專利名稱：促進生長激素釋放的螺哌啶類化合物和同系物的制作方法
本申請是申請人的共同未決申請序號07/989，322(1992年12月11日提交)的部分繼續申請。
由垂體分泌的生長激素刺激了能夠生長的身體的各個組織的生長。此外，已知生長激素對身體的代謝過程具有下列基本作用1、增加身體所有細胞中蛋白質合成的速度;
2、降低身體細胞中碳水化合物使用的速度;
3、增加游離脂肪酸的活動和為獲得能量對脂肪酸的使用。
生長激素分泌的缺乏能夠導致各種醫學上的疾病，如侏儒癥。
已知釋放生長激素有各種途徑。例如，化學藥品如精氨酸、L-3，4-二羥基苯丙氨酸(L-DOPA)、胰高血糖素、后葉加壓素和誘發低血糖的胰島素，以及活動如睡眠和運動，通過以某些方式作用于下丘腦，或許減少生長激素釋放的抑制因子的分泌，或許增加已知的促分泌生長激素釋放因子(GRF)或釋放未知的內源生長激素的激素或所有這些激素的分泌，從而間接地使生長激素由垂體釋放出來。
在需要提高生長激素水平的情況中，這一問題的解決一般是通過提供外源生長激素或通過施用GRF或可刺激生長激素產生和/或釋放的肽化合物。在兩種情況的任一種中化合物的肽基性質都必須使化合物通過注射給藥。起初生長激素源是提取出尸體的腦下腺。這導致產品非常昂貴，而且由此帶來的危險是與腦下腺源有關的疾病可能會傳播給生長激素的接受者。近來已經可以得到重組體生長激素，盡管不再帶有任何疾病傳播的危險，但是這種必須通過注射或通過鼻噴霧給藥的產品仍然十分昂貴。
已經開發了刺激內源生長激素釋放的其他化合物，如與GRF相關的類似肽基化合物或美國專利4，411，890號的肽。盡管這些肽遠遠小于生長激素，但它們對各種蛋白酶仍很敏感。正如大多數肽的情況一樣，其口服生物藥效率的潛能很低。本發明化合物是促進生長激素釋放的非肽類似物，它們在各種生理環境中都是穩定的，并且可以通過腸胃外、鼻或口服途徑給藥。
本發明包括能夠刺激自然或內源生長激素釋放的某些螺環化合物。因此這些化合物能夠用于治療需要刺激生長激素的產生或分泌的病癥，如患有自然生長激素缺乏的人或用于食品生產的動物，在后一種情況下生長激素的刺激將會產生更大更高產的動物。因此，本發明的一個目的是描述螺環化合物。本發明的另一個目的是描述這些化合物的制備方法。本發明的再一個目的是描述這些化合物用于增加人和動物的生長激素分泌的用途。本發明的另外一個目的是描述含有螺環化合物的組合物，它們用于治療人和動物以便提高生長激素分泌的水平。其他目的將由閱讀下列敘述而變得明顯。
本發明的新的螺環化合物及其可藥用鹽以及其各個非對映體最好用下面結構式Ⅰ和Ⅱ表示
R1是C1-C10烷基、芳基、芳基(C1-C6烷基)和C3-C7環烷基(C1-C6烷基)或C1-C5烷基-K-C1-C5烷基、芳基(C0-C5烷基)-K-(C1-C5烷基)、C3-C7環烷基(C0-C5烷基)-K-(C1-C5烷基)、其中K是O、S(O)m、N(R2)C(O)、C(O)N(R2)、OC(O)、C(O)O、或-CR2＝CR2-或-C≡C-，其中芳基如下所定義，而且R2和烷基可以被1至9個鹵原子、S(O)mR2a、1至3個OR2a或C(O)OR2a進一步取代，而芳基可被下列基團進一步取代苯基、苯氧基、鹵代苯基、1-3個C1-C6烷基、1至3個鹵原子、1至2個OR2、亞甲二氧基、S(O)mR2、1至2個CF3、OCF3、硝基、N(R2)(R2)、N(R2)C(O)R2、C(O)OR2、C(O)N(R2)(R2)、SO2N(R2)(R2)、N(R2)S(O)2芳基或N(R2)SO2R2;
R2是氫、C1-C6烷基、C3-C7環烷基，并且當兩個C1-C6烷基存在于一個原子上時，它們可以任意連接形成任選包括氧、硫或NR2a的C3-C6環;
R2a是氫或C1-C6烷基;
R3a和R3b獨立地是氫、鹵素、C1-C6烷基、OR2、氰基、OCF3、亞甲二氧基、硝基、S(O)mR、CF3或C(O)OR2，當R3a和R3b彼此處于鄰位時，它們可以連接形成任選包括1或2個選自氧、硫或氮雜原子的C5至C8脂環或芳環;
R4和R5獨立地是氫、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基，其中取代基可以是1至5個鹵原子、1至3個羥基、1至3個C1-C10鏈烷酰氧基、1至3個C1-C6烷氧基、苯基、苯氧基、2-呋喃基、C1-C6烷氧羰基、S(O)m(C1-C6烷基);或R4和R5可以一起形成-(CH2)，La(CH2)3-，其中La是C(R2)2、O、S(O)m或N(R2)，r和s獨立地是1至3，R2如上所定義;
R6是氫或C1-C6烷基;
A是
其中x和y獨立地是0-3;
Z是N-R2或O;
R7和R7a獨立地是氫、C1-C6烷基、OR2、三氟甲基、苯基、取代的C1-C6烷基，其中取代基是咪唑基、苯基、吲哚基、對羥基苯基、OR2、1至3個氟、S(O)mR2、C(O)OR2、C3-C7環烷基、N(R2)(R2)、C(O)N(R2)(R2);或R7和R7a可以獨立地與R4和R5基團之一或兩者連接起來，在末端氮與R7或R7a基團的烷基之間形成亞烷基橋，其中亞烷基橋含有1至5個碳原子;
B、D、E和F獨立地是C(R8)(R10)、O、C＝O、S(O)m或NR9，所以一個或兩個B、D、E或F可以任意地不存在以便提供一個5、6或7元環;條件是只有當其余的B、D、E和F基之一同時是O、S(O)m或NR9時，B、D、E和F才可以是C(R8)(R10)或C＝O;B和D或D和E可以一起為N＝CR10-或CR10＝N，或B和D或D和E可以一起為CR8＝CR10，其條件是其它的B和E和F之一同時是O、S(O)m或NR9;
R8和R10獨立地是氫、R2、OR2、(CH2)q芳基、(CH2)qC(O)OR2、(CH2)qC(O)O(CH2)q芳基或(CH2)q-(1H-四唑-5-基)，芳基可以被1至3個鹵原子、1至2個C1-C8烷基、1至3個OR2或1至2個C(O)OR2任意地取代;
R9是R2、(CH2)q芳基、C(O)R2、C(O)(CH2)q芳基、SO2R2、SO2(CH2)q芳基、C(O)N(R2)(R2)、C(O)N(R2)(CH2)q芳基、C(O)OR2、1H-四唑-5-基、SO3H、SO2NHC≡N、SO2N(R2)芳基、SO2N(R2)(R2)，而(CH2)q可以被1至2個C1-C4烷基任意取代，R2和芳基可以被下列基團任意地進一步取代1至3個OR2a、O(CH2)q芳基、1至2個C(O)OR2a、1至2個C(O)O(CH2)q芳基、1至2個C(O)N(R2a)、(R2a)、1至2個C(O)N(R2a)(CH2)q芳基、1至5個鹵原子、1至3個C1-C4烷基、1，2，4-三唑基、1H-四唑-5-基、C(O)NHSO2R2a、S(O)mR2a、C(O)NHSO2(CH2)q芳基、SO2NHC≡N、SO2NHC(O)R2a、SO2NHC(O)(CH2)q芳基、N(R2)C(O)N(R2a)(R2a)、N(R2a)C(O)N(R2a)(CH2)q芳基、N(R2a)(R2a)、N(R2a)C(O)R2a、N(R2a)C(O)-(CH2)q芳基、OC(O)N(R2a)(R2a)、OC(O)N(R2a)(CH2)q芳基;SO2(CH2)qCONH-(CH2)mNHC(O)R11，其中w是2-6，R11可以是生物素、芳基或被1或2個OR2、1-2個鹵原子、疊氮基或硝基取代的芳基;
m是0、1或2;
n是1或2;
q可以任意地是0、1、2、3或4;以及G、H、I和J是碳、氮、硫或氧原子，并且至少一個是雜原子，G、H、I或J之一可以任意地不存在以便得到5或6元雜芳環。
在上面結構式和整個本發明說明書中，下列術語具有指定的意義上述烷基包括直鏈或支鏈構型的指定鏈長的烷基，它們可以任意地含有雙鍵或三鍵。這類烷基的實例有甲基、乙基、丙基、乙炔基、異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、己基、異己基、烯丙基、丙烯基、丁烯基、丁二烯基等。
上述烷氧基包括直鏈或支鏈構型的指定鏈長的烷氧基，它們可以任意地含有雙鍵或三鍵。這類烷氧基的實例有甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、異戊氧基、己氧基、異己氧基、烯丙氧基、丙炔氧基、異丁烯氧基、2-己烯基氧基等。
術語“鹵素”包括鹵原子氟、氯、溴和碘。
術語“芳基”包括苯基和萘基，以及含有1至3個氮、硫或氧雜原子的5-和6-元環的芳殘基或含有1至3個氮、硫或氧雜原子的稠合的5元或6元雙環的芳殘基。這類雜芳環的實例有吡啶、噻吩、苯并噻吩、四唑、吲哚、N-甲基吲哚、二氫吲哚、吲唑、N-甲酰基吲哚、苯并咪唑、噻唑、呋喃、嘧啶和噻二唑。
在上面的通式中上面定義的某些術語可能出現一次以上，當這樣出現時每一術語的定義應當不依賴于其他術語。
本發明優選的化合物及其可藥用鹽以及其各個非對映體是
式Ⅲ其中R1是C1-C10烷基、芳基(C1-C4烷基)、C3-C6環烷基(C1-C4烷基)、(C1-C4烷基)-K-(C1-C4烷基)、芳基(C0-C5烷基)-K-(C1-C4烷基)、(C3-C7環烷基)(C0-C5烷基)-K-(C1-C4烷基)，其中K是O、S(O)m、-CR2＝CR2-、-C≡C-;或N(R2)C(O)，其中R2和烷基可以被1至7個鹵原子、S(O)m-C1-C4烷基、OR2a或C(O)OR2a進一步取代，芳基可以被下列基團進一步取代1-2個C1-C4烷基、1至2個鹵原子、1至2個OR2、CF3、OCF3、亞甲二氧基、S(O)mR2、SO2N(R2)(R2)、N(R2)SO2R2或C(O)OR2;
R2是氫、C1-C6烷基、C3-C7環烷基，并且如果兩個C1-C6烷基存在于一個原子上時，它們可以任意地連接形成任選包括1至2個選自氧、硫或NR2a雜原子的C4-C6環;
R2a是氫或C1-C6烷基;
R3a和R3b獨立地是氫、鹵素、C1-C4烷基、OR2、亞甲二氧基、硝基、S(O)mC1-C4烷基、CF3或C(O)OR2，R4和R5獨立地是氫、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基，其中取代基可以是1至5個鹵原子、1至2個羥基、1至2個C1-C6鏈烷酰氧基、1至2個C1-C6烷氧基或S(O)m(C1-C4烷基);
