛋白，糖肽，糖脂，多糖，寡糖，核酸，生物有機分子，肽模 擬物，藥物制劑以及它們的代謝物，轉錄和翻譯控制序列，等等。拮抗劑還包 括蛋白質的小分子抑制劑，以及特異性結合蛋白質從而阻斷其與其靶標結合的 融合蛋白、受體分子和衍生物，蛋白質的拮抗劑變體，蛋白質的反義分子，RNA 適體，以及針對蛋白質的核酶。 "B細胞表面標記拮抗劑"是在與B細胞表面標記結合后能破壞或消 耗哺乳動物體內的B細胞和/或干擾一種或多種B細胞功能的分子，例如，通 過減弱或防止B細胞引起的體液反應。所述拮抗劑優選能夠消耗用其處理的哺 乳動物體內的B細胞(即降低循環B細胞水平)。這種消耗可通過各種機制實現， 如ADCC和/或CDC、抑制B細胞增殖，和/或誘導B細胞死亡(例如通過細胞 凋亡)。本發明范圍內的拮抗劑包括結合B細胞標記的抗體，合成或天然-序列 肽，融合蛋白，和小分子拮抗劑，可任選偶聯于或融合于細胞毒劑。例子包括但不限于，例如，CD20抗體，BR3抗體(例如，WO0224卯9)， BR3-Fc，等等。
CD20抗體的例子包括"C2B8"，現在稱為"利妥昔單抗" ("RITUXAN ")(美國專利號5736137);釔-[90]-標記的2B8鼠科抗體，稱為 "Y2B8"或"替伊莫單抗"(ZEVALIN )，可購自IDEC制藥公司(IDEC Pharmaceuticals, Inc.)(美國專利號5736137; 1993/6/22由ATCC以登錄號 HB11388保藏，名稱是2B8);鼠科IgG2a"Bl"，也稱為"托西莫單抗"，任選用 "I標記以得到""I-Bl"或"碘im托西莫單抗"抗體(BEXXARTM)，可購自Corixa (也可參見美國專利號5595721);鼠科單克隆抗體"1F5" (Press等，Blood 69(2): 584-591 (1987)及其變體，包括"插入構架的(framework-patched)"或人源化1F5 (WO 2003/002607， Leung， S.;以HB-96450保藏于ATCC);鼠科2H7和嵌合 2H7抗體(美國專利號5677180);人源化2H7 (參見，例如，WO04/056312; US20060024295); HUMAX-CD20tm抗體(基因邁伯公司(Genmab)，丹麥)；WO 2004/035607中列出的人單克隆抗體(Teeling等)；AME-133TM抗體(應用分子進 化公司(Applied Molecular Evolution)); A20抗體或其變體如嵌合或人源化A20 抗體(分別表示為cA20、 hA20) (US 2003/0219433，伊繆麥迪克斯公司 (Immunomedics));禾口購自International Leukocyte Typing Workshop (國際白細胞 分型工作室)的單克隆抗體L27， G28-2， 93-1 B3， B-C1或NU-B2(Valentine等， 選自Leukocyte Typing III(白細胞分型III) (McMichad編，第440頁，牛津大學 出版社(Oxford University Press) (1987))。"緩解疾病的抗風濕藥"或"DMARD"的例子包括羥氯替平，柳氮磺 吡啶，氨甲喋呤，來氟米特，依那西普，英夫利昔單抗(加口服和皮下甲氨喋 呤)，硝基咪唑硫嘌呤，D-青霉胺，金(口服)，金(肌內)，米諾環素，環孢霉素， 葡萄球菌蛋白A免疫吸附，包括其鹽和衍生物，等等。 "CTLA4"在活化的T淋巴細胞上表達并參與下調免疫應答。文獻中 CTLA4的其他名稱包括細胞毒T淋巴細胞相關抗原4，細胞毒T淋巴細胞相 關蛋白4，細胞分化抗原CD152，和細胞毒T淋巴細胞相關顆粒絲氨酸蛋白酶 4。許多其他術語也在文中進行了定義或表征。發明詳述 CD4是主要在T淋巴細胞譜系細胞(包括大部分胸腺細胞和外周T 細胞亞類)上表達的表面糖蛋白。某些非淋巴細胞也表達低水平的CD4，盡管 這種趨異細胞分配的功能意義還未知。在成熟T細胞上，CD4通過與抗原呈遞 細胞表達的MHC II類分子相互作用而發揮共識別功能。004+ T細胞主要構成 在病毒、細菌、真菌和寄生蟲感染的T-依賴性應答期間調節T和B細胞的功 能輔助細胞亞類。在自身免疫性疾病(尤其當對自身抗原的耐受性被破壞時)的發病 機制中，CD4+ T細胞可導致炎性反應從而造成關節和組織破壞。例如，通過 募集造血譜系的炎性細胞，產生抗體、炎性細胞因子和介質，以及通過激活殺 傷細胞有助于這些過程。CD4+T細胞與狼瘡的發病機制有關。例如，CD4+T細胞存在于腎 小球腎炎部位。據報道，SLE患者的CD4+T細胞對抗原超響應并在體外耐受 凋亡。能支持B細胞產生自身抗體的自身抗原特異性CD4+ T細胞(產生IFN-Y 的效應/記憶CD4+細胞)存在于SLE患者中。此外，觀察到MHC II級等位基因 和SLE風險之間強烈相關。類似地，CD4+ T細胞與MS的發病機制有關。例如，CD4+輔助 T細胞參與MS的發病機制，相應的實驗室模型，實驗性變應性腦脊髓炎(EAE)， 以及消除了 T細胞的實驗室動物顯示不會產生EAE (Steinman等的USPN 4695459， 題為"Method of treating autoimmune diseases that are mediated by Leu3/CD4 phenotype T cells(治療Leu3/CD4表型T細胞介導的自身免疫性疾病 的方法)"，Traugott等，(1983) "Multiple sclerosis: distribution of T cell subsets within active chronic lesions(多發性硬化T細胞亞類在活動性慢性損傷內的分 布)"Science 219: 308-310， Arnason等，(1962) "Role of the thymus in immune reaction in rats: II. Suppressive effect of thymectomy at birth on reactions of delayed (cellular) hypersensitivity and the circulating small lymphocyte (胸月泉在大.
