專利名稱：：對溶血磷脂酸具有反應性的免疫衍生部分的制作方法對溶血磷脂酸具有反應性的免疫衍生部分政府資助本發明至少部分由美國政府依據撥款申請NCI2R44CA110298-2提供的基金資助。因此，美國政府在本文所述的發明中具有的某些權利。相關申請本專利申請要求2006年5月31日提交的美國臨時專利申請序列號60/810，185(代理人案號LPT-3100-PV)，2006年8月4日提交的美國臨時專利申請序列號60/835，569(代理人案號LPT-3100-PV2)和2007年4月16日提交的美國臨時專利申請序列號60/923，644(代理人案號LPT-3100-PV3)的優先權。出于任何和所有目的，將這些申請以引用方式整體并入本文。
背景技術：
：本發明涉及單克隆抗體，和生產抗免疫原抗體的方法，所述免疫原包括在人和/或動物疾病中起信號分子作用的生物活性脂分子。可用于本發明的一類具體的信號傳導生物活性脂質是溶血脂質(lysolipid)。尤其優選的信號傳導溶血脂質是鞘氨醇-l-磷酸(S1P)和多種溶血磷脂酸(LPA)。可以進一步修飾本發明的抗體以使它們適用于具體的動物物種(包括人)，而不引起中和免疫應答。通過遞送含有所述抗體(單獨地或與其他治療劑和/或治療組合)的藥物組合物，所述抗體、及其衍生物和變體可用于治療和/或預防多種疾病或障礙。此外，所述抗體還可用于檢測生物樣品中的生物活性信號傳導脂質，由此為許多目的提供有用的信息，所述目的包括但不限于疾病的診斷和/或預后，新治療形式的發現和開發，所述治療形式修飾具體靶向的6脂質的產生和/或作用。受本發明組合物作用的疾病或病況包括，但不限于以過度增殖、血管生成、炎癥、纖維化和/或細胞凋亡作為其部分潛在病理的疾病。
背景技術：
：1.介紹下述描述包括對理解本發明有用的信息。不承認任何所述信息為現有技術，或與目前要求保護的發明有關，或者任何明確引用或暗示引用的出版物為現有技術或甚至與目前要求保護的發明具體相關。2.背景A,生物活性信號傳導脂質目前認為脂質及其衍生物是醫學研究的重要革巴標，但并不僅僅為細胞膜中的簡單結構元件、增溶劑、維生素或激素的原料、或作為P-氧化、醣酵解或其他代謝過程的能量來源。尤其是，某些生物活性脂質發揮在動物和人疾病中重要的信號傳導介體的作用。雖然質膜的大多數脂質只起結構作用，但它們中的小部分涉及胞外刺激向細胞內的傳送。"脂類的信號傳導"指使用生物活性脂質作為第一或第二信使的許多細胞信號傳導通路中任一個，包括脂類信號分子與其自身特異性受體的直接相互作用。脂質信號傳導通路由多種胞外刺激激活，所述胞外刺激的范圍從生長因子到炎性細胞因子；并調節細胞命運決定，諸如細胞凋亡、分化和增殖。關于生物活性脂質信號傳導的研究為科學研究的熱門領域，因為越來越多的生物活性脂質被鑒定并且其作用被表征。生物活性脂質的實例包括衍生自花生四烯酸的類二十烷酸(包括類二十烷酸代謝物，諸如HETE、大麻素(cannabinoids)、白三烯、前列腺素、脂氧素、環氧二十碳三烯酸和異類二十烷酸)、非-類二十烷酸大麻素介體、磷脂及其衍生物(諸如磷脂酸(PA)和磷脂酰甘油(PG)和心磷脂)以及溶血磷脂諸如溶血磷脂酰膽堿(LPC)和多種溶血磷脂7酸(LPA)。生物活性信號傳導脂質類介體還包括鞘脂類，諸如神經酰胺、神經酰胺-l-磷酸酯、鞘氨醇、二氫鞘氨醇、鞘氨醇磷脂酰膽堿(SPC)和鞘氨醇-I-磷酸(SIP)。鞘脂類及其衍生物代表一組對重要的細胞過程具有多效效應的胞外和胞內信號傳導分子。生物活性信號傳導脂質的其他實例包括磷脂酰肌醇(PI)、磚脂酰乙醇胺(PEA)、二脂酰甘油(DG)、硫苷脂、神經節苷脂和腦苷脂。如預期的，生物學脂質(即，天然存在特別是存在于活的有機體內的脂質)通常是非-免疫原性的或非常弱的免疫原性的。就其本身而言，傳統上認為脂質是對于基于抗體的治療和診斷/預后方法的弱靶標。本文包括的一篇文獻報導了一種單克隆抗體，其靶向與栽體蛋白偶聯的磷脂酰絲氨酸(PS)的衍生形式。磷脂酰絲氨酸是質膜氨磷脂。膜脂質側的喪失，特別是磷脂酰絲氨酸在細胞表面的出現，導致改.變的表面性質的表達，所述表面性質其調節細胞功能并影響細胞與其環境的相互作用[ZwaalandSchroit，(1997)Blood，89:1121-1132〗。例如，在細胞凋亡過程中PS從細胞膜的內葉(其正常位置)重新分配到外葉。Diaz，Balasubramanian和Schroit[Bioconj.Chem.(1998)9:250-254]公開了引起針對PS的特異性免疫應答的脂質抗原的制備。PS與蛋白載體(BSA)通過脂質的脂肪酰基側鏈的共價偶聯保護PS頭基團作為表位的完整性。Schroit(美國專利6，300，308、美國專利6，806,354)公開了與磷脂酰絲氨酸(PS)或磷脂酰膽堿(PC)/多肽或PS/多肽綴合物特異性結合的抗體，所述抗體通過給動物施用PS/多肽綴合物或PC/多肽綴合物來制備。還公開了PS、PC/多肽或PS/多肽綴合物的檢測方法。還公開了通過給動物施用含有PS/多肽偶聯組合物的藥學組合物來制備特異性結合PS的抗體的方法，以及在施用了所述綴合物的動物中治療癌癥的方法，即，作為癌癥疫苗。還公開了通過p2-糖蛋白1/脂質復合物(即，非共價相連的脂質和糖蛋白)免疫動物來引入自身免疫性以用于癌癥治療。作者斷言若干自身免疫應答針對P2-糖蛋白I/脂復合物(引用Schousboe，(1979)Biochim.Biophys.8Acta,579:396-408)，因此抗-復合物應答的產生可能代表在癌癥治療中的實質性突破。Thorpe，Schroit等人描述了單克隆抗體(3G4)，其在血清或血清蛋白P2-糖蛋白1。2-GPI)存在下結合陰離子磷脂。Luster等人，J.Biol.Chem.281:29863-29871。首先描述為特異性耙向陰離子磷脂的抗體，其定位于小鼠腫瘤中的血管內皮細胞。Ran等人(2005)Clin.CancerRes.11:1551-1562。隨后，顯示所述抗體與在腫瘤血管上的陰離子磷脂和P2-GPI的復合物結合，使得與PS結合的抗體依賴于P2-GPI。Huang等人(2005)CancerRes.65:4408-4416。所述抗體通過P卩GPI的二聚化來增強P2-GPI與內皮細胞的結合。事實上，人造P2-GPI二聚體甚至能在抗體不存在時與內皮細胞膜結合。Luster等人，J.Biol.Chem.281:29863-29871。3G4的人源化形式(Tarvacin，Bavituximab)在臨床試驗中用于治療癌癥和病毒病。Thorpe等人(W02004/006847)公開了與PS結合并且與抗體3G4竟爭結合PS的抗體、其片段或免疫綴合物。Thorpe等人(US6，818，213、US6，312，294和US6,783,760)公開了與氨基磷脂結合并具有連接的治療劑的治療性綴合物。Baldo等人(美國專利5，061，626)公開了血小板活化因子(PAF)的抗體，用于生產抗體的PAF類似物和使用PAF或PAF類似物的免疫測定。PAF是膽堿縮醛磷脂，其中甘油的C-2(sn2)位置用乙酰基而不是長鏈脂肪酸進行酯化。Vielhaber等人報導表征了兩種據認為對神經酰胺具有特異性的抗體試劑，一個是IgM-富集的多克隆小鼠血清和另一個是IgM單克隆抗體。發現所述單克隆抗體對鞘磷脂具有特異性并且發現抗血清在納摩爾范圍內與多種神經酰胺類反應(Vielhaber,G.等人，(2001)Glycobiology11:451-457)。Krishnamurthy等人最近報導了抗神經酰胺的兔IgG的制備，還引證了商購可獲得的抗神經酰胺抗體試劑的缺乏(J.LipidRes.(2007)48:968-975)。B.溶血脂質由于在一個或兩個可能的乙酰化位置沒有乙酰基，溶血脂質為含有極性頭基團和單一烴支架的低分子量脂質。相對于在sn-3的極性頭基團，所述烴鏈可以在sn-2和/或sn-1位置(術語"溶血的(lyso)"最初涉及溶血，已經被IUPAC重新定義為指脫酰作用)。參見"NomenclatureofLipids,www.chem.qtnul.ac.uk/iupac/lipid/lipln2.html。這些脂質代表信號傳導的生物活性脂質，和其生物學和醫學的重要亮點，其可以通過靶向用于治療、診斷/預后或研究目的的脂信號傳導分子來實現(Gardell，等人(2006)，TrendsinMolecularMedicine,vol12:65-75)。醫學上重要的溶血脂質的兩個具體實例為LPA(甘油支架)和S1P(鞘氨醇類支架)。其他溶血脂質包括鞘氨醇、溶血磷脂酰膽堿(LPC)、鞘氨醇磷脂酰膽堿(溶鞘磷脂)、神經酰胺、神經酰胺-l-磷酸酯，二氫鞘氨醇(二氫鞘氨醇(dihydrosphingosine))、二氫鞘氨醇-l-磷酸和N-乙酰-;f申經酰胺-l一磷酸酯。相反，在C-1(snl)含有O-烷基(-0-CH2_)或O-烯基醚且在C-2含有酰基的縮醛磷脂，不屬于溶血脂質類。所選的LPA、SIP和二氫SIP的結構表示如下。LPA(20:4)LPA(16:0)LPA(18:2)LPA(18:1)LPA(18:0)S1PDihydo~S1PLPA不是一個單一的分子實體，而是具有多種長度和多種飽和度的脂肪酸的內源性結構變體的集合(Fujiwara，等人(2005)，JBiolChem，vol.280:35038-35050)。LPA的結構支架衍生自基于甘油的磷脂諸如磷脂酰膽堿(PC)或磷脂酸(PA)。在溶血鞘脂諸如SIP的情況下，神經酰胺支架在sn-2處脂肪酸缺失。S1P、二氫SIP(DHS1P)和鞘氨醇磷脂酰膽堿(SPC)的支架結構基于衍生自神經鞘磷脂的鞘氨醇。LPA和SIP通過結合同一類的多跨膜區G蛋白偶聯受體(GPCR)來調節多種細胞信號傳導通路(ChunJ，RosenH(2006),CurrentPharmDes，vol.12:161-171,andMoolenaar，WH(1999)，ExperimentalCellResearch,vol.253:230-238)。所述SIP受體被命名為SIP,、S1P2、S1P3、SlP4和SlPs(以前為EDG-l、EDG-5/AGR16、EDG-3、EDG-6和EDG-8)和所述LPA受體被命名為LPA,、LPA2、LPA3(以前為EDG-2、EDG-4和EDG-7)。已經鑒定該家族的第四個LPA受體為LPA(LPA4)，并且也已經報導了這些溶血磷脂的其他推定受體。C.溶血磷脂酸(LPA)早就知道LPA為真核和原核細胞中磷脂生物合成的前體，但是LPA僅僅在最近才以信號傳導分子出現，其由激活的細胞(特別是血小板)快速產生和釋放，通過作用于特定的細胞-表面受體來影響耙細胞(例如，參見Moolenaar,等人(2004)，BioEssays，vol.26:870-881，和vanLeewen等人(2003),BiochemSocTrans,vol31:1209-1212)。除了在內質網中被合成和加工成更復雜的磷脂外，LPA可以通過水解細胞激活后預先存在的磷脂來生成；例如，所述sn-2位置通常因脫酰作用而缺失脂肪酸殘基，只留下sn-1羥基酯化為脂肪酸。此外，由于許多腫瘤類型上調自體毒素，所以生產LPA的一個關鍵的酶，即自體毒素(溶血PLD/NPP2),是致癌基因的產物(BrincHey，D.(2004)，JCellBiochem，vol.92:900-12)。已經報導人血漿和血清中的LPA濃度，包括使用敏感和特異性的LC/MS程序進行的測定(Baker，等人(2001)，AnalBiochem，vol292:287-295)。例如，20078在允許保持在25。C一個小時的新鮮制備的人血清中，估計LPA濃度約為1.2pM，其中LPA類似物16:0、18:1、18:2和20:4為主要的種類。類似地，在允許保持在25。C一個小時的新鮮制備的人血清中，估計LPA濃度約為0.7pM，其中18:1和18:2的LPA為主要的種類。LPA影響廣泛范圍的生物應答，從誘導細胞增殖、刺激細胞遷移和突觸回縮、間隙連接閉合、甚至粘液菌趨化性(Goetzl，等人(2002)，ScientificWorldJournal,vol.2:324-338)。隨著對越來越多的細胞系統進行了LPA應答性測試，關于LPA生物學的知識不斷增長。例如，現在知道，LPA除了刺激細胞生長和增殖外，LPA促進在創傷修復和再生中作為重要事件的細胞張力和細胞表面的纖維連接蛋白(fibronectin)結合(Moolenaar，等人(2004)，BioEssays，vol.26:870-881)。最近，抗-凋亡活性也歸因于LPA，最近還報導了過氧化物酶體增殖物受體Y為LPA的受體/靶標(Simon，等人(2005)，JBiolChem，vol.280:14656-14662)。已經證明LPA為抗體生成的困難耙標，雖然在科學文獻中有關于生產抗LPA的多克隆鼠抗體的報導(Chen等人(2000)MedChemLett,vol10:1691-3)。D.鞘氨醇-l-磷酸SIP為細胞增殖的介體并通過激活生存通路來防止細胞凋亡(Maceyka，等人(2002)，BBA，vol.1585:192-201,和Spiegel,等人(2003)，NatureReviewsMolecularCellBiology,vol.4:397-407)。提議CER/SPH水平和SIP之間的平衡提供了可變電阻機制(rheostatmechanism),其決定纟田胞是否被定向至死亡通路或被保護免于細胞凋亡。可變電阻機制的關鍵調節酶為鞘氨醇激酶(SPHK),其作用是將促死亡的生物活性信號傳導脂質(CER/SPH)轉變為促生長的S1P。S1P有兩種命運S1P被S1P裂解酶(一種將SIP切割為磷酸乙醇胺和十六醛的酶)降解，或較不常見地，被SIP磷酸酯酶水解為SPH。12SIP被大量生產并儲存于血小板中，血小板含有高水平的SPHK并缺少降解S1P的酶。當血小板被激活時，分泌S1P。此外，其他細胞類型，例如肥大細胞還被認為能分泌S1P。一旦S1P被分泌，認為其以高濃度被結合在載體蛋白(諸如血清白蛋白和脂蛋白)上。發現血漿中S1P以高濃度存在，已經報導其濃度為0.5-5^M。還暗示了S1P的細胞內作用(例如，參見SpiegelS,KolesnickR(2002)，Leukemia,vol.16:1596-602;SuomaUinen，等人(2005)，AmJPathol,vol.166:773-81)。細胞表面SIP受體的普遍表達使得SIP影響細胞應答的不同系列，包括增殖、粘連、收縮、運動力、形態發生、分化和存活。應答的系列似乎取決于細胞和組織系統內的SIP受體的重疊的或截然不同的表達模式。此外，最近已經證實SIP和生長因子信號通路之間的串擾，后者包括血d、板衍生生長因子(PDGF),血管內皮生長因子(VEGF)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)(例如，參見Baudhuin,等人(2004)，FASEBJ，vol.18:341-3)。涉及S1P的多種細胞過程的調節尤其對神經元信號傳導、血管張力(vasculartone)、創傷愈合、免疫細胞運輸(trafficking)、繁殖和心血管功能等等具有特別的影響。這些系統中SIP的內源性水平的改變可能具有有害的影響，引起若干病理生理學病癥，包括癌癥、心力衰竭、以及傳染性和自身免疫性疾病。最近Sabbadini博士發明的治療癌癥的新方法涉及降低SIP的生物有效的胞外水平(單獨或與常規抗癌治療組合)，包括施用化療試劑，諸如蒽環類。為此，描述了對S1P具有特異性的抗體的制備。例如，參見共同擁有的美國專利申請序列號10/820，582。能選擇性地從血清中吸收SIP的所述抗體作為中和胞外SIP的分子海棉起作用。還參見共同擁有的美國專利號6，881，546和6，858，383以及美國專利申請序列號10/028,520、10/029，372和11/101，976。因為還證明SIP是促-血管生成的，所以對抗體效力的一個額外好處是其通過限制血液供應來使生長中的腫瘤缺乏營養和氧的能力。關于抗-SlP方法尤其特別的是，雖然已經提出基于鞘脂的抗癌策略，其靶向鞘脂代謝途徑的關鍵酶，諸如SPHK,但之前沒有強調脂質介體S1P本身，大部分是由于直接減輕該脂質靶標的困難，尤其是第一產生抗脂質耙標(諸如SIP)的抗體的困難，其次檢測實際上針對S1P靶標而產生的抗體的困難。如已經注意到的，關于針對其他脂質靶的治療和診斷方法，存在類似的困難。本發明通過提供可專利的方法，尤其是通過提供抗生物活性脂質的單克隆抗體的產生來提供有效的解決這兩個困境的方法。3.定義在詳細描述本發明前，對在本發明上下文中使用的若干術語進行定義。除了這些術語外，如果需要在說明書的其他地方對其他術語進行定義。除非本文中另有明確定義，在本說明書中使用的術語具有其
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上公認的含義。"抗-S1P抗體"指結合S1P的任何抗體或抗體衍生的分子。"生物活性脂質"指脂信號傳導分子。生物活性脂質與結構脂質(即，膜結合磷脂)不同在于它們介導胞外和/或胞內信號傳導并因此涉及通過調節分化、遷移、增殖、分泌、存活和其他過程來控制許多細胞類型的功能。在體內，可以在細胞外液中發現生物活性脂質，其中它們可以與其他分子例如血清蛋白(諸如白蛋白和脂蛋白)復合，或"游離"形式(即，不與其他分子種類復合)。作為胞外介體，一些生物活性脂質通過激活膜結合的離子通道或GPCR或酶或因子來改變細胞信號傳導，其反過來又激活導致細胞功能或存活改變的復雜信號傳導系統。作為胞內介體，生物活性脂質通過直接與胞內成分，諸如酶、離子通道或結構元件(諸如肌動蛋白)直接相互作用來起作用。生物活性脂質的代表性實例包括LPA和S1P。生物活性脂質的實例包括鞘脂諸如神經酰胺、神經酰胺-l-磷酸鹽、鞘氨醇、二氫鞘氨醇、鞘氨醇磷脂酰膽堿(SPC)和鞘氨醇-1-磷酸(S1P)。鞘脂及其衍生物和代謝物的特征在于鞘氨醇類支架(衍生自神經鞘磷脂)。鞘脂及其衍生物和代謝物代表對重要的細胞過程具有多效效應的一組胞外和胞內信號傳導分子。它們包括硫苷脂、神經節苷脂和腦苷脂。其他生物活性脂質的特征在于基于甘油的支架；例如溶血磷脂，諸如溶血磷脂酰膽堿(LPC)和多種溶血磷脂酸(LPA)，以及磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰乙醇胺(PEA)、磷脂酸、血小板活化因子(PAF)、心磷脂、磷脂酰甘油(PG)和二脂酰甘油(DG)。然而其他生物活性脂質衍生自花生四烯酸；這些包括類二十烷酸(包括類二十烷酸代謝物諸如HETE、大麻素、白三烯、前列腺素、脂氧素、環氧二十碳三烯酸和異類二十烷酸)，非-類二十烷酸大麻素介體。還可以根據本發明使用其他生物活性脂質，包括其他磷脂及其衍生物。在本發明的一些實施方案中，與基于鞘氨醇的生物活性脂質(具有鞘氨醇類支架的那些，諸如鞘氨醇和S1P)相反，靶向基于甘油的生物活性脂質(具有甘油衍生支架的那些，諸如LPA)以產生抗體是優選的。在其他實施方案中，靶向花生四烯酸-衍生生物活性脂質以產生抗體是想要的，且在其他實施方案中優選花生四烯酸-衍生的和甘油-衍生生物活性脂質，但不優選鞘氨醇類-衍生生物活性脂質。在本發明上下文中，所述花生四烯酸-衍生的和甘油-衍生生物活性脂質均可以指"非-鞘氨醇類生物活性脂質"。特別排除在根據本發明的生物活性脂質種類以外的是磷脂酰膽堿和磷脂酰絲氨酸，以及其最初作為細胞膜內葉和/或外葉的結構成員其作用的代謝物和衍生物。"生物標記物"是體內具有特定分子特征的特異性生化藥劑，所述特征使其可用于測量疾病進展或治療效果。例如，S1P為用于某些過度增殖和/或心血管病況的生物標記物。"栽體，，指適用于與半抗原偶聯的部分，由此為半抗原賦予免疫原性。載體的一類代表性的非限制性種類為蛋白質，其實例包括白蛋白、匙孔血藍蛋白、血凝素(hemaglutanin)、破傷風毒素和白喉類毒素。在本領域中，已知根據本發明使用的其他載體的類別和實例。比發明的應用。術語"化療試劑"指抗癌和其他抗增殖試劑。簡單地說，"化療試劑"指意圖破壞細胞和組織的化學試劑。所述試劑包括但不限于DNA破壞試劑和抑制MA合成的試劑蒽環類(多柔比星、柔紅霉素donorubicin、表柔比星epirubicin)、烷基化試劑(苯達莫司汀、白消安、卡鉑、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、環磷酰胺、達卡巴嗪、六曱蜜胺、異環磷酰胺、洛莫司汀、氮芥、美法侖、米托坦、絲裂霉素、哌泊溴烷、丙卡巴肼、鏈佐星、塞替派和曲他胺)、鉑衍生物(順鉑、卡鉑、順二氨二氯基鉑)、和拓樸異構酶抑制劑(Camptosar);抗-代謝物諸如卡培他濱、氯脫氧腺苷、阿糖胞苷(cytarabine)(及其活化形式，ara-CMP)、阿糖胞苦(cytosinearabi謂ide)、達卡巴漆、氟尿苦、氟達拉濱、5-氟尿嘧啶、5-DFUR、吉西他濱、羥基脲、6-巰嘌呤、曱-氨蝶呤、噴司他丁、三甲氧蝶呤、6-硫烏嘌呤)；抗血管生成劑(貝伐珠單抗、沙利度胺、舒尼替尼、來那度胺、TNP-470、2-曱氧雌二醇、雷珠單抗、索拉非尼、厄洛替尼、硼替佐米、培加他尼、內皮抑制素)；血管干擾劑(類黃酮/黃酮、DMXAA、康普瑞汀衍生物諸如CA化P、ZD6126、AVE8062A等)；生物制劑諸如抗體(赫賽汀、阿瓦斯丁、Panorex、Rituxin、澤娃靈(Zevalin)、麥羅塔(Mylotarg)、坎帕斯(Campath)、百克沙(Bexxar)、愛必妥(Erbitux));內分泌治療芳香酵4中制劑(4一hydroandrostendione、依西美坦、氛魯米特、阿那曲唑、來曲唑(letozole))、抗雌激素(他莫昔芬、托瑞米芬(Toremifine)、Raoxifene、氟維司群(Faslodex))、類固醇諸如地塞米松；免疫調節劑細胞因子，諸如IFN-P和IL2)，整合蛋白的抑制劑，其他粘附蛋白和基質金屬蛋白酶)；組蛋白去乙酰化酶抑制劑，如N-辛二酰苯胺異羥將酸；信號傳導抑制劑諸，如酪氨酸激酶抑制劑如伊馬替尼(Gleevec);熱休克蛋白抑制劑，如17-N-烯丙基氨基-17-去甲氧基格爾德霉素；類視黃醇，諸如所有的反式視黃酸；生長因子受體或生長因子自身的抑制劑；抗有絲分化化合物和/或微管解聚試劑，諸如紫杉類(紫杉醇、多西他賽、泰索帝、BAY59-8862)、16諾維本、長春堿、長春新堿、長春地辛和長春瑞濱；抗炎試劑，諸如COX抑制劑和細胞周期調節劑，例如，檢查點調節劑和端粒酶抑制劑。術語"聯合治療"指涉及提供至少兩種不同治療以獲得需要的治療效果的治療方案。