A是
其中x和y獨立地是0、1或2;
R7和R7a獨立地是氫、C1-C4烷基、取代的C1-C4烷基，其中取代基是1至3個氟、或咪唑基、苯基、吲哚基、S(O)mC1-C4烷基，C(O)OR2、或R7和R7a可以獨立地與R4和R5基團之一或兩者連接起來，在末端氮與R7或R7a基團的烷基之間形成亞烷基橋，其中亞烷基橋含有1至3個碳原子;
B、D和F獨立地是C(R8)、(R10)、O、C＝O、S(O)m或NR9，所以B、D或F之一可以任意地不存在以便得到5或6元環，條件是只有當其余的B、D和F基團之一同時是O、S(O)m或NR9時，B、D和F之一才是C(R8)(R10)或C＝O;
R8和R10獨立地是氫、R2、OR2、(CH2)q芳基、(CH2)qC(O)OR2、(CH2)qC(O)O(CH2)q芳基或(CH2)q-(1H-四唑-5-基)，芳基可以被1至3個鹵原子、1至2個C1-C4烷基、1至3個OR2或1至2個C(O)OR2任意地取代;
R9是R2、(CH2)q芳基、C(O)R2、C(O)(CH2)q芳基、SO2R2、SO2(CH2)q芳基、C(O)N(R2)(R2)、C(O)N(R2)(CH2)q芳基、1H-四唑-5-基、SO2NHC≡N、SO2NR2芳基、SO2N(R2)(R2)，(CH2)q可以被1至2個C1-C2烷基任意地取代，R2可以被下列基團任意地取代1至2個OR2a、O(CH2)q芳基、1至2個C(O)OR2a、C(O)N(R2a)(R2a)、S(O)mR2a、1H-四唑-5-基、C(O)NHSO2R2a、C(O)NHSO2(CH2)q芳基、N(R2a)C(O)N(R2a)(R2a)或N(R2a)C(O)N(R2a)(CH2)q芳基，芳基可以被下列基團任意取代1至2個OR2a、1至2個鹵原子、1至2個C1-C4烷基、C(O)OR2a或1H-四唑-5-基;SO2(CH2)wCONH(CH2)w-NHC(O)R11，其中w＝2-6，R11可以是生物素、芳基或被1或2個OR2、1-2個鹵原子、疊氮基或硝基取代的芳基;
m是0、1或2;
q可以任意是0、1、2或3;以及芳基是苯基、萘基、吡啶基、噻吩基、吲哚基、噻唑基或嘧啶基。
當化合物Ⅲ中不存在F時，可得到更為優選的化合物。
因此，本發明更為優選的化合物及其可藥用鹽以及其各個非對映體如結構式Ⅳ所示
R1是C1-C10烷基、芳基(C1-C4烷基)、C5-C6環烷基(C1-C4烷基)或(C1-C4烷基)-K-C1-C2烷基-、芳基(C0-C2烷基)-K-(C1-C2烷基)、C3-C6環烷基-(C0-C2烷基)-K-(C1-C2烷基)，其中K是O或S(O)m、芳基可以被1至2個C1-C4烷基、1至2個鹵原子、OR2、C(O)OR2、CF3或S(O)mR2進一步取代。
R2是氫、C1-C4烷基、環C3-C6烷基，并且如果兩個C1-C4烷基存在于一個原子上，它們可以任意地連接形成任選包括氧或NR2a雜原子的C5-C6環;
R2a是氫或C1-C4烷基;
R3a和R3b獨立地是氫、鹵素、C1-C4烷基、C(O)OR2、羥基、C1-C4烷氧基、S(O)mC1-C4烷基或CF3;
R4和R5獨立地是氫、C1-C4烷基、取代的C1-C4烷基，其中取代基可以是1至2個羥基或S(O)m(C1-C3烷基);
A是
其中x是0或1;
R7和R7a獨立地是氫、C1-C3烷基;或R7和R7a可獨立地與R4和R5基團之一或兩者連接起來，在末端氮與R7或R7a基團的烷基之間形成亞烷基橋以形成包含末端氮的5或6元環;
B和D獨立地是C(R8)(R10)、C＝O、O、S(O)m、NR9，條件是只有當B和D的另一個是O、S(O)m或NR9時，B和D之一可以是C(R8)(R10)或C＝O;
R8和R10獨立地是氫、R2、OR2或(CH2)q芳基，芳基可以被1至2個鹵原子、1至2個C1-C4烷基、OR2或1至2個C(O)OR2任意地取代;
R9是C(O)R2、C(O)(CH2)q芳基、SO2R2、SO(CH2)q芳基、C(O)N(R2)(R2)、C(O)N(R2)(CH2)q芳基，而(CH2)q可以被1至2個C1-C2烷基任意取代，R2可以被下列基團任意地取代1至2個OR2a、O(CH2)q芳基、C(O)OR2a、C(O)N(R2a)(R2a)、S(O)mR2a、1H-四唑-5-基、C(O)NHSO2R2a或N(R2a)C(O)N(R2a)(R2a)，芳基可以被下列基團任意地取代1至2個OR2a、1至2個鹵原子、1至2個C1-C2烷基、C(O)OR2a、1H-四唑-5-基或S(O)mR2a;SO2(CH2)qCONH(CH2)wNHC(O)R11，其中w＝2-6，R11可以是生物素、芳基，芳基可被1至2個OR2、1至2個鹵原子、疊氮基、硝基任意地取代;
m是0、1或2;
q可以任意是0、1、2或3;
芳基是苯基、萘基、吡啶基、吲哚基、噻吩基或四唑基。
本發明最優選的化合物及其可藥用鹽以及其各個非對映體如結構式Ⅴ所示
R3a是H，氟D是O，S，S(O)m，N(R2)，NSO2(R2)，NSO2(CH2)t芳基，NC(O)(R2)，NSO2(CH2)qOH，NSO2(CH2)qCOOR2，N-SO2(CH2)qC(O)-N(R2)(R2)，N-SO2(CH2)qC(O)-N(R2)(CH2)wOH，
而且芳基是苯基或吡啶基、苯基可以被1-2個鹵原子取代;
R2是H、C1-C4烷基;
m＝1，2;
t是0、1、2;
q是1、2、3;
w是2-6。
本發明具有代表性的最優選的釋放生長激素的化合物包括下列化合物及其可藥用鹽1、N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺2、N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲羰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺3、N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-苯磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺
4、N-[1(R)-[(3，4-二氫-螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺5、N-[1(R)-[(2-乙酰基-1，2，3，4-四氫螺[異喹啉-4，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺6、N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺7、N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽8、N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(2′，6′-二氟苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺9、N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-5-氟螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺10、N-[1(S)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲硫基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺11、N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-3-苯基丙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺12、N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-3-環己基丙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺13、N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-4-苯基丁基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺14、N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺
15、N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-5-氟螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺16、N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-(2-乙氧羰基)甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺17、N-[1(R)-[(1，2-二氫-1，1-二氧代螺[3H-苯并噻吩-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺所用命名法的具有代表性的實例如下
N-[1(R)-[(3，4-二氫-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-4-苯基丁基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺
N-[1(S)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲硫基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺
N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺。