鼠免疫反應中的作用II.出生時進行的胸腺切除術對延遲的(細胞)超敏反應
和循環小淋巴細胞的抑制作用)"J Exp Med 116: 177-186，以及Gonatas和 Howard (1974) "Inhibition of experimental allergic encephalomyelitis in ratsseverely depleted of T cdls(抑制T細胞嚴重消耗大鼠的實驗性變應性腦脊髓 炎)"Science 186: 839-841)。 CD4+和CD8+ T細胞在MS損傷中被發現；已知 這兩者都產生炎性細胞因子，盡管它們對于發病機制的相對貢獻還不清楚。觀 察到MS患者血液中髓磷脂特異性CD4+細胞的頻率提高了 4倍。據信，目前 使用的或者將來很可能用于治療MS的一些藥物部分通過它們對T細胞的作用 而起作用；例如，Tysabi^(那他珠單抗，a-4整聯蛋白抗體)，CamPath (阿侖 單抗，CD52抗體)，和達珠單抗(IL-2Ra抗體)。此外，MS風險的增加與MHC II級等位基因(3.6倍)以及程度較低的I級等位基因(2倍)相關。 —方面，本發明提供通過給予非消耗性CD4抗體和臨床上或實驗 上用來治療狼瘡的其他化合物的組合來治療狼瘡，包括SLE和狼瘡腎炎的方 法。本發明的另一方面提供通過給予導致腎功能改善和/或蛋白尿或活動性尿沉 淀減輕的非消耗性CD4抗體來治療狼瘡腎炎，包括中期到晚期疾病的方法。 本發明還有一方面提供通過給予任選與臨床上或實驗上用來治療MS的其他化 合物組合的非消耗性CD4抗體來治療MS的方法。本發明還有另一方面提供 通過給予通常與臨床上或實驗上用來治療自身免疫性疾病的其他化合物組合 的非消耗性CD4抗體來治療患有自身免疫性疾病如類風濕性關節炎、哮喘、 銀屑病、炎性腸病(例如，克羅恩病和潰瘍性結腸炎)和斯耶格倫綜合征的移植 物受者或對象的方法。
CD4抗體已經描述了許多消耗性和非消耗性CD4抗體。也已經報道了這些 抗體在誘導對抗原(包括自身抗原)的耐受性方面的應用。參見，例如，USPN 4695459; Cobbold和Waldmann的USPN 6056956，題為"Non-depleting anti-CD4 monoclonal antibodies and tolerance induction(一一消耗'性抗-CD4單克隆抗體禾口而t 受誘導)，，；Cobbold和Waldmann的USPN 5690933，題為"Monoclonal antibodies for inducing tolerance(用于誘導耐性的單克隆抗體)"；Cobbold等的歐洲專利申 請公布0240344，題為"Monoclonal antibodies and their use(單克隆抗體及其應 用)，，；Hanna等的USPN 6136310，題為"Recombinant anti-CD4 antibodies for human therapy(用于人類治療的重組抗-CD4抗體)"；Newman等的USPN 5756096，題為"Recombinant antibodies for human therapy(用于人類治療的重組抗體)"；Newman等的USPN 5750105，題為"Recombinant antibodies for human therapy(用于人類治療的重組抗體)"；Kung和Goldstein的USPN 4381295，題 為"Monoclonal antibody to human helper T cells and methods of preparing same(人輔助T細胞的單克隆抗體及其制備方法)"；Waldmann (1989) "Manipulation of T匿cell responses with monoclonal antibodies(單克隆抗體對T細 胞反應的操縱)"Ann Rev Immunol 7: 407-44;以及Wofsy和Seaman (1987) "Reversal of advanced murine lupus in NZB/NZW Fl mice by treatment with monoclonal antibody to L3T4(用L3T4單克隆抗體治療來逆轉NZB/NZW Fl小 鼠的高級鼠科狼瘡"J Immunol 138: 3247-53。