例如，聯合治療可能涉及施用兩種或多種化學上不同的活性成分，例如快速作用的化療試劑和抗-脂質抗體。備選地，聯合治療可能涉及施用抗-脂質抗體和/或一種或多種化療試劑，單獨或與其他治療(諸如放射療法和/或手術)一起遞送。在施用兩種或多種化學上不同的活性成分的情況下，應理解活性成分可以作為同一組合物的部分或作為不同的組合物被施用。當作為單獨的組合物施用時，可以同時或不同時，通過相同或不同的途徑，使用相同或不同的給藥方案來施用包含不同的活性成分所組合物，均根據具體情況要求和由主治醫師來決定。類似地，當一種或多種抗脂質抗體種類，例如抗-LPA抗體，單獨或與一種或多種化療試劑偶聯，例如與放射和/或手術組合時，所述藥物可以在手術或放射治療之前或之后遞送。"衍生生物活性脂質綴合物"指與載體共價綴合的衍生生物活性脂質。所述載體可以是蛋白分子或可以是諸如聚乙二醇、膠體金、佐劑或有機硅珠之類的部分。衍生生物活性脂質綴合物可用作免疫原以產生根據本發明的抗體應答，并且相同或不同的生物活性脂質綴合物可用作檢測試劑以檢測由此產生的抗體。在一些實施方案中，當用于檢測時，所述衍生生物活性脂質綴合物與固相載體相連。"表位"或"抗原決定蔟"指與衍生自抗體的抗體抗原結合部分反應的抗原部分。"半抗原"是非-免疫原性的物質，但能與抗體或衍生自抗體的抗原結合部分反應。換句話說，半抗原具有抗原性但沒有免疫原性。術語"過度增殖障礙"指與不受控制的增殖細胞相關的疾病和障礙，包括但不限于導致癌癥和良性腫瘤的器官和組織細胞的不受控制生長。與內皮細胞相關的過度增殖障礙能導致血管生成疾病，諸如血管瘤、子宮內膜異位、肥胖癥、年齡相關性黃斑變性和多種視網膜病，以及引起再狹窄(由動脈硬化癥治療中支架引起的)的內皮細胞和平17滑肌細胞的增殖。涉及成纖維細胞的過度增殖障礙(即，纖維發生)包括但不限于過度疤痕形成(即，纖維化)障礙，諸如年齡相關性黃斑變性，與心肌梗塞相關的心臟重構和心力衰竭，諸如通常由手術或損傷、疤痕瘤和纖維瘤以及支架引起的過度創傷愈合。"免疫原"是能誘導特異性免疫應答，特別是在已經施用所述免疫原的動物中誘導抗體應答的分子。在本發明中，免疫原是與載體綴合的衍生生物活性脂質，即"衍生生物活性脂質綴合物"。所述用作免疫原的衍生生物活性脂質綴合物可用作捕獲材料以檢測應答免疫原而產生的抗體。因此，所述免疫原還可用做檢測試劑。備選地，所述用作捕獲材料的衍生生物活性脂質綴合物可以具有不同于免疫原中的接頭和/或載體部分。"抑制"，特別在生物現象的情況下，指降低、壓制或延遲。例如，導致"抑制腫瘤產生"的治療可以指腫瘤完全沒有形成，或與未治療的對照相比它們形成得更慢，或在數量上更少。在本發明的上下文中，"液體組合物，，指以其如制造商為最終使用者(即，醫生或護士)提供的填滿形式或成品形式，與固體相反為液體或溶液的組合物。在此處，"固體"指不是液體或溶液的組合物。例如，固體包括通過凍干法、冷凍-干燥、沉淀和類似方法制備的干燥組合物。"單一療法"指基于遞送一種治療有效的化合物的治療方案，無論以隨時間的單一劑量或若干劑量施用。"瘤形成"指異常和不受控制的細胞生長。"贅生物"或腫瘤是異常的、無節制的和紊亂的細胞生長的增殖，并且通常指癌癥。贅生物可以是良性或惡性的。如果贅生物具有破壞性生長、侵襲和轉移的性質，其是惡性的或癌性的。侵襲指贅生物通過浸潤或破壞周圍組織的局部擴散，通常突破限定組織邊界的基底膜，由此經常進入機體的循環系統。轉移通常指腫瘤細胞通過淋巴或血液循環系統的散布。轉移還指腫瘤細胞通過經由漿膜腔、或蛛網膜下腔或其他空間的直接擴展的遷移。通過轉移過程，胂瘤細胞遷移至身體的其他區域在遠離最18初出現地點的地方形成的贅生物。根據本發明"可專利的"的組合物、方法、機器或制品指在進行分析時，所述主題滿足所有關于專利性的法定要求。例如，關于新穎性，非顯而易見性等，如果后來的研究揭露一個或多個權利要求包括一個或多個能否定新穎性，非顯而易見性等的實施方案，所述由"可專利的，，實施方案的定義限制的權利要求，特別排除非專利性實施方案。其從屬權利要求也被理解為提供最寬的合理范圍，同時保持其有效性。此外，以如下方式理解權利要求，(1)保持其合理性和(2)如果在修改一個或多個專利性的法定要求的情況下，或如果評估從提交利公布時一個或多個從屬權利要求的合;里性受到質疑的情;兄下:'提供最寬的合理解釋。術語"藥學可接受的鹽"指保留本發明試劑和化合物的生物效力和性質的鹽，其不是生物學或其他方面不良的。在許多情況下，本發明的試劑和化合物能由于帶電基團(例如，帶電氨基和/或羧基或與其類似的基團)的存在而形成酸式和/或堿式鹽。藥學可接受的酸加成鹽可以由無機和有機酸制備，而藥學可接受的堿可以由無機和有機堿制備。關于藥學可接受的鹽的綜述(參見Berge，等人(1977)J.Pharm.Sci.，vol.66，1-19)。"大量"指多于一個。術語"單獨的"、"純化的"、"分離的"等指包含在裝樣品的容器中的一個或多個樣品成分為，或已經物理上與該容器中存在的一個或多個其他樣品成分分開或在存在于該管中的一個或多個其他樣品成分存在下稀釋。在分離或純化步驟中除去或稀釋的樣品成分，包括化學反應產品、不反應的化學試劑、蛋白質、碳水化合物、脂質和非結合的分子。術語"種類"在本文的多種情況下使用，例如，化療試劑的具體種類。在每種情況下，該術語指在具體情況下所指的那類化學上不同的分子的群體。"特異性相連"、"特異性結合"等指兩個分子間特異性的、非隨機的相互作用，所述相互作用取決于允許分子間合適的化學或分子相互作用的結構、疏水/親水、和/或靜電特性的存在。可以說抗體"結合"其耙抗原的表位或與其耙抗原的表位具有"反應性"(或等效地，針對其耙抗原的表位具有反應性)。在本領域中，抗體通常被表述為"抗"或"針對"其抗原以簡單表示抗體與抗原結合。此外，"穩定的"指兩個分子(例如，肽和TLR分子)之間的相互作用足夠穩定，得以維持所述分子用于所需的目的或操作。例如，肽和TLR分子之間"穩定的，，相互作用指其中所述肽開始并維持與TLR分子的結合以足夠長的時間以實現所需的效果。"受試者"或"患者"指需要能被本發明的分子影響的治療的動物。可以根據本發明治療的動物包括脊推動物，哺乳動物(諸如牛科、犬科、馬科、貓科、綿羊科、豬科、和靈長類(包括人和非人靈長類)動物)是特別優選的實例。"替代標記物(surrogatemarker)"指對體內生物活性的實驗量度，其間接指示對疾病狀態的治療效果。用于過度增殖和/或心血管病況的替代標記物的實例包括SPHK和/或S1PR。"治療有效量"(或"有效量")指當給需要所述治療的受試者施用時，足以實現治療的活性成分(例如本發明的試劑)的量。因此，本領域的普通技術人員可以容易地確定本發明組合物的治療有效量。在癌癥治療的情況下，"治療有效量"指這樣一個量，其在與癌細胞存活或代謝相關的一個或多個參數中產生客觀上可測量的變化，所述參數包括與具體癌癥相關的一個或多個基因表達的增加或減少，腫瘤負荷的降低，癌細胞的裂解，生物樣品中一種或多種癌細胞死亡標記物(例如，活檢和體液(諸如全血、血漿、血清、尿等)的等分試樣)的檢測，誘導細胞凋亡或其他細胞死亡通路的誘導等。當然，所述治療有效量根據具體的受試者和被治療的病況、受試者的體重和年齡、疾病狀況的嚴重程度、所選的具體化合物、采取的給藥方案、施用時間、施用方式等而變化，所有這些均能被本領域的普通技術人員容易地確定。可以理解在聯合治療的情況下，具體活性成分的治療有效量不同于以單一療法(即，僅采用一種化學實體作為活性成分的治療方案)施用時，該活性成分的治療有效量。術語"治療"或"處理"指疾病或障礙的任何處理，包括預防疾病或障礙或保護免受疾病或障礙(即，使得臨床癥狀不出現)；抑制疾病或障礙(即，停滯、延遲或壓制臨床癥狀的出現；和/或減輕疾病或障礙(即，引起臨床癥狀的衰退))。應當理解，不是一直都能區別"預防"和"壓制"疾病或障礙，因為最終誘發事件是未知的或潛在的。因此，應當理解術語"預防"組成一類包括"預防"和"壓制"的"治療"。因此所述術語"保護"也包括"預防"。術語"治療方案"指使用化療試劑和細胞毒素劑、放射療法、手術、基因療法、DNA疫苗和療法、siRNA療法、抗血管生成療法、免疫療法、骨髓移植、適體和其他生物制劑(諸如抗體和抗體變體)、受體誘騙和其他基于蛋白的治療劑對疾病或障礙的任何治療。發明概述本發明的目的是提供可專利的組合物，和用于產生與生物活性脂質反應的抗體(尤其是單克隆抗體)及其衍生物的方法，所述生物活性脂質與動物尤其是哺乳動物(特別是人)中的疾病過程有關、相關或以其他方式與其有牽連。因此，本發明的一個方面涉及用于生產可專利免疫原的可專利中間體，所述免疫原可用于產生可專利的對生物活性脂質具有反應性的抗體。這類可專利的化合物包括衍生生物活性脂質，其各自包含具有極性頭基團和至少一個烴鏈的生物活性脂質，其中在烴鏈中的碳原子用保護或未保護的懸垂反應基團進行衍生[即，巰基(硫醇)、羧酸基、氰基、酯、羥基、鏈烯基、炔基、酰基氯或卣素原子]。代表性生物活性脂質包括溶血脂質，例如鞘脂和鞘脂代謝物諸如神經酰胺、神經酰胺-l-磷酸、N-乙酰基-神經酰胺-l-磷酸、鞘氨醇-1-磷酸(S1P)、鞘氨21醇、鞘氨醇磷脂酰膽堿(SPC)、二氫鞘氨醇和二氫鞘氨醇-1-磷酸。其他生物活性脂質包括溶血脂質(諸如溶血磷脂酸(LPA))，以及溶血磷脂酸代謝物或前體(諸如溶血磷脂酰肌醇(LPI)或溶血磷脂酰膽堿(LPC))。關于LPA,示例性反應基團定位包括將反應基團懸桂到烴鏈中的碳原子上或溶血磷脂酸部分的甘油支架的sn-1位置上。特別優選的衍生生物活性脂質包括LPA和S1P的巰基衍生物。本發明的相關方面涉及由根據本發明的衍生生物活性脂質而產生的免疫原。通常，所述免疫原包括與載體共價連接的衍生生物活性脂質。合適載體部分的實例包括栽體蛋白(諸如匙孔血藍蛋白(KLH)和白蛋白)、聚乙二醇、膠體金、佐劑或有機硅珠。根據本發明優選的免疫原包括與KLH或白蛋白共價連接的LPA的巰基衍生物。在基于鞘脂的免疫原的情況下，優選的免疫原實施方式包括與KLH或白蛋白共價連接的巰基S1P衍生物。通過衍生生物活性脂質與栽體部分的反應來制備本發明的免疫原，所述反應在允許所述載體與所述生物活性脂質之間的共價連接通過懸垂反應基團發生以產生生物活性脂質-載體免疫原的具體種類的條件下進行。然后在作為免疫方法的一部分給宿主動物施用前，優選地分離或純化所述免疫原，所述免疫涉及所需免疫原的一次或若干次施用(典型地通過注射)。在該方面的優選實施方式中，用合適的保護基團保護衍生生物活性脂質的懸垂反應基團，在用于共價連接載體和生物活性脂質的化學反應之前或作為其的一部分除去所述保護基團并且所述衍生生物活性脂質被"去保護"。如上面討論的，本發明的另一方面涉及制備對生物活性脂質具有反應性的單克隆抗體的方法。在所述方法中，用如本文所述的生物活性脂質免疫原對免疫活性宿主動物(例如，嚙齒類動物諸如小鼠、大鼠、豚鼠或兔)進行免疫。免疫作用后，宿主發起針對生物活性脂質的抗體應答，導致對免疫原中具體生物活性脂質種類具有反應性的抗體的產生。所得的抗體是多克隆或優選單克隆的。對于單克隆抗體，產生所需抗體的細胞系優選是克隆和永生的，以有利于以所需量產生所需的脂質特異性抗體。在優選的實施方式中，所需的單克隆抗體，例如對LPA有反應性的單克隆抗體用于產生抗體衍生物，諸如嵌合的或人源化抗體或抗體片段。在一些實施方式中，完全人源化抗體可以通過對經改造包含一些或全部感受態人系統的動物(例如，小鼠或大鼠)進行免疫來產生。已知，對于抗體生成來說脂質通常為一類非常難處理的分子。本發明的一方面認為該問題至少部分歸因于檢測對具體靶標脂質種類具有反應性的抗體的困難性。然而，通過使用具體靶標生物活性脂質的衍生形式(諸如溶血脂質或神經鞘脂或鞘脂代謝物)，可以很好地克服該問題。在一些優選的實施方式中，所述衍生生物活性脂質可用于鑒定對具體生物活性脂質的表位具有反應性的抗體，所述生物活性脂質存在于產生待檢測的抗體的免疫原中。為了實現該作用，可以將具體的衍生生物活性脂質或衍生生物活性脂質綴合物與固體支持物相連，優選地是分析儀器的固相，諸如ELISA板、Biacore芯片等。與固體支持物的連接使得在抗體結合和檢測過程中洗掉生物活性脂質的可能性最小化。本發明的另一方面涉及藥學組合物或獸醫學組合物，其包含載體和根據本發明的分離的免疫衍生部分，例如單克隆抗體或抗體片段、變體或衍生物。優選的載體包括藥學可接受的那些，尤其是當所述組合物打算用于人治療用途時。對于非人的治療應用(例如，在治療寵物、家畜、魚或家禽)，可以使用獸醫學可接受載體。本發明的相關方面涉及使用或治療的方法，包括防止或預防性治療和施用。所述方法通常涉及給需要治療性或預防性處理的受試者(例如，哺乳動物，特別是人患者)施用一定量的對物活性脂質靶有反應活性的免疫衍生部分，其有效實現所需的治療。在一些實施方式中，所述生物活性脂質靶是非鞘氨醇類生物活性脂質。治療有效的免疫衍生部分的一個優選實例是對溶血脂質(諸如LPA)有反應性的人源化的單克隆抗體。根據本發明的免疫衍生部分，優選作為治療組合物的一部分的施用途徑，可以根據是否需要局部或全身治療和治療區域而變化。施用可以是局部的(包括經皮、眼部和粘膜(包括陰道、子宮內和直腸)遞送，肺部遞送，氣管內、鼻內和表皮遞送)，口服的或腸胃外的。腸胃外施用包括靜脈內、動脈內、皮下、腹膜內或肌肉內注射或輸注；或顱內，例如鞘內或心室內施用。本發明的其他方面涉及多種診斷、預后和/或研究可行的方法。一個所述方面涉及衍生脂質類似物在檢測來自動物或抗體文庫的體液或組織樣品中抗天然生物活性脂質的自身抗體的存在中的用途。另一個所述方面涉及檢測除鞘脂或其代謝物以外的靶生物活性脂質方法。通常，所述方法涉及免疫衍生部分與對其具有反應性的靶生物活性脂質結合。例如可以在允許免疫衍生部分與靶生物活性脂質(如果樣品中存在的話)結合的條件下，通過將已知或懷疑含有靶生物活性脂質的樣品(例如，活檢或流體或體液樣品，例如血液、血清、血漿、尿、唾液、眼淚、腦脊髓液、細胞培養物等)與免疫衍生部分接觸來獲得結合的檢測。為了執行所述診斷方法，需要試劑，并且采用根據本發明的衍生脂質類的診斷試劑代表了本發明的另一方面。在擁有這些試劑的情況下，可以準備使用這些試劑的診斷性分析。在下述部分中更詳細地討論本發明的這些和那些方面以及實施方式。本專利申請包含至少一個以彩色繪制的圖。在提出要求和支付必須的費用后可以提供本專利申請帶有彩色附圖的副本。圖l.制備典型琉基化-S1P類似物的有機合成方案，所述巰基化-S1P類似物用作本發明免疫原的關鍵組分，以及用作ELISA和BUCore試驗的沉積材料(laydownmaterial)的關鍵組分。圖2.制備用于合成圖3中的巰基化-LPA類似物的巰基化-相關脂24肪酸的有機合成方案。圖3.制備巰基化-LPA類似物的有機合成方案，所述巰基化-LPA類似物為本發明免疫原的關鍵組分，以及為ELISA和其他試驗的沉積材料的關鍵組分。圖4.抗-SlPmAb對S1P是特異性的和靈敏的，且不識別結構上類似的生物活性脂質。面板A.S1P、SPH、LPA、SPC和其他結構上類似的生物脂與平板上的S1P竟爭與所述mAb的結合的竟爭性ELISA。只有游離的S1P或DH-S1P能竟爭結合，證實抗-SIPmAb的特異性。SPC僅輕微地竟爭結合。面板B.用于評估特異性的生物活性脂質的結構。圖5.抗-SlPmAb于硫代-S1P結合動力學的BiaCore分析限定于Biacore馬來酰亞胺表面CM5傳感器芯片上。將抗-SlPmAb的多種稀釋溶液應用于流動池(flowcell)以產生感應圖。圖6.鼠SphingomabTM的小鼠Vh和、結構域的氨基酸序列。用框線顯示CDR殘基。圖7.鼠SphingomabTM的Vh和^結構域的核苷酸和氨基酸序列。圖8.該圖顯示鼠SphingomabTM和來源于鼠SphingomabTM的嵌合、SIP-結合抗體的結合研究的ELISA結果。圖9.直接ELISA顯示鼠和嵌合mAbs與ELISA板的結合，所述ELISA板涂敷有實施例6中所述的巰基化S1P類似物。數據顯示嵌合mAb(ccc-S1PIgG)與完全鼠mAb(moc-SlPIgG)相比，如果不大于后者的話，具有與其類似的結合性能。本領域的技術人員應該理解，下述說明詳細描述本發明某些優選的實施方式，因此僅僅是代表性并不描述本發明的實際范圍。在詳細描述本發明之前，應該理解本發明不限于所述的具體分子、系統和方法，因為這些都可以變化。還應理解本文所用的術語僅僅出于描述具體實施方式的目的，不意圖限制所附權利要求所限定的本發明范圍。25發明詳述本發明涉及組合物，以及生產和鑒定抗生物活性脂質分子的抗體的方法，所述生物活性脂質分子作為信號傳導分子在人和/或動物疾病中起作用。本發明還涉及這些抗體本身，以及其在治療上、診斷上和作為研究試劑的使用方法。l.生產和鑒定抗體的方法已知，對于抗體生產來說脂質通常為一類非常難處理的分子。抗體產生通常被描述為兩個過程必須提供合適的免疫原，其將在動物中產生所需的抗體應答，以及產生的抗體(如果存在的話)，必須是可檢測的。如上討論的，有效的抗體生產要求抗體產生和抗體檢測。如在下述實施例中公開的，使用衍生生物活性脂質作為免疫原實現靶向特定生物活性脂質的抗體的產生。在所述實施例中，使用制造商推薦的方案將巰基化生物活性脂質(例如，S1P)類似物與匙孔血藍蛋白(KLH)或與無脂肪酸的牛血清白蛋白(BSA)經由SMCC(Pierce，RockfordIL)偶聯。SMCC為與一級氨和巰基反應的異型雙功能交聯劑，并且代表優選的交聯劑。對于馬來酰亞胺-活化蛋白，還可以使用碘代乙酰胺(服)。然而，還可以^吏用其他本領域中已知的免疫原和生產抗體的方法。例如，通過采用脂質體的免疫(Maneta-Peyret等人，1988，1989;BenerjiandAlving，1990)或通過對蛋白(Tamamura等人，1971;Maneta-Peyret等人,1989)，對細菌(Umeda等人，1989)，對丙烯酰胺(Maneta-Peyret等人，1988，1989)和對金[Tomii等人，(1991)JpnJ.MedSci.Biol.44:75-80]的單聚磷脂吸附來產生抗磷脂種類的抗體。在許多情況下，生物活性脂質以乳化劑或脂質體復合物呈遞導致IgMs與IgG相比，具有有限的特異性、敏感性和/或生物活性。例如，表征了兩種商購可獲得的預測對神經酰胺具有特異性的試劑，一種是富含IgM的多克隆小鼠血清和另一種是IgM單克隆抗體。發現所述單克隆抗體對神經鞘磷脂具有特異性，并發現所述抗血清在納摩爾范圍內與多種神經酰胺類反應。Vielhaber，G.等人，(2001)Glycobiology11:451-457。在不同的方法中，Ran等人[(2005)Clin.CancerRes.11:1551-1562]使用被過氧化物處理過的b.End3內皮細胞(旨在引起陰離子磷脂向細胞外表面的遷移)作為免疫原來引發產生對陰離子磷脂特異性的抗體。因此已知許多方法，通過其可以引發對所需抗原性靶標的抗體應答；只要所產生的抗體能被檢測并證明能與所需的生物活性脂質反應，可以在本發明中使用這些方法的任何一個。雖然抗體產生是必需的，但如果抗體不能被檢測的話，不是充分的。因此，本發明的一個方面基于如下理解，即之前其他人生產生物活性脂質抗體的失敗至少歸因于檢測步驟的缺點。在下述實施例中，檢測問題通過使用衍生生物活性脂質得到很好的解決。使用衍生生物活性脂質來檢測和鑒定對具體生物活性脂質的表位具有反應性的抗體，所述生物活性脂質存在于用于生產待檢測的抗體的免疫原中；用于檢測的衍生形式的生物活性脂質包含產生抗體的相同表位。為了實現該功能，衍生的脂質可以與分析儀器的固體支持物相連，諸如ELISA板、BiaCore傳感器芯片等。在一些實施方式中，衍生生物活性脂質直接與固體支持物共價綴合。例如，所述衍生脂質可以與下述實施例中所述的活化BiaCore芯片共價綴合。在其他實施方式中，所述衍生生物活性脂質與載體部分共價綴合，產生"衍生生物活性脂質綴合物"，然后其與固體支持物結合。例如，如在下述實施例中所述的，將與BSA共價綴合的衍生脂質用作ELISA的沉淀材料(捕獲材料)。在任一實施方式中，衍生生物活性脂質與固體支持物的連接提供了穩定的檢測手段，其不太可能如一些檢測方法的風險那樣被洗掉。可以以多種方式實現抗體的檢測。在本發明優選的實施方式中，所述檢測通過ELISA，BiacoreTM無標記相互作用分析系統，或其他基于固體支持物途徑的檢測手段，其中所述衍生生物活性脂質與所述固體支持物相連。其他固體支持物的實例包括但不限于親和柱、玻璃珠或合成珠，多孔板等。27用于檢測步驟的所述衍生生物活性脂質綴合物可以是用作免疫原的相同衍生生物活性脂質綴合物，或所述衍生生物活性脂質可以與不同于綴合物中用作免疫原的載體綴合。在一些實施方式中，例如對于ELISA沉淀，優選在檢測步驟中使用不同于用作免疫原的衍生生物活性脂質綴合物以使交聯反應最小化。例如，載體可以是BSA(優選無脂肪酸，特別是在檢測步驟)、KLH或其他本領域已知的載體。用于綴合衍生生物活性脂質與蛋白載體的交聯劑例如可以是SMCC或IOA。在一個優選的實施方式中，所述免疫原是SIP-IOA-KLH，并且S1P-SMCC-BSA(無脂肪酸的BSA)是ELISA中的捕獲沉淀材料，其中S1P指與交聯劑(在該情況下為IOA或SMCC)反應以與蛋白載體(在該情況下為KLH或BSA)形成共價鍵的衍生S1P。2.化合物術語"抗體"("Ab")或"免疫球蛋白"(Ig)指能結合抗原或表位的，衍生自免疫球蛋白基因或其片段的肽、多肽，模仿免疫球蛋白基因或其片段的肽、多肽，由免疫球蛋白基因或其片段編碼的肽、多肽。例如，參見Imm畫biology，FifthEdition,C.A.Janeway，P.Travers，M.，Walport，M.J.Shlomchiked.，ed.GarlandPublishing(2001)。抗體分子或免疫球蛋白為分子量大約為150kDa的大糖蛋白分子，通常由兩種不同類的多肽鏈組成。一種多肽鏈，稱為"重"鏈(H),約50kDa。另一種多肽，稱為"輕"鏈(L)，約25kDa。每個免疫球蛋白分子通常由兩條重鏈和兩條輕鏈組成。兩條重鏈通過二硫鍵相連，其數量在不同免疫球蛋白同種型的重鏈之間變化。每條輕鏈通過一個共價二硫鍵與一條重鏈相連。在任何給定的天然存在的抗體分子中，所述的兩條重鏈和兩條輕鏈是相同的，具有兩個相同的抗原結合位點，因此被認為是二價的，即具有同時結合兩個相同分子的能力。來自任何脊推動物物種的抗體分子的"輕"鏈，根據其恒定區的氨基酸序列可以被歸屬為兩個明顯不同的類型，kappa(k)和lambda(入)。兩種類型的輕鏈的比例在物種間變化。例如，小鼠中平均k與入之比為20:1，而在人中其為2:1，在牛中為1:20。