在本申請中所用的下列縮寫具有以下含意BOC 叔丁氧羰基BOP 苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)-六氟磷酸鏻CBZ 芐氧羰基DCC 二環己基碳化二亞胺
DMF N，N-二甲基甲酰胺EDC 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽FAB-MS 快速原子轟擊-質譜GHRP 釋放生長激素的肽HOBT 羥基苯并三唑LAH 氫化鋁鋰HPLC 高壓液相色譜MHz 兆赫茲MPLC 中壓液相色譜NMM N-甲基嗎啉NMR 核磁共振OXONE 過一硫酸鉀PLC 制備性層色譜PCC 氯鉻酸吡啶嗡Ser 絲氨酸TFA 三氟乙酸THF 四氫呋喃TLC 薄層色譜TMS 四甲基甲硅烷如在上面結構式Ⅰ和Ⅱ中星號所標記的那樣，本發明化合物均具有至少一個不對稱中心。在分子中可以存在其他不對稱中心，這取決于分子中各種取代基的性質。每一個這樣的不對稱中心將產生兩個旋光異構體，并且所有這樣的旋光異構體(作為分離的、純的或部分純化過的旋光異構體、其外消旋混合物或非對映的混合物)均包括在本發明范圍內。在由式Ⅰ和Ⅱ中星號所表示的不對稱中心的情況中，已經發現活性更大并因此為更優選的異構體的絕對立體化學如式Ⅰa所示。當R2取代基為氫時，不對稱中心的特殊構型相應于D-氨基酸中的構型。在大多數情況下這種構型也被指定為R-構型，不過這將隨著用于確定R或S立體化學排布的R1和R2的意義而變化。
本發明化合物通常是以其可藥用酸加成鹽形式而被分離的，如用無機和有機酸衍生的鹽。這類酸的實例有鹽酸、硝酸、硫酸、磷酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、馬來酸、琥珀酸、丙二酸、甲磺酸，等等。此外，包含酸性官能基如羧基的某些化合物可以其無機鹽形式被分離，其中抗衡離子可選自鈉、鉀、鋰、鈣、鎂等以及有機堿。
本發明化合物Ⅰ和Ⅱ的制備可以按順序的或會聚的合成途徑來進行。下列反應流程中給出了以順序的方式制備式Ⅰ和Ⅱ化合物的合成詳細說明。
在許多情況下，保護的氨基酸衍生物1是市場上可買到的，其中保護基L是例如BOC或CBZ基。其他的保護的氨基酸衍生物1可以用文獻方法制備。許多式2和2a的螺哌啶和螺吖庚因(n＝2)是文獻中已知的，并且可以通過標準方法如鹵化、硝化、磺酰化等在苯基或雜芳基上衍生。此外，各種苯基或雜芳基取代的螺哌啶和螺吖庚因(n＝2)可以按照文獻方法用衍生的苯基和雜芳基中間體來制備。在流程Ⅰ之后的流程中合成方法僅用螺哌啶來說明，不過本領域技術人員應當理解，對高級同系物系列也可以進行所說明的轉化以得到n＝2的式Ⅰ和Ⅱ化合物。
可以按照流程1所述合成式3和3a中間體。式2和2a的螺哌啶與式1的保護了的氨基酸(其中L是適宜的保護基)的偶合反應適宜在惰性溶劑如二氯甲烷中用偶合劑如DCC或EDC在HOBT存在下進行。此外，該偶合反應也可以用偶合劑如BOP在惰性溶劑如二氯甲烷中進行。通過硅膠色譜法，例如用快速色譜法(W.C.Still，M.Kahn和A.Mitra，J.Org.Chem.1978，43，2923)、MPLC或制備性TLC分離不需要的副產物并純化諸中間體。
流程1
可以按照流程2中說明的方法將3和3a轉化為中間體4和4a。芐氧羰基的除去可以用本領域已知的許多方法進行;例如，在鈀或鉑催化劑存在下，在質子傳遞溶劑如甲醇中用氫氣進行催化氫化。在催化氫化受到其他潛在反應性官能基的存在的抵觸的情況下，芐氧羰基的除去也可以通過用溴化氫的乙酸溶劑處理來進行。BOC保護基的除去是在溶劑如二氯甲烷或甲醇中，用強酸如鹽酸或三氟乙酸來進行的。除去可能存在的其他保護基所要求的條件可以參見Greene，T;Wuts，P.G.M.Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley & Sons，Inc.，New York，NY 1991。
流程2
可以按流程3所示制備其中A為亞甲基或取代亞甲基的式5和5b中間體，即通過在惰性溶劑如二氯甲烷中，用偶合劑如EDC或DCC在HOBT存在下，使式4和4a中間體與式6的氨基酸進行偶合反應。這些氨基酸6是已知的氨基酸，或是通過對本領域技術人員來說是已知的方法容易合成的氨基酸。此外，偶合反應也可以用偶合劑如BOP在惰性溶劑如二氯甲烷中進行。另外，如果R4或R5是氫，則在偶合反應中使用式7的氨基酸(其中L是如上所定義的保護基)，得到5a和5c。5a和5c的去保護(L＝保護基)可以按照本領域中已知的條件進行。
流程3
如流程4中所述的那樣，可將其中R4和/或R5為氫的式Ⅰ和Ⅱ化合物進一步制成氨基上被取代的新化合物Ⅰ和Ⅱ(優選側鏈R7＝CH2-CH(OH)-CH2X，其中X＝H或OH)。在本領域已知的條件下用醛進行Ⅰ和Ⅱ的還原性胺化作用;例如在鉑、鈀或鎳催化劑存在下用氫氣的催化氫化，或在惰性溶劑如甲醇或乙醇中使用化學還原劑如氰基硼氫化鈉。此外，可以通過環氧化物開環反應進行類似的轉化。
流程4
可以按流程5所示通過4或4a與試劑8(其中X是好的離去基團如Cl、Br、Ⅰ、咪唑)反應制備其中A為N(R2)(CH2)z-C(R7)(R7a)-(CH2)y的式Ⅰ和Ⅱ化合物。此外，4和4a在惰性溶劑如1，2-二氯乙烷中可以與式9的異氰酸酯反應。如果在最終產物中R4或R5是氫，則試劑8和9將帶有可除去的保護基L以代替R4或R5。
流程5
本發明化合物Ⅰ和Ⅱ也可以如反應流程6、7和8所述以會聚方式制備。
在許多情況中，保護的氨基酸衍生物10是市場上可買到的酯，其中M＝甲基、乙基或芐基。其他酯保護的氨基酸可以通過本領域技術人員熟知的經典方法制備。這些方法中的某些方法包括保護的氨基酸與重氮基烷烴的反應以及保護基L的除去，在強酸如鹽酸或對甲苯磺酸存在下氨基酸與適當的醇的反應。制備新氨基酸的合成路線被描述于流程14、15和16中。
式11和11a的中間體的制備可以如流程6所示，通過胺10與如上面流程3中所述的氨基酸6和/或7(其中L是保護基)的偶合反應進行。當11或11a中存在脲鍵時，它可以按流程5所示被引入。
流程6
可以如流程7所述，通過本領域已知的許多方法將酯11或11a轉化為中間體酸12或12a;例如，可以用氫氧化鋰在質子傳遞溶劑如甲醇水溶液中將甲酯和乙酯水解。此外，芐基的除去可以通過許多還原方法進行，包括在鉑或鈀催化劑存在下在質子傳遞溶劑如甲醇中的氫化反應。烯丙基酯的裂解可以用四-(三苯基膦)鈀催化劑，在2-乙基乙酸存在下在各種溶劑包括乙酸乙酯和二氯甲烷中進行(見J.Org.Chem.1982，42，587)。
流程7
可以如流程8所述將酸12或12a制成5和5a及5b和5c。式2和2a的螺哌啶與式12或12a的酸(其中L是適宜的保護基)的偶合反應宜于在惰性溶劑如二氯甲烷中，用偶合劑如二環己基碳化二亞胺(DCC)或EDC，在1-羥基苯并三唑(HOBT)存在下進行。此外，該偶合反應也可以用偶合劑如苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)六氟磷酸鏻(“BOP”)在惰性溶劑如二氯甲烷中進行。通過除去保護基L將5a和5c轉化為Ⅰ和Ⅱ。當R4和/或R5是H時，可以如流程4所述將取代的烷基任意加到氮原子上。
流程8
流程9說明了氧化的螺-2，3-二氫化茚基哌啶中間體的制備，其中R3a和R3b均為氫。將保護的螺茚13進行硼氫化，然后用氯鉻酸吡啶鎓進行氧化處理，得到螺-2，3-二氫-1-茚酮14。
流程9
流程10說明了螺-1，2-二氫化茚向苯并內酰胺中間體的轉化。在惰性溶劑如氯仿中將螺-2，3-二氫-1-茚酮用疊氮酸處理(Schmidt反應)是用于這種轉化的許多適當的文獻方法之一。在此實例中形成了兩種苯并內酰胺的混合物。這些異構體很容易通過硅膠色譜法分離。然后將這些中間體去保護，并如流程1和8所述用中間體同系物2將其結合到生長激素促分泌素中。
流程10
在溶劑如DMF中在NaH存在下，用烷基鹵將15和16烷基化，得到17和18(R2＝C1-C4烷基)。
流程10A
當L是適當的保護基如芐基時，可以用氫化鋁鋰將酰胺還原，得到胺19和21。然后用本領域技術人員已知的條件，將其中R2＝H的這些胺烷基化、芳基化、酰化，或使其與取代的磺酰基鹵或異氰酸酯反應，得到化合物20和22。用鈀催化劑通過氫解除去保護基(L)，得到中間體，可以用上面所示的流程1和8中說明的化學方法并使用中間體同系物2，將所述中間體結合到本發明的促分泌素中。
流程11
流程11A
此外，可以如流程12所示制備1，2，3，4-四氫螺[異喹啉-4，4′-哌啶]環系。將保護的螺茚臭氧分解，然后用二甲硫處理，得到的半縮醛中間體24在還原性胺化和酰化條件下得到胺25。氨基保護基(L)如上所定義。
流程12
用文獻中描述的及本領域技術人員已知的方法可以制備式26的環類似物，其中X，Y是H，H;OH，H;H，OH;及＝O。例如，如流程13所示，根據Kabbe，H.J.在Synthesis.1978，886-887以及其中所引文獻中所述方法，螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]類似物可以由取代或未取代的2-羥基苯乙酮和適當保護了的4-哌啶酮來制備。而2-羥基苯乙酮類或者是市場上買到的，或者可以用本領域技術人員已知的文獻方法制備。這類方法被描述在下列文獻中Chang，C.T.等人，J.Am.Chem.Soc.，1961，3414-3417，和Elliott，J.M.等人，J.Med.Chem.，1992，35，3973-3976。按下列文獻所述去保護基Protective Groups in Organic Synthesis，Greene，T.W.，Wuts，P.G.，John Wiley & Sons，New Yonk，1991，和Olofson，R.A.等人，J.Org.Chem.1984，49，2081-2082，得到胺，然后可以通過上述流程1和8詳細說明的化學方法并用中間體同系物2，將所述胺結合到生長激素促分泌素中。