具體地說，非消耗性CD4抗體 和及其在誘導耐受性中的應用已經描述于Frewin等的美國專利申請公開號 2003/0108518，題為"TRXl antibody and uses therefor(TRXl抗體及其用途)"和 Frewin等的美國專利申請公開號2003/0219403 ，題為"Compositions and methods of tolerizing a primate to an antigen(使靈長類動物耐受抗原的組合物和方法)"， 各自通過引用納入本文。適用于所述方法的示例性非消耗性CD4抗體包括TRX1抗體，描 述于Frewin等的美國專利申請公開號2003/0108518，題為"TRX1抗體及其用 途"和Frewin等的美國專利申請公開號2003/0219403，題為"使靈長類動物耐受 抗原的組合物和方法"。這些抗體是人源化抗體，其包含經修飾的人抗體的恒 定區、人抗體的輕鏈和重鏈構架區以及衍生自小鼠單克隆抗體的輕鏈和重鏈 CDR。因此，在一類實施方式中，非消耗性CD4抗體是如圖1-4中任一 所示的TRX1抗體。該抗體可具有SEQ ID NO: 3所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 6所示重鏈氨基酸序列、SEQ ID NO: 9所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 12所示重鏈氨基酸序列、SEQ ID NO: 15所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 18 所示重鏈氨基酸序列、或SEQ ID NO: 21所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 24 所示重鏈氨基酸序列。在相關類型的實施方式中，所述抗體包含某抗體的CD4 結合片段，該抗體包含SEQ ID NO: 3所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 6所 示重鏈氨基酸序列、SEQ ID NO: 9所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 12所示 重鏈氨基酸序列、SEQ ID NO: 15所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 18所示重鏈氨基酸序列、或SEQ ID NO: 21所示輕鏈氨基酸序列和SEQ ID NO: 24所 示重鏈氨基酸序列。包含TRX1抗體一個或多個CDR的抗體也可用于該方法。因此， 在一類實施方式中，非消耗性CD4抗體包含圖1A所示輕鏈的CDR1 (SEQ ID NO: 25)、 CDR2 (SEQ ID NO: 26)或優選CDR3 (SEQ ID NO: 27)。所述抗體任 選包含圖1A所示輕鏈的CDR1、 CDR2和CDR3(SEQ ID NO: 25-27)。類似地， 在一類實施方式中，所述抗體包含圖1D所示重鏈的CDR1(SEQIDN0:28)、 CDR2 (SEQ ID NO: 29)或優選CDR3 (SEQ ID NO: 30)。所述抗體任選包含圖ID 所示重鏈的CDR1、 CDR2和CDR3(SEQ ID NO: 28-30)。在一類實施方式中， 所述抗體包含圖1A所示輕鏈的CDR1、 CDR2和CDR3以及圖ID所示重鏈的 CDR1、 CDR2和CDR3(SEQIDNO:25-30)。該抗體任選還包含圖1A、圖2A、 圖3A或圖4A所示輕鏈的FR1、 FR2和/或FR3，和/或圖1D、圖2D、圖3D 或圖4D所示重鏈的FR1、 FR2、 FR3和/或FR4。其他示例性抗體包括，但不限于，與TRX1抗體結合相同表位的抗 體(例如，如圖l-4中任一所示的抗體)。當所述對象是人時，所述抗體優選是人源化抗體或人抗體。顯然， 在治療非人哺乳動物時，任選改造所述抗體以適用于該動物，例如通過摻入合
適種類哺乳動物免疫球蛋白的構架和恒定區序列。該抗體任選是單克隆抗體、 完整抗體、抗體片段和/或天然抗體。該抗體任選具有減弱的效應功能，例如，與人IgGl相比，從而降 低其誘導補體活化和/或抗體依賴性細胞介導的細胞毒性的能力。例如，該抗體