來自任何脊推動物物種的抗體的"重"鏈，根據其恒定區的氨基酸序列可以被歸屬為五個明顯不同類型(稱為同種型)中的一個。一些同種型具有若干亞型。免疫球蛋白的五種主要類型為免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白E(IgE)。IgG是最豐富的同種型并具有若干亞類(在人中有IgGl、2、3和4)。所述Fc片段和鉸鏈區的區別在于不同同種型的抗體，由此確定其功能性質。然而，所述結構域的整體組織在所有同種型中是類似的。如本文所使用的，"抗體片段"和其語法型變體指包括抗原結合位點或完整抗體可變區的完整抗體的部分，其中所述部分可以不含完整抗體的Fc區的重鏈恒定區(例如，CH2、CH3和CH4)。備選地，在所述"抗體片段"中可以包括重鏈恒定區的部分(例如，CH2、CH3和CH4),抗體片段的實例為保留抗原結合性并包括Fab、Fab'、F(ab。2、Fd和Fv片段的那些；二聚體；三聚體；單鏈抗體分子(sc-Fv);由抗體片段形成的樣史型抗體(minibodies)，納米抗體(nanobodies)和多特異性抗體。例如，Fab片段還包含輕鏈恒定區和重鏈的第一恒定區(CH1)。術語"可變區"指抗體分子或其片段的N-端序列。通常，四個鏈的每一個在其氨基端部分都具有一個貢獻抗原結合位點的可變(V)區，和確定同種型的的恒定(C)區。輕鏈通過許多非共價相互作用以及通過二硫鍵與重鏈結合，且重鏈和輕鏈的V區在抗體分子的各自臂中配對以產生兩個相同的抗原結合位點。認為一些氨基酸殘基在輕鏈和重鏈可變區之間形成一個界面(參見Kabat等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,NationalInstituteofHealth,Bethesda，Md.(1991);Clothia等人，J.Mol.Biol.，vol.186:651(1985))。值得注意的是，可變性是在抗體的整個可變區中分布不一致，但集中在三個片段，其中兩個在輕鏈被稱為"互補決定區"(CDRs)或"高變區"，以及重鏈可變區。可變區的更高度保守部分稱為"框架區"29(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變區各自包括由三個CDR連接的四個FR區。每個鏈中的CDR通過FR區與其他鏈的CDR緊靠在一起，促成抗體的抗原結合位點的形成(參見Kabat等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,NationalInstituteofHealth,Bethesda，Md.(1991))。總得來說，所述6個CDR促成抗體分子的結合性質。然而，即使單一可變區(或僅包括三個對抗原特異性的CDR的半個Fv)具有識別并結合抗原的能力(參見Pluckthun，inThePharmacologyof單克隆抗體，vol.113,RosenburgandMooreeds.，Springer-VerUg，NewYork,pp.269-315(1994))。術語"恒定區"指抗體重鏈或輕鏈的C-端區域。通常，所述恒定區不直接涉及抗體分子對抗原的結合性質，但展現多種效應子功能，諸如抗體參與抗體依賴性細胞毒性。此處，"效應子功能"指通過Fc結構域和免疫系統蛋白之間的分子相互作用，由免疫細胞的募集介導的抗體的不同生理效應(例如，調理作用、細胞裂解、肥大細胞、嗜堿性粒細胞和嗜酸性粒細胞脫顆粒，和其他過程)。重鏈的同種型決定抗體的功能性質。重鏈的羧端部分賦予其獨特的功能性質，而這些功能性質與輕鏈無關。術語"變體"指與抗體天然的氨基酸序列不同在于至少一個氨基酸殘基修飾的氨基酸序列。天然或親本或野生型氨基酸序列指在自然中發現的抗體的氨基酸序列。抗體分子的"變體"包括但不限于在輕鏈和/或重鏈的可變區或恒定區內的變化，包括在Fc區、Fab區、CH,結構域、CH2結構域、CH3結構域和鉸鏈區中。術語"特異性，，指抗體對其靶表位的選擇性結合。通過比較在給定調整條件下，對目的抗原的結合與對不相關抗原或抗原類似物或抗原混合物的結合，可以測試抗體分子的結合特異性。優選地，根據本發明的抗體與不相關抗原或甚至靶抗原的類似物沒有顯著結合。此處，術語"抗原"指被抗體分子或與抗原結合的免疫衍生部分識別并結合的分子。被抗體結合的抗原的特異性部分被稱為"表位"。"半抗原"指只有在與栽體，例如蛋白、聚乙二醇(PEG)、膠體金、有機硅珠等30連接時，在大多數情況下能引發免疫應答的小分子(即，用作抗原)。所述栽體還可以是自身不能引發免疫應答的那些。在最廣義范圍下使用的術語"抗體"，包括單克隆、多克隆、多特異性(例如，雙特異性，其中抗體的每一個臂與相同或不同抗原的不同表位具有反應性)、微型抗體、雜綴合物、二價抗體、三價抗體、嵌合和合成抗體，以及特異性結合具有所需結合性質和/或生物活性的抗原的抗體片段。術語"單克隆抗體"(mAb)指抗體、或類似抗體的群體(獲自實質上同質抗體的群體)，且不應理解為需要通過任何特定的方法來產生所述抗體。例如單克隆抗體可以通過KohlerG.andMilsteinC.(1975)，Nature,vol.256:495-497首次描述的雜交瘤方法或通過重組DNA方法來制備。術語"嵌合"抗體(或免疫球蛋白)指包含重和/或輕鏈的分子，所述重和/或輕鏈與來源于具體物種或屬于具體抗體類型或亞類的抗體的對應序列相同或同源，而鏈的其他部分與與來源于其他物種或屬同源，只要它們展現所需的生物活性(Cabilly，等人，infra;Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,vol,81:6851(1984))。術語"人源化抗體"指還包含以來自非人(即，鼠)抗體的某些選擇性序列代替人序列的人抗體。人源化抗體包括不顯著改變其結合和/或生物活性的保守氨基酸取代或來自相同或不同物種的非天然殘基。所述抗體為含有衍生自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗體。在極大程度上，人源化抗體為人免疫球蛋白(受體抗體)，其中來自受體的互補決定區(CDR)的殘基被來自非人物種(供體抗體)，諸如具有所需性質的小鼠、大鼠、駱駝、牛、山羊或兔的CDR殘基代替。此外，人源化抗體可以包括既不在受體抗體也不在引入的CDR或框架序列中存在的殘基。進行這些修飾以進一步優化和最大化抗體性能。因此，通常來說，人源化抗體包含所有可變區中的至少一個，在一方面包括兩個，其中所有的或所有的高變環對應于非人免疫球蛋白的那些，且所有的或基本上所有的FR區域為人免疫球蛋白序列的那些。所述人源化抗體任選地還包括至少一部分免疫球蛋白恒定區(Fc)或人免疫球蛋白恒定區(Fc)。例如，參見Cabilly，等人，U.S.Pat.No.4,816,567;Cabilly，等人，歐洲專利申請號0，125，023Bl;Boss，等人，U.S.Pat.No.4，816，397;Boss，等人，歐洲專利申請號0,120,694Bl;Neuberger，等人,WO86/01533;Neuberger，等人，歐洲專利申請號0,194,276Bl;Winter,U.S.Pat.No.5,225,539;Winter,歐洲專利申請號0，239，400B1;Padlan，等人，歐洲專利申請號0,519,596Al;Queen，等人(1989)，Proc.Nat/1Acad.Sci.USA,vol.86:10029-10033)。術語'完全人源性，抗體指在遺傳改造(即，轉基因)小鼠(例如，來自Medarex)中產生的抗體，當呈遞免疫原時，能產生不需要CDR移植的人抗體。這些來自動物諸如小鼠，其中非人抗體基因被壓制并被人認為當給這些可能產生相關CDR的人框架的轉基因小鼠或其他動物呈遞生物活性脂質時，可能產生抗生物活性脂質的抗體。術語"雙特異性抗體"指具有至少兩個不同表位的結合性質的抗體或單克隆抗體。在一個實施方案中，所述表位來自相同的抗原。在另一個實施方案中，所述表位來自兩個不同的抗原。制備雙特異性抗體的方法在本領域中是已知的。例如，可以使用兩個免疫球蛋白重鏈/輕鏈對的共表達重組產生雙特異性抗體。備選地，可以使用化學連接來制備雙特異性抗體。本領域技術人員能使用這些或其他本領域中已知的方法來制備雙特異性抗體。雙特異性抗體包括雙特異性抗體片段。本發明包括的雙特異性抗體的一個實例是對SIP表位和LPA表位具有結合性質的抗體，因此其能識別和結合SIP和LP1。本發明包括的雙特異性抗體的另一個實例是對來自生物活性脂質的表位和來自細胞表面抗原的表位具有結合性質的抗體。因此所述抗體能識別和結合生物活性脂質并能識別和結合細胞，例如，出于靶向目的。術語"異源綴合抗體"指兩個共價連接的抗體。可以使用合成蛋白質化學中已知的方法制備所述抗體，包括使用交聯劑。如本文所使用的，術語"綴合物"指通過一個或多個抗體片段或結合部分與一個或多個聚合物分子共價連接形成的分子。術語"生物活性"指能結合所需表位并以一些方式發揮生物學作用的抗體或抗體片段。生物學作用包括但不限于生長信號的調節、抗細胞凋亡信號的調節、細胞凋亡信號的調節、效應子功能級聯的調節和其他配體相互作用的調節。術語"重組DNA"指經人工改造、產生或修飾的核酸和由其表達的基因產物。"重組的"多肽或蛋白是通過重組DNA技術，例如，由用編碼的所需多肽或蛋白的外源DNA構建體轉化的細胞產生多肽或蛋白。"合成的"多肽或蛋白是通過化學合成制備的那些。術語"表達盒"指在與所述序列相容的宿主中能影響結構基因(即，蛋白編碼序列，諸如本發明抗體)表達的核酸分子。表達盒包括至少一個與多肽編碼序列盒任選的其他序列可操作連接的啟動子，例如，轉錄終止信號。還可以使用其他在影響表達中必需的或有幫助的調節元件，即，增強子。因此，表達盒包括質粒、表達載體、重組病毒、重組"棵DNA"載體的任何形式等。"載體"或"質粒"或"表達載體"指能瞬時或穩定維持在細胞中以實現一個或多個重組基因表達的核酸。載體可以包括單獨或與其他化合物復合的核酸。載體任選地包括病毒或細菌核酸和/或蛋白，和/或膜。載體包括但不限于可與DNA片段連接并對其進行復制的復制子(例如，RNA復制子，噬菌體)。因此，栽體包括但不限于RNA、自主自我復制環狀或線狀DNA或RNA，并包括表達和非表達質粒。"質粒"可商購獲得，在非限制的基礎上公眾可獲得，或用發表的方法如所報導的由可獲得的質粒構建。此外，表達載體還可以包含為檢測轉化的宿主細胞提供表型性狀的基因，諸如二氫葉酸還原酶或對真核細胞培養物的新霉素抗性、或諸如在大腸桿菌中的四環素或氨千青霉素抗性。術語"啟動子"包括能驅動細胞中編碼序列轉錄的所有序列。因此，用于本發明構建體的啟動子包括順式作用轉錄控制元件和涉及調33節或調整基因轉錄的時機和/或速度的調節序列。例如，啟動子可以是順式作用轉錄控制元件，包括增強子、啟動子、轉錄終止子、復制起點、染色體整合序列、5'和3'非翻譯區或內含子序列，其涉及轉錄調節。適用于本發明的轉錄調節區包括但不限于人巨細胞病毒(CMV)即刻早期增強子/啟動子、SV40早期增強子/啟動子、大腸桿菌lac或trp啟動子和已知控制真核或原核細胞或其病毒中基因表達的其他啟動子。A.鞘脂的抗體本發明提供制備針對某些生物活性脂質(包括鞘脂)的抗體的方法。術語"鞘脂"指如http〃www.lipidmaps.org所定義的鞘脂，包括下述鞘脂堿基[包括sphing-4-enines(鞘氨醇)、二氫鞘氨醇、4-羥基二氫鞘氨醇(植物鞘氨醇)、鞘氨醇堿基同源物和變體、鞘脂堿基l-磷酸、溶鞘磷脂和溶鞘糖脂；N-曱基化鞘脂堿基和鞘脂堿基類似物];神經酰胺[包括N-乙酰鞘氨醇(神經酰胺)、N-乙酰二氫鞘氨醇(二氫神經酰胺)、N-乙酰-4-羥基二氫鞘氨醇(植物神經酰胺)，乙酰神經酰胺和神經酰胺1-磷酸];鞘磷脂[包括神經酰胺磷脂酰膽堿(神經鞘磷脂)，神經酰胺磷酸乙醇胺和神經酰胺磷酸肌醇；鞘磷脂；中性鞘糖脂[包括簡單的Glc系列(GlcCer,LacCer等GalNAcbl-3Galal-4Galbl-4Glc-(Globo系列)GalNAcbl-4Galbl-4Glc-(Ganglio系列)Galbl-3GlcNAcbl-3Galbl-4Glc-(Lacto系列)Galbl-4GlcNAcbl-3Galbl-4Glc-(Neolacto系列)GalNAcbl-3Galal-3Galb1—4Glc-(Isoglobo系列)GlcNAcbl-2Manal-3Manb1—4Glc-(Mollu系列)GalNAcbl-4GlcNAcb1-3Manbl-4Glc-(Arthro系列)，Gal—(Gala系列)或其他中性鞘糖脂];酸性鞘糖脂[包括神經節苷脂、磺酸鞘糖脂(sulfoglycosphingolipid)(硫苷脂)，葡糖醛酸鞘脂(glucuronosphingolipid)，褲酸鞘糖月旨34(phosphoglycosphingolipid)和其他酸性鞘糖脂；堿性鞘糖脂；兩性鞘糖脂；鞘砷脂(ars國phingolipid)和其他鞘脂。抗-鞘脂抗體用于治療或預防如下面詳細描述的，障礙(諸如過度增殖障礙)和心血管或腦血管疾病和障礙。在具體的實施方式中，本發明涉及制備S1P抗體及其變體的方法，其包括S1P本身{定義為鞘氛醇—1—彿酸[sphingene-1-phosphate;D-赤式-鞘氨醇-l-磷酸；sphing-4-enine-1-磷酸；(E，2S,3R)-2-氨基-3-羥基-十八碳-4-enoxy]膦酸](CAS26993-30-6)},或DHS1P{定義為二氫鞘氨醇-1-磷酸[sphinganine-1-phosphate;[(2S，3R)-2-氨基-3-羥基-十八烷氧]膦酸；D-赤式-二氫-D-鞘氨醇-l-磷酸](CAS19794-97-9)}。SPC的抗體(定義為鞘氨磷酰膽堿，溶鞘磷脂，鞘氨磷脂酰膽堿，鞘氨醇磷酰膽堿，四乙基溴化銨(ethanaminium);2-((((2-氨基-3-羥基-4-十八碳烯)氧)羥基氧膦基)氧)-N，N,N-三曱基-，氯化物，(R-(R*，S*-(E))),2-[[(E，2R，3S)-2-氨基-3-羥基-十八-4-enoxy]-羥基-磷酰基]氧乙基1-三曱基-氯化銨(CAS10216-23-6)]}也可以是有用的。1.優選的抗-S1P單克隆抗體.描述了特異性單克隆抗-S1P抗體(抗-S1PmAb)。該抗體可用作治療性分子海綿以選擇性吸收S1P，并由此降低促-血管生成因子，促成纖維化因子和促肺瘤因子的有效胞外濃度。這可以導致腫瘤體積和轉移潛力降低，以及同時阻斷新血管形成，否則其可能喂養生長的腫瘤。該抗體(和具有等效活性的分子)還可用于治療其他受S1P影響的過度增殖障礙，包括不想要的內皮細胞增殖，如在年齡相關性黃斑變性以及許多癌癥中發生的。此外，S1P保護細胞免受細胞凋亡的能力可以被試劑(諸如導致標準促細胞凋亡化療藥物的功效增加的抗體)逆轉。B.其他生物活性信號傳導脂質的抗體本文所述的方法可用于制備抗除鞘脂(例如，SPC、神經酰胺、鞘氨醇、二氫鞘氨醇、S1P和二氫-S1P)外，許多其他胞外和胞內生物活性脂質的單克隆抗體。其他生物活性脂質類型包括白三烯、類二十烷酸、類二十烷酸代謝物(諸如HETE、前列腺素、脂氧素、環氧二十碳三烯酸和異類二十烷酸)、非-類二十烷酸大麻素介體，磷脂及其衍生物(諸如磷脂酸(PA)和磷脂酰甘油(PG))、心磷脂和溶血磷脂諸如溶血磷脂酰膽堿(LPC)和溶血磷脂酸(LPA)。簡而言之，本發明適用于在重要細胞過程中具有多效效應的任何所需胞外和/或胞內信號傳導生物活性脂質。生物活性脂質的其他實例包括磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰乙醇胺(PEA)、二脂酰甘油(DG)、硫苷脂、神經節苷脂、紅細胞糖苷脂和腦苷脂。C.綴合物本文所述的單克隆抗體或其抗原結合片段，可以在體外單獨使用或可以以非衍生或非綴合形式給受試者施用。在其他實施方式中，所述抗體、衍生物和變體可以是被衍生或與一個或多個分子實體連接。其他分子實體包括天然存在的、重組的或合成的肽、多肽和蛋白，非肽化學化合物(諸如同位素)、小分子治療劑等。優選的小分子包括放射性標記、熒光劑和小分子化療試劑。優選的蛋白包括生長因子、通過合適方法連接活性成5分:其中考慮所述活性成分和^期應用等口等。例如，本發明的單克隆抗體可以通過化學偶聯、基因融合、非共價連接或其他合適方法與其他分子功能性連接。因此本發明設想在一個或多個本發明單克隆抗體或其變體或衍生物與另一活性成分之間形成綴合物。所述綴合物可以是共價的或非共價的，且可以在活性成分之間經由接頭或直接發生。所述綴合物的實例包括與同類或不同類的另一個治療性單克隆抗體連接的本發明一個或多個單克隆抗體(或其抗原結合區)。備選地，本發明單克隆抗體或抗體衍生物或變體可以與不同類的治療劑連接，例如小分子化療試36劑或放射性同位素。在一些實施方式中，兩種或多種不同治療劑的每一個的一個或多個(其中至少一個是本發明化合物)可以通過多價支架連接。作為綴合物的備選，本發明的單克隆抗體或抗體衍生物或變體可以簡單地與一個或多個不同治療劑連接。例如，本發明單克隆抗體與適合與給受試者施用的遞送載體(例如，脂質體、微團、納米顆粒等)中的一個或多個其他類型治療劑組合。本發明還設想將本發明的單克隆抗體或抗體衍生物或變體(例如，針對具體的靶生物活性脂質具有反應性的一個或多個CDR)與蛋白或多肽綴合。例如，將來自免疫球蛋白重鏈或輕鏈可變區的一個或多個CDR可以移植到單克隆抗體中。3.應用本發明涉及用于治療或預防過度增殖障礙的組合物和方法，所述過度增殖障礙諸如癌癥、纖維化和血管生成、和心血管疾病、心臟病已經其他疾病、障礙或身體外傷和/或腦血管病和障礙，其中給患者施用治療劑，所述治療劑改變不想要、有毒和/或生物活性脂質、或其前體或代謝物的活性或濃度。本發明的治療方法和組合物通過改變某些不需要的或有毒的脂質的絕對、相對和/或可利用濃度和/或活性來起作用。因此"有毒的"指疾病過程中具體脂質的參與，例如作為信號傳導分子。不希望受任何特定的理論限制，認為不適當濃度的脂質(諸如LPA)和/或其代謝物引起或促使多種疾病和障礙的形成，包括心臟病、神經性疼痛、癌癥、血管生成、炎癥和腦血管疾病，其中包括中風樣內耳病理(例如，參見Scherer，等人(2006)，CardiovascularResearch,vol.70;79-87)。同樣地，本組合物和方法可用于治療這些疾病和障礙，尤其是通過降低具體靶脂質(例如LPA)的有效體內濃度。根據本發明進行治療的幾類疾病描述于下。A.過度增殖疾病和障礙i.癌癥一種治療策略是降低胂瘤促進劑(SIP)的胞外生物有效水平，單獨或與常規抗癌治療組合，包括施用化療試劑，諸如蒽環類。最后，形成對SIP特異的單克隆抗體(mAb)，其可以選擇性的吸收來自血清的SIP,用作分子海綿來中和胞外S1P。由于證明S1P是促-血管生成的，針對抗體效力的另一好處來自抗體的饑餓生長中腫瘤的血液供應的能力。因此，另一個基于鞘脂的抗-腫瘤策略涉及組合CER和SPH產生的已知活化劑(多柔比星和相關蒽環類糖苷，放射療法等)，結合降低SIP水平的策略。盡管已經提出基于鞘脂的抗癌方案(其靶向鞘脂代謝通路的關鍵酶，諸如SPHK)，但沒有強調S1P本身，很大程度上是因為攻擊該靶標和相關靶標的困難。如本文所述，已經產生對S1P具有高特異性的單克隆抗體，其識別生理范圍內的SIP并能通過分子組合來中和S1P。使用該抗體(及其衍生物)將剝奪生長中的腫瘤細胞的重要生長和存活因子。此外，當與常規癌癥治療(諸如手術、放射療法和/或施用細胞毒性抗癌藥)組合使用時，基于所述抗體的癌癥治療的使用也是有效。細胞毒素劑的實例，例如包括蒽環類藥物、長春堿、絲裂霉素、博來霉素、細胞毒素核苷、紫杉烷類、埃坡霉素、盤皮海綿內酯、蝶啶類藥物、diynenes和鬼臼毒素。那些類的成員例如包括，多柔比星、洋紅霉素、柔紅霉素、氨基蝶呤、甲氨蝶呤(methotrexate)、氨甲蝶呤(methopterin)、二氯曱氨蝶呤、絲裂霉素C、甲基絲裂霉素、5-氟尿嘧口定、6-巰基嘌呤、吉西他濱、阿糖胞脊(cytosinearabi畫ide)、鬼臼毒素或鬼臼毒素衍生物、諸如依托泊甙、磷酸依托泊甙或替尼泊苷、美法侖、長春堿、長春新堿、異長春堿、長春地辛、環氧長春堿、紫杉醇等。其他抗腫瘤藥物包括雌莫司汀、順鉑、卡鉑、環磷酰胺、博萊霉素、吉西他濱、異環磷酰胺、美法侖、六甲密胺、塞替派、阿糖胞苷、idatrexate、三曱氧蝶呤、達卡巴嗪、左旋門冬酰胺酶、喜樹堿、CPT-11、托泊替康、ara-C、比卡魯胺、氟他胺、亮丙瑞林、吡咬并苯并-引咮衍生物、干擾素和白介素。其他細胞毒性藥物在本領域38中是熟知的。基于抗體的聯合治療可以通過使細胞對細胞凋亡敏感而最小化其毒性副作用來提高化療試劑的功效，雖然單獨施用抗體在延遲疾病進展中也是有效的。確實，抗-SlPmAb在人癌癥的小鼠模型中和同種異體移植小鼠模型中延遲腫瘤進展的能力證實在治療人和動物腫瘤中可利用抗-S1P抗體方法。此外，在異種移植模型中能治療所述幾種人癌癥類型(例如，卵巢癌、乳腺癌、肺癌和黑素瘤)的發現，證實了抗-S1P抗體方法不局限于一種癌細胞或組織類型。LPA介導多種細胞應答，包括細胞增殖、分化、血管生成和運動性。大量的實驗發現說明胞外LPA通過刺激腫瘤細胞增殖、存活、侵入并通過誘導血管生成和轉移，在幾種人癌癥進展中起關鍵作用。此外，LPA保護多種腫瘤細胞類型免受細胞凋亡。LPA與卵巢癌和乳腺癌長期有關[Fang，X.，等人，(2002)BiochimBiophysActa,1582:257-64];在患者的血液和腹水中均發現LPA水平提高，其與腫瘤進展、血管生成和轉移潛能有關。此外，主要負責LPA生產的酶，自體毒素(ATX)與人腫瘤(包括黑素瘤、肺癌、成神經細胞瘤、肝細胞癌、和多形性成膠質細胞瘤)的轉移和侵入性質有關。因此認為LPA為癌癥治療的創新并有前途的革巴標[Mills,G.B.andW.H.Moolenaar(2003)NatRevCancer,3:582-91]。認為用抗-LPA抗體(諸如本文所公開的)中和LPA將是癌癥治療中新的抗-血管生成和抗轉移治療方法。認為抗LPA的單克隆抗體作為"海綿"選擇性結合LPA并由此降低體內胞外有效水平。認為這導致腫瘤發生和腫瘤生長的降低以，及同時阻斷血管形成和轉移潛能。此外，LPA保護細胞免受細胞凋亡的能力有可能由于抗體中和而喪失，由此提高標準促凋亡的化療藥物的功效。ii.血管生成血管生成指從已存在的血管形成新血管的過程。現在認為與實體瘤和循環腫瘤相關的血管生成是肺瘤發生的一個關鍵成分，因為目前腫瘤生長取決于新血管形成這個觀點已被科學界廣泛接受。