通式27化合物中的酮官能基可以用硼氫化鈉還原為醇，或者也可以用本領域技術人員已知的條件完全還原為亞甲基。例如，用硼氫化鈉還原酮，然后用濃鹽酸處理并氫化，得到通式29化合物。然后可以通過流程1和8中詳細說明的化學方法并用通式2化合物，將式27、28或29的胺結合到生長激素促分泌素中。此外，在引入式Ⅰ化合物之后酮常常可被還原。
手性羥基螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]類似物的制備可以用旋光性還原劑和非對映的鹽的結晶來完成。
本發明的式Ⅰ和Ⅱ化合物是由各種取代的天然和非天然氨基酸制備的，如式30和6及7的氨基酸，其中A是-(CH2)x-C(R7)(R7a)-(CH2)y-。許多這類酸的制備已描述于美國專利5206237號中。
這些外消旋型中間體的制備是通過本領域技術人員熟知的經典方法完成的(Williams，R.M.“Synthesis of Optically Active 2-Amino Acids”Pergamon PressOxford，1989;Vol.7)。存在幾種拆分(DL)-氨基酸的方法。常用的方法之一是通過由旋光酸或胺衍生的鹽結晶而拆分氨基或羧基被保護的中間體。此外，可以用前述化學方法使羧基被保護的中間體的氨基與旋光酸偶合。通過色譜技術或結晶法分離各個非對映體，然后將手性酰胺水解得到拆分了的氨基酸。類似地，可將氨基被保護的中間體轉化為手性非對映的酯和酰胺的混合物。用上述方法分離混合物并將各個非對映體水解，得到(D)和(L)氨基酸。最后，拆分(DL)-氨基酸的N-乙酰基衍生物的酶催化方法已由Whitesides和合作者報道在J.Am.Chem.SOc.1989，111，6354-6364中。
當希望合成旋光純型的這些中間體時，某些已確定的方法包括(1)手性烯醇化物的不對稱親電胺化作用(J.Am.Chem.Soc.1986，108，6394-6395，6395-6397和6397-6399)，(2)旋光羰基衍生物的不對稱親核胺化作用(J.Am.Chem.Soc.1992，114，1906;Tetrahedron Lett.1987，28，32)，(3)手性甘氨酸烯醇化物合成子的非對映選擇性烷基化作用(J.Am.Chem.Soc.1991，113，9276;J.Org.Chem.1989，54，3916)，(4)對手性親電甘氨酸酯合成子的非對映選擇性親核加成(J.Am.Chem.Soc.1986，108，1103)，(5)前手性脫氫氨基酸衍生物的不對稱氫化作用(“Asymmetric Synthesis，Chiral Catalysis;Morrison，J.D.，Ed;Academic PressOrlando，FL，1985;Vol.5)，以及(6)酶催化合成(Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1978，17，176)。
例如，在雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鈉存在下用肉桂酰溴平穩地進行二苯基噁嗪酮31的烯醇化物的烷基化反應(J.Am.Chem.Soc.1991，113，9276)，得到化合物32，將其用三氟乙酸除去N-叔丁氧羰基并經PdCl2催化劑氫化，轉化為所需的(D)-2-氨基-5-苯基戊酸33(流程14)。
流程14
作為O-芐基-(D)-絲氨酸衍生物34的式30中間體宜于由適當取代的芐基鹵和N-保護的-(D)-絲氨酸34制備。保護基L適宜為BOC或CBZ基。34的芐化作用可以用文獻中公知的許多方法進行，包括如流程15所示的在惰性溶劑和DMF中，用兩當量氫化鈉進行去質子化作用，然后用一當量各種芐基鹵處理(Synthesis 1989，36)。
流程15
用流程15所示的烷基化方案也可以制備O-烷基-(D)-絲氨酸衍生物。可用于制備式35的(D)-絲氨酸衍生物的其他方法包括用式ArCH2O-C(＝NH)CCl3試劑對由34衍生物的羧基被保護的中間體進行酸催化劑的芐化作用(O.Yonemitsu等人，Chem.Pharm.Bull.1988，36，4244)。此外，用ArCH2OCH2X(其中X是離去基團)將手性甘氨酸烯醇化物烷基化，得到化合物35。另外可以按上述方法制備并拆分D，L-O-芳基(烷基)絲氨酸。
N-保護的-(D)-半胱氨酸36的烷基化作用是用在(D)-絲氨酸衍生物合成中所述方法進行的，并在下面用R1a-X(其中X是離去基團如鹵化物和甲磺酰氧基)加以說明，如流程16所示。
流程16
可以用許多氧化劑將半胱氨酸衍生物37氧化為亞砜38(n＝1)和砜38(n＝2)。(關于硫化物氧化的綜述參見Org.Prep.Proced.Int.1982，14，45)。高磺酸鈉(J.Org.Chem.1967，32，3191)常被用于合成亞砜，而過硫酸氫鉀(OXONE)(Tetrahedron Lett.1981，22，1287)被用于合成砜。
因此，可以通過流程1和8中詳細說明的化學方法，將各種取代的氨基酸結合到生長激素促分泌素中。也可以用高碘酸鈉或OXONE
由半胱氨酸促分泌素制備含有亞砜或砜官能基的促分泌素。此外，如流程17所示，最后一步合成中，過氧化氫可被用作氧化劑。亞砜40(n＝1)和砜40(n＝2)類似物可以用制備性薄層色譜法分離。
流程17
氨基保護基的除去可以用本領域已知的許多方法進行，如上述方法和Protective Groups in Organic Synthesis，T.W.Greene，John Wiley and Sons，NY，1981中的方法。
可以用上述方法通過用醛的還原性烷基化反應，或通過烷基化反應如用各種環氧化物的反應，進一步制備其中R4和R5各為氫的式Ⅰ化合物。以鹽酸鹽或三氟乙酸鹽得到的產物宜于通過反相高性能液相色譜法(HPLC)或通過重結晶純化。
式41的螺哌啶可以用許多方法制備，包括如下所述的合成。
式42的螺哌啶(其中L為定義的保護基)可以用文獻中已知的方法(例如H.Ong等人，J.Med.Chem.1983，23，981-986)合成。42的二氫吲哚氮(其中L為保護基如甲基或芐基)可以與各種親電試劑反應，得到式43的螺哌啶，其中R9可以是各種官能基團。化合物42可以與例如異氰酸酯在惰性溶劑如二氯甲烷中反應生成脲衍生物，與氯甲酸酯在惰性溶劑如二氯甲烷中反應生成氨基甲酸酯，與酰氯、酸酐或酰基咪唑反應生成酰胺，與磺酰氯反應生成磺酰胺，與氨磺酰氯反應生成硫酰胺。此外，用本領域已知的條件式42的二氫吲哚氮可以用醛進行還原性烷基化反應。當用于還原性胺化反應中的醛是式HCOCOOM的保護了的水合乙醛酸(其中M是定義的保護基)時，M可以從產物中除去并進一步被衍生。另外，42可以與環氧化物反應生成43，其中R9是β-羥基取代的烷基或芳基烷基。通過使42與氟代苯基或氟代雜芳基試劑反應，也可以將二氫吲哚42轉化為式43化合物，其中R9＝苯基或取代苯基，雜芳基或取代雜芳基。這類化學方法詳見H.Ong等人，J.Med.Chem.1983，23，981-986.
如流程19所示，其中R9為氫的螺哌啶中間體43(L＝Me或Bn)或大部分的上述衍生物可被脫甲基或脫芐基，生成化合物44(其中R9為氫)或大部分的上述衍生物。對于其中L＝Me的式43化合物來說，脫甲基反應可以用本領域技術人員熟知的許多方法進行。例如，43的脫甲基反應可以在惰性溶劑如二氯甲烷中，使化合物43與溴化氰和碳酸鉀反應、生成氨基氰，將其在回流的四氫呋喃、回流的強酸如鹽酸水溶液中用氫化鋁鋰處理，或用格利雅試劑如溴化甲基鎂處理，得到化合物44。此外，可以按照R.Olofson等人在J.Org.Chem.1984，49，2795及其中所引參考文獻中所述的ACE-Cl方法進行43的脫甲基反應。對于其中L＝Bn的式43中間體，芐基的脫去可以用還原方法進行，包括在鉑或鈀催化劑存在下在質子傳遞溶劑如甲醇中的氫化作用。此外，可以按照R.Olofson等人在J.Org.Chem.1984中所述的ACE-Cl方法進行43(L＝Bn)的脫芐基反應。
螺雜環化合物45可以用許多方法制備，包括流程20中所述的合成法。被保護的哌啶47的烯丙位氧化反應是通過本領域技術人員熟知的經典方法(Rabjohn，N.Org.React.1976，24，261)完成的。將所產生的烯丙基醇在惰性溶劑如苯中用亞硫酰氯處理，得到相應的氯化物48。當D＝O或S時，烷基化反應是以DMF或丙酮作為溶劑用碳酸鉀作堿來進行的，而當D＝NR9(R9＝H、烷基、芳基、酰基、磺酰基、氨基甲酸酯)時，烷基化反應是用氫化鈉作為堿在惰性溶劑如THF中進行的，得到環化前體49。當L是所定義的保護基時，化合物49可以通過本領域技術人員熟知的許多方法環化。例如，49的環化反應可以通過使其與氫化三丁基錫(Curran，D.P.Synthesis 1988，417和489)在惰性溶劑如苯中反應來完成，得到化合物46。此外，化合物46(D＝NR9)可以用流程18和19中所示方法制備。當D＝S時，可以用許多氧化劑將化合物46氧化成亞砜46′(m＝1)和砜46′(m＝2)(流程21)。例如，高碘酸鈉常被用于亞砜的合成，而OXONE被用于砜的合成。除去保護基便得到胺45，然后通過上面所示流程1和8中詳細說明的化學方法并用中間體同系物2，將胺45結合到生長激素促分泌素中。
流程21
式50和式51的螺哌啶類化合物可以用流程22所述的合成方法制備。
其中R11被定義為烷基、芳基、(CH2)q-芳基或保護基的式53苯并[c]吡咯酮類化合物可以從市場上買到，或者可以用文獻中已知的方法由相應的鄰苯二甲酰亞胺類化合物合成(例如，Bewster等人，J.Org.Chem.，1963，28，501;Mcalees等人，J.Chem.Soc.，1977，2038)。在堿如氫化鉀、雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鋰或鉀存在下，用被保護的雙2-鹵代乙基胺(其中L是所定義的保護基，如甲基、芐基、t-BOC或CBZ等，Y可以是Cl、Br、Ⅰ)可以將苯并[c]吡咯酮53烷基化，得到螺哌啶54。可以用上述方法除去保護基得到式50。用氫化物如氫化鋁鋰還原式50中的內酰胺，得到式51。
流程22
應當注意到進行上述反應流程的順序并不重要，而且在本領域技術人員的技術范圍之內可以改變反應順序以促進反應或避免不需要的反應產物。