與Fc受體的結合降低(或沒有)。類似地，該抗體可具有非糖基化的Fc部分。 該抗體任選為能夠結合FcRN的抗-CD4變體抗體。 狼瘡的治療 —方面，本發明提供通過給予治療有效量的抗-CD4非消耗性抗體 和/或第二藥劑來治療哺乳動物對象如人類對象的狼瘡的方法。所治療對象的狼 瘡通常是系統性紅斑狼瘡(SLE)、皮膚紅斑狼瘡(CLE)或狼瘡腎炎，但也可以是 其他形式的狼瘡，如腎外狼瘡、腦炎狼瘡、兒科狼瘡、非腎狼瘡、盤狀狼瘡或 脫發性狼瘡。要治療的狼瘡在治療開始時可以是早期、中期或晚期疾病。在治療狼瘡腎炎的實施方式中，所述狼瘡腎炎可以是I-VI級中的任何一種。例如， 要治療的狼瘡可以是膜增生性狼瘡腎炎(II級)或膜性狼瘡腎炎(V級)。狼瘡通常 是是增生性狼瘡腎炎(III級或IV級)，治療目的是使蛋白尿減輕、活動性尿沉 淀減輕和使腎功能正常或穩定。例如，蛋白尿(用本領域已知方法測量，例如，
24小時尿蛋白質測量，使用標尺(dipstick)或其他常規分析，例如本文實施例l 所述)可降低至少25%或至少50%，或甚至至少75%或至少90%，或者蛋白尿 可降至低于l g/天或低于500 mg/天。另一例子是，對象的尿蛋白質與肌酸酐 之比可降低至少25%或至少50%，或者該比例可降至低于1或低于0.5。類似 地，活動性尿沉淀(通過本領域已知方法監測，例如通過顯微觀察)可降低至少 25%、至少50%、至少75%或至少90%，或在治療開始后僅保留非活動性尿沉 淀(低于10紅血細胞/高倍視野且不存在紅細胞管形，優選低于5紅血細胞/高 倍視野可證實這一點)。 一方面，當治療狼瘡腎炎時，用所述組合開始治療后 所述對象顯示出蛋白尿減輕和/或活動性尿沉淀減輕。例如，對象尿液中的蛋白 質濃度可降至用所述組合開始治療前對象尿液中蛋白質濃度的75%以下，50% 以下，25%以下，或10%以下，或降至低于1 g/天或低于500 mg/天，和/或活 動性尿沉淀可降低至少25%、至少50%、至少75%或至少90%，或者在治療 開始后僅有非活動性尿沉淀(例如，低于IO、優選低于5紅血細胞/高倍視野)。
—類常規實施方式中，在該方法中將治療有效量的非消耗性CD4 抗體和至少一種第二化合物的組合給予對象以治療狼瘡。所述非消耗性CD4 抗體可以是本文所述的任何一種。所述第二化合物是通常用來治療狼瘡的化合
物，例如，護理或實驗性治療的標準品。示例性的第二化合物包括，但不限于， 細胞毒劑；免疫抑制劑；抗瘧藥如羥氯喹，氯喹，或喹納克林；化療劑；細胞 因子拮抗劑或抗體；生長因子；激素(例如，激素替代療法)；抗-激素療法；整 聯蛋白拮抗劑或抗體，例如，a4-整聯蛋白抗體或拮抗劑；B細胞表面標記拮抗 劑；B細胞表面標記的抗體(例如，CD20抗體，例如，利妥昔單抗，也稱為 Rituxan ); CD5、 CD28或CD40的抗體或阻斷劑；皮質激素，例如，甲潑尼 龍，潑尼松如低劑量潑尼松，地塞米松，或糖皮質激素(glucorticoid)，例如， 經關節注射，包括全身性皮質激素治療；DMARD;或上述任何一種的組合， 等等。也可參見美國專利申請公布2006/0024295和2003/0219403。
在一類實施方式中，上述第二化合物選自，例如，環磷酰胺，霉酚
酸酯、CTLA4-Ig和BR3-Fc。環磷酰胺是商品名為Cytoxan 。霉酚酸酯也稱為 CellCept 、 MMF或2-嗎啉代乙基(E)-6-(l,3-二氫-4-羥基-6-甲氧基-7-甲基-3-氧 -5-異苯并呋喃基)-4-甲基-4-己烯酸酯(1^乂611(^6)。 CTLA4-Ig是連接于經修飾的 人免疫球蛋白Fc部分的人細胞毒T-淋巴細胞-相關抗原4(CTLA-4)的胞外結構 域，例如，阿巴特賽普(abatacept)(布里斯托-美時施貴寶公司的€^11(^@)或 RG2077 (來普里基因公司(RepliGen))。示例性的a4-整聯蛋白抗體是那他珠單 抗(Tysabi^)。BAFF的可溶性拮抗劑BR3-Fc是一種包括人BR3胞外結構域(在 B細胞上發現的BAFF受體)和人IgGl Fc的融合蛋白(參見，例如，Vugmeyster 等，(2006) American Journal of Pathology 168: 476-489和Kayagaki等，(2002) Immunity 10: 515-524)。