SIP和39LPA似乎對血管生成過程是重要的。LPA是GR0a(—種被認為通過其促-血管生成作用促進腫瘤發生的原癌基因)的主要的調節劑(Lee，等人(2006)，CancerRes,vol.66:2740-8)。LPA還增強基質金屬蛋白酶-2(—種在進行血管生成過程中，在細胞遷移中被識別的作用因子)的表達(Wu，等人(2005)，Endocrinology,vol.146:3387-3400)。S1P刺激DNA合成和人靜脈內皮細胞(HUVEC)的趨化運動性，同時誘導多細胞結構分化(關鍵的早期血管形成)。SIP還促進骨髓衍生的內皮細胞前體向新血管形成位點遷移，且過表達S1P受體的細胞對抗血管生成藥(沙利度胺和新伐'司他)具有抗性。因此，S1P，以及特別是S1受體是血管生成和新血管形成所需的。最后，在S1P和其他促-血管生成生長因子(諸如VEGF、EGF、PDGF、bFGF和IL-8)之間發生串擾。例如，S1P反式激活EGF和VEGF2受體，而VEGF上調S1P受體表達(Igarashi，等人(2003)，PNAS(USA)，vol.100:10664-10669)。應當理解，血管生成的臨床控制是治療癌癥和其他血管生成依賴性疾病(諸如年齡相關性黃斑變性(AMD)和子宮內膜異位)的關鍵成分。抗-血管生成治療劑還是特別有吸引力的，因為涉及腫瘤血管生成的血管內皮細胞不向腫瘤細胞那么早就突變；因此，與腫瘤細胞相比，血管內皮細胞較不可能獲得對延長治療的抗性，使它們成為有用的治療靶標。有幾種證據表明S1P是潛在顯著的促-血管生成生長因子，其在腫瘤血管生成中是重要的，所述證據包括在多種使用HUVEC的體外試驗中，抗-SlP抗體能中和S1P-誘導的管腔形成、血管內皮細胞的遷移并防止細胞死亡；將表達升高S1P水平的乳腺癌MCF-7細胞注射到棵鼠的乳腺脂肪墊中導致血管生成-依賴性腫瘤的增加，所述腫瘤比當使用對照細胞時更大和更多；抗-SlP抗體能急劇降低原位鼠黑素瘤同種異體移植模型中的腫瘤相關的血管生成；S1P增加向植入小鼠的Matrigel栓中的新毛細管生長，該作用能被抗-SlP抗體的全身施用中和；在鼠Matrigel栓試驗中，體內施用抗-SlP抗體能完全中和促-血管生成生長因子-誘導的血管生成(例如，由bFGF和VEGF);SIP刺激體外和體內的bFGF和VEGF從腫瘤細胞釋放，該作用能被抗-SlP抗體逆轉；SIP增強大量不同類型癌細胞的體外運動性和侵入，其中包括多形性成膠質細胞瘤細胞；以及抗-SlP抗體顯著降低與AMD動物模型相關的新血管形成。SIP在血管生成-依賴性腫瘤中的重要性使得SIP成為一個優秀的癌癥治療靶標。確實，胞外SIP的抗體中和可能導致哺乳動物(包括人)中癌癥進展的顯著降低，這是用支持腫瘤生長所需的營養和氧的共同喪失來抑制血管形成的結果。因此，抗-SlP抗體具有幾種作用機制，包括(1)對腫瘤細胞生長的直接作用；(2)對血管內皮細胞的間接抗-血管生成作用；和(3)預防其他促-血管生成生長因子的釋放和作用的間接抗-血管生成作用。因此，除了提供抗血管生成治療外，抗-S1P抗體還能用作抗轉移治療劑。血管生成的控制是治療除癌癥外的其他血管生成-依賴性疾病的關鍵成分，諸如老年性黃斑變形、早產兒視網膜病變、糖尿病視網膜病變、子宮內膜異位和類風濕性關節炎(Carmeliet，P.(2005)，Nature,vol.Vol.438(15):932-6)。抗-血管生成治療劑還是特別有吸引力的，因為涉及腫瘤血管生成的血管內皮細胞不像癌細胞那么早就突變；因此，與腫瘤細胞相比，血管內皮細胞較不可能獲得對延長治療的抗性，使它們成為有用的治療靶標。SIP抗體及其衍生物還在治療與SIP活性相關的其他過度增殖障礙中是有用的，諸如由異常內皮細胞增殖引起的那些，如伴隨與AMD相關的血管生成所發生的。纖維發生和結疤(a)S1P、成纖維細胞和重建過程很清楚心臟成纖維細胞，特別是心肌成纖維細胞是應答細胞死亡和心肌梗塞(MI)的炎癥的痣痕形成中的關鍵細胞元件。心肌成纖維細胞膠原基因表達是重建的標志和疤痕形成所必需的。除了S1P的其他活性外，SIP還是炎性介體，除了激活血小板、刺激血管生成和促進平滑肌功能外，其通過激活成纖維細胞遷移和增殖來對傷口愈合具有重要貢獻。因此，可能由損傷的心肌局部產生的S1P部分地造成與心臟重構和心力衰竭相關的不適應的傷口愈合，特別是通過活化心臟中的心肌成纖維細胞。細胞對S1P的應答通常有三種防止細胞死亡；刺激增殖；和促進遷移應答。因此，S1P活性或與具體障礙、細胞系等的關系可以通過采用用于該目的的配合分析來評估。有證據表明成纖維細胞以三種方式應答S1P以促進傷口愈合。例如，在下述實施例部分中的幾個實施例中，陳述了證明S1P通過提高心臟心肌成纖維細胞的活性來促進重建(增殖、遷移和膠原基因表達)。(Excessscarring)。受傷或手術后的過度結痣，不是胎兒皮膚組織而是成年人的一個問題(AdzickandLorenz(1994)，AnnSurg，vol.220:10-18),其歸因于受傷后成人皮膚組織中過多的TGF-(3。暗示SIP為TGF-(3信號傳導系統的潛在活化劑。因此，預期抗SIP抗體限制受傷或手術后的過多疤痕。(b)通過LPA和SIP防止細胞死亡LPA是一種保護癌細胞免受細胞凋亡的試劑。因此，如上面詳細討論的，例如抗LPA的抗體使癌細胞對化學療法更易感。事實上，這已經在本文下面描述的使用新近開發的抗-LPA單克隆抗體的實施例中得到證實。與許多細胞類型類似，通過加入SIP能直接保護成纖維細胞免受細胞凋亡，并且SPHK的抑制劑增強細胞凋亡，且SIP阻斷細胞色素C的釋放和所得胱天蛋白酶的激活。此外，用SPHK1轉染的成纖維細胞顯示出防止細胞凋亡，該效果可能取決于SPHK1向質膜的轉移。已經4艮好確定了SPHK1上調Akt,由此調節Bel-2家族成員并防止細胞凋42亡。鼠胚胎成纖維細胞(MEFs)中的Akt磷酸化也需要S1P3。同樣，SPHK的上調并導致SIP水平的增加保護心臟成纖維細胞免受細胞凋亡。神經酰胺，S1P的上游代謝物，降低線粒體的膜電勢，與誘導死亡的線粒體蛋白的轉錄升高相一致。由于可變電阻機制，SIP可具有相反的作用并保護心臟心肌成纖維細胞(即，在心臟中完全分化的成纖維細胞)免受細胞凋亡。確實，SIP甚至激活自體吞噬作為保護機制。中和抗-SlP抗體(或結合并用于隔離SIP的其他分子)能逆轉這些影響。B.疼痛認為生物活性脂質在疼痛(包括神經性疼痛和與化學治療相關的疼痛)的發病機理中起重要作用。使用多種藥理學和遺傳學方法，包括使用缺少LPA1受體的小鼠，確立了LPA信號傳導在神經性疼痛的形成中的顯著作用(參見，即，Ueda，等人(2006)，PharmacolTher，vol.109:57-77;I畫e，等人(2004)，NatMed.，vol.10:712-8)。具有神經損傷的野生型動物形成行為上的痛覺異常和痛覺過敏，這與背神經后根中的脫髓鞘以及脊髓背角中的蛋白激酶C異構體和在背神經后根神經中樞中的21釣通道亞單位的表達增加平行。鞘內注射LPA誘導與在神經連接后觀察到的那些類似的行為、形態和生化變化。相反，缺少能激活Rho-Rho激酶路徑的單一LPA受體(LPA-1,還稱為EDG-2)的小鼠在外周神經損傷后不形成神經病理性疼痛的信號。Rho和Rho激酶的抑制劑也防止這些神經性疼痛信號。這些結果暗示受體介導的LPA信號傳導在起始神經病理性疼痛中是關鍵的，并且抗LPA的抗體很有可能減輕患有該病況的個體中的神經性疼痛[Moulin,DE(2006)，PainResManag，vol.11，SupplA:30A-6A]。在其他疼痛的情況下，與化學療法相關的疼痛是許多小分子化療試劑的主要劑量限制性毒性。確實，已經報導了許多化學治療誘導的43疼痛的案例。例如，使用紫杉醇(Taxol)(—種來自太平洋紫杉樹紫杉屬短葉蘇木(raxM6reW尸oh'a)的抗肺瘤藥)治療多種癌癥，包括卵巢癌、乳腺癌和非小細胞肺癌。然而紫杉醇的效力受到高生發率的嚴重痛性外周神經病(例如麻痹和灼痛)的產生所限。抗與所述疼痛相關的生物活性脂質的單克隆抗體，例如LPA(或含有其脂質結合部分的該抗體的衍生物)，可以與紫杉醇聯合施用以減輕與化療試劑相關的疼痛。作為減輕該劑量限制性毒性的結果，當與所述單克隆抗體或抗體衍生物聯合施用時，待施用的紫杉醇的量可以更高(并因此甚至更有效)。在一些實施方案中，所述化療試劑(或其他藥物)可以與抗體或抗體4汙生物綴合或以其他方式與抗體或抗體衍生物相連，例如，通過將小分子化療試劑與抗體共價相連，通過將小分子化療劑與連有單克隆抗體或至少一個衍生自單克隆抗體的結合生物活性脂質的結構域的多價支架相連等，所述單克隆抗體對靶生物活性脂質具有特異性反應性。C心血管疾病和障礙缺血性心臟病是美國的第一位死亡原因。每年約有一百五十萬人遭受心臟病發作(心肌梗塞)，其中約有三分之一(即，約500,OOO)是致命的。此外，約六百七十五萬美國人患有心絞痛(心臟缺血最常見的表現形式)。僅在美國總共有超過一千三百萬患者患有缺血性心臟病。"缺血"是一種與向身體局部供應氧合血流不足相關的病況，通常由供應其的血管的收縮或阻塞引起。缺血在流向組織的血流降低到臨界水平之下時發生。這種血流的降低可能由下述原因產生(i)由栓子(血塊)引起的血管阻塞；(U)由于動脈硬化癥引起的血管阻塞；(iii)血管破裂(出血性中風)；(iv)由于急性血管收縮引起的血管阻塞；(v)心肌梗塞(當心臟停止時，流向器官的血液減少，由此導致缺血)；(vi)外傷；(vii)手術，在手術期間需要減少或停止流向組織或器官的血液以實現手術目的(即，血管成形術、心臟和肺/心臟移植)；(viii)與某些試劑接觸，例如，多巴酚丁胺或腺苷(Lagerqvist，等人(1992)，Br.HeartJ.，vol.68:282-285);或(ix)作為心臟毒性的抗腫瘤試劑和44其他化療試劑，諸如多柔比星。即使血液流速(體積/時間)是足夠的，由于缺氧仍然可能發生缺血，即，其中血液的氧含量不足以滿足受影響區域的正常細胞需氧量的病況。在定義上，缺氧血與含氧量正常的血截然不同，即，其血液中氧含量不足以滿足正常細胞需氧量。缺氧病況由，但不限于下述原因產生，不利影響心臟泵血的心力衰竭的形式，諸如高血壓、心律不齊、敗血性休克、外傷、心肌癥和充血性心臟病。當心臟血流受限制(缺血)和/或當給心肌供應的氧被減少(缺氧)使得供應量不能滿足心臟對氧的要求時，發生心肌缺血障礙。冠心病(CAD)由動脈硬化引起，特別是動脈硬化癥，是缺血的最常見原因，并具有諸如穩定或不穩定心絞痛之類的癥狀。CAD能導致急性心肌梗塞(AMI)和心臟性猝死。導致心力衰竭的缺血病況的范圍指急性冠狀動脈綜合征(ACS)。再灌注損傷通常是缺血的結果，特別是當使用抗凝血劑、溶解血栓劑或抗心絞痛藥時，或當通過血管成形術或通過冠狀動脈移纟直法手術打開心血管時。目前，對急性心肌梗塞和其他心臟病的治療包括，但不限于機械裝置和與其相關方法，例如，冠狀動脈血管成形術；溶解血栓劑諸如鏈激酶、tPA及其衍生物。這些治療的佐劑包括P-受體阻滯藥、阿司匹林和肝素，以及糖蛋白(GP)IIb/IIIa抑制劑。GPIIb/IIIa抑制劑降低血小板凝聚和血栓形成。實例包括單克隆抗體(例如，阿昔單抗)、環肽(例如，依替巴肽)、和非肽類擬肽(nonpeptidepeptidomimetics)(例如，替羅非班(tirofibian)、拉米非班、珍米洛非班、西拉非班和來達非班(lefradafibian))。預防性治療包括降低患者膽固醇水平的那些，例如通過飲食控制和藥物干預。他汀類是一種用于降低膽固醇水平的試劑。認為他汀類通過抑制HMG-CoA還原酶的活性來起作用，該還原酶反過來又增加膽固醇受體的肝臟產生。肝臟膽固醇受體結合膽固醇并將其從血液中除去。所述試劑包括洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀和氟伐他汀。這些和其他他汀類減慢冠心病的進程，并能誘導患者中動脈粥樣硬化病變的退化，雖然沒有完全理解使用所述藥物的副作用的范圍。應當理解，對生物活性脂質有反應性的單克隆抗體和衍生物，以及其他片段和變體單獨或與其他治療方法(包括用藥物和/或手術的治療)組合可用于實現心臟治療。此處，"心臟治療"指預防和/或治療心肌疾病、紊亂或物理外傷，包括心肌缺血、AMI、CAD和ACS、以及外傷或心臟細胞和組織受損，其可能在引起哺乳動物(特別是人)中缺血或缺血/再灌注受損的干擾心臟病學或其他手術或醫療過程或治療過程中發生，或作為干擾心臟病學或其他手術或醫療過程或治療的結果發生。除了心臟和大腦，抗-SlP方法還可用于其他基于血管的、類中風病況，諸如多種內耳病理(Scherer,等人(2006)，CardiovascRes，vol.70:79-87)。D.腦血管疾病和障礙經歷腦缺血的患者通常遭受從瞬時神經功能缺損到不可逆損傷(中風)或死亡的殘廢。腦缺血，即，流向中樞神經系統的血流減少或停止，可以表征為局部或全身的。局部腦缺血指由在腦血管中由顱內或顱外的腦動脈中的部分或完全閉塞引起的血流減少或停止。所述閉塞通常導致中風、特征在于持續至少24小時的神經功能缺損的急性發作的綜合征，反映局部涉及中樞神經系統并是腦循環干擾的結果。其他局部腦缺血的原因包括由蛛網膜下出血或醫源性干涉引起的血管痙攣。全身性腦缺血指由全身性循環衰竭引起的腦血管中的血流減少，其迅速導致向組織供應的氧和營養的減少。因此，全身性腦缺血由嚴重的心臟功能衰退引起，且更通常地由AMI引起，雖然干擾原因包括由急性心肌炎或心搏停止或延長的心肺旁路后的心肌收縮抑制引起的泵衰竭；機械性異常，諸如嚴重的心臟瓣膜狹窄、大量主動脈瓣返流或二尖瓣返流，以及急性獲得性室間隔缺損；以及來自心律不齊，諸如心室顫動，或來自介入操作，諸如頸動脈血管成形術、支架、動脈內膜切除術、心臟導管插入術、電生理研究和血管成形術。通過用細胞死亡后導致胞內Na+和0&++的增加來對臨界細胞進行去極化，中風和/或MI后的缺血損傷典型地導致細胞死亡。控制該過程的一種通道是瞬時受體電位蛋白(TransientReceptorPotentialProtein,—種非電壓依賴性通道)，且最近將SIP鑒定為通過GPCR-依賴性機理的該通道的激活劑。此外，瞬時受體電位蛋白，鞘氨醇激酶1和鞘氨醇激酶2與Egr-1共享啟動子區域，Egr-l被認為是一種調節心血管病理的重要總開關(Khachigian，LM(2006)，CircRes，vol.98:186-91)并且Spl是一種在神經細胞死亡中起關鍵作用的轉錄因子(Simard，等人(2006)，NatMed.，vol.12:433-40)。基于這些發現，預期抗SIP的抗體能減輕由缺氧后的缺血引起的細胞死亡。本領域的技術人員能容易地鑒定患有中風的患者或處于患中風、腦缺血、頭部外傷或癲癇癥風險的患者。例如，處于患有中風風險的患者包括患有高血壓或進行大手術的那些。傳統上，急性缺血性中風的緊急處理主要由普通的支持治療組成，例如水合作用、監視神經狀態、血壓控制和/或抗血小板或抗凝血治療。給中風患者施用肝素的效果有限且不穩定。在一些情況下，在一段時間內缺血問題會自己解決，這是由于如下事實在幾天的時間內一些血栓被吸收到循環中或碎裂并傳播到遠處。組織纖溶酶原激活劑(t-PA)已經被批準用于治療急性中風，雖然所述全身性治療與腦內出血和出血性并發癥的風險增加有關。除了施用溶解血栓劑和肝素外，目前在市場上對于患有阻塞性局部腦缺血的患者來說沒有其他治療選擇。血管痙攣可能部分地對血管舒張劑有應答性。神經血管手術的新開發領域(涉及在頸動脈中放置微創裝置以物理上除去不良病變)在將來可以為這些患者提供治療選擇，雖然這類操作可能導致自身血管痙攣。應當理解，對生物活性脂質具有反應性的抗體、抗體-衍生物及其他免疫衍生部分可單獨或與其他治療方法(包括用藥物和/或手術治療)聯合用于實現腦血管治療。此處"腦血管治療"指涉及針對預防和/或治療與腦缺血和/或缺氧有關的疾病和障礙的治療。特別關注的是由全身缺血引起的腦缺血和/或缺氧，所述全身缺血由引起哺乳動物(特別是人)中缺血或缺血/在灌注腦血管損傷的心臟病、以及外傷或手術或醫療過程或治療引起。E.結合生物活性脂質的抗體的診斷性和治療性應用由于已闡明了多種生物活性脂質在疾病中的作用，還能預見生物活性脂質的抗體結合劑在診斷和治療診斷(theranostics)中的新作用。根據本發明，提供了使用與固體支持物結合的衍生脂質來增強生物活性脂質的檢測的方法。除了在抗體產生和表征以及在研究中的使用這些檢測方法外，增強的生物活性脂質的檢測還提供對與生物活性脂質相關疾病的有價值的診斷方法。當與其他技術組合時，提供了設計最佳患者治療的治療診斷方法。一個非限制性實例是抗-S1P抗體在診斷和治療診斷方法中的用途，涉及S1P作為癌癥生物標記物的角色。還預想使用靶向LPA或其他活性脂的抗體，并用于其他疾病適應癥的診斷和治療診斷方法。最近，科學文獻顯示S1P是有效的致瘤生長因子，其可能從腫瘤細胞釋放，且S1P可能是早期癌癥檢測的新生物標記物。在多種癌胂類型中，負責生產S1P的酶SPHK被顯著上調(French,Schrecengost等人2003)。與相鄰的正常組織相比，在惡性乳腺癌、結腸癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、子宮癌、腎癌和直腸癌中SPHK活性被上調2-3倍。這些研究者還顯示SPHK表達在患者間變化，表明一些患者的腫瘤比患有同樣腫瘤類型的其他患者更依賴于S1P。檢索商購可得的基因組數據庫(ASCENTA，GenelogicInc.,GaUhersburgMD)證實SPHK的相對表達通常在多種惡性腫瘤中顯著提高。最近的出版物還顯示S1P是新的癌癥生物標記物[Xu，Y.等人，(1998)JAMA280:719-723;Shen，Z.等人，(2001)GynecolOncol83:25-30;Xiao,Y.J.等人,(2001)AnalBiochem290(2):302-13;Sutphen(2004)CancerEpidemiology13(7)1185-91]。例如，Sutphen等人還顯示血清SIP水平在早期卵巢癌患者中升高(Sutphen2004)。48從所述數據可以.推測乳腺癌患者也可以在其對SIP的依賴性上顯示出一些可變性。總之，這些初步觀察提示可以預測對個體患者(如果該患者的活檢組織、血液、尿或其他組織或液體樣品顯示升高的S1P水平)的抗-S1P治療劑，例如，抗-S1PmAb治療劑的成功。S1P在生物液體中的潛在用途已經被下述專利公開US6,534,323，US6,534,322;US6，210，976;US6，858，383;US6,881,546;US7，169，390和US6,500,633，通常均以臨時申請進行命名。即使人源化抗體具有低毒性和大的治療指數，對患者和衛生服務來說它們是非常昂貴的。因此，抗-SlPmAb治療劑的直接應用于最可能對該治療有應答的那些來說會降低風險和最小化成本，從而提供最佳的患者受益。下面概述的是用于改善疾病管-理的生物臘質診新和治療4參斷-的幾個推薦的應用。1.SIP可用做生物標記物來預測個體患者的治療功效，特別是當結合基于鞘脂的基因組時。基于最近的發現，我們推測SIP依賴性腫瘤除了大量的S1P血清來源外，能產生其自身的S1P。高度攻擊性肺瘤利用生產其自身生長因子的策略，而我們認為SIP是一種生長因子。因此，來自個體患者的血清、血漿或尿測量總SIP將是患者結果的一個預測。此外，S1P生產集中在胂瘤自身和肺瘤微環境中(例如，間質流體)。下文的實施例ll描述了抗-SlPmAb在腫瘤切片的免疫組織化學方法用于估計腫瘤自身的S1P產生中的用途。SPHK的上調證實是有用的，但由于激酶是一種酶，認為與如果依賴于激酶自身的RM或蛋白表達相比，通過SIP產生測量的信號更高。此外，假定其腫瘤S1P受體和SPHK表達的上調的患者更可能具有依賴SIP作為生長因子的腫瘤。認為這些患者將最受益于我們推定的抗-SlPmAb療法。因此，來自通過定量PCR分析活檢組織的，對SIP受體和SPHK的相對表達的生物分析將提供強的治療診斷平臺。該治療診斷平臺由血清SIP標記物分析結合作為疾病替代標記物的SIP-相關蛋白標記物的基因組學或蛋白組學定量組成。該新的多標記物分析將提供用于預測對基于抗SIPmAb(SPHING0MABTM)治療的個體應答性的強大平臺。2.SIP可用作替代標記物來滴定治療方案。來自用抗SIPmAb治療的患者的血清SIP濃度具有被用作評估治療過程的替代標記物的潛力。使用患者血清、血漿或尿樣品的基于ELISA的平臺允許準確測量S1P生物標記物水平和更精確測定個體的抗-SlPmAb給藥方案。可以將替代標記物水平與標準的臨床終點聯合使用來測定醫療方案的功效。3.SIP可用作用于早期檢測癌癥的篩選工具。由于進展階段和治療成功之間的強烈相關，癌癥的早期檢測是引起關注的。由于大多數患者無癥狀這一個事實，印巢癌一期是非常難檢測的。到診斷出卵巢癌時，大多數患者已處于疾病晚期。在較早階段的檢測對患者結果顯然是有利的。如上所述，卵巢癌患者的血清含有2倍高的S1P，且該升高用我們目前的ELISA平臺是容易檢測的。由于許多實體瘤類型，包括卵巢癌，顯示升高的SPHK表達，推測患有這些癌癥的許多患者將顯示升高的血液和/或尿S1P，這允許臨床醫師更早干預疾病進展。本文描述的衍生生物活性脂質還可用于檢測患者液體或組織樣品中的抗體水平。不局限于下述，檢測血液中抗-鞘脂抗體的存在的免所述疫分析可用于間接測試患有慢性缺血病況、癌癥或自身免疫障礙(諸如多發性硬化)的患者中增加的鞘脂。該分析基于如下推測鞘脂的血液水平的升高導致患者產生抗-鞘脂抗體，類似于在患有結腸直腸癌的患者中觀察到的抗-乳糖基鞘氨醇抗體(JozwiakW.&J.Koscielak，Eur.J.CancerClin.Oncol.18:617-621，1982)和在麻瘋病患者的血清中檢測到的抗-半乳糖腦苷脂抗體(VemuriN.等人，LeprosyRev.67:95-103，1996)。F.研究本發明生物活性信號傳導脂質質靶標可立即用于高通量篩選分析中，用于篩選候選化合物以鑒定具有所需活性的那些，即，抑制能催化產生不需要的生物活性信號傳導脂質的反應的酶或阻斷生物活性50信號傳導脂質與其受體的結合。由此鑒定的化合物可用作常規的"前導化合物"或其自身可用作治療劑。本發明的篩選方法包括使用篩選分析從不同分子的文庫中鑒定一個或多個具有所需活性的化合物。"篩選分析"是經設計用于識別、分離和/或確定在具有預選的活性的集合中的化合物結構的選擇性分析。所述集合可以是根據本領域中已知的方法制備的傳統組合文庫，或可以是商購獲得的并可以是對潛在的生物活性信號傳導活性預選的大量有機結構或結構。"