式Ⅰ和Ⅱ的釋放生長激素的化合物可作為體外研究如何在垂體水平下調節生長激素分泌的獨特手段。這包括用于評價所認為或已知影響生長激素分泌的許多因素如年齡、性別、營養因素、葡萄糖、氨基酸、脂肪酸、以及禁食和非禁食狀態。此外，本發明化合物可以用于評價其他激素如何改變生長激素釋放活性。例如，已經確定生長激素釋放的抑制因子抑制生長激素釋放。很重要的并且需要研究其對生長激素釋放的作用的其他激素包括性腺激素，如睪酮、雌二醇和孕酮;腎上腺激素，如皮質醇及其他類皮質激素、腎上腺素和去甲腎上腺素;胰腺和胃腸激素，如胰島素、胰高血糖素、促胃酸激素、促胰液素;血管活性肽，如韓蛙皮素(bombesin)、神經激肽;以及甲狀腺激素，如甲狀腺素和三碘甲腺原氨酸。式Ⅰ和Ⅱ化合物也可用于研究某些垂體激素如生長激素和內啡肽對垂體的可能的負或正反饋作用，從而改變生長激素釋放。特別的科學上的重要性在于這些化合物可用于闡明調節生長激素釋放的亞細胞機理。
式Ⅰ和Ⅱ化合物可對動物(包括人)給藥，從而在體內釋放生長激素。例如，這些化合物可被給藥于商業上重要的動物如豬、牛、羊等，以便加快并增大其生長速度和生長程度，提高飼養效率并增加這些動物的產奶量。此外，這些化合物可被對人進行體內給藥，作為直接測定垂體是否能夠釋放生長激素的診斷手段。例如，可以將式Ⅰ和Ⅱ化合物體內給藥于兒童。對這種給藥之前和之后取出的血清樣品檢測其生長激素。對于這些樣品中每個樣品中生長激素量的比較是直接測定病人的垂體釋放生長激素能力的方法。
因此，本發明在其范圍內包括藥物組合物，該組合物包含作為活性成分的至少一種式Ⅰ和Ⅱ化合物以及藥用載體或稀釋劑。藥物組合物的活性成分除了包含至少一種式Ⅰ和Ⅱ化合物外，還可以任選地包含合成代謝劑，或具有不同活性的其他組合物，如抗菌生長促進劑(Permittant)或治療骨質疏松癥的藥劑，或與皮質類固醇結合使用，以使降解代謝副作用減到最小，或與其他藥物活性物質結合使用，而這種結合提高了藥效并使副作用減到最小。
生長促進劑及合成代謝劑包括(但不限于)TRH、二乙基己烯雌酚、雌激素、β-激動劑、茶堿、合成代謝甾體化合物、腦啡肽、E系前列腺素、美國專利3，239，345號中公開的化合物如玉米赤霉醇、和美國專利4，036，979號中公開的化合物如四氫氧基并噻嗯基脲、或美國專利4，411，890號中公開的肽。
本發明的生長激素促分泌素的進一步應用是與其他生長激素促分泌素結合使用，如美國專利4，411，890號和專利申請公開WO89/07110、WO 89/07111和B-HT 920中所述的釋放生長激素的肽GHRP-6、GHRP-1，以及WO 93/04081中所述的hexarelin和新發現的GHRP-2或釋放生長激素的激素(GHRH，也叫GRF)及其類似物，或生長激素及其類似物，或生長調節因子包括IGF-1和IGF-2，或α-腎上腺素能激動劑如氯壓定，或與5-羥色胺5HTID激動劑如sumitriptan或抑制生長激素釋放的抑制因子或其釋放的藥劑如毒扁豆堿和吡啶斯的明。
正如本領域技術人員所公知的那樣，生長激素的已知和潛在的用途是各種各樣的并且是非常多的。因此，為刺激內源性生長激素的釋放而給藥本發明化合物，可以具有與給藥生長激素本身相同的效果或用途。生長激素的這些各種各樣的用途可總結如下刺激老人的生長激素釋放;治療生長激素缺乏的成人;預防糖皮質激素的降解代謝副作用，治療骨質疏松癥，刺激免疫系統，加快傷口愈合，加快骨折修復，治療生長遲緩，治療急性或慢性腎衰竭或腎機能不全，治療生理性身材矮小，包括生長激素缺乏的兒童，治療與慢性疾病有關的身材矮小，治療肥胖癥和與肥胖癥有關的生長遲緩，治療與Prader-Willi綜合征和特納綜合征有關的生長遲緩;加快燒傷病人或大手術如胃腸手術后的痊愈并減少住院期;治療子宮內生長遲緩、骨胳發育不良、腎上腺皮質機能亢進和庫欣綜合征;取代緊張病人的生長激素;治療骨軟骨發育不良、Noonans綜合征、睡眠障礙、阿爾茨海默氏病、延遲的傷口愈合及社會心理隔絕癥;治療肺機能不良和通風機依賴癥;減弱大手術后的蛋白降解代謝反應;治療吸收障礙綜合征，減少由慢性疾病如癌癥艾滋病引起的惡病質和蛋白損失;加快病人通過TPN(總的腸胃外營養)的體重增加和蛋白增加;治療血胰島素過多包括胰島細胞增殖癥;對排卵誘導的輔助治療，以及預防和治療胃和十二指腸潰瘍;刺激胸腺發育并預防與年齡有關的胸腺機能衰退;對慢性血液透析病人的輔助治療;治療免疫抑制病人并提高接種后抗體應答;改善虛弱老人的肌肉強度、可動性、皮膚厚度的保持、代謝的體內平衡、腎自身穩定性;刺激成骨細胞、骨重造及軟骨生長;治療神經疾病如外周和藥物誘發的神經病、急性感染性多神經炎、肌萎縮性脊髓側索硬化、多發性硬化癥、腦血管意外和脫神經髓鞘疾病;刺激成伴動物的免疫系統和治療成伴動物的老化疾病;家畜的生長促進劑;以及刺激羊身上的羊毛生長。
本領域技術人員已知有許多化合物正被努力用于治療上述疾病或治療適應癥。上面所提到的這些治療劑中的某些治療劑與本發明的生長激素促分泌素的結合將會產生附加的、補充的并且常常是協同的性能，從而提高這些各種治療劑的生長促進劑、合成代謝及所需的性能。在這些結合中，治療劑和本發明的生長激素促分泌素存在的劑量范圍可以獨立地是當這些化合物和促分泌素單獨使用時有效劑量水平的百分之一至一倍。
抑制骨吸收、預防骨質疏松癥及加速骨折愈合的結合治療可以通過雙磷酸鹽與本發明的生長激素促分泌素的結合來說明。用于這些用途的雙磷酸鹽的應用已被綜述過，例如，Hamdy，N.A.T.，Role of Bisphosphonates in Metabolic Bone Diseases.Trends in Endocrinol.Metab.，1993，4，19-25。具有這類作用的雙磷酸鹽包括alendronate、tiludronate、二甲基-APD、risedronate、羥乙二磷酸鹽、YM-175、氯甲雙磷酸鹽、pamidronate和BM-210995。根據其藥效，給病人服用的雙磷酸鹽的口服日劑量水平為0.1mg至5g，本發明生長激素促分泌素的日劑量水平為每千克體重0.01mg至20mg，從而達到對骨質疏松癥的有效治療。
本發明化合物可以通過口服、腸胃外(例如肌內、腹膜內、靜脈內或皮下注射，或植人)、鼻、鞘、直腸、舌下或局部給藥途徑給藥，并且可被配制成適于每一給藥途徑的劑型。
用于口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、粉劑和粒劑。在這些固體劑型中，將活性化合物與至少一種惰性可藥用載體如蔗糖、乳糖或淀粉混合。正如通常所實踐的那樣，這些劑型還可以包含除惰性稀釋劑以外的其他物質，例如潤滑劑如硬脂酸鎂。在膠囊劑、片劑和丸劑情況中，劑型還可以包含緩沖劑。此外片劑和丸劑可以用腸溶衣包衣來制備。
用于口服給藥的液體劑型包括可藥用乳劑、溶液、懸浮液、糖漿劑、酏劑，其中含有本領域中常用的惰性稀釋劑如水。除了這些惰性稀釋劑外，組合物還可以包括輔助劑，如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑，以及甜味劑、調味劑和香味劑。
用于腸胃外給藥的本發明制劑包括無菌的水浴液或非水溶液、懸浮液或乳劑。非水溶劑或載體的實例的實例有丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油和玉米油、明膠和注射用有機酯如油酸乙酯。這些劑型還可以含有輔助劑，如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。這些制劑的滅菌可以通過例如，經細菌保留濾器過濾，將滅菌劑加入組合物中，照射組合物或加熱組合物。也可以將其制成無菌固體組合物的形式，在使用之前可將其即刻溶于無菌水或某些其他無菌注射介質中。
用于直腸或鞘給藥的組合物優選為栓劑，其中除了活性物質外，還可以含有賦形劑如可可脂或栓劑蠟。
用于鼻或舌下給藥的組合物也可以用本領域公知的標準賦形劑制備。
本發明組合物中活性成分的劑量是可變的;然而活性成分的量必須是能夠得到適當劑型的量。所選擇的劑量取決于所需的治療效果、給藥途徑以及治療時間。通常，給病人和動物如哺乳動物給藥的日劑量水平為每千克體重0.0001至100mg，以便達到生長激素的有效釋放。
給出下列實施例只是為了進一步說明本發明，而不能認為是對本發明的限制。
實施例1N-[1(R)-[(2′，3′-二氫-2-氧代螺[哌啶-4，4′(1H)-喹啉]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟A1′-(叔丁氧羰基)-3，4-二氫-3-氧代螺[1H-茚-1，4′-哌啶]向661mg(2.31mmol)1′-(叔丁氧羰基)螺[1H-茚-1，4′-哌啶][按Chambers等人，J.Med.Chem.，1992，35，2036的方法制備]的5.0ml THF溶液中加入5.8ml(1.0M THF，2.9mmol)9-BBN。將反應混合物在70℃下加熱直至TLC分析表明起始原料已消耗完。濃縮溶液并將剩余物溶于二氯甲烷中。將溶液冷卻至0℃并在15分鐘內緩慢加入4.1g(19.2mmol)PCC。將反應混合物溫熱至室溫然后回流30分鐘。然后將溶液用乙醚稀釋，通過硅藻土和硅酸鎂載體的濾墊過濾。用快速色譜法純化(硅膠，己烷/乙酸乙酯，4∶1)得到326mg(47%)標題化合物。
1H NMR(200MHz，CDCl3)7.75-7.60(m，2H)，7.50-7.44(m，2H)，4.30-4.15(m，2H)，2.85(dt，2H)，2.63(s，2H)，1.98(dt，2H)，1.53-1.40(m，2H)，1.49(s，9H).
步驟B螺[1H-茚-1，4′-哌啶]-3(2H)-酮三氟乙酰胺將步驟A的中間體在1∶1∶0.5的三氟乙酸、二氯甲烷和苯甲醚的混合物中的溶液攪拌1小時，然后濃縮并與甲苯共沸，得到標題化合物，1H NMR(200MHz，CDCl3)7.81-7.70(m，1H)，7.62-7.45(m，2H)，7.22-7.15(m，1H)，3.72-3.58(m，2H)，3.29-3.04(m，2H)，2.70(s，2H)，2.47(dt，2H)，1.85-1.75(m，2H).