該組合中可任選包含第三種、第四種(等等)化合物； 一個例子是，皮質激素如甲潑尼龍和/或潑尼松可與CD4抗體和環磷酰胺一起 給予。 —實施方式中，對象之前從未用藥物，如免疫抑制劑，治療過狼瘡 和/或之前從未用抗-CD4抗體治療過。在另一實施方式中，對象之前用藥物治 療過狼瘡和/或之前用抗-CD4抗體治療過。在進一步的實施方式中，對象未患 類風濕性關節炎。再在進一步的實施方式中，對象未患多發性硬化癥。再在其 他實施方式中，對象未患狼瘡之外的自身免疫性疾病。"自身免疫性疾病"在文 中表示由個體自身的組織或器官或共分離物引起并針對這種組織或器官或共 分離物的疾病或病癥，或其表現形式或由此導致的癥狀。 一實施方式中，其指 由于B細胞產生與正常的身體組織和抗原反應的抗體而導致或加劇的癥狀。在 其他實施方式中，所述自身免疫性疾病涉及自身抗原(例如核抗原)的表位的特 異性自身抗體的分泌。 —實施方式中，用所述組合開始治療前，所述對象顯示出蛋白尿， 通過治療改善了這種蛋白尿。例如，治療開始前，對象顯示出的蛋白尿高于500 mg/天、高于1000mg/天、高于2000 mg/天或高于3500 mg/天；治療開始后， 蛋白尿可降低至少25%或至少50%，或者甚至至少75%或至少90%，或者蛋 白尿可降至低于1 g/天或低于500 mg/天，例如，通過24小時尿蛋白質測量測 得。
蛋白質與肌酸酐之比的降低也可類似地監測。尿蛋白質和肌酸酐水 平可通過本領域已知方法測量，例如，通過測量隨機尿液樣品的尿蛋白質與肌 酸酐之比。 一實施方式中，用所述組合開始治療前，所述對象顯示出蛋白質與 肌酸酐之比高于0.5、高于1或高于2;治療開始后，蛋白質與肌酸酐之比可能 被降至，例如，低于1(例如，對治療部分響應時)或低于0.5(例如，完全響應
時)。治療開始后，與治療前的值相比，蛋白質與肌酸酐之比可降低至少25% 或至少50%。 一實施方式中，用所述組合開始治療前，所述對象顯示出腎病范
圍的蛋白尿，即蛋白質與肌酸酐之比高于3;治療開始后，蛋白質與肌酸酐之
比被降至低于3，或者任選降低至少25%或至少50%或者降至低于2或低于1。例如，可通過監測補體水平、自身抗體水平、和/或整體疾病活性 來評價對用該組合治療狼瘡，包括狼瘡腎炎的反應。例如，補體水平(例如， C3、 C4和CH50)的正常化可表明治療成功。類似地，治療開始后，自身抗體 如抗-雙鏈DNA抗體、ANA和抗-Clq的水平可降低例如至少25。/。、至少50% 或至少75%。也可觀察到腎活檢的改善，從而表明治療成功。任選地，用所述組合開始治療前，所述對象顯示出腎病綜合征。可 通過本領域已知方法診斷腎病綜合征。 一些病征、癥狀或其他標志可用來診斷 腎病綜合征，其中包括24小時尿蛋白質高于3.5g/天，蛋白質與肌酸酐之比高 于3 ，低白蛋白血癥(血液中的白蛋白水平低)，尤其是眼、腳和手周圍的水腫(腫 脹)，和/或高膽固醇血癥(血液中膽固醇水平高)。本發明不限于腎病綜合征的這 些病征、癥狀或其他標志。用該組合治療可任選緩解腎病綜合征。例如，治療 開始后所述對象任選顯示出蛋白尿減輕到低于3.5 g/天，例如，低于3 g/天， 低于2g/天，低于lg/天，或甚至低于0.5g/天，和/或治療開始后蛋白質與肌 酸酐之比降至低于3，例如，低于2，低于l，或甚至低于0.5。用該組合治療對象對于對象有可觀益處，例如，可減輕不良副作用。 例如，與非消耗性CD4抗體組合治療所需的第二化合物(例如，環磷酰胺)的量 可以大大低于單用這第二化合物治療以緩解癥狀所需的量。例如，環磷酰胺可 產生嚴重副作用；因此迫切需要用較少藥物完成治療。 —方面，該方法包括用非消耗性CD4抗體和第二化合物治療對象 以減輕癥狀，然后繼續用非消耗性CD4抗體(不與第二化合物組合)治療對象以維持消退。例如，可用非消耗性CD4抗體和環磷酰胺、霉酚酸酯或CTLA4-Ig 的組合治療對象以減輕癥狀，然后單用非消耗性CD4抗體(即，不與環磷酰胺、 霉酚酸酯或CTLA4-Ig組合)治療以維持消退。使對象接觸最少的第二化合物的 方法也能降低副作用。在其他實施方式中，用非消耗性CD4抗體和第二化合 物治療對象以減輕癥狀，然后用除非消耗性CD4抗體之外的第二化合物或一 種或多種其他化合物繼續治療對象以維持消退。另一類常規實施方式還提供治療哺乳動物對象例如人的狼瘡腎炎 的方法。在該方法中，將治療有效量的非消耗性CD4抗體給予對象。