鑒定"是指分離具有所需活性的化合物，并確定其化學結構(包括但不限于分別確定多肽的氨基酸序列和核酸的核苷酸序列)，和另外地或備選地，純化具有所篩選活性的化合物。設計生化和生物分析在廣泛范圍的系統(從蛋白-蛋白相互作用、酶催化、小分子-蛋白結合到細胞功能)內測試活性。所述分析包括自動、半自動分析和高通量篩選分析。實施例本發明通過過參考下述詳細的實施例來進一步進行描述。在任何情況下，這些實施例都不應理解為對本發明的限制。實施例1制備S1P的代表性巰基化類似物的合成方案該實施例中描述的合成方法通過主要使用初級常規有機化學連續加入結構元件來制備抗原。在圖1中提供該實施例中描述的方法的圖示，在下面的合成描述中的化合物編號指圖1中的編號結構。該合成方法開始于商購獲得的15-羥基十五炔，1,通過甲基磺酰氯激活所述15-羥基基團以促進羥基置換以產生磺酸酯，2。用叔丁基硫醇取代所述磺酸酯得到保護的硫醚，3，其用Garner's醛縮合得到4。溫和地將炔基部分還原為烯(5)，然后通過酸催化打開噁唑烷(oxazolidene)環得到S-保護和N-保護的硫醇取代鞘氨醇，6。在最后一步中，用二碳酸二叔丁酯再衍生化來減輕在酸催化開環期間N-B0C基的損失。51應當理解，化合物6本身可用作制備半抗原的抗原以產生針對鞘氨醇的抗體，或，備選地，作為兩種不同的合成方法的起始材料來制備巰基化S1P類似物。在一個方法中，用磷酸三甲酯對化合物6進行磷酸化得到化合物7。用三甲基溴硅烷處理化合物7除去來自磷酸酯的曱基和來自伯胺的叔丁氧羰基，得到在硫上只有叔丁基作為唯一保護基團的化合物8。為了除去該基團，用NBS代替叔丁基以形成二硫化物，9，然后對其進行還原得到巰基化S1P類似物，10。另一方法涉及直接用NBSCi處理化合物6形成二硫化物，11,然后對其進行還原形成N-保護的巰基化S1P類似物，12。用溫和的酸處理該化合物得到巰基化的鞘氨醇類似物，13，對其進行酶催化地磷酸化(例如，鞘氨醇激酶)得到巰基化S1P類似物，10。對所述的合成方法進行改變是可能的，尤其是關于保護和去保護試劑的選脊，例如，在實施例3中描述的使用三平基二硫化三氟甲基磺酸鹽(trimethyidisulfidetriflate)對石克醇進行去保護。化合物2.將DCM(400mL)加入到裝有1(10.3g，45.89mmol)的500mLRB燒瓶中，并將所得溶液冷卻到0。C。接下來，一次性加入TEA(8.34g，82.60mmoi，9.5mL)，然后在10分鐘內逐滴加入MsCl(7.88g，68.84mmol，5.3mL)。允許在室溫下攪拌反應半個小時或直到起始材料消失a=0.65，5:1己烷EtOAc)。用NH4C1(300mL)淬滅該反應，并用DCM(2X200mL)萃取。用MgS04干燥有機層，過濾并將濾液蒸發得到固體(13.86g，99.8%的產率)。'HNMR(CDC13)S4.20(t，J=6.5Hz，2H)，2.98(s，3H)，2.59(td,J=7Hz，3Hz，2H)，1.917(t,J=3Hz，1H),1.72(五重峰，J=7.5Hz，2H)，1.505(五重峰，J=7.5Hz，2H)，1.37(brs，4H)，1.27(brs，14H).13C{]H}腿(CDC13)S85.45，70.90，68.72，46.69，38.04，30.22，30.15，30.14，30.07，29.81，29.76，29.69，29.42，29.17，26，09，19.06，9.31。在化合物2的HRMS分析(ES-TOF)中觀察到的主要離子為m/z=325.1804(C16H3。03S的計算值M+Na+52325.1808)。化合物3.向1LRB三頸燒瓶中裝入叔丁硫醇(4.54g，50.40mmol)和THF(200mL)，然后置于冰浴中。在30分鐘內加入n-BuLi(3L5mL，1.6M，在己烷中)。接下來，在2分鐘內加入溶于THF(100mL)的化合物2(13.86g，45.82mmol)。允許反應攪拌1小時或直至起始材料消失(Rr=0.7，1:1己烷/EtOAc)。用飽和NH4C1(500mL)淬滅反應并用Et02(2X250mL)萃取，用MgS04干燥，過濾，并蒸發濾液得到黃色的油狀物(11.67g，86%的產率)。^NMR(CDC13)52.52(t，J=7.5Hz，2H)，2.18(td，J=7Hz，2.5Hz，2H)，1.93(t，J-2.5Hz，1H)，1.55(五重峰，J=7.5Hz，2H)，1.51(五重峰，J=7Hz,2H)，1.38(brs，4H)，1.33(s,9H)，1.26(s，14H).13C{H)NMR(GDCh)S85.42，68.71，68.67,54.07,42.37，31.68，30.58，30.28，30.26，30.19，30.17，29.98，29.78，29.44,29.19，29.02，19.08。化合物4.將裝有化合物3(5.0g，16.85mmol)的250mLSchlenk燒瓶抽真空并用氮氣填充三次，然后加入無水THF(150mL)。將所得溶液冷卻到-78。C。接下來，在2分鐘內加入n-BuLi(10.5mL，在己烷中1.6M)。并在-78。C下攪拌反應混合物18分鐘，然后除去冷卻槽20分鐘。繼續干冰浴。15分鐘后，然后在五分鐘內加入于無水THF(IOmL)中的Garner，s醛(3.36g，14.65mmol)。20分鐘后，除去冷卻槽。在2.7小時后薄層色鐠(TLC)顯示Garner，s醛已經消失。用飽和NH4C1水溶液(300mL)淬滅反應并用Et20(2X250mL)萃取。用Na2S04干燥合并的Et20相，過濾并蒸發濾液得到粗化合物4和其同-非對映異構體(未顯示在圖1中)，為黃色油狀物(9.06g)。然后在下一步中無需進一步純化直接使用該材料。化合物5.為了還原化合物4中的三鍵，將所述油狀物在氮氣下溶于無水Et20(100mL)中。在室溫下，將RED-A1(20mL，在甲苯中65%)緩慢加入到所得的溶液中以控制氫氣(H2)的放出。在室溫下攪拌反應過夜或到當TLC顯示起始材料消失時(Rf=0.6，在1:1EtOAc:己烷中)并用冷MeOH或NH4C1水溶液緩慢淬滅以控制比的放出。用硅藻土(Celite)墊過濾所得的白色懸浮液并用EtOAc(2X400mL)萃取濾液。用MgS04干燥合并的EtOAc萃取相，過濾并蒸發濾液得到粗化合物5及其同-非對映異構體(未顯示在圖1中)，為黃色油狀物(7.59g)。化合物6.將含有化合物5的油狀物溶于MeOH(200mL)中，加入PTSA水合物(O.63g),并在室溫下攪拌溶液l天，然后在5(TC下攪拌2天，此時，TLC顯示所有起始材料(5)已經消失。然而，存在一些極性材料，說明酸已經部分切掉BOC基團。通過加入飽和的NHrC1-水溶液(400mL)來結束反應，并用醚(3x300mL)萃取。用Na2S04干燥合并的醚相，過濾并蒸發濾液至干燥，得到5.14g的油狀物。為了對所形成的氨進行再保護，將所述粗產物溶于CH2C12(150mL)，并向其加入B0C20(2.44g)和TEA(1.7g)。當TLC(1:1己烷/EtOAc)顯示在基線上不再有材料時，加入飽和NH4C1水溶液(200mL),在分離有機相后，用CH2C12(3X200mL)萃取混合物。用Na2S(h干燥合并的萃取相，過濾并將濾液濃縮至干燥，得到黃色油狀物(7.7g)，其在硅膠柱上使用梯度的己烷/EtOAc(多至1:l)進行色譜分析以分離非對映異構體。通過使用l:lPE/EtOAc的TLC，反式異構體(化合物6)的Rr為0.45。對于順式異構體(未顯示在圖1中)，其Rf為0.40。化合物6的產量為2.45g(根據Garner，s醛，總產率為39%)。反式異構體的^NMR(CDC13)51.26(brs，20H)，1.32(s，9H)，1.45(s，9H)，1.56(五重峰，2H，J=8Hz),2.06(q，2H，J-7Hz)，2.52(t，2H，J-7Hz)，2.55(brs，2H)，3.60(brs,1H),3.72,，1H，J=11.5Hz,7.0Hz，3.5Hz)，3.94(dt，1H，J=11.5Hz,3.5Hz)，4.32(d，1H，J=4.5Hz)，5.28(brs，1H)，5.54(dd，1H，J=15.5Hz，6.5Hz)，5.78(dt，1H,J=15.5Hz，6.5Hz).13C{)H}NMR(CDCh)5156.95，134.80，129.66，80.47，75.46，63.33，56.17，42.44，32.98，31.70，30.58，30.32，30.31，30.28,30.20，30.16，30.00，29.89,29.80，29.08，29.03。C27H53N04S的分析計算值:C，66.48;H，10.95;N，2.87.實驗值:C，65.98;H，10.46;N，2.48.化合物7.向溶于無水吡啶(2mL)的醇化合物6(609.5mg，1.25mmol)的溶液中加入CBr4(647.2mg，1.95mmol，1.56當量)。在冰浴中冷卻燒瓶，并在2分鐘內逐滴加入P(OMe)3(284.7mg,2.29mmol，1.84當量)。4分鐘后，除去水浴，并在12小時后用醚(2GmL)稀釋該混合物-。舟HC4水-溶氣(IOmL，2N)洗滌所得混合物以形成乳液,其在用水(20mL)稀釋后分離。用醚(2xl0mL)，然后EtOAc(2xl0mL)萃取水相。合并醚萃取物和第一次的EtOAc萃取物，并用HC1水溶液(10mL，2N)、水(IOmL)和飽和NaHC03水溶液(10mL)洗滌。用最后的EtOAc萃取物反萃取水性洗滌液。用MgS04干燥合并的有機相，過濾并濃縮濾液得到粗產物(l.16g),其通過快速色譜在二氧化硅(3x22cm柱)上使用CH2CL然后CH2Ch-EtOAc(1:20，1:6，1:3和1:1產品開始洗脫，6:4,7:3)進行純化。前期級分含有56.9mg的油狀物。后期級分提供透明無色的油狀產物(化合物7,476.6mg，64%)C29H58N07PS(595.82)的分析計算值C，58.46;H，9.81;N，2.35.實驗值C，58.09;H,9.69;N，2.41.化合物8.對含有化合物7(333.0mg，0.559mmol)和攪拌棒的燒瓶抽真空并用氮氣填充。用注射器注入乙腈(4mL，由CaH2蒸餾得到)并將含有溶液的燒瓶在并冰浴中冷卻。使用注射器，在l分鐘內加A(CH3)3SiBr(438.7mg，2.87mmol，5.13當量)。35分鐘后，用另一部分乙腈(lmL)清洗燒瓶的上部并除去冰浴。在另一80分鐘后，取出等分試樣，通過在其上吹掃氮氣來干燥溶液，殘余物在CDCh中通過'HNMR進行分析，其只顯示歸于P-0CH3部分的痕量峰。20分鐘后，向反應混合物中加入水(O.2mL)，然后加入用于分析等分試樣的CDC13溶液，并在旋轉蒸發儀上濃縮所述混合物到ca.Q.5mL體積。按份使用丙酮(3mL)將所述殘余物轉移到校準的測試管中，形成淺棕色溶液。按份加入水(3mL)。加入0.3mL后，觀察到渾濁。加入總共lmL后，形成膠狀沉淀。另外加入O.6mL水，變得更渾濁且膠狀分離，但最后一部分水似乎沒有改變混合物的外觀。總之，在數小時內完成該過程。離心該管并通過移液管除去上清液。所述固體不再是膠狀的，在真空下用PA。干燥，得到化合物8(258.2mg，95%),為一水合物。C22H"N05PS+H2Q(485.66)的分析計算值C，54.40;H,9.96;N，2.88.實驗值C，54.59;H，9.84;N，2.95。化合物9.在手套箱中將化合物8(202.6mg，0.417mmol)加入到含攪拌棒、無水THF(3mL)和水醋酸(3mL)的測試管中。加入NBSCl(90mg，0.475mmol，1.14當量)，并在半小時后，得到澄清溶液。在總共9小時后，蒸發等分試樣至干燥，并在CDCh中用'HNMR分析殘余物。對應于C尿StBu和C《SSAr的峰顯示反應約完成了75%,將該語與CDCh中純NBSC1的鐠比較顯示在該反應中沒有試劑殘留。因此，加入另一部分(24.7mg，0.130mmol，0.31當量)，3個小時后加入另一個部分(19.5mg，0.103mmo1，0.25當量)。在另一'j、時后，將所得混合物轉移至新的測試管中，使用THF(2mL)清洗并加入水(lmL)。化合物10.將PMe3(82.4mg，1.08mmol，加入的2-硝基苯亞磺酰氯總量的1.52倍)加入到上述化合物9的澄清溶液中。所述混合物變暖和渾濁，并隨著時間有沉淀形成。4.5小時后，加入甲醇，并離心該管。固定沉淀有困難，其占據管底部lcm。使用移液管除去澄清的黃色上清液。加入甲醇(5mL，用氮氣除氧)，離心該管，并用移液管除去上清液。重復該循環3次。當濃縮時，最后的甲醇洗滌僅留下4.4mg的殘余物。在真空下用PA。干燥大塊的固體殘余物，得到化合物10(118.2mg,68%)為一鹽酸鹽。C18H38N05S+HC1(417.03)的分析計算值C，51.84;H，9.43;N，3.36.實.驗值C，52.11;H，9.12;N,3.30.化合物11.化合物6(1.45g，2.97mmol)溶于AcOH(20mL)，并一次性加入的NBSC1(0.56g，2.97mmol)。攪拌反應3小時或直至起始材料消失，通過TLC[產物Rf=0.65，起始材料Rf=0.45，1:1E10Ac/己烷]觀察產物出現。在高真空線下濃縮反應至干燥，并將殘余物溶于THF/H20(100mLof10:1)中。化合物12.將Ph3P(0.2.33g,8.91mmol)—次性加入到含有化合物11的上述溶液中，攪拌反應3小時或直至起始材料消失。在高真空系下將粗反應混合物濃縮至干燥，得到含化合物12的殘余物。化合物13.將含化合物12的上述殘余物溶于DCM(50mL)和TFA(lOmL)中。室溫下攪拌混合物5小時并濃縮至干燥。將殘余物加載到裝有硅膠的柱上并用純DCM，接下來用含有5°/。Me0H的DCM，然后用含有10%MeOH的DCM進行色語分析得到最終產物，化合物13,為粘性白色固體(O.45g，來自5的產率為46%)。^NMR(CDC13)51.27(s)，1.33(brm，)，1.61(p，2H，J=7.5Hz),2.03(brd，2H,J=7Hz),2.53(q，2H，J=7.5Hz)，3.34(brs，1H)，3.87(brd，2H，J=12Hz)，4.48(brs，2H)，4.58(brs，2H)，5.42(dd，1H，J=15Hz，5.5Hz)，5.82(dt，1H，J-15Hz，5.5Hz)，7.91(brs，餘"C(110腿(CDCU5136.85，126.26，57.08，34.76,32.95，5730.40，30.36,30.34，30.25，30.19，30.05，29.80，29.62，29.0925.34。實施例2制備巰基化脂肪酸的合成方案構的巰基4^脂肪酸的制備、，所述脂質結構能進一步與蛋白或其他載體復合，并施用至動物以引發免疫應答。所述方法采用常規有機化學。在圖2中提供該實施例中采用的方法的圖示，在下面的合成描述中所述的化合物編號指圖2中的編號結構。描述了兩種合成。第一種合成，對于C-12巰基化脂肪酸而言，起始于商購的12-月桂-酸，化合物14。然后用叔丁基硫醇代替溴以產生保護的C-12巰基化脂肪酸，化合物15。第二種合成，對于C-18巰基化脂肪酸而言，起始于商購的9-溴-壬醇(化合物16)。化合物16中的羥基通過二氫吡喃基的加成得到保護，且所得的化合物，17，經由格氏反應(Grignardreaction)通過激活一半溴化材料進行二聚化，接下來加入另一半。對在酸催化下除去二氫吡喃保護基后產生的18-羥基十八醇(化合物18)選擇性地進行單溴化以形成化合物19。在該反應過程中，約一半的醇基團通過形成曱烷磺酸酯被激活以進行親核取代。然后所述醇被氧化而形成18-溴羧酸，化合物20，然后用叔丁硫醇處理以置換溴并形成保護的巰基化C-18脂肪酸，化合物21。保護的巰基化脂肪酸，各自為叔丁基硫醚，可以被合并入復合脂，并例如使用實施例1和3中描述的脫保護方法之一除去保護基。然后將所得的游離硫醇用于與蛋白或其他載體復合，之后用該半抗原接種動物。A.C-12巰基化脂肪酸的合成化合物15.將叔丁硫醇(12.93g，143mmol)加入到干燥的58Schlenk燒瓶中，并使用Schlenk方法使該系統處于氮氣下。加入無水，脫氣的THF(250mL)并在冰浴中冷卻燒瓶。在十分鐘內通過注射器緩慢加入n-BuLi(55mL，在己烷中2.5M，137.5mmo1)。在0。C下攪拌混合物1小時。加入固體的溴酸(bromoacid),化合物H(10g，36mmo1),并在60°C下對反應加熱和攪拌24小時。用2MHCi(250mL)淬滅反應，并用醚(2x300mL)萃取。合并的醚層用硫酸鎂干燥，過濾，并通過旋轉蒸發濃縮濾液得到米色粉末狀的硫醚酸，化合物15(10g，99%的產率)。H腿(CDC13,500MHz)51.25-1.35(brs，12H)，1.32(s，9H)，1.35-1.40(m，2H)，1.50-1.60(m，2H)，1.60-1.65(m，2H)，2.35(t，2H，J=7.5Hz)，2.52(t,2H，"7.5Hz)。在HRMS(ES-TOF)中觀察到的主要離子在m/z311.2020,M+Na+的計算值為311.2015。B.C-12巰基化脂肪酸的合成化合物17.向干燥Schlenk燒瓶中裝入化合物16(50g，224.2mmol)并溶于從鈉/二苯甲酮蒸餾出的無水脫氣THF(250mL)中。在冰浴中冷卻燒瓶，然后加入PTSA(O.5g，2.6mmol)。然后在五分鐘內緩慢加入干燥脫氣DHP(36g,42.8mmol)。使混合物變暖到室溫并攪拌過夜，用TLC(IO:IPE:EtOAc)監測直到根據溴醇(bromoalcohol)點完全消失確認反應完成。然后加入TEA(1g，10mmol)淬滅PTSA。然后用冷的碳酸氫鈉溶液洗滌混合物，并用EtOAc(3X250mL)萃取。然后用硫酸鎂干燥有機層，并濃縮得到68.2g的粗產物，通過柱色語(10:1PE:EtOAc)純化該粗產物得到60g(99%的產率)無色油狀物。'HNMR(CDCh，500MHz)51.31(brs，6H)，1.41-1.44(m，2H)，1.51-1.62(模糊的多重峰,6H)，1.69-1.74(m，1H)，1.855(五重峰，J=7.6Hz，2H)，3.41(t，J=7Hz，2H)，3.48-3.52(m，2H)，3.73(dt，2H，J=6.5Hz)，3.85-3.90(m,2H)，4.57(t，2H，J=3Hz)。化合物18.將鎂片(2.98g，125mmol)與碘晶體一起加入到火焰干燥的Schlenk燒瓶中。然后加入從鈉中蒸餾出的無水THF(200mL)并使用Schlenk技術對該系統進行脫氣。然后在IO分鐘內緩慢將化合物17(30g，97mmol)加入到鎂中，并將溶液置于65°C的油浴中，攪拌過夜。根據TLC用丙酮淬滅等分試樣，確認反應完成，并觀察到在10:1PE:EtOAc混合物中RF的變化。然后通過套管將格氏溶液在氮氣下轉移到另外含有化合物17(30g，97mmol)的三頸瓶中。然后將含有所得混合物的燒瓶在水浴中冷卻到0°C,然后通過注射器加入Li2CuCl4(3mL,1M)的溶液。在幾分鐘內反應混合物變成深藍色。攪拌該混合物過夜。第二天早上，根據TLC(10:1PE:EtOAc)確認反應完成，用飽和的NH,C1溶液淬滅反應，然后在醚(3X250mL)中萃取。用硫酸鎂干燥醚層并濃縮得到粗產物(4Gg)，將粗產物溶于MeOH中。然后加入濃HGl(0.5mL)，導致白色乳液的形成，將其攪拌.3小時。.然后過濾白色乳液得到16g(58。/。的產率)的純二醇，化合物18。'HNMR(CDC13，200MHz)51.26(brs，24H)，1.41-1.42(m，4H)，1.51-1.68(m，4H)，3.65(t，4H,J=6.5Hz)。化合物19.在氮氣下，將所述對稱二醇，化合物18(11g,38.5mmol)加入到干燥Schlenk燒瓶中，然后加入從鈉蒸餾出的無水THF(700mL)。對所述系統進行脫氣并將燒瓶置于冰浴中。由注射器加入二異丙基乙胺(6.82mL，42.3mmol)，然后緩慢加入MsCl(3.96g，34.4mmol)，攪拌該混合物l'小時。用飽和NaH2P04溶液(300mL)淬滅反應，然后用EtOAc(3X300mL)萃取。然后合并有機層，用MgS04干燥，濃縮得到14g二醇、單曱磺酸鹽和二曱磺酸鹽的混合物。NMR顯示C《0H:C《0M質子的1:0.8混合物。然后將所述混合物溶于無水的THF(500mL)中，脫氧，并向其加入LiBr(3,5g，40.23mmol)。回流該混合物過夜，之后用水(150mL)淬滅反應，并用EtOAc(3X250mL)萃取。然后用MgSO,干燥有機層，并濃縮得到溴化產物的混合物，然后通過快速色諳(DCM)純化得到白色粉末狀的化合物19(3.1g,25%的產率)。'H腿(CDCh，500MHz)51.26(brs，26H)，1.38-1.46(m，2H)，1.55(五重峰，2H，J=7.5Hz)，1.85(五重峰，2H，J=7.5Hz)，3.403(t，2H，J=6.8Hz)，3.66(t.2H，J=6.8Hz)。化合物20.向圓底燒瓶中裝入化合物19(2.01g，5.73mmol)，并將固體溶于試劑級的丙酮(150mL)。同時，通過將Cr03(2.25g，22mmol)溶于H2S(^(4mL)中制備Jones試劑，然后緩慢加入10mL冷水并攪拌溶液10分鐘。然后在五分鐘內將冷的Jones試劑緩慢加入到圓底燒瓶中，之后攪拌溶液l小時。所得的橙色溶液在幾分鐘內變為綠色。然后用水(150mL)淬滅混合物，在醚(3X150mL)中萃取兩次。然后用硫酸鎂干燥醚層，并濃縮得到白色粉末狀的化合物20(2.08g，98%的產率)。^NMR(CDC13，200MHz)51.27(brs，26H)，1.58-1.71(m，2H)，1.77-1.97(m，2H),2.36(t，2H，J=7.4Hz)，3.42(t，2H，J=7Hz)。化合物21.將叔丁辟u醇(11.32g,125mmol)加入到干燥的Schlenk燒瓶中并溶于從鈉中蒸餾出的無水THF(450mL)。通過向燒瓶中充入氮氣泡來對溶液脫氧，然后將燒瓶置于冰浴中。然后在10分鐘內經由注射器緩慢加入n-BuLi的己烷溶液(70mL，1.6M)。攪拌混合物1小時，然后加入化合物20(5.5g，16.2mmol)并在60。