步驟C三氟乙酰胺-2，3-二氫螺[茚-1，4′-哌啶]
向1.0g(3.21mmol)步驟B中所得中間體的3.0ml二氯甲烷中加入0.945ml(6.74mmol)三乙胺和50mg·DMAP，最后加入0.501ml(3.53mmol)三氟乙酸酐。將反應混合物攪拌3小時，然后用20二氯甲烷稀釋，溶液用水洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅膠，己烷/乙酸乙酯2∶1)純化得到568mg(1.91mmol)。
1H NMR(200MHz，CDCl3)7.79-7.64(m，2H)，7.52-7.41(m，2H)，4.75-4.65(m，1H)，4.22-4.08(m，1H)，3.37(dt，1H)，2.92(dt，1H)，2.70(s，2H)，2.08(dt，2H)，1.71-1.62(m，2H).
步驟D三氟乙酰胺-3′，4′-二氫-2-氧代螺[哌啶-4，4′(1H)-喹啉]在0℃下，向218mg(3.36mmol)疊氮化鈉在0.285ml水和1.5ml氯仿中的溶液中加入0.105ml硫酸。將反應混合物攪拌2.5小時，然后分離各層，用硫酸鈉干燥氯仿層。然后將疊氮酸加到400mg(1.34mmol)步驟A所得中間體的溶液中，5分鐘內向此溶液中加入0.400ml硫酸。將反應混合物攪拌20分鐘，然后在45℃下攪拌45分鐘，最后在室溫下攪拌16小時。將硫酸層加至冰中，然后用50%氫氧化鈉堿化，水層用乙酸乙酯萃取。將乙酸乙酯萃取液用硫酸鈉干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅膠，二氯甲烷/乙酸乙酯1∶1，然后1∶2)純化100mg粗產物得到50mg(0.160mmol)高RF值的物質和16mg(0.051mmol)低RF值的物質。
1H NMR(200MHz，CDCl3，高RF)8.9-8.7(bs，1H)，7.40-7.21(m，2H)，7.18-7.04(m，1H)，6.90-6.86(m，1H)，4.52-4.36(m，1H)，3.97-3.83(m，1H)，3.52(dt，1H)，3.22(dt，1H)，2.79(s，2H)，2.12-1.66(m，4H).1HNMR(200MHz，CDCl3，低RF)8.12(dd，1H)，7.60-7.52(m，1H)，7.45-7.35(m，2H)，6.95(bs，1H)，4.56-443(m，1H)，4.03-3.96(m，1H)，3.64-3.62(m，2H)，3.49-3.35(m，1H)，3.11(dt，1H)，2.20-1.80(m，4H).
步驟E3′，4′-二氫-2-氧代螺[哌啶-4，4′(1H)-喹啉]將49mg(0.157mmol)步驟B中得到的高RF值的物質的甲醇/水4∶1溶液和過量的氫氧化鉀攪拌過夜。濃縮溶液并將水和乙酸乙酯加到剩余物中，分離各層，用乙酸乙酯萃取水層。合并的有機層用硫酸鈉干燥并濃縮，得到31mg(0.143mmol)標題化合物。
步驟FN-[1(R)-[(2′，3′-二氫-2-氧代螺[哌啶-4，4′(1H)-喹啉]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[[1，1-二甲基乙氧羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺向29mg(0.134mmol)步驟C中得到的中間體、65mg(0.167mmol)2-氨基-N-[1(R)-[2′，3′-二氫-2-氧代螺[哌啶-4，4′(1′H)-喹啉]-1-基)羰基]-2-(1H-吲哚-3-基)乙基-2-甲基丙酰胺和24mg(0.174mmol)HOBT的二氯甲烷溶液中加入33mg(0.174mmol)EDC。將反應混合物攪拌過夜，然后處理，并按實施例1(步驟A)所述進行色譜純化，唯一不同的是用二氯甲烷/丙酮洗脫，得到34.8mg(0.059mmol)標題化合物。
步驟GN-[1(R)-[(2′，3′-二氫-2-氧代螺[哌啶-4，4′(1H)-喹啉]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽按照實施例1(步驟C)所述的方法，由步驟D得到的中間體(14mg，0.023mmol)得到標題化合物(7.2mg，0.013mmol)，只唯一不同的是在此情況下通過向純化的游離胺中加入4N HCl的二噁烷溶液得到其鹽酸鹽。
1H NMR(400MHz，CD3OD，2∶1 旋轉異構體的混合物)8.34(d，2/3H)，8.27(d，1/3H)，7.59(d，2/3H)，7.55(d，1/3H)，7.38(d，1/3H)，7.33(d，2/3H)，7.25(d，1/3H)，7.18-6.98(m，4H)，6.85(d，1/3H)，6.80(d，2/3H)，6.68(d，2/3H)，5.23-5.17(m，1H)，4.22-4.19(m，2/3H)，4.09-3.95(m，1/3H)，3.62-3.59(m，1/3H)，3.36-3.17(m，22/3H)，3.08(dt，1/3H)，2.75(dt，1/3H)，2.69(dt，2/3H)，2.48(dd，2H)，1.93-1.75(m，2/3H)，1.60(s，3H)，1.58(s，2H)，1.40-1.32(m，1H)，1.51(s，1H)，1.10(m，1/3H)，1.02(m，2/3H)，0.90(dt，2/3H)，0.22(dt，2/3H).FAB-MSm/e490(m+1).
實施例2N-[1(R)-[(2′，3′-二氫-1-氧代螺[哌啶-4，4′(1H)-異喹啉]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟A[3′，4′-二氫-1-氧代螺[哌啶-4，4′(1H)-異喹啉]按照實施例13(步驟D)所述方法，由實施例1(步驟D)的低RF值的中間體(16.0mg，0.051mmol)制得標題化合物(11.3mg，0.036mmol)。
1HNMR(200MHz，CDCl3)8.12(dd，1H)，7.60-7.52(m，1H)，7.45-7.35(m，2H)，6.95(bs，1H)，4.56-4.43(m，1H)，4.03-3.96(m，1H)，3.64-3.62(m，2H)，3.49-3.35(m，1H)，3.11(dt，1H)，2.20-1.80(m，4H).
步驟BN-[1(R)-[(2′，3′-二氫-1-氧代螺[哌啶-4，4′(1H)-異喹啉]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[[1，1-二甲基乙氧羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺按照實施例13(步驟D)所述的方法，由步驟A的中間體(10.0mg，0.032mmol)和2-氨基-N-[1(R)-[2′，3′-二氫-2-氧代螺[哌啶-4，4′(1′H)-喹啉]-1-基)羰基]-2-(1H-吲哚-3-基)乙基-2-甲基丙酰胺(21.6mg，0.055mmol)，制得標題化合物(13.6mg，0.023mmol)。
步驟CN-[1(R)-[(2′，3′-二氫-1-氧代螺[哌啶-4，4′(1H)-異喹啉]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽將10.1mg(0.017mmol)由步驟B得到的中間體在1.5N HCl的乙酸乙酯溶液中的溶液攪拌過夜，然后濃縮并與甲醇共沸，得到8.3mg(0.015mmol)標題化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD，2∶1 旋轉異構體的混合物)7.94(d，1/3H)，7.87(d，2/3H)，7.62-7.53(m，2H)，7.40-7.33(m，21/3H)，7.18-7.10(m，3H)，6.75(d，2/3H)，5.22-5.18(m，2/3H)，5.15(t，1/3H)，4.27-4.23(m，2/3H)，4.14-4.10(m，1/3H)，3.68-3.61(m，1H)，3.25-3.18(m，4H)，3.10(dt，2/3H)，2.87(dt，1/3H)，2.70(dt，1/3H)，2.65(dt，2/3H)，1.88(dt，1/3H)，1.75(dt，1/3H)，1.62+1.61+1.59+1.51(s，共計6H)，1.57-1.44(m，1H)，1.38-1.35(m，1/3H)，1.15-1.10(m，1/3H)，0.929(dt，2/3H)，0.19(dt，2/3H).FAB-MSm/e490(m+1).
實施例3N-[1(R)-[(4H-1-氧代螺[3H-2-苯并吡喃-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟A螺[3H-2-苯并吡喃-3，4′-哌啶]-1(4H)-酮向10%鈀/炭(5mg)的乙醇(5ml)懸浮液中加入1′-芐基螺[3H-2-苯并吡喃-3，4′-哌啶]-1(4H)-酮(20mg，0.058mmol)(Hashigaki等人，Chem.Pharm.Bull.32pg 3561-3568(1984))。在1個大氣壓室溫下進行氫化。將反應混合物在氫氣氛下攪拌2小時，直至TLC分析表明反應已完成。用硅藻土545真空過濾除去催化劑，濃縮濾液得到所需產物(12.4mg，98.5%)。
FAB-MS計算值C13H15NO2217;實測值218(M+H，100%)。
步驟BN-[1(R)-[(4H-1-氧代螺[3H-2-苯并吡喃-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[[1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺將步驟A的中間體(12mg，0.055mmol)和α(R)-[[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酸(27mg，0.058mmol)的二氯甲烷溶液冷卻至0℃，然后加入HOBT(2mg，0.015mmol)、N-甲基-嗎啉(8.8mg;0.084mmol)和EDC(22mg，0.12mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時直至用TLC分析判斷反應已完全。然后用飽和氯化鈉溶液洗滌該溶液并用無水硫酸鎂干燥。然后將溶液過濾并濃縮。通過硅膠色譜法純化，得到標題化合物(15mg，47%)。FAB-MS計算值C33H40N4O6588;實測值589(M+H，39%)[489(M+H-100，42%)去掉t-Boc基團]。
步驟CN-[1(R)-[(4H-1-氧代螺[3H-2-苯并吡喃-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽將步驟B的中間體(12mg，0.02mmol)的甲醇(3ml)溶液冷卻至0℃。然后在攪拌下將濃鹽酸(3ml)緩慢加到混合物中。將反應混合物攪拌30分鐘直至TLC分析表明反應已完全。然后溶液經甲苯濃縮數次。無需純化即可使用該鹽酸鹽(10.15mg，96%)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)產物以兩種構象異構體(2∶1)的混合物存在δ7.977，7.905(2d，2/3H)，7.604-6.994(m，8H)，5.134-5.093(m，12/3H)，遮蓋5.025-4.715(m，2H)，4.191-4.114(m，1/3H)，3.637-3.587(m，1H)，3.344-3.299(m，1H)，3.188-3.124(m，1H)，3.030(s，2/3H)，(dt，2.81Hz，9.4Hz，1/3H)，2.536(q，1H)，2.301(t，1/3H)，1.590，1.571(2s，6H)，1.539-1.483(m，2/3H)，1.275(s，6H)，1.259-1.206(m，2/3H)，(m，1H)，0.633-0.545(m，1/3H)，-0.277-0.361(m，1/3H).