用所述 抗體開始治療后，與治療開始前對象顯示出的蛋白尿和/或活動性尿沉淀水平相 比，所述對象顯示出腎功能改善，蛋白尿減輕，和/或活動性尿沉淀減輕。例如， 蛋白尿可降低至少25%、至少50%、至少75%或至少90%，或者蛋白尿可降 至低于1 g/天或低于500 mg/天；尿蛋白質與肌酸酐之比可降低至少25%或至 少50%，或者該比例可降至低于1或低于0.5;和/或活動性尿沉淀可降低至少 25%、至少50%、至少75%或至少90%，或者在治療開始后僅有非活動性尿沉 淀。所述非消耗性CD4抗體可以是本文所述的任何一種。 —實施方式中，對象之前從未用藥物治療過狼瘡腎炎和/或之前從 未用抗-CD4抗體治療過。在其他實施方式中，對象之前用藥物治療過狼瘡腎 炎和/或之前用抗-CD4抗體治療過。在其他實施方式中，本發明的非消耗性抗 -CD4抗體是唯一的給予對象以治療狼瘡腎炎的藥物。在其他實施方式中，本 發明的非消耗性CD4抗體是用來治療狼瘡腎炎的藥物之一。在進一步的實施 方式中，所述對象未患類風濕性關節炎。再在進一步的實施方式中，所述對象 未患多發性硬化癥。再在其他實施方式中，所述對象未患除狼瘡和/或狼瘡腎炎 之外的自身免疫性疾病。在一類實施方式中，該方法包括給予至少一種第二化合物，如本文 所述與非消耗性CD4抗體組合的化合物中的任何一種。例如，環磷酰胺、霉 酚酸酯、CTLA4-Ig或a4-整聯蛋白抗體可與非消耗性CD4抗體組合給予對象。 該組合中可任選包含第三種、第四種等化合物；例如，皮質激素如甲潑尼龍和 /或潑尼松可與CD4抗體和環磷酰胺一起給予。 —實施方式中，用非消耗性CD4抗體治療開始前，所述對象顯示出蛋白尿，用非消耗性CD4抗體開始治療后這種蛋白尿降低。例如，治療開
始前，對象顯示出的蛋白尿高于500 mg/天、高于1000 mg/天、高于2000 mg/ 天或高于3500mg/天；治療開始后，蛋白尿可降低至少25%、至少50%、至少 75%或至少90%，或者蛋白尿可降至低于1 g/天或低于500 mg/天。可類似地監 測到蛋白質與肌酸酐之比的降低。 一實施方式中，治療開始前，所述對象顯示 出蛋白質與肌酸酐之比高于0.5、高于1或高于2;治療開始后，蛋白質與肌酸 酐之比可降低至少25%或至少50%，或降至低于1或低于0.5。 一實施方式中， 用所述組合開始治療前，所述對象顯示出腎病范圍的蛋白尿，即蛋白質與肌酸 酐之比高于3;治療開始后，蛋白質與肌酸酐之比被降至低于3，或者任選降 低至少25%或至少50%或者降至低于2或低于1。任選地，治療開始前，所述 對象顯示出腎病綜合征。腎病綜合征可任選通過治療而緩解。例如，治療開始 后對象可任選顯示出蛋白尿減輕至低于3.5g/天，例如，低于3g/天，低于2g/ 天，低于lg/天，或者甚至低于lg/天或低于0.5g/天。 治療多發性硬化癥多發性硬化癥(MS)是一種人中樞神經系統(CNS)的炎性和脫髓鞘 變性疾病。它是一種世界性疾病，在美國有大約300， 000人患有該病；它主 要發生在年輕成年人中，約70%-80%患者的發病年齡在20-40歲之間(Anderson 等，Ann Neurology 31(3): 333-6 (1992); Noonan等，Neurology 58: 136-8 (2002))。 基于其臨床過程，磁共振成像(MRJ)掃描評價，和活檢及尸檢材料的病理學分 析，MS是一種異質性疾病(Lucchinetti等，Ann Neurol 47: 707-17 (2000))。該 病有多種表現，包括脊髓、腦干、顱神經、小腦、大腦和認知綜合征。大多數 MS患者有進行性殘疾，尤其是在未來25年中。在疾病發生后的15年內一半 的MS患者需要手杖來行走。MS是造成青年和中年神經殘疾的主要原因，直 到過去十年還不知道有益的治療方法。由于沒有特異性臨床發現，MS難以診 斷，因此需要開發高度結構化的診斷標準，其中包含一些技術進步，包括MRI 掃描、誘發電位和腦脊液(CSF)研究。所有診斷標準取決于不同時間發生的中 央白質內分散損傷的一般原理而不能由其他病因學如感染、血管疾病或其他自 身免疫性病癥來解釋(McDonald等，Ann Neurol 50: 121-7 (2001))。 MS具有四 種疾病模式復發性-間歇性(relapsing-remitting)MS (RRMS;發病時80%-85%的病例)，原發性進行性MS (PPMS;發病時10%-15%)，進行性復發性MS