C回流該溶液過夜。第二天取出等分試樣，用NMR分析，確認反應完成。用HC1(200mL，2M)淬滅反應并用醚(3X250mL)萃取。然后用硫酸鎂干燥醚層，過濾并將濾液濃縮得到白色固體狀的產物，化合物21(5g，90%的產率)。NMR(CDCh，200MHz)51.26(brs，26H)，1.32(brs，9H)，1.48-1.70(m，4H)，2.35(t，2H，J=7.3Hz),2.52(t，2H，J=7.3Hz).13CNMR(CDCh，200MHz)524.69，28.35，29.05，29.21，29.28，29.39，29.55，29.89，31.02(3C)，33.98，41.75，179.60。61實施例3制備LPA的巰基化類似物的合成方案在本實施例中描述的合成方法得以制備巰基化LPA。然后將所述LPA類似物能進一步與載體，例如蛋白載體復合，然后將其施用至動物以引發對LPA的免疫原性應答。所述方法釆用有機化學和酶反應，在圖3中提供該方法的合成圖示，在下面的合成描述中所述的化合物編號指圖3中的編號結構。起始材料為實施例2中的化合物15，和對映異構體純的甘油磷脂酰膽堿(化合物22)。合并這兩種化合物得到二-乙酰化產物，化合物23，使用DCC來促進酯化。在一個合成方法的變化形式中，首先用磷脂酶-A2處理所得的二-乙酰化的甘油磷脂酰膽石咸以除出去在甘油骨架的sn-2位處的脂肪酸以產生化合物24。該物質進一步用另一種酶(磷脂酶-D)處理以除去膽堿并形成化合物26。在另一個合成方法的變化形式中，在磷脂酶-A2處理之前，用磷脂酶-D處理產生化合物25，然后用磷脂酶-D處理化合物25得到化合物26。兩種變化形式得到相同產物一一磷脂酸衍生物，化合物26。然后除去在化合物26中的叔丁基保護基團，首先使用三甲基二硫化三氟曱基磺酸鹽以產生化合物27,然后用二硫化物還原以產生所需的LPA衍生物，化合物28。本領域技術人員應當理物28,化合物23.向火焰干燥的Schlenk燒瓶中加入疏醚酸，化合物15(10g，35.8mmo1)，化合物22(甘油磷脂酰膽堿-CdCh復合物，4.25g，8.9mmol)，DCC(7.32g，35.8mmol)和DMAP(2.18g，17.8mmol)，之后對燒瓶抽真空并用氮氣填充。加入最小量的無水脫氣的DCM(IOOmL)，得到絮狀混合物。用金屬箔蓋住燒瓶，然后攪拌直到根據TLC(silica，10:5:1DCM:MeOH:濃N仏0H)顯示反應完成。化合物16的不溶性排除了用TLC監測其消失，但當判斷Rr0.l的產物點的強度不再增強時，停止反應。這通常需要3至4天，且在一些情況下，加入更多的DCC和DMAP。完成后，過濾反應混合物，并將濾液濃縮得到黃色油狀物，采用使用上述的溶劑系統的快速色語對其進行純化得到3.6g(50%的產率)含有化合物23和單乙酰化產物(比例為5:1)的混合物的透明蠟狀物，如根據比較(CA)3N-，-C《StBu和-C忍C00-部分的峰的積分所估計。通過HRMS(ESI-TOF)分析油狀物得到在m/z820.4972主離子峰，M+Na+的計算值=C』』Na08PS2+820.4960。A.合成變體l-磷脂酶-A2處理化合物24.將如上所述的化合物23和單乙酰化產物的混合物(3.1g，3.9mmol)溶于Et20(400mL)和甲醇(30mL)中。加入硼酸鹽緩沖液(IOOmL，pH7.40.1M，0.072mM的CaCl2)，隨后加入磷脂酶-A2(來自蜂毒，130單位，Sigma)。所得混合物攪拌l0小時，此時TLC(二氧化硅，MeOH:水4:1-之前的溶劑系統(10:5:1DCM:MeOH:濃N仏0H)證實是無效的)顯示起始材料(Rf=0.7)消失和一個新點(Rr=0.2)的出現。分離有機層和水層，并用醚(2x250mL)洗滌水層。用DCM:MeOH(2:1，2x50mL)的混合物從水層中萃取產物。然后通過旋轉蒸發濃縮有機層得到白色蠟狀產物(l.9g，86%的產率)，其NMR顯示為純產物(化合物24)。NMR(CDC13，500MHz)51.25-1.27(brs,12H),1.31(s，9H)，1.35-1.45(m，2H)，1.52-1.60(m，4H)，2.31(t，2H，J=7.5Hz)，2.51(t，2H，J=7.5Hz),3.28(brs，9H)3.25-3.33(brs，2H)，3.78-3.86(m，1H)，3.88-3.96(m，2H),4.04-4.10(m，2H)，4.26-4.34(m，2H)。用HRMS(ESI—TOF)對蠟狀物的分析在m/z550.2936得到主要離子m/z550.2936，M+Na+的計算值為550.2943(C24H5。NNa07PS2+)，和m/z528.3115，MH+的計算值為528.3124(C24H51N07PS2+)。C24H5。N07PS+2H20(563.73)的分析計算值:C，51.13;H，9.66;N，2.48.實驗值C，50.90;H，9.37;N,2.76。63化合物26.溶血化合物24(1.5g，2.7mmol)溶于仲丁醇(5mL)和Et力(200mL)的混合物中，并對所得的絮狀混合物進行超聲直到絮狀物消散。加入緩沖溶液(200mL，pH5.8，0.2MNaOAc，0.08MCaCh)，接下來加入甘藍提取物(80mL來自皺葉甘藍的提取物(其含有磷脂酶-D),含有9mg蛋白/mL)。攪拌該反應1天并用TLC(Cl8RPSi02，5:1ACN:water)監測，起始材料和產物的^分別是0,3和0.05。為了推動反應完成，根據需要加入額外的甘藍提取物(50mL),并再攪拌該反應一天。再重復該過程2次以上，根據完成轉化的需要。當反應完成，在旋轉蒸發儀上濃縮該混合物以除去醚，然后加入EDTA溶液(O.5M，25mL)，并在5:4的MeOH:DCM(300mL)混合物中萃取產物。濃縮有機層，接下來從DCM和丙酮中重結晶殘余物得到純產物(O.9g，的產率).^NMR(CDC13，200MHz)51.25-1.27(brs，12H)，1.33(s，9H)，1.52-1.60(m，4H)，2.34(t，2H，J=7.5Hz)，2.52(t，2H，J=7.5Hz)，3.6-3.8(brs，1H)，3.85—3.97(brs，2H)，4.02-4.18(m，2H)。化合物27.用曱醇洗滌保護的樣品LPA，化合物26(0.150g，0.34mmol)并加入到手套箱的小瓶中。然后將其懸浮在AcOH:THF(1:1，lOmL)的混合物中，其甚至在超聲l小時后也沒有完全溶解。然后加入固體[Me2SSMe]0Tf(0.114g，0.44mmol)。將其攪拌18小時。通過取出等分試樣來監測反應，在真空下將其濃縮至干燥，并在CD30D中重新溶解或懸浮殘余物以觀察最接近硫的CH2峰的111NMR位移。起始材料在2.52ppm處有峰，而在該結合點形成的非對稱二石克化物在約2.7ppm處有峰。沒有進一步分離或表征該材料(化合物27)。化合物28.用水(IOOPL),接下來立即用PMe3(0.11g，1.4mmol)處理含化合物27的混合物。攪拌3小時后，通過真空除去溶劑得到不溶的白色固體。加入甲醇(5mL),離心混合物，并移出母液。真空濃64縮得到120mg(91%產率)的化合物28，為米色固體。化合物28為巰基化LPA半抗原，所述半抗原可以經由二硫鍵形成與栽體(例如白蛋白或KLH)綴合。化合物28的表征NMR(1:1CD3OD:CD3C02D，500MHz)51.25-1.35(brs，12H)，1.32-1.4(m，2H)，1.55-1.6(m，4H)，2.34(t，2H，J=7)，2.47(t，2H，J-8.5)，3.89-3.97(brs，2H)，3.98-4.15(m，2H)，4.21(m，1H)。溶于甲醇的樣品的負離子ES的主要的離子產生在m/z=385.1。實施例4S1P的抗體一類治療抗體特異性結合不需要的鞘脂以實現有益效果，例如，(1)降低不需要的、毒性的鞘脂的有效濃度(和/或其代謝前體的濃度)，所述鞘脂能促進不需要的作用，諸如心臟中毒、致瘤或血管生成作用；(2)抑制不需要的、毒性的、致瘤或血管生成的鞘脂與細胞受體的結合，因此和/或降低可用于結合所述受體的鞘脂的濃度。所述治療效果的實例包括但不限于，使用抗-S1P抗體來降低體內可利用的S1P的血清濃度，由此阻斷或至少限制S1P的致癌和血管生產作用以及其在MI后的心力衰竭、癌癥或纖維發生疾病的作用。合成巰基化S1P(圖1的化合物IO)以包含能使S1P的關鍵結構特征與栽體部分(諸如KLH)交聯的反應基團(例如，巰基)。在免疫前，使用標準方法，使硫代-S1P類似物經由10A或SMCC與蛋白載體(例如，KLH)交聯。SMCC是能與伯胺和巰基反應的異型雙功能交聯劑，且代表優選的交聯劑。用50Hg的免疫原(SMCC促進的巰基化-S1P和KLH的綴合物)/注射，對SwissWebster或BALB-C小鼠進行免疫，在兩個月內共4次。在第二、三和四次免疫后兩個星期收集血清樣品，通過直接ELISA篩選抗-SlP抗體的存在。隨后，將來自顯示具有高的抗體滴度的動物的脾用于生產雜交瘤/標準融合過程。培養所得的雜交瘤以融合，之后收集細胞上清液用于ELISA分析。在被免疫的55小鼠中，有8只為良好的應答者，顯示對S1P具有反應性的抗體的顯著血清滴度。然后根據規定過程，使用這些小鼠的脾和骨髓瘤細胞來進行融合。然后通過直接ELISA篩選所得的1，500個雜交瘤，得到287個陽性雜交瘤。在由直接ELISA篩選的這287個雜交瘤中，159個顯示顯著的滴度。然后將所述159雜交瘤的每一個擴展到24-孔板中。然后，重新篩選所述擴展雜交瘤的細胞調節基質以鑒定能分泌目標抗體的穩定雜交瘤。在最高60滴度的穩定雜交瘤上進行竟爭ELISA。在被篩選的55只小鼠和將近1,500個雜交瘤中，發現一個雜交瘤展現證明為有限稀釋克隆的性能特征，如最終產生真正的單克隆抗體所要求的。該過程產生47個克隆，大部分對產生S1P抗體來說是陽性的。在這47個克隆中，有6個在24-孔板中被擴展，隨后通過竟爭ELISA進行篩選。在保持陽性的4個克隆中，選擇一個來起始S1P單克隆抗體的大規模生產。用這些細胞注射SCID小鼠，所得腹水為蛋白A-純化的(50%產量)并分析內毒素水平(<3EU/mg)。對于第一輪腹水產生，對50只小鼠進行注射，產生總共125mL的腹水。所述抗體為IgGlk的同種型，且根據HPLC認為是〉95。/。純。在含有150mM氯化鈉(pH7.2)的20mM磷酸鈉中制備所述抗體并在-70。C下貯存。陽性雜交瘤克隆(命名為克隆306D326.26)保藏于ATCC(安全保藏號SD-5362)，并表示抗S1P的第一鼠mAb。所述克隆還包含抗體重鏈和輕鏈的可變區，所述可變區可用于產生"人源化"抗體變體，以及構建嵌合抗體所需的序列信息。通過使用實施例1中描述的巰基化SIP類似物(即，化合物10)作為抗原的直接ELISA，對S1P-特異性抗體的血清和細胞上清液進行篩選。如下面所述，除了在初次孵育中用等體積的PBS/O.l%Tween-20(PBST)稀釋50ul的樣品(血清或細胞上清液)外，進行標準ELISA。在96-孔高結合力的ELISA板(Costar)中進行ELISA，所述板用與在結合緩沖液(33.6mMNa2C03，100mMNa跳;pH9.5)中的BSA綴合的0.1pg化學合成的化合物10涂敷。在37。C下孵育巰基化-SIP-BSAl小時，并在4'C下在ELISA板孔中孵育過夜。然后用PBS(137mMNaCl，2.68mMKC1，10.14mMNa2HP04，1.76mMKH2P04;pH7.4)洗滌所述板四次，并在室溫下用PBST封閉1小時。對于初次孵育步驟而言，75uL樣品(含有待測量的S1P)與25uL在PBST中稀釋的0.1ug/mL抗-S1PmAb—起孵育，并加入到ELISA板的孔中。每個樣品在一式三份的孔中進行。在室溫下孵育l小時后，用PBS洗滌ELISA板四次，并室溫下用每孔100ul的0.lug/mLHRP羊抗小鼠二抗(JacksonImmunoresearch)孵育1小時。然后用PBS洗滌平板四次并與四曱基聯苯胺(Sigma)接觸1-10分鐘。通過加入等體積的1MH2S(M亭止檢測反應。通過使用EL-X-800ELISA平板讀數儀(Bio-Tech)來測量450nm處樣品的光密度。對于交聯反應，如上所述進行竟爭ELISA，除了下述改變外(圖4)。初次孵育由竟爭劑(S1P，SPH，LPA等)和生物素綴合的抗-SlPmAb組成。使用EZ-LinkSulfo-NHS-生物素化試劑盒(Pierce)進行純化的單克隆抗體的生物素化。按照試劑盒方法確定生物素的并入，且范圍為7-11個生物素分子/抗體。如下制備竟爭劑在氬氣下對脂質原料進行超聲和干燥，然后在DPBS/BSA[lmg/ml無脂肪酸的BSA(Calbiochem)于DPBS(Invitrogen14040-133)]中重構。根據需要在PBS/0.5%TritonX-100中稀釋純化的抗-S1PmAb。混合竟爭劑和抗體溶液以產生3份竟爭劑對應一份抗體。使用HRP-綴合的鏈霉親和素二抗(JacksonImmunoresearch)來產生信號。在圖4中顯示的竟爭ELISA數據的另一方面顯示抗-S1PmAb不能區分巰基化-S1P類似物(化合物10)和在竟爭實驗中加入的天然S1P。還證實所述抗體不識別任何氧化產物，因為構建所述類似物不含任何雙鍵(這對在實施例3所述的LPA類似物而言也是正確的)。還針對含有雙鍵的天然產物測試抗-SlPmAb，允許其在室溫下保持48小時。根據之前報導的方法(Deutschman,等人(July2003)，AmHeartJ.，vol.146(1):62-8)，進行天然SIP的反相HPLC，且結果顯示保留時間沒有區別。此外，圖4中顯示的單克隆抗體對多種脂質的結合特點的比較表明所述抗體識別的表位不涉及天然SIP的雙鍵區域中的烴鏈。另一方面，單克隆抗體識別的表位是在鞘氨醇堿基骨架含有氨基67醇加游離磷酸酯的區域上。如果游離的磷酸酯與膽堿連接(與SPC的情況類似)，那么所述結合稍微降低。如果將氨基酯化成脂肪酸(與C1P的情況類似)，沒有觀察到抗體結合。如果鞘氨醇氨基醇骨架用甘油骨架代替(與LPA的情況類似)，所述SIP-特異性單克隆顯示沒有結合。這些表位定位數據表明SIP上只有一個被所述單克隆抗體識別的表位，且這個表位由SIP的獨特極性頭基團限定。在使用ELISA測試的類似實驗中，評估合適的對照材料以確保該抗-S1P單克隆抗體不識別蛋白栽體或交聯劑。例如，在綴合巰基化-S1P與BSA時，將正常的交聯劑SMCC換為IOA,作為ELISA的沉淀材料。當使用IOA時，所述抗體的結合特點幾乎與使用BSA-SMCC-巰基化-S1P時相同。類似地，將KLH換為BSA作為與巰基化-S1P復合的蛋白，作為沉淀材料。在該實驗中，所述抗體的結合特點也沒有顯著區別。結合動力學由于脂質的性質，傳統上S1P對其受體或其他部分的結合動力學是有問題的。許多問題與脂質的不溶性有關。對于BIAcore測量法，這些問題通過將S1P直接固定到BIAcore芯片上來解決。然后抗體在芯片表面流動并測量光密度的變化以確定抗體對S1P的結合特點。為了避免抗體的二價結合性質，以低密度在芯片上涂敷S1P。此外，用多種密度的S1P(7、20和1000RU)涂敷芯片且抗體結合數據大體上符合1:1相互作用模型。圖5證實光密度的變化由在三個不同的S1P密度下單克隆抗體與S1P的結合引起。總之，確定單克隆抗體對S1P的親和力是非常高的，在約88皮摩爾(pM)至"nM的范圍內，這取決于是否使用單價或二價結合模型來分析結合數據。實施例5S1P單克隆抗體的可變區的克隆和表征A.簡介生物產品的制備是復雜的，部分是因為與蛋白本身可變性相關的復雜性。對于單克隆抗體(mAbs)，可變性可以定位于蛋白骨架或懸桂于這些糖基化蛋白的烴部分。例如，異質性可以歸因于可變化的二硫化物配對的形成、脫酰胺和異天冬氨酰殘基的形成、曱硫氨酸和半胱氨酸的氧化、N-端谷氨酸殘基與焦谷氨酸的環化和由哺乳動物羧肽酶的部分酶切C-端賴氨酸。另一方面，在細胞培養過程中引入的碳水化合物的異質性包括海藻糖的分化加成、備選的甘露糖的支鏈連接和端唾液酸化作用的差異存在。此外，可以進行誘變來改變糖基化類型。氧化也是關注源。例如，重組人源化單克隆抗體HER2當接觸強光和高溫時在液體制劑中進行氧化。有趣地，據報導所述氧化是制劑依賴性的(Lam，等人(1997)，Pharm.Sci.，vol.86:1250-1255)，且據報導在在填充過程中與不銹鋼容器或不銹鋼成分接觸后，制劑中NaCl的存在引起在更高溫度下的氧化增加。確定在Fc區的重鏈中第255位的甲硫氨酸為主要的氧化位點。通過補充有甲疏氨酸和硫代硫酸鹽的基質消除氧化，其由制劑中金屬離子和過氧化物雜質的存在下產生的自由基引起。諸如這些原因，通常將過程工藝應用于抗體分子以改善其性質，諸如在異質系統中的表達增強、對蛋白酶的抗性，降低的聚合和增強的穩定性。該實施例報導了抗S1P的鼠mAb的克隆。該抗體，命名為SphingomabTM，是IgGl單克隆抗體。總的方案由克隆輕鏈(VL)和重鏈(VH)的鼠可變區組成。306DVH的共有序列顯示恒定區片段與y2b同種型一致。克隆鼠可變區與輕鏈的恒定區(CL)和重鏈的恒定區(CH1、CH2和CH3),得到嵌合抗體構建體。同樣，SphingomabTM是獨特的，是因為在CDR2區的重鏈的第50位上的Fab區中游離半胱氨酸的存在。替換這個殘基將大大有利于制備和生產過程，以及提高產率。確實，為了改善抗體分子的生物物理性質，通過構建一系列包含所需置換的構建體來進行許多氨基酸殘基對50位的半胱氨酸殘基的置換。然后在哺乳動物細胞中表達這些構建體，且在ELISA測試中比較不同抗體變體與S1P的結合。與嵌合抗體相比，所得的具有Cys50Ser和Cys50Arg置換的突變體在與S1P的結合中展示輕微的降低，而用Phe或Ala置換Cys沒有改變與SIP的結合。69B.材料和方法l.抗體基因克隆在醒M(Dulbecco'sDulbecco，sModifiedEagleMedium含有GlutaMAXTMI，4500mg/L右旋葡萄糖，丙酮酸鈉；Gibco/Invitrogen，Carlsbad,CA，111-035-003)，10%FBS(SterileFetalCloneI,PerbioScience),和IX谷氨酸/青霉素/鏈霉素(Gibco/Invitrogen)中培養來自抗-S1P雜交瘤細胞系306D326.1(ATCC#SD-5362)的克隆。使用基于RNeasyMini試劑盒(Qiagen，HUdenGermany)的程序從107個雜交瘤細胞中分離出總的RNA。根據制造商的方法使用RNA來產生第一鏈cDNA(lsl鏈合成試劑盒，AmershamBiosciences)。通過使用MHV7引物(MHV7:5，-ATGGRATGGAGCKGGRTCTTTMTCTT-3，[SEQIDNO:l])結合IgG2b恒定區引物MHCGl/2a/2b/3混合物(MHCG1:5，-CAGTGGATAGACAGATGGGGG-3，[SEQIDNO:2];MHCG2a:5，-CAGTGGATAGACCGATGGGGC-3[SEQIDNO:3];MHCG2b:5，-CAGTGGATAGACTGATGGGGG-3，[SEQIDNO:4];MHCG3:5，-CAAGGGATAGACAGATGGGGC-3，[SEQIDNO:5])的PCR來擴增免疫球蛋白重鏈可變區(VH)cDNA。使用T0P0-TA克隆⑧試劑盒和序列，將反應產物連接到pCR2.r-TOP(T載體(Invitrogen)中。然后通過PCR擴增來自該載體的所述重鏈的可變區并作為#//7d/ni和J/7sI片段插入并與含有HCMVi啟動子、前導序列和y-1恒定區的表達載體pGlD200(參見美國專利號7,060,808)或pG4D200(id.)相連以產生質粒pGlD200306DVH。306DVH的共有序列(圖6;SEQIDNO:6)顯示恒定區片段與Y2b同種型一致。類似的，使用MKV20引物(5'-GTCTCTGATTCTAGGGCA-3，[SEQIDNO:7])結合K恒定區引物MKC(5'-ACTGGATGGTGGGAAGATGG-3，[SEQIDNO:8])來擴增所述免疫球蛋白K鏈可變區(VK)。使用TOPO-TA克隆⑧試劑盒和序列將所述反應的產物連接到pCR2.r-TOP(T載體中。然后通過PCR擴增輕鏈的可變區，然后作為化/pHI和III片段插入到包含HCMV啟動子、前導序列和人Y恒定區的表達載體pOlOO中(參見，美國專利號7，060，808)，以生產質粒pKN100306DVK。將重鏈和輕鏈質粒pGlD200306DVH與pKNl00306DVK轉化到DH4a細菌中并貯存于甘油中。根據制作商所述制備大規模的質粒DNA(Qiagen，不含內毒素的MAXIPREPtm試刑盒)。使用Qiagen，sQIAprepSpinMiniprep試齊寸盒或EndoFreePlasmidMega/Maxi試劑盒純化的DNA樣品，用ABI3730x1自動測序儀進行測序，其還將熒光信號翻譯為其對應的核堿基序列。在5，和3，端設計引物使得所獲得的序列重疊。引物長度為18-24個堿基，且優選地它們含有50%GC含量并沒有預期的二聚體或二級結構。來自SphingomabTM的小鼠VH和Vl結構域的氨基酸序列顯示于圖6(分別為SEQIDNOS:6和9)。在圖6中，將所述CDR殘基(參見Kabat，EA(1982)，PharmavolRev，vol.34:23-38)用方框框出，并顯示于下表1。表l:小鼠Vh和Vl結構域的小鼠SphingomabTMCDR序列<table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table>幾個嵌合抗體Vh和W的結構域的完整核苷酸和氨基酸序列顯示于圖7。在圖7中，根據Kabat方法(Kabat,等人(1991)，NIHNationalTechnicalInformationService,pp.1-3242)，對氨基酸序列進行編號，和對CDR進行標識。2.COS7表達對于在非人哺乳動物系統中的抗體表達，通過電穿孔(O.7ml，10'個細胞/ml)，使用每個質粒10ug,將質粒轉染到非洲綠猴腎成纖維細胞的細胞系COS7。將轉染細胞置于8ml的生長培養基中，持續4天。在瞬時共轉染的COS細胞條件培養基中以1.5Pg/ml表達嵌合306DH1x306DVK-2抗體。使用SIPELISA測量該抗體與SIP的結合。如下在定量ELISA中測定所述嵌合抗體的表達水平。