FAB-MS 計算值 C28H32N4O4488;實測值489(M+H，65%).
實施例4N-[1(R)-[(4′，5′-二氫-4′-氧代螺[哌啶-4，6′-[6H]噻吩并[2，3-b]噻喃]-1-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-丙酰胺鹽酸鹽步驟AN-[1(R)-[(4′，5′-二氫-4′-氧代螺[哌啶-4，6′-[6H]噻吩并[2，3-b]噻喃]-1-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-丙酰胺標題化合物的制備是用實施例3步驟B所述的方法，原料螺[哌啶-4，6′-[6H]噻吩并[2，3-b]噻喃]-4′(5′H)-酮鹽酸鹽(10mg，0.044mmol)(EP公開No.90313262.9)，α(R)-[[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酸(20mg，0.051mmol)，HOBT(1相當量)，N-甲基嗎啉(0.01ml，0.093mmol)和EDC(20mg，0.10mmol)。反應時間5小時。產量22mg，(98%)。
1H MNR(400MHz，CDCl3)產物以兩種構象異構體(2∶1)的混合物存在δ8.240(s，2/3H)，8.063(s，1/3H)，7.680(d，2/3H)，7.628(d，1/3H)，7.416-6.962(m，5H)，5.279-5.162(m，1H)，4.878-4.763(m，1H)，4.285(d，2/3H)，3.376(d，2/3H)，3.342-3.196(m，1H)，3.129-2.973(m，12/3H)，2.715-2.662(m，1H)，2.285(d，2/3H)，2.139(d，2/3H)，1.683-1.567(m，81/3H)，1.503，1.454，1.427，1.409(4s，12H)，1.278-1.217(m，2H)，0.708-0.628(m，2/3H).
FAB-MS 計算值 C31H38N4O5S2610;實測值611(M+H，32%).
步驟BN-[1(R)-[(4′，5′-二氫-4′-氧代螺[哌啶-4，6′-[6H]噻吩并[2，3-b]噻喃]-1-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-丙酰胺鹽酸鹽標題化合物的制備是用實施例15步驟C所述的方法，原料上面步驟的中間體(200mg，0.033mmol)和甲醇(3ml)。反應時間1.5小時。產量12.2mg(69%)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)產物以兩種構象異構體(2∶1)的混合物存在δ7.562-7.022(m，6H)，5.513-5.446(m，62/3H)，5.099-5.003(m，1H)，遮蓋4.914-4.726(m，2/3H)，4.178(d，1H)，3.624(d，1H)，3.337-3.043(m，22/3H)，2.760-2.660(m，1H)，2.324(d，1H)，2.234(d，1H)，1.597，1.587，1.574，1.510(4s，4H)，1.364-1.225(m，3H)，0.562-0.482(m，2/3H)，-0.311-0.391(m，2/3H).
FAB-MS 計算值 C26H30N4O3S2510;實測值511(M+H，51%).
實施例5N-[1(R)-[(3-氫螺[1H-異苯并呋喃-1，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟AN-[1(R)-[(3-氫螺[1H-異苯并呋喃-1，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺標題化合物的制備是用實施例3步驟B所述的方法，原料3-氫螺[1H-異苯并呋喃-1，4′-哌啶]鹽酸鹽(10mg，0.044mmol)(Bauer等人，US3985889)，α(R)-[[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酸(20mg，0.051mmol)，HOBT(1相當量)，N-甲基嗎啉(0.01ml，0.093mmol)和EDC(20mg，0.10mmol)。反應時間5小時。產量21mg(81%)。
產物以兩種構象異構體(1∶1)的混合物存在
(1H NMR CDCl3)δ8.096(s，1H)，7.689(t，1H)，7.341(d，1H)，7.244-6.611(m，6H)，5.288-5.202(m，1/2H)，4.945(br.s，1/2H)，4.161(d，1/2H)，4.003(d，1/2H)，3.338(d，1/2H)，3.280-3.115(m，2H)，3.005-2.861(m，1H)，2.751(d，1/2H)，2.416(d，1/2H)，1.787-1.549(m，31/2H)，1.491，1.461，1.421，1.410(4s，12H)，1.281-1.212(m，3H)，0.857(t，6H).
FAB-MS 計算值 C32H40N4O5560;實測值561(M+H，33%).
步驟BN-[1(R)-[(3-氫螺[1H-異苯并呋喃-1，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽標題化合物的制備是用實施例3步驟C所述的方法，原料上面步驟的中間體(20mg，0.04mmol)和甲醇(3ml)。反應時間1小時，產量18.2mg(93.5%)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)產物以兩種構象異構體(1∶1)的混合物存在δ7.621-6.568(m，8H)，5.198-5.136(m，1H)，遮蓋4.856(寬.s，1H)，4.098-4.045(m，1H)，3.611-3.499(m，1H)，3.348-3.110(m，51/2H)，2.987-2.903(m，21/2H)，2.618(d，1/2H)，2.508(d，1/2H)，1.691-1.473(m，8H)，1.271(br.s，21/2H)，0.081-0.006(m，1/2H).
FAB-MS 計算值 C27H32N4O3460;實測值461(M+H，96%).
實施例6N-[1(R)-[(3，4-二氫-6-甲基-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟AN-[1(R)-[(3，4-二氫-6-甲基-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺標題化合物的制備是用實施例3步驟B所述的方法，原料3，4-二氫-6-甲基螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-4-酮鹽酸鹽(20mg，0.058mmol)(Hashigaki等人，Chem.Pharm.Bull.32 pg 3561-3568(1984))，α(R)-[[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酸(32mg，0.082mmol)，HOBT(1相當量)，N-甲基嗎啉(0.03ml，0.28mmol)和EDC(40mg，0.21mmol)。反應時間8小時，產量34mg(86%)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)產物以兩種構象異構體(2∶1)的混合物存在δ8.154(s，2/3H)，8.088(s，1/3H)，7.626(d，2/3H)，7.591-7.060(m，6H)，6.725-6.688(m，2/3H)，5.265-5.168(m，2/3H)，4.985-4.900(m，2/3H)，4.289-4.178(m，2/3H)，3.469(s，2/3H)，3.229-3.064(m，22/3H)，2.730(t，2/3H)，2.562(s，21/3H)，2.251(d，21/3H)，2.158(d，2/3H)，2.068(d，2/3H)，1.680-1.541(m，3H)，1.502，1.475，1.454，1.427，1.402(5s，15H)，1.292-1.226(m，3H)，0.616-0.532(m，1/3H)，-0.495-0.590(m，1/3H).
FAB-MS 計算值 C34H42N4O6602;實測值603.(M+H，37%).
步驟BN-[1(R)-[(3，4-二氫-6-甲基-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽標題化合物的制備是用實施例3步驟C所述的方法，原料上面步驟的中間體(20mg，0.029mmol)和甲醇(3ml)。反應時間3小時，產量17.5mg(96.5%).
1H NMR(400MHz，CDCl3)產物以兩種構象異構體(2∶1)的混合物存在
δ7.550-6.768(m，71/3H)，5.089-5.016(m，2H)，遮蓋4.872-4.679(m，1H)，4.144-4.093(m，1H)，3.569-3.485(m，1H)，3.321-3.081(m，21/3H)，2.716-2.600(m，11/3H)，2.253，2.236，2.222，2.196，2.190，2.155(6s，4H)，1.569，1.541，1.475(3s，7H)，1.388-1.237(m，32/3H)，0.881-0.808(m，2H)，0.434-0.420(m，2/3H)，0.427-0.436(m，2/3H).
FAB-MS 計算值 C29H34N4O4502;實測值503(M+H，97%).
實施例7N-[1(R)-[(3，4-二氫-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-4-苯基丁基-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟Aα(R)-[[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-4-苯基丁酸苯甲酯將2(R)-氨基-4-苯基丁酸苯甲酯甲苯磺酸鹽(6.0g，13mmol)的二氯甲烷溶液用稀氫氧化鈉溶液萃取。用MgSO4干燥有機層并蒸發得到剩余物。向該剩余物的溶液中加入N-敘丁氧羰基-α-甲基丙氨酸(3.21g，15.8mmol)，HOBT(1.7g，13mmol)的二氯甲烷溶液和EDC(5.1g，26mmol)，將該混合物在室溫下攪拌過夜。然后將混合物傾入鹽水和3N HCl的混合物中并用乙酸乙酯萃取。將有機萃取液干燥、蒸發，通過快速柱色譜法純化，用40%乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到所需的產物(5.47g，91%)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.34-7.07(m，10H)，5.15(d，JAB＝12Hz，1H)，5.08(d，JAB＝12Hz，1H)，4.86(br.s，1H)，4.67-4.62(m，1H)，2.61-2.53(m，2H)，2.18-2.14(m，1H)，2.01-1.96(m，1H)，1.47(s，3H)，1.43(s，3H)，1.41(s，9H).
步驟Bα(R)-[[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-4-苯基丁酸用10%鈀/炭作為催化劑(0.5g)，在室溫和1大氣壓氫氣下氫化上面步驟的中間體(5.37g，11.8mmol)2小時。通過硅藻土濾除催化劑并蒸發得到標題化合物(4.22g，100%)。
1H NMR(200MHz，CD3OD)δ7.804-7.143(m，5H)，4.402-4.359(m，1H)，2.672(dt，2Hz，6Hz，2H)，2.126-2.004(m，2H)，1.483，1.444(2s，5H)，1.423(s，9H)，1.412(s，3H).