(PRMS;發病時5%);和繼發性進行性MS (SPMS) (Kremenchutzky等，Brain 122 (第10部分)1941-50 (1999); Confavreux等，N Engl J Med 343(20): 1430-8 (2000))。預計50%的RRMS患者在10年內將發展成SPMS，并有多達90%的 RRMS患者將最終發展成SPMS (Weinshenker等，Brain 112 (第1部分)133-46 (1989》。本發明包括治療哺乳動物對象如人類對象的多發性硬化癥的方法。 一方面，該方法包括給予所述對象治療有效量的非消耗性CD4抗體。所述非 消耗性CD4抗體可以是本文所述的任何一種。在其他方面，該方法包括給予 所述對象治療有效量的非消耗性CD4抗體和至少一種第二化合物的組合。同 樣，所述非消耗性CD4抗體可以是本文所述的任何一種。所述第二化合物通常用來治療MS，例如，護理或實驗性治療的標 準品。示例性第二化合物包括，但不限于，細胞毒劑；免疫抑制劑(例如，環 磷酰胺)；B細胞表面標記拮抗劑；B細胞表面標記抗體；CD20抗體，例如， 利妥昔單抗，見US 20060051345); CD5、 CD28或CD40的抗體或阻斷劑；皮 質激素(例如，潑尼松)、CTLA4-Ig、 a4-整聯蛋白的抗體或拮抗劑如那他珠單抗 (Tysabri ),霉酚酸酯，抑制素，LFA-1或CD-lla的抗體或阻斷齊lj(參見Jardieu 等的美國專利申請公開號20050281817，題為"Method for treating multiple sclerosis(治療多發性硬化癥的方法)"，白介素-12抗體，(3干擾素(例如，干擾素 (3-la如Avonex⑧或Rebi產，或干擾素卩-lb如Betaseron ),醋酸格拉默 (Copaxone ), CD52抗體如阿侖單抗(CamPat1^)，白介素受體抗體如達珠單抗 (Zenapax ,白介素-2受體ot亞基抗體)，等等。在一類實施方式中，該方法包括用非消耗性CD4抗體和第二化合 物治療對象以減輕癥狀，然后用非消耗性CD4抗體(不與第二化合物組合)繼續 治療對象以維持消退。例如，對象可用非消耗性CD4抗體和醋酸格拉默的組 合治療，然后單用非消耗性CD4抗體治療以維持消退。在其他實施方式中， 對象可用非消耗性CD4抗體和第二化合物治療以減輕癥狀，然后用除非消耗 性CD4抗體之外的第二化合物或一種或多種通常用來治療MS的化合物繼續 治療。
—實施方式中，對象之前從未用藥物如免疫抑制劑治療過多發性硬 化癥和/或之前從未用抗-CD4抗體治療過。在其他實施方式中，對象之前用藥
物治療過多發性硬化癥和/或之前用抗-CD4抗體治療過。通常，所述對象對于多發性硬化癥的治療是適格的，即所述對象是 MS對象。出于本文的目的，這種MS對象是正在經歷、曾經經歷、或者可能 經歷多發性硬化癥的一種或多種病征、癥狀或其他標志的對象；已診斷出多發 性硬化癥的對象，例如無論是新診斷出的("新發生的"MS)、之前診斷出又重新 復發或惡化、之前診斷出并正在消退，等等；和/或有多發性硬化癥風險的對象。 鑒定患有多發性硬化癥或有患病風險的人時可任選通過血清、腦脊液(CSF)和/ 或MS損傷中CD20陽性B細胞水平升高，和/或采用檢測自身抗體的試驗來篩 選，定性并優選定量評估。示例性的這種與多發性硬化癥相關的自身抗體包括 抗-髓磷脂堿性蛋白(MBP)、抗-髓磷脂少突膠質神經細胞糖蛋白(MOG)、抗-神 經節苷脂和/或抗-神經絲抗體。可在對象的血清、腦脊液(CSF)和/或MS損傷內 檢測這種自身抗體。"升高的"自身抗體或B細胞水平在文中是指這種自身抗體 或B細胞的水平明顯超過未患MS的個體的水平。文中，要治療的MS包括原發性進行性多發性硬化癥(PPMS)、復 發性-間歇性多發性硬化癥(RRMS)、繼發性進行性多發性硬化癥(SPMS)和進行 性復發性多發性硬化癥(PRMS)。當治療開始時所述MS可以是早期、中期或晚 期疾病。表述"治療有效量"用于MS治療時是指抗體(或者抗體和至少第二化合 物的組合)的用量能有效預防、緩解或治療多發性硬化癥。這種有效量將通常 改善MS的病征、癥狀或其他標志，如降低復發率、預防殘疾、降低腦MRI 損傷的數目和/或體積、改善定時25-英尺行走(timed 25-foot walk)、延長疾病進 展時間(例如采用擴展的殘疾狀態量表(Expanded Disability Status Scale, EDSS)) 等等。 