用100pi稀釋于PBS的0.4|ng/ml羊抗人IgG抗體(Sigma，St.Louis,MO)的等分試樣涂敷微量滴定板(NuncMaxiSorpimmunoplate，Invitrogen)，并在4。C下孵育過夜。然后用200iil/孔的洗滌緩沖液(1xPBS，0.1%TWEEN)洗滌所述板三次。將200的每一個稀釋的血清樣品或融合上清液的等分試樣轉移到毒素涂敷的板上并在37°C下孵育1小時。用洗滌緩沖液洗滌6次后，向每一個孔中以1:5000的稀釋度加入羊抗人k輕鏈過氧化物酶綴合物(JacksonImmunoResearch)。在室溫下反應l小時，用洗滌緩沖液洗滌平板六次，并向每個孔中中加入150的K-BLUE底物(Sigma)，在室溫下于黑暗中孵育10分鐘。通過加入50pi的REDSTOP溶液(SkyBioLtd.)來停止反應并使用MicroplaterReader3550(Bio-RadLaboratoriesLtd.)來測量在655nm處的吸收。抗體結合測試的結果顯示于圖8。3.293F表達對于在人系統中的抗體表達，將質粒轉染到人胚胎腎細胞系293F(Invitrogen)，使用293fectin(Invitrogen)和293F-FreeStyle培養基(Invitrogen)培養。以0.5g/mL轉染輕鏈和重鏈質粒。在106個細胞/mL的細胞密度下進行轉染。轉染后3天，通過在25°C，1100rpm下離心5分鐘來收集上清液。通過定量ELISA(參見下面)定量表達水平，嵌合抗體的表達水平在~0.25-0.5g/mL之間變化。4.定量ELISA用稀釋于1M碳酸鹽緩沖溶液(pH9.5)的片段特異性的兔抗鼠，IgG，F(ab，)2(JacksonImmunoResearch)或片段特異性的兔抗人，IgGF(ab，)2(JacksonImraunoResearch)涂敷孩i量滴定ELISA板(Costar),在37。C下持續1小時。用PBS洗滌平板并在37。C下用PBS/BSA/Tween-20封閉1小時。對于初次孵育，將稀釋的非特異性鼠IgG或人IgG，全分子(用于標準曲線)和待測量的樣品加入到孔中。用1:40,000稀釋的100ul/孔的HRP綴合的羊抗鼠(H+L)(JacksonImmunoResearch)或1:50,000稀釋的HRP綴合的羊抗人(H+L)(JacksonImmunoResearch)洗涂平板并在37。C下孵育1小時。洗滌后，用四甲基聯苯胺(Sigma)檢測酶促反應并通過加入1M1^04來停止。使用ThermoMultiskanEX測量在450nm處的光密度(OD)。將原始數據轉移到GraphPad軟件用于分析。5.直j妾ELISA用在37。C下稀釋于1M碳酸鹽緩沖溶液(pH9.5)1小時的SIP涂敷微量滴定ELISA板(Costar)過夜。用PBS(137mMNaCl，2.68mMKCl，10.1mMNa2HP04，1.76mMKH2P04;pH7.4)洗滌平板并用PBS/BSA/Tween-20在室溫下封閉1小時或在4。C下過夜。對于初次孵育(室溫下1小時)，采用下述設定的稀釋度0.4pg/inL,0.2|ng/mL，0.1)Lig/mL，0.05pg/mL，0.0125)ig/mL,和0|ng/mL，并向每孑L力口入100pi,以建立使用抗-SlPmAb和用于測試結合的樣品的標準曲線。用1:20,000稀釋的100pl/孔的HRP綴合的羊抗鼠(JacksonImmunoResearch)或1:50,000稀釋的HRP綴合的羊抗人(H+L)(JacksonImmunoResearch)洗滌平板并在37。C下孵育1小時。洗滌后，用四曱基聯苯胺(Sigma)檢測酶促反應并通過加入1M112304來停止。使用ThermoMultiskanEX測量在450nm處的光密度(OD)。將原始數據轉移到GraphPad軟件用于分析。下表2顯示突變體與嵌合抗體的比較分析。為了得到這些結果，73通過與HRP綴合的對鼠或人IgG特異性的第二抗體檢測結合的抗體。測量顯色反應并以光密度(OD)報導。抗體的平板濃度為0.1ug/ml。檢測到第二抗體與SlP-涂敷的基質沒有相互作用。表2:<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>實施例6抗S1P的嵌合mAb如本文所使用的，術語"嵌合"抗體(或"免疫球蛋白")指包括與衍生自具體物種或屬于具體抗體種類或子類的抗體中的對應序列相同或同源的重鏈和/或輕鏈的分子，而鏈的其余部分與衍生自其他物種同或同源，只要它們展示所需的生物活性(CabiUy等人，supra;Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81:6851(1984))。使用來自具有人IgGl免疫球蛋白的Fc區的具體雜交瘤(ATCC安全保藏序號SD-5362)的鼠抗體的S1P活性結合區的可變區(Fv)產生抗SIP的嵌合抗體。所述Fc區含有所述人抗體的CL、ChL和Ch3結構域。不局限于特定的方法，嵌合抗體還可以由人IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA或IgM的Fc區產生。本領域的技術人員應當理解，"人源化，，抗體可以通過用人抗體框架區(例如，Frl，Fr4等)，諸如IgGl框架區，移植鼠抗-SlPmAb的互補決定區(CDR，例如CDR1-4)。圖9顯示在使用巰基化-S1P作為沉淀材料的直接ELISA測量法中嵌合和全鼠mAbs的結合。對于顯示于圖9的直接ELISA實驗，抗S1P的嵌合抗體與全鼠單克隆抗體具有類似的結合特征。在涂敷有0.lug化學合成的巰基化SIP的96-孔高結合ELISA板(Costar)中進行ELISA，所述的巰基化SIP與結合緩沖溶液(33.6mMNa2C03，lOOmMNa跳;pH9.5)中的BSA綴合。在ELISA板中，在37。C下孵育所述巰基化S1P-BSA1小時或在4'C下孵育過夜。然后用PBS(137mMNaCl，2.68mMKC1，10.14mMNa2HP04，1.76mMKH2P04;pH7.4)洗滌平板四次并在室溫下用PBST封閉1小時。對于初次孵育步驟，75uL的樣品(含有待測量的S1P)與25I^L0.1|ag/mL稀釋于PBST的抗-SlP單克隆抗體一起孵育并加入到ELISA板的孔中。每一個樣品在一式三份的孔中進行。在室溫下孵育1小時后，用PBS洗滌ELISA板四次并與100ul/孔的0.lug/mLHRP羊抗鼠二抗(JacksonImmunoresearch)在室溫下孵育1小時。然后用PBS洗滌平板四次并與四曱基聯苯胺(Sigma)接觸1-IO分鐘。通過加入等體積的1MH2S04來停止反應。通過使用EL-X-800ELISA平板讀數器(Bio-Tech)在450nm處測量來測定樣品的光密度(OD)。與實施例4中描述的實驗類似，測量免疫動物的血清或產生抗體的細胞(如雜交瘤)的細胞條件培養基(即，上清液)中的抗體滴度的優選方法涉及用靶配體(例如，S1P、LPA等的巰基化類似物)涂敷ELISA板，所述配體與蛋白栽體諸如BSA共價相連。不局限于特定的方法或實施例，可以產生抗其他脂質靶諸如LPA、神經酰胺、硫苷脂、腦苷脂、心磷脂、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、eicosinoids和其他白三烯等的嵌合抗體。此外，如果需要的話，許多這些脂質還可以被糖基化和/或乙酰化。實施例7對鞘氨醇激酶(SPH激酶)基于抗體的測試鞘氨醇激酶(SPH激酶或SPHK)催化SPH向S1P的轉化。已經描述了編碼人SPH-激酶的基因序列(Melendez等人，Gene251:19-26，2000)。已經描述了SPH激酶的三個人同源物(SKA、SKB和SKC)(公布的PCT專利申請W000/52173)。還描述了鼠SPH激酶(Koharaa等人，J.Biol.Chem.273:23722-23728,1998;和公布的(PCT專利申請W099/61581)。公布的PCT專利申請WO99/61581報導了編碼鞘氨醇激酶的核酸。公布的PCT專利申請WO00/52173報導了編碼鞘氨醇激酶同源物的核酸。還^R導了其他SPH激酶。例如，參見Pitson等人，BiochemJ.350:429-441，2000;公布的PCT申請WO00/70028;Liu等人，J.Biol.Chem.，275:19513-19520，2000;PCT/AU01/00539,公布為WO01/85953;PCT/US01/04789,公布為WO01/60990;和PCT/EP00/09498，公布為W001/31029。SPH激酶的抑制劑包括但不限于N,N-二甲基鞘氨醇(Edsall等人，Biochem.37:12892-12898，1998);D-蘇式-二氫鞘氨醇(Olivera等人，Nature365:557-560，1993);和鞘脂堿基(Jonghe等人，"Structure-ActivityRelationshipofShort-ChainSphingoidBasesAsInhibitorsofSphingosineKinase"，Bioorganic&MedicinalChemistryLetters9:3175-3180，1999)。用于評估這些和其他已知或潛在的SPH激酶抑制劑的SPH激酶分析包括由Olivera等人，MethodsinEnzymology,311:215-223，1999;Caligan等人，AnalyticalBiochemistry,281:36-44，2000公開的那些。認為SPH激酶的抑制引起其底物SPH的聚集，其類似于S1P,在一些情況下可能是不需要的鞘脂。為了避免或除去這些不想要的影響，可以施用(i)刺激利用SPH作為底物的試劑，只要所述酶不是產生SIP作為反應產物(例如，神經酰胺合成酶；參見下問)的酶；或(ii)抑制產生SPH作為產物的酶的試劑。不局限于具體的方法，抗-SIP抗體(例如，單克隆抗-SIP抗體)可用作體外SPH激酶活性分析的試劑。例如，在PBS和激酶底物一一SPH(例如與無脂肪酸的BSA復合)的存在下，可以將純化的SPHK加入到微滴定板的孔中。然后將所得的反應產物，S1P，進行使用抗-SlP抗體(例如，描述于上述實施例4的單克隆抗-SlP抗體)的ELISA。在所述試驗中，測試化合物對SPHK的抑制導致比對照反應更低的SIP的水平，所述對照反應不包括SPHK抑制化合物。所述分析經配置用于高通量，并因此可用作SPHK活性調節劑的高通量篩選分析的基礎。實施例8SIP裂解酶或SPP活性的基于抗體的試驗刺激催化降解SIP的反應(即，利用S1P作為反應物的反應)將刺激S1P分子的降解。所述酶包括但不限于S-l-P裂解酶SIP裂解酶催化SIP向乙醇胺-P(還已知為t-2-十六醛)和棕櫚醛的轉化(Veldhoven等人，Adv.LipidRes.26:67-97，1993;VanVeldhoven，MethodsinEnzymology，311:244-254，1999)。報導了酵母(Lanterman等人，Biochem.J.332:525-531,1998)、鼠(Zhou等人，Biochem.Biophys.Res.Comm.242:502-507，1998)和人(publishedPCT專利申請WO99/38983)S1P裂解酶基因。公希的PCT專利申請W099/16888報導了SIP裂解酶DNA和蛋白序列。美國專利號6，187，562和公布的PCT專利申請W099/38983還報導了SIP裂解酶。可以研發功能獲得分析來發現能激活裂解酶或提高編碼其的基因的表達的小分子化合物。不局限于具體方法，可以在ELISA模式中使用抗-SIP抗體來測量儀體外或基于細胞模式中加入的SPH所產生的S1P。可以進一步研究確定為刺激SIP裂解酶活性的化合物(直接對該酶刺激或間接通過提高編碼該酶的基因的表達水平(例如，通過基因激活，增強S1P裂解酶mRNA穩定性等)，因為所述化合物證實在減低患者的S1P胞外濃度中是有用的，在所述患者中SIP水平與毒性有關，諸如在治療癌癥、心臟病、腦血管疾病、自身免疫性紊亂、炎性紊亂、血管生成疾病、纖維化疾病和年齡相關性黃斑變性中。SIP磷酸酯酶SIP磷酸酯酶(也成為SPP磷酸水解酶)是一種催化S-1-P向鞘氨醇轉化的哺乳動物酶(Mandala等人，Proc.Nat.Acad.Sci.95:150-155，1998;Mandala等人，Proc.Nat.Acad.Sci.97:7859-7864，2000;Mandala，Prostaglandins&otherLipidmediator,64:143-156，2001;Brindley等人，MethodsinEnzymology311:233-244，1999)。已經從酵母中分離出兩種S-1-P磷酸酯酶，LBP1和LBP2(Mandala等人，J.Biol.Chem.272:32709-32714，1997);77PCT/UW01/03879,公布為WO01/57057。于SIP裂解酶類似，可以研發功能獲得分析來發現能激活SIP磷酸酯酶或提高編碼其的基因的表達的化合物。例如，可以在ELISA模式中使用抗-SlP抗體來測量在體外或細胞模式中加入的SPH所產生的S1P。可以進一步研究確定為刺激SIP磷酸酯酶活性的化合物，直接對該酶刺激或間接通過提高編碼該酶的基因的表達(例如，通過基因激活，增強S1P磷酸酯酶mRNA穩定性等)，因為所述化合物證實在減低患者S1P胞外濃度中是有用的，在所述患者中SIP水平與毒性有關，諸如在治療癌癥、心臟病和腦血管疾病、自身免疫性紊亂、炎性紊亂、血管生成疾病、纖維化疾病和年齡相關性黃斑變性中。實施例9抗LPA的單克隆抗體的產生和表征抗體生產雖然已經在文獻中報導了抗天然存在的LPA的多克隆抗體(ChenJH，等人,BioorgMedChemLett.2000Aug7;10(15):1691-3),但沒有描述單克隆抗體。使用類似于實施例4中描述的方法生產抗LPA的單克隆抗體，C-12硫代-LPA類似物(在實施例3中的化合物28)為半抗原的關鍵成分，所述半抗原通過所述類似物經由SH反應基團與蛋白載體(KLH)交聯形成(其經由釆用IOA或SMCC作為交聯劑的標準化學交聯)。為此，使用實施例4中所述的方法用硫代-LPA-KLH半抗原(在該情況下，巰基化-LPA:SMCC:KLH)來免疫小鼠以產生抗-SIP單克隆抗體。在針對LPA類似物進行免疫的80只小鼠中，選擇顯示抗LPA的最高滴度的5只動物(使用ELISA進行確定，其中使用SMCC將與在半抗原中所用的相同的LPA類似物(化合物28)與BSA綴合并在ELISA板上沉淀)發展到雜交瘤階段。收獲這5只小鼠的脾并通過標準技術產生雜交瘤。簡言之，一只小鼠產生雜交瘤細胞系(命名為504A)。在所有涂布有雜交瘤的50"系列中，根據通過之前描述的篩選ELISA所測量的，66個顯示陽性抗體產物。下表3顯示在從兩個小鼠的脾中產生的雜交瘤的細胞上清液中的抗體滴度，所述小鼠對LPA類似物半抗原有應答，在所述半抗原中巰基化LPA類似物使用異型雙功能交聯劑與KLH交聯。這些數據證實抗-LPA抗體不與所述交聯劑或蛋白載體反應。重要的是，所述數據顯示雜交瘤產生抗LPA抗體，而不是抗S1P抗體。表3:LPA雜交瘤3"血液滴度來自24孔LPA結合S1P結合小鼠#1:312，500的0D的上清液(1:20)的0D(1:20)的ODw/S1P*11.2421.A.631.1970,231低l丄651.5450.176無20.7092.B.72.3570.302低2.B.632.3020.229低2.B.832.7120.175無2.B.1042.570.164無2.B.IB72.3870.163無2.B.3A62.2270.134無*與來自24孔上清液的S1P高=在[1:20]時0D>1.0-2.0中=在[1:20]時0.4-1.0低=在[1:20]時0.4-0.2無=在[1:20]時OD<0.2通過ELISA(與12:0和18:1LPA的直接結合和竟爭ELISA)監測小鼠中抗-LPAmAb的形成。至少在一半免疫小鼠中觀察到顯著的免疫應答,并選擇具有最高抗體滴度的五只小鼠來起始脾融合后的雜交瘤細胞系79的形成。在初篩由這5個融合產生的超過2000雜交瘤細胞系后，總共29個分泌抗-LPA的雜交瘤細胞系對18:1LPA具有高的結合性。在這些雜交瘤細胞系中，24個被進一步亞克隆并在一系列ELISA分析中進行表征。在保持陽性的24個克隆中，選擇6個雜交瘤克隆用于進一步表征。它們的選擇基于它們的較好的生化和生物性質。直接結合動力學通過ELISA測量6個抗-LPAmAb(B3，B7，B58，A63，B3A6，D22)與12:0和18:1LPA(0.1uM)的結合。從使用純mAb的6個遞增濃度(0到0.4ug/ml)的滴定曲線來計算ECs。值。EC5。代表具有最大結合的50%的有效抗體濃度。Max表示最大結合(表示為OD450)。結果顯示于表4中。表4-抗-LPAmAb的直接結合動力學<table>tableseeoriginaldocumentpage80</column></row><table>-使用BIAcore3000Biosensor^義器確定6個前導備選物的動力學參數t(結合速率常數)，kd(萬解速率常數)和Kd(結合平衡常數)。在本研究中，將LPA固定在傳感器表面并將抗-LPAmAb在溶液中沿著表面流動。如所示的，6個結合LPA的mAb都具有類似的K。值(范圍為0.34-3.8pM)和類似的動力學參數。抗-LPA鼠mAb顯示對LPA的高親和力將LPA固定在傳感器芯片上，其密度在150共振單元范圍內。將每一個mAb的稀釋液經過固定的LPA，并通過結合/離解相位的非線性回歸來獲得動力學常數。誤差由在一式兩分的操作中利用至少三次測定的標準偏差給出。表觀親和力通過KD=ka/kd測定，ka=結合速率常數(M—、—》，kd-離解速率常數(s-0。表5-抗-LPAmAb對LPA的親和力<table>tableseeoriginaldocumentpage81</column></row><table>6種抗-LPAmAb的特異性譜已經鑒定許多LPA亞型是具有生物活性的，并優選mAb識別所有亞型到治療相關的程度。使用其中向抗體固定的脂混合物中加入竟爭脂質的竟爭分析來評估抗-LPAmAb的特異性。用6個mAb來進行竟爭ELISA分析以評估其特異性。在ELISA板上捕獲18:1LPA。在BSA(1mg/ml)-PBS中連續稀釋每一個竟爭脂質(直至10uM),然后用mAb(3nM)孵育。然后將混合物轉移到LPA涂敷的孔中并用第二抗體測量結合抗體的量。將數據標準化為最大信號(Aw)并表達為抑制百分比。按一式三分進行分析。IC5。最大抑制達到一半時的濃度；MI:最大抑制(在抑制劑不存在下的結合百分比)；-一由于弱的抑制而沒有估計。高的抑制結果表示抗體對竟爭脂質的識別。如表6所述，所有的抗-LPAmAb識別不同的LPA亞型。表6.六種抗-LPAmAb的特異性語.<table>tableseeoriginaldocumentpage82</column></row><table>有趣地是，抗-LPAmAb能區別12:0(月桂酰)，14:0(肉豆蔻酰)，16:0(棕櫚酰)，18:1(油酰)，18:2(亞麻酰)和20:4(花生酰)LPA。不飽和脂質的EC5。排序為18:2>18:1>20:4而飽和脂質的ECs。排序為14:0〉16:0>18:0。具有高特異性的mAb是最終藥物開發所需要的。就其與LPA相關的生物脂質(諸如二硬酯酰-磷脂酸，溶血磷脂酰膽堿，S1P神經酰胺和神經酰胺-1-磷酸鹽)的結合來評估抗-LPAmAb的特異性。證實六個抗體均對二硬酯酰PA和LPC(LPA的直接代謝前體)沒有教練反應性。實施例10抗-LPA單克隆抗體的抗癌活性癌細胞增殖LPA是有效的生長因子，其通過經由GPCR-受體的Gi，Gq和G,w3的刺激和下游信號傳導事件的激活來支持細胞存活和增殖。測試細胞系對LPA(0.01mM至10mM)的增殖應答。通過使用來自Chemicon(TemeculaCA)(Panc-1)細胞增殖分析試劑盒和來自Pierce(Caki-1)的Cell-Blue滴度來分析細胞增殖。每一個數據點是三個獨立實驗的平均值。LPA以劑量依賴性方式提高7個人-衍生的肺瘤細胞系的增殖，包括SK0V3和0VCAR3(卵巢癌)，Pane-l(胰腺癌)，Caki-l(腎癌細胞)DU-145(前列腺癌)，A549(肺癌)和HCT-116(直腸結腸腺癌)細胞和一個大鼠衍生的腫瘤細胞系，RBL-2H3(大鼠白血病細胞)。即使腫瘤衍生的細胞通常具有高的增殖基線水平，LPA似乎進一步增大在大多數細胞系中的增殖。評估抗-LPAmAb(B7和B58)抑制在所選人癌細胞系中的LPA-謙導增殖的能力。顯示LPA誘導的增殖的增加通過加入抗-LPAmAb而減輕。抗-LPAmAb使腫瘤細胞對化療試劑敏感研究當與臨床相關水平的化療試劑，紫杉醇(Taxol)接觸時，LPA保護卵巢腫瘤細胞抗細胞凋亡的能力。用1%FBS(S)，紫杉醇(O.5mM)+/-抗-LPAmAb處理SKV03細胞24小時。LPA保護SKV03細月包免受Taxol-誘導的細胞凋亡。根據制造商(Promega)所建議的，通過測量胱天蛋白酶活性來分析細胞凋亡。如預期的，LPA保護大多數所測試的癌細胞系免受紫杉醇-誘導的細胞死亡。當將抗-LPA抗體加入到選擇的LPA應答細胞中，所述抗-LPA抗體阻斷LPA保護細胞免受由細胞毒性化療試劑誘導的死亡的能力。此外，抗-LPA抗體能除去血清提供的保護。估計血清包含約5-20mMLPA。在SK0V3細胞中紫杉醇誘導的胱天蛋白酶-3，7激活，并且向細胞中加入血清保護細胞免受細胞凋亡。紫杉醇-誘導的胱天蛋白酶激活通過向培養基中加入所有三種抗-LPAmAb增強。這表示通過選擇性抗體介導中和血清中存在的LPA除去LPA的保護和抗凋亡作用。抗-LPAmAb抑制LPA-介導的腫瘤細月包遷移轉移癌的一個重要特征是腫瘤細胞規避接觸抑制并遠離其來源的組織。顯示LPA促進幾種癌細胞類型中的轉移潛能。因此，通過使用細胞單層劃痕分析，測試了抗-LPAmAb在幾種人癌細胞系中阻斷LPA-依賴性細胞遷移的能力。將細胞接種再96孔平板中并培養至融83合。饑餓24小時后，用移液管尖端刮孔的中心。在本領域接受的"劃痕分析"中，細胞通過向劃痕遷移并接近傷口的固定模式應答刮痕傷口。通過數字攝影在所需的時間點以10x的放大倍率監測遷移和傷口靠近的進行。沒有處理的細胞(NT)，用含或不含(w/0)mAbB7(10Pg/ml)或同種型匹配的非特異性抗體(NS)(10Pg/ml)的LPA(2.5mM)處理的細胞。在未處理的細胞中，在劃痕后，單層邊緣之間存在大的缺口。相反，在相同的時間點，LPA-處理的細胞僅有小的缺口，且一些細胞正在越過缺口進行接觸。在用LPA和抗-LPA抗體B7處理的細胞中，在該時間點的缺口比只用LPA處理的細胞大幾倍，雖然沒有未處理的對照細胞的缺口那么大。這顯示抗-LPA抗體對腎細胞癌(Caki-1)細胞的LPA-刺激的遷移具有抑制租用。采用mAbsB3和B58獲得類似的數據。這表明抗-LPAmAb能降低最初來源于轉移癌的細胞系的LPA-介導的遷移。抗-LPAmAb抑制來自肺瘤細胞的促致癌細胞因子的釋放LPA通過提供促生長腫瘤微環境和促進血管生成來參與癌的建立和進展。特別地，在癌細胞中觀察到促生長因子(諸如IL-8和VEGF)的增加。IL-8強烈與癌進展和預后牽連。IL-8可能通過促進心血管形成和誘導嗜中性粒細胞和內皮細胞的趨化性來影響癌癥。此外，IL-8的過表達與許多人癌癥類型中的抗藥顯型的形成有關。測試與非特異性抗體(NS)相比，三種抗-LPAmAb(B3，B7和B58)降低體外IL-8產生的能力。將Caki-1細胞播種于96孔板中并生長直至融合。在過夜血清饑餓后，用含有或不含有抗-LPAmAbB3，B7，B58或NS(非特異性的)的18:1LPA(0.2mM)處理細胞。24小時后，收集在遞增濃度的抗-LPAmAbB3,B7和B58下，用或不用LPA處理的腎癌細胞(Caki-l)的培養上清液，并使用商購可獲得的ELISA試劑盒(HumanQuantikineKit，R&DSystems,Minneapolis,MN)分析IL-8水平。在用抗-LPAmAb預處理的細胞中，IL-8表達以劑量依賴性方式顯著降低(0.1-30jag/mLmAb),而LPA在非處理的細胞中以平均100%84的程度增加IL-8表達。用其他熟知的促-血管生成因子(VEGF)獲得類似的結果。還在其他癌細胞系諸如胰腺細胞系Panc-l中觀察到抗-LPAmAb抑制IL-8的釋放。這些數據顯示促-血管生成因子釋放的阻斷是這些抗-LPAmAb的附加和潛在的重要影響。抗-LPAmAb已知體內血管生成使用MatrigelPlug分析一個抗-LPAmAb(B7)減輕體內血管生成的能力。該分析使用Matrigel,—種包括衍生自鼠腫瘤的基膜的腫瘤殘余物的專利混合物。當將Matrige1,或其衍生生長因子-還原的(GFR)Matrigel，皮下(sc)注射到動物中時，其凝固并形成一個'栓(plug)，。如果在放置前混合促-血管生成因子與基質，所述栓將被最終形成血管的血管內皮細胞侵入。Matrigel可以單獨制備或與重組生長因子(bFGF，VEGF)或腫瘤細胞混合來制備，然后皮下注射到六周齡棵(NCrNu/Nu)雌性小鼠的腹側。在該實施例中，將Caki-l(腎癌)細胞引入到Matrigel中并產生足夠水平的VEGF和/或IL8和LPA。從用鹽水或10mg/kg抗-LPAmAb-B7處理的鼠中制備含5xl05Caki-l細胞的Matrigel栓，每3天在Matrigel植入之前1天開始。對栓進行內皮CD31染色，接下來定量在栓中形成的微血管。定量數據為來自3個栓的至少16個視野/切片的平均+/-SEM。與來自鹽水處理的小鼠的栓相比，來自用抗-LPAmAbB7處理的小鼠的栓顯示在血管形成的顯著降低，如通過CD31的內皮染色所測定的。與用鹽水處理的動物相比，染色血管的定量顯示在來自用mAbB7處理的動物的含Caki-l的栓中血管生成降低大于50%。作為抗-LPAmAb治療的結果，在腫瘤細胞血管生成中這是一個統計學顯著的降低(通過學生T檢驗測定，mAbB7對鹽水的p<0.05)。抗-LPAmAb降低腎和胰腺異種移植物中腫瘤的進展已經顯示(如上)所述抗-LPA抗體有效降低多個人腫瘤細胞系中LPA-誘導的胂瘤增殖、遷移、保護細胞免受細胞死亡和細胞因子的釋85放是。然后在腎癌和胰腺癌的異種移植模型中測試mAbsB58和B7。下面為證實抗-LPA抗體方法的潛在抗致癌效應的初級結果。使用標準方法通過向4周齡的雌性棵(NCrNu/Nu)小鼠的左腹側內皮下注射Caki-1和Panc-l人腫瘤細胞來形成腫瘤。對于Caki-l，IO天后，對于Panc-1，30天后，當形成實體瘤(~200mm3)時，將小鼠隨機分配到治療組中。通過腹膜內(i.p.)施用25mg/kg的抗-LPAmAbs或載體(鹽水溶液)來起始治療。在研究期間，每三天施用抗體。對于caki-l腫瘤，治療由25mg/kg的抗-LPAmAbB58組成，對于Panc-l或鹽水，治療由25mg/kg的mAbB7組成。數據為用于caki-l研究的7個鹽水處理的小鼠和6個B58-處理小鼠的平均+/-SEM,以及用于pane-1研究的4個鹽水處理小鼠和5個B7-處理小鼠的平均+/-SEM。每隔一天用電子卡尺測量腫瘤體積，并用公式W2xL/2測定腫瘤體積。在鹽水組中，在腫瘤到達1500mm3后處死動物。記錄最終的腫瘤體積和重量。在初步實驗中，在腫瘤達到大約400-500mm3后，抗-LPAmAb降低腫瘤體積的能力是明顯的。此時，來自對照動物的腫瘤繼續生長，而來自抗-LPAmAb-處理的動物的腫瘤在兩個異種移植模型中展現較慢的生長速率。當與來自鹽水處理的動物的腫瘤重量相比，數據顯示抗-LPAmAb還降低caki-1和pane-1腫瘤的最終胂瘤重量。抗-LPAmAb調節具有腫瘤的動物中促-血管生成細胞因子的循環處所述抗-LPAmAbs(B58和B7)還影響促-血管生成細胞因子的循環水平。在用抗-LPAmAb7(Pane-1)處理的動物中，在任何抗體處理的動物中，白介素-8(IL-8)的血清水平是不可檢測的，而分別在85天和63天后在Pane-1和Caki-1異種移植中IL-8血清水平是可檢測的。更重要地，腫瘤大小和IL-8水平之間存在強相關性(r-O.98)。在具有Caki-1腫瘤的動物中，當與用鹽水處理0"=0.55)比較時，用抗-LPAmAb58(r=0.34)處理還降低人IL-8的血清水平。如上面提到的，86認為細胞因子循環水平的降低是由于直接抑制細胞因子從腫瘤細胞本身釋放所致。這些數據表明抗-LPAmAb降低腫瘤進展的能力，同時還降低促-血管生成化合物的循環水平。抗-LPAmAb降低在轉移瘤的小鼠模型中的腫瘤進展腫瘤進展的一個重要特點是腫瘤轉移并在遠的地點形成繼發性腫瘤結節的能力。上文描述的體外研究證實LPA誘導腫瘤細胞以規避接觸抑制并促進在關于細胞運動性的劃痕實驗中的遷移的能力。在這些研究中，所述抗-LPAmAb還抑制LPA的腫瘤生長促進效應因子。抗-LPAmAb抑制體內腫瘤轉移的功效。肺瘤轉移的現象在動物模型中難以模擬。許多研究者使用"實驗性"轉移模型，其中將腫瘤細胞直接注射到血流中。血管形成是一個轉移的整體過程，因為血管數的增加意味著細胞得以移動更短的距離來到達循環。基于抗-LPAmAb能阻斷轉移過程中的幾個整體步驟這個發現，認為抗-LPAmAb抑制體內腫瘤細胞轉移。研究使用高轉移的鼠黑素瘤(B16-F10)來檢測三種抗-LPAmAb對體內轉移的治療作用。該模型證實對自體毒素的cPA抑制劑是高度敏感的。4周齡的雌性(C57BL/6)小鼠接受經由尾靜脈注射B16-F10鼠黑素瘤腫瘤細胞(100uL，5xlQ4個細胞/動物)。每三天通過腹膜內注射給小鼠(1G只/組)施用25mg/kg的抗-LPAmAb(B3或B7)或鹽水。18天后，收獲肺部并分析。所述肺部器官是黑素瘤細胞的優選轉移位點，并因此緊密地就轉移結節進行評估。經由氣管用10%的緩沖福爾馬林膨脹肺，以同時膨脹和固定，使得即使是小的病灶在組織學檢查中也能被檢測。將肺分成5個葉，并通過尺寸(大^5mm;中1-4mm;小〈1mm)來分類腫瘤，并在解剖顯微鏡下計數。在檢查肺部后，腫瘤的數量在抗體處理的動物中明顯降低。對于用mAbB3處理的動物，大腫瘤降低21%，中腫瘤降低17%和小腫瘤降低22%。對于用mAbB3處理的動物的小腫瘤數目與用鹽水處理的動物的小腫瘤數目，學生T檢驗的統計學分析給出p<0.05。如在上述實施例中所示，現在顯示LPA的致腫瘤作用延伸到腎癌(例如，Caki-l)和胰腺癌(Panc-1)細胞系。在兩種細胞系中，LPA誘導腫瘤細胞增殖、遷移和促-血管生成劑和/或促轉移劑(諸如VEGF和IL-8)的釋放。現在顯示三種高親和性和特異性的單克隆抗-LPA抗體在一組體外細胞分析和血管生成和轉移的體內腫瘤模型中展現功效。實施例11腫瘤活檢材料的免疫組織化學本實施例的目的是證實針對S1P產生的mAb能用于檢測活檢材料中的S1P。該免疫組織化學(IHC)方法評估S1P(認為其由胂瘤自身產生)在腫瘤中的水平，并比測試鞘氨醇激酶的蛋白或RNA表達更敏感和更具有特異性。此外，IHC方法不受S1P信號的減少，因為分泌自腫瘤的S1P稀釋到胞外空間(即，血漿隔室)中。分析了在來自小鼠Matrigel/異種移植模型中的U937人胂瘤切片(冷凍的，10卿厚)中的S1P含量。U937細胞(人淋巴瘤細胞系；ATCCcatno#CRL-1593.2)在10.5mg/ml濃度下與Matrigel基質混合。將600含U937的Matrigel混合物(30x106個細胞/栓，600MJ體積)植入4-6周nu/nu雌性小鼠的右腹側，并允許生長30天。處死動物并切除Matrigel栓，埋入OTC中并在干冰和異戊烷中閃凍(flashfrozen)。然后使用低溫恒溫器切成5um切片。然后將切片室溫下固定在10%中性緩沖福爾馬林(Sigma,St.LouisMO;catalognumber:HT50+1;lot#025K4353)中20分鐘，然后切片。室溫下用于PBS中的IOOmM甘氨酸(pH7.4)洗滌切片5分鐘，用PBS/0.1%Tween20洗滌兩次。室溫下在1%BSA/PBS/0.05%Tween中封閉切片20分鐘。在1%/BSA/PBS/O.05%Tween中稀釋(如所示的，1:25或l:50)第一抗體(例如，鼠抗-SIPmAb)并室溫下與腫瘤切片孵育3小時。然后在輕輕攪拌下用PBS/0.1%Tween洗滌切片3次。稀釋的第二抗體(FITC-綴合的抗小鼠Ab(1:250)和RRX-綴合的抗-大鼠Ab(1:2500或1:500)88與腫瘤切片在l%BSA/PBS/0.05%Tween中在室溫下孵育1小時。然后用PBS/0.05%Tween以5分鐘的間隔洗滌切片6次。通過室溫下與稀釋于PBS的DAPI(1:5000)孵育20分鐘，用DAPI(4，，6-二脒基-2-苯基吲哚二乳酸鹽(MPI，10mg;Sigma，St.LouisMO;catalognumberD3571,lot22775)對切片進行對比染色。然后用PBS以5分鐘的間隔洗滌兩次并用DI仏0洗滌一次，并在Gelvitol封片介質中封片并晾干。使用的第一抗體是稀釋為l.Omg/ml的LT1002(LH-2;15mg/ml)抗-SlPmAb，并在1%/BSA/PBS/O.05%Tween中1:25的工作濃度下添加。使用的第二抗體是在l°/。/BSA/PBS/0.05%Tween中以1:250稀釋的熒光素(FITC)-綴合的兔抗-鼠IgG(H+L)(JacksonImmunoResearch，WestGrovePA;catalog#315-095-003;lotnumber:67031)Ab。用DeltaVision去巻積顯《敖鏡系統(AppliedPrecision,Inc.，Issaquah，WA.)系統捕獲圖像。所述系統包括安裝在NikonTE-200倒置表面焚光顯微鏡上的PhotometriesCCD。通常，獲取間隔~0.2um的8-10個光學切片。設定曝光時間使得相機響應在每個熒光團的線性范圍。鏡片包括20x和10x。使用在SiliconGraphicsOctane工作站上的SoftWorxsoftware(AppliedPrecision,Inc)對數據設定進行去巻積和分析。使用該IHC方法，能在腫瘤活檢圖像中容易看到SIP,使用抗-SIPmAb為第一抗體。相反，在對照樣品中不存在SIP染色，在該樣品中省略第一抗體。不受理論或這些實施例的限制，認為生物標記物SIP的測量法可以與SIP受體和鞘氨醇激酶的基因表達的測量結合，兩者可用作可替代的癌癥標記物。在本領域中已知的基因表達分析的方法的實例包括DNA陣列或微陣列(Brazma和Vilo，FEBSLett.，2000，480，1724;Celis，等人，FEBSLett.,2000，480，216)、SAGE(基因表達的串聯分析)(Madden,等人，DrugDiscov.Today,2000，5,415425)、READS(限制性內切酶擴增消化的cDNA)(Prashar和Weissman，89MethodsEnzymol.，1999，303，25872)、TOGA(總的基因表達分析)(Sutcliffe,等人，Pro"Natl.Acad，Sci.U.S.A.,2000，97，197681)，蛋白質陣列和蛋白質組學(Celis，等人，FEBSLett.，2000，480,216;Jungblut，等人，Electrophoresis,1999，20，210010)，表達序列標簽(EST)測序(Celis，等人，FEBSLett.,2000，480，216;Larsson，等人，J.Biotechnol.，2000，80，14357)，差減RNA指紋技術(SuRF)(Fuchs，等人，Anal.Biochem.，2000，286，9198;Larson,等人，Cytometry,2000，41，203208)，差減克隆，差異顯示(DD)(Jurecic和Belmont,Curr.Opin.Microbiol.,2000，3,31621),比較基因組雜交(Carulli，等人，J.CellBiochem.Suppl.，1998，31，28696)，FISH(熒光原位雜交)技術(Going和Gusterson，Eur.J.Cancer,1999，35，1895904)和質譜方法(To,Comb.Chem.HighThroughputScreen,2000，3，23541)。木**在本公開的啟發下，在無需過度實驗可以得到和執行本文所述和要求保護的所有的組合物和方法。而本發明的組合物和方法以優選實施方案的方式進行描述，對于本領域的技術人員來說明顯的是，可以對所述組合物和方法進行改變。認為所有的這些對本領域技術人員來說顯而易見的類似替換和修飾在所附權利要求所限定的本發明的精神和范圍內。在本說明書中的所有專利、專利申請和出版物表示本發明所屬領域的普通技術人員的水平。所有專利、專利申請和出版物(包括對其要求優先權或其他利益的那些)通過引用方式并入本文，其程度如同每個出版物都被單獨且明確地表明以引用方式并入本文。本文中示例性地描述的本發明可以在缺少本文中沒有明確公開的任何元素下實行。因此，例如，在本文的每一種情況下，術語"包括，，，"基本上由……組成，，和"由……組成"中的任一個可以用另外兩個術語的任一個替代。所使用的術語和表達用作說明書的術語且90不受限制，且不意圖在所述術語和表達的使用中排除任何所示和所描述的等價性質，或其部分，但認為多種修飾可能在本發明所要求保護的范圍內。因此，應該理解盡管本發明具體由優選實施方案和任選特且認為所述修飾和變化在所附權利要求所限定的本發明的范圍內。9權利要求1.一種對溶血磷脂酸具有反應性的分離的免疫衍生部分。2.根據權利要求1的分離的免疫衍生部分，其中所述免疫衍生部分選自多克隆抗體；單克隆抗體；嵌合抗體；多克隆、單克隆或嵌合抗體的片段；多克隆、單克隆或嵌合抗體的變體；和多克隆、單克隆或嵌合抗體的衍生物。3.—種組合物，其包含載體，任選地是藥學可接受載體和根據權利要求1的分離的免疫衍生部分。4.一種對溶血磷脂酸具有反應性的分離的單克隆抗體，任選地包含在組合物中，所述組合物進一步包含載體，任選地是藥學可接受載體。5.—種方法，選自(a)—種降低受試者中溶血磷脂酸有效濃度的方法，包括給受試者施用足以降低溶血磷脂酸有效濃度的量的、根據權利要求1的免疫衍生部分，其中所述免疫衍生部分任選地是單克隆抗體，由此降低溶血磷脂酸的有效濃度；和(b)—種降低受試者中溶血磷脂酸有效濃度的方法，包括給受試者施用足以降低所述溶血磷脂酸有效濃度的量的、根據權利要求1的免疫衍生部分，其中所述免疫衍生部分是單克隆抗體，其中所述溶血磷脂酸有效濃度被降低。6.根據權利要求5，(a)部分的方法，其中所述受試者是哺乳動物，任選地是人，且其中所述免疫衍生部分任選地選自多克隆抗體；單克隆抗體；嵌合抗體；多克隆、單克隆或嵌合抗體的片段；多克隆、單克隆或嵌合抗體的變體；和多克隆、單克隆或嵌合抗體的衍生物。7.根據權利要求5的方法，其中所述免疫衍生部分作為組合物的一部分被施用，所述組合物進一步包含載體，任選地是藥學可接受載體。8.—種方法，選自(a)—種治療方法，包括給需要治療性或預防性治療的受試者施用有效完成所述治療的量的、根據權利要求1的免疫衍生部分，其中所述免疫衍生部分任選地是單克隆抗體；(b)—種治療方法，包括給需要治療性或預防性治療的受試者施用有效完成所述治療的量的、根據權利要求1的分離的免疫衍生部分，其中所述免疫衍生部分是單克隆抗體；(c)一種抑制癌細胞增殖的方法，包括使癌細胞接觸有效抑制所述癌細胞增殖的量的、根據權利要求1的分離的免疫衍生部分，任選地是單克隆抗體；(d)—種抑制體內癌細胞增殖的方法，包括給已知或懷疑患有癌癥的受試者施用有效抑制包括所述癌的細胞增殖的量的、根據權利要求1的分離的免疫衍生部分，任選地是單克隆抗體；(e)—種抑制癌細胞遷移的方法，包括使癌細胞接觸有效抑制所述癌細胞遷移的量的、根據權利要求1的分離的免疫衍生部分，任選地是單克隆抗體；(f)一種抑制體內癌細胞遷移的方法，包括給已知或懷疑患有癌癥的受試者施用有效抑制包括所述癌的細胞遷移的量的、根據權利要求1的分離的免疫衍生部分，任選地是單克隆抗體；(g)—種抑制患有腫瘤的動物中肺瘤轉移的方法，包括給所述動物施用有效抑制所述腫瘤轉移的量的、根據權利要求1的分離的免疫衍生部分，任選地是單克隆抗體；(h)—種抑制已知或懷疑患有胂瘤的動物中腫瘤轉移的方法，包括給所述動物施用對溶血磷脂酸具有反應性的分離的免疫衍生部分，使得所述腫瘤的轉移被抑制，其中所述腫瘤任選地選自腎癌、胰腺癌、黑色素瘤、肺癌、成神經細胞瘤、肝細胞癌、多形性成膠質細胞瘤、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、結腸直腸癌和白血病；(i)一種抑制腫瘤中血管生成的方法，包括給已知或懷疑患有腫瘤的動物施用對溶血磷脂酸具有反應性的分離的免疫衍生部分，使得所述腫瘤中的血管生成被抑制，其中所述腫瘤任選地選自腎癌、胰腺癌、黑色素瘤、肺癌、成神經細胞瘤、肝細胞癌、多形性成膠質細胞瘤、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、結腸直腸癌和白血病；(j)一種增加細胞的細胞凋亡的方法，任選地在體內，包括使細胞，任選地是癌細胞接觸有效增加所述細胞的細胞凋亡的量的、根據權利要求1的分離的免疫衍生部分，任選地是單克隆抗體；和(k)一種增強細胞毒素劑對細胞的抗凋亡作用的方法，任選地在體內，包括使細胞，任選地是癌細胞接觸有效增強細胞毒素劑對細胞的抗W]亡作用的量的、根據權利要求1的分離的免疫衍生部分，任選地是單克隆抗體。9.根據權利要求8的方法，其中所述受試者是哺乳動物，任選地是人，且其中所述免疫衍生部分選自多克隆抗體；單克隆抗體；嵌合抗體；多克隆、單克隆或嵌合抗體的片段；多克隆、單克隆或嵌合抗體的變體；和多克隆、單克隆或嵌合抗體的衍生物。10.根據權利要求8的方法，其中所述免疫衍生部分作為組合物的一部分被施用，所述組合物進一步包含載體，任選地是藥學可接受載體。11.根據權利要求8，(a)或(b)部分的方法，其中所述治療是癌癥治療。12.根據權利要求8，(c)、(d)、(e)、(f)、(j)或(k)部分的方法，其中所述癌細胞選自腎癌細胞、胰腺癌細胞、黑素瘤細胞、肺癌細胞、成神經細胞瘤細胞、肝細胞癌細胞、多形性成"交質細胞瘤細胞、乳腺癌細胞、卵巢癌細胞、前列腺癌細胞、結腸直腸癌細胞和白血病細胞。13.—種治療癌癥的方法，包括給患有或懷疑患有癌癥的動物，任選地是人或非人哺乳動物施用治療有效量的根據權利要求1的分離的免疫衍生部分，任選地是單克隆抗體，使得所述動物中溶血磷脂酸的有效濃度降低。14.根據權利要求13的方法，其中，所述癌癥選自腎癌、胰腺癌、黑色素瘤、肺癌、成神經細胞瘤、肝細胞癌、多形性成膠質細胞瘤、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、結腸直腸癌和白血病。15.根據權利要求14的方法，進一步包括施用細胞毒素劑。16.—種施用方法，包括給需要用根據權利要求1的分離的免疫衍生部分治療的受試者，任選地是人或非人哺乳動物，施用所述免疫衍生部分，其中所述分離的免疫衍生部分任選地以組合物施用，所述組合物進一步包含栽體，任選地是藥學可接受載體。17.根據權利要求16的方法，其中所述免疫衍生部分選自多克隆抗體；單克隆抗體；嵌合抗體；多克隆、單克隆或嵌合抗體的片段；多克隆、單克隆或嵌合抗體的變體；和多克隆、單克隆或嵌合抗體的衍生物。18.根據權利要求16的方法，其中所述施用選自局部(任選地是經選自經皮，表皮眼部、子宮內、陰道、直腸、肺部、氣管內或鼻內施用的局部途徑)、口服和腸胃外施用(任選地是經選自靜脈內、動脈內、皮下、腹膜內、肌肉內或顱內施用的腸胃外途徑)。19.根據權利要求16的方法，其包括腸胃外施用包含對溶血磷脂酸具有反應性的單克隆抗體和藥學可接受載體的組合物。全文摘要描述了制備對生物活性脂質靶具有反應性的單克隆抗體及其衍生物的組合物和方法。這些組合物包括衍生的脂質，每一個組合物都包含有一個極性頭基團團和至少一個烴鏈(例如，溶血脂質諸如溶血磷脂酸或鞘氨醇-1-磷酸)的生物活性脂質，其中碳原子用懸垂反應基團進行衍生；通過連接衍生的脂質與載體部分(即，載體蛋白、聚乙二醇、膠體金、藻酸鹽或有機硅珠)制備免疫原；通過用所述免疫原免疫動物來產生單克隆抗體和衍生物；含有所述抗體和抗體衍生物的治療和診斷組合物。還描述了制備所述衍生脂質、免疫原以及單克隆抗體和衍生物的方法，檢測所述抗體一旦產生的方法，和使用所述抗體和衍生物的治療和檢測方法。文檔編號C07K16/00GK101501071SQ200780026994公開日2009年8月5日申請日期2007年5月31日優先權日2006年5月31日發明者G·漢森,R·A·薩巴蒂尼,W·A·加蘭德申請人:Lpath公司