一方面，治療對象的脫髓鞘被降低。"原發性進行性多發性硬化癥"或"PPMS"的特征為疾病從其發作逐 步進展，根本沒有任何疊加的復發和消退。可能存在疾病活性平穩期，然后可 能有情況較好和較差的幾天(或幾周)。PPMS與RRMS和SPMS的不同之處在 于，它通常發生于30歲晚期或40歲早期，男性和女性同樣容易患病，且最初 的疾病活性通常出現在脊髓而非腦中。PPMS通常會遷移到大腦，但相比PRMS或SPMS不太可能損傷大腦區域；例如，PPMS患者不太可能產生認知問題。
PPMS是MS的一個亞型，在MRI掃描中最不可能顯示炎性(釓增強)損傷。該 病的原發性進行性形式占所有多發性硬化癥患者的10-15%。可按照McDonald 等，Arm Neurol 50: 121-7 (2001)的標準定義PPMS。本文治療的PPMS對象通 常是有可能或已經被診斷為PPMS的對象。"復發性-間歇性多發性硬化癥"或"RRMS"的特征為復發(也稱為惡 化)，期間可能出現新癥狀或者舊癥狀重新出現或惡化。復發之后是消退期， 期間患者會從復發的缺陷中完全或部分恢復。復發可持續數天、數周或數月， 而恢復可以是緩慢而逐漸的或者幾乎是瞬間的。絕大多數MS患者首先被診斷 為RRMS。這通常發生在它們20或30歲時，盡管早得多或者晚得多診斷出也 是已知的。患上這種MS亞型的女性是男性的兩倍。復發期間，髓磷脂一中樞 神經系統(CNS)白質區域內圍繞神經纖維(神經元)的保護性絕緣鞘一在炎性反 應中會被身體自身的免疫系統損傷。這造成許多明顯依賴于CNS損傷區域而 變化的神經學癥狀。復發后，炎性應答立即消失，CNS中一種特殊類型的神經 膠質細胞(稱為少突膠質細胞)引起髓鞘再生一使軸突周圍的髓磷脂鞘可能被修 復的一種過程。正是這種髓鞘再生可能造成癥狀消退。約50%的RRMS患者 在發病10年內轉變成SPMS。 30年后，這一數字上升到90%。任何時刻，該 病的復發性-消退形式約占所有MS患者的55%。"繼發性進行性多發性硬化癥"或"SPMS"的特征為臨床神經學損傷 穩定進展且有或沒有疊加的復發和最低消退及平穩。SPMS患者之前經歷過 RRMS期，這一時期將持續2-40年或更長。任何疊加的復發和消退隨時間而 減少。從疾病的繼發性進行性階段發作開始，相比RRMS階段殘疾開始更快地 產生，盡管在某些個體中這一過程也是十分緩慢的。10年后，50%的RRMS 患者將發展成SPMS。在25-30歲時，這一數字升高至90。/。。 SPMS中的炎性 損傷形成水平將低于RRMS，但疾病的總負荷會繼續進展。任何時刻，SPMS 占多發性硬化癥患者的約30%。"進行性復發性多發性硬化癥"或"PRMS"的特征為臨床神經學損傷 穩定進展并伴有疊加的復發和消退。復發之后立即是明顯的恢復，但兩次復發 之間癥狀會逐漸惡化。PRMS影響所有多發性硬化癥患者的約5%。 一些神經學家認為PRMS是PPMS的變化形式。 其他病癥的治療非消耗性CD4抗體，包括非消耗性CD4抗體和一種或多種其他化 合物的組合，也可用于除狼瘡或多發性硬化癥之外的疾病和病癥，例如，CD4+ T細胞造成的病理狀況。因此，本發明的一個方面提供治療哺乳動物對象如人 類對象的病癥的方法。該方法包括給予所述對象治療有效量的非消耗性CD4 抗體和至少一種第二化合物的組合。 一實施方式中，所述對象是組織移植物受 者，且要治療的病癥是移植排斥或移植物抗宿主病。能夠用該組合物治療的其 他病癥包括，但不限于，自身免疫性病癥或疾病如類風濕性關節炎、哮喘、銀 屑病、炎性腸病(例如，克羅恩病或潰瘍性結腸炎)和斯耶格倫綜合征。所述非消耗性CD4抗體可以是上述任何一種。該第二化合物可任 選是用來治療所述病癥，例如，護理或實驗性治療的標準品。示例性第二化合 物包括，但不限于，細胞毒劑；免疫抑制劑(例如，環磷酰胺)；B細胞表面標 記拮抗劑；B細胞表面標記抗體；CD20抗體，例如，利妥昔單抗，見US 20060051345); CD5、 CD28或CD40的抗體或阻斷劑；皮質激素(例如，潑尼 松)、CTLA4-Ig、 a4-整聯蛋白的抗體或拮抗劑如那他珠單抗(Tysabi^)，霉酚酸 酯，抑制素，LFA-1或CD-lla的抗體或阻斷齊U(參見Jardieu等的美國專利申請
發明者B·歐文 申請人:基因技術股份有限公司