步驟CN-[1(R)-[(3，4-二氫-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-4-苯基丁基-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺將螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-4(3H)-酮(20mg，0.776mmol)和上面步驟的中間體(31mg，0.085mmol)的二氯甲烷溶液冷卻至0℃，然后加入HOBT(1相當量)，N-甲基嗎啉(0.1ml，0.90mmol)和EDC(33mg，0.17mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌3小時直至用TLC分析判斷反應已完全。然后溶液用飽和氯化鈉溶液洗滌、用無水硫酸鎂干燥。接著將溶液過濾并濃縮。通過硅膠色譜法純化，得到標題化合物(41.6mg，95.5%)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)產物以兩種構象異構體(1∶1)的混合物存在δ7.853-6.925(m，9H)，4.936-4.868(m，2H)，4.355-4.265(mt，1H)，3.605-3.565(m，1/2H)，3.388-3.318(m，1H)，3.022-2.965(m，1H)，2.686-2.608(m，3H)，2.067-1.948(m，21/2H)，1.871-1.810(m，1H)，1.580(寬.s，2H)，1.503，1.488，1.455，1.411，1.403(5s，15H)，1.292-1.227(m，2H).
步驟DN-[1(R)-[(3，4-二氫-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-4-苯基丁基-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽將上面步驟的中間體(40mg，0.071mmol)的乙酸乙酯溶液冷卻至0℃。然后向溶液中鼓泡通入氯化氫氣體2分鐘。將反應混合物攪拌15分鐘直至TLC分析表明反應已完全。濃縮溶液，無需純化即可使用該鹽酸鹽(33.8mg，95.5%)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)產物以兩種構象異構體(1∶1)的混合物存在δ8.271-8.229(m，1H)，7.799(dd，13/4Hz，7.84Hz，1H)，7.545(q，1H)，7.289-7.006(m，7H)，4.737-4.703(m，1H)，4.277(d，1/2H)，4.186(d，1/2H)，3.555-3.292(m，11/2H)，3.187-3.068(m，1H)，2.809-2.724(2m，2H)，2.633-2.563(m，1H)，2.085-1.927(m，31/2H)，1.645，1.639，1.616(3s，6H)，1.677-1.603(m，3H)，1.316-1.279(m，2H).
FAB-MS 計算值 C27H33N3O4463;實測值464(M+H，54%).
實施例8N-[1(R)-[(3，4-二氫-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟AN-[1(R)-[3，4-二氫-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺將螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-4(3H)-酮(20mg，0.776mmol)和α(R)-[[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-3-(苯基甲氧基)-3-丙酸(32mg，0.085mmol)的二氯甲烷溶液冷卻到0℃，然后加入HOBT(1相當量)，N-甲基嗎啉(0.1ml，0.90mmol)和EDC(33mg，0.171mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌4小時直至通過TLC分析判斷反應已完全。然后用飽和氯化鈉溶液洗滌該溶液并用無水硫酸鎂干燥。接著將溶液過濾并濃縮。通過硅膠色譜法純化得到標題化合物(40.8mg，91%)。
FAB-MS計算值C32H41N3O7579;實測值580(M+H，23%);[去掉t-Boc保護基的實測值480(M+H-100，57%)]。
步驟BN-[1(R)-[(3，4-二氫-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽標題化合物的制備是用實施例3步驟D所述方法，原料上面步驟的中間體(35mg，0.061mmol)和乙酸乙酯(10ml)。反應時間1小時。產量30.2mg(97%)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)產物以兩種構象異構體(1∶1)的混合物存在δ7.800-7.792-(m，1H)，7.533-7.578(m，1H)，7.395-7.285(m，5H)，7.088-7.015(m，2H)，5.551-5.107(m，1H)，遮蓋4.921-4.816(m，1H)，4.535-4.518(2s，11/2H)，4.295(d，1H)，3.911-3.803(m，1H)，3.717-3.703(2s，11/2H)，3.499-3.400(m，1H)，3.309-3.291(4s，31/2H)，3.211-3.051(m，1H)，2.789(q，1/2H)，2.633-2.513(ABq，1H)，2.060(t，1H)，1.897(d，1/2H)，1.821-1.725(m，1/2H)，1.626-1.567(6s，6H)，1.564-1.410(m，1/2H)，1.301(寬.s，11/2H).FAB-MS 計算值 C27H33N3O5479;實測值480(M+H，100%).
實施例9N-[1(R)-[(6-氯-3H-4-氧代螺[1H-喹唑啉-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟AN-[1(R)-[(6-氯-3H-4-氧代螺[1H-喹唑啉-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺標題化合物的制備是用實施例3步驟B所述的方法，原料6-氯螺(哌啶-4，2(1′H)-喹唑啉)-4(3H)-酮鹽酸鹽(50mg，0.17mmol)，α(R)-[[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酸(81mg，0.21mmol)，HOBT(1相當量)，N-甲基嗎啉(1相當量)和EDC(80mg，0.42mmol)。反應時間3小時。產量64.5mg(60%)。
FAB-MS計算值C32H39N6O5Cl 623;實測值624(M+H，29%)。
步驟BN-[1(R)-[(6-氯-3H-4-氧代螺[1H-喹唑啉-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽用實施例7步驟D所述的方法，由上面步驟的中間體(50mg，0.08mmol)制備標題化合物。反應時間1小時，產量40mg(89.5%)。
FAB-MS計算值C27H31N6O3Cl 523;實測值523(M+H，71%)。
實施例10N-[1(R)-[(1，4-二氫-4-苯基-1-氧代螺[3H-2-苯并吡喃-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟A1，4-二氫-4-苯基螺(3H-2-苯并吡喃-3，4′-哌啶)-1-酮用實施例3步驟A所述的方法，由1′-芐基-1，4-二氫-4-苯基螺(3H-2-苯并吡喃-3，4′-哌啶)-1-酮鹽酸鹽(8mg，0.019mmol)和乙醇(5ml)制備標題化合物。反應時間45分鐘。產量5.5mg(98.5%)。
FAB-MS計算值C19H19NO2293;實測值294(M+H，93%)。
步驟BN-[1(R)-[(1，4-二氫-4-苯基-1-氧代螺[3H-2-苯并吡喃-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺標題化合物的制備是用實施例3步驟B所述的方法，原料上面步驟的中間體(5mg，0.017mmol)，α(R)-[[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酸(12mg，0.030mmol)，HOBT(1相當量)，N-甲基嗎啉(1相當量)和EDC(12mg，0.060mmol)。反應時間5小時，產量9.2mg(86%)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)產物以兩種構象異構體(1∶1)的混合物存在δ8.185-8.072(m，11/2H)，7.885(s，1/2H)，7.710-6.813(m;12H)，5.331-5.309(m;1/2H)，5.198-5.111(m，1/2H)，4.710-4.605(m，1/2H)，4.300-4.235(m，1/2H)，3.876(d，1/2H)，3.719-3.617(m，1H)，3.355-3.046(m;11/2H)2.746(q，1/2H)，2.006-1.960(m，1H)，1.678-1.574(m，2H)，1.438，-1.368(m，6H)，1.257，1.240，1.227，1.208，1.186(5s，5H).
步驟CN-[1(R)-[(1，4-二氫-4-苯基-1-氧代螺[3H-2-苯并吡喃-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽用實施例7步驟D的方法，由上面步驟的中間體(9mg，0.015mmol)和乙酸乙酯(10ml)制備標題化合物。反應時間1小時。產量8mg(97%)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)產物以兩種構象異構體(2∶1)的混合物存在
δ8.347-8.333(m，1H)，8.043(t，1/2H)，7.662-6.869(m，12 1/2H)，5.355-5.315(m，1/2H)，5.108-5.061(m，1/2H)，遮蓋4.897-4.768(m，1/2H)，4.174-4.103(m，1/2H)，3.717-3.526(m，1H)，3.387-3.237(m，2H)，3.179-3.067(m，1H)，2.660(q，1/2H)，2.044-1.981(m，1H)，1.655-1.212(m，11H)，0.964-0.820(m，21/2H)，0.575-0.423(m，1/2H)，-0.271-0.448(m，1/2H).
FAB-MS 計算值 C34H36N4O4564;實測值565(M+H，25%).
實施例11N-[1(R)-[3，4-二氫-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟AN-[1(R)-[(3，4-二氫-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺用實施例25步驟A所述的方法，由α(R)-[[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酸(903mg，2.3mmol)和螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-4(3H)-酮鹽酸鹽(535mg，2.11mmol)(Elliott，J.等人，J.Med.Chem.1992，35，3973-3976)制得該中間體(1.25g，100%)。
1H NMR(400MHz，CDCL3)化合物以構象異構體(比例2∶1)的混合物存在δ8.42，8.31(2s，1H)，7.79，7.75(2dd，1.6Hz，7.8Hz，1H)，7.66，7.56(2d，8.0Hz，7.6Hz，1H)，7.47-6.78(m，8H)，5.37-5.15(m，1H)，4.98，4.94(2br.s，1H)，4.24，4.18(2br.d.1H)，3.40，3.32(2br.d，2H)，3.23-3.02(m，3H)，2.73(dt，3Hz，13Hz，1H)，2.47(d，2Hz，1/3H)，2.17(d，16.6Hz，2/3H)，2.08(d，16.7Hz，2/3H)，1.84(寬.s，2H)，1.70-1.60(br.dd.1H)，1.3-1.2(寬.dd，1H)，0.56(dt，4.6，13.8Hz，2/3H)，-0.55(dt，4.6，13.8Hz，2/3H).FAB-MS計算值 C33H40N4O6，588;實測值595(M+Li，100%).
步驟BN-[1(R)-[(3，4-二氫-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽向攪拌著的步驟A中所制得的中間體(1.0g，1.7mmol)的甲醇(5ml)溶液中加入濃鹽酸(5ml)。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，加入20ml甲苯，并將混合物真空蒸發，該步驟重復兩次，得到標題化合物(0.87g，98%)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)化合物以構象異構體(比例2∶1)的混合物存在δ7.76-6.90(m，10H)，5.11(dd，5，11Hz，1H)，4.16，4.11(2td，2.0Hz，14Hz，1H)，3.60，3.33(2md，14Hz，1H)，3.25-3.10(m，2H)，2.92-2.67(m，2H)，2.30-2.17(AB，中心在w.23，16.7Hz，2H)，2.85-2.80(br.d，1/3H)，1.60，1.59(2s，6H)，1.70-1.50(m，遮蓋)，1.40-1.30(md，1H)，0.47(dt，5.5，13.5Hz，2/3H)，-0.38(dt，5.5，13.5Hz，2/3Hz).FAB-MS計算值C28H32N4O4，488;實測值489(M+H，100%).
實施例11AN-[1(R)-[(3，4-二氫-4(RS)-羥基螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺在0℃下，向攪拌著的實施例11中的標題化合物(55mg，0.09mmol)的甲醇(5ml)溶液中分數批加入硼氫化鈉(16mg，0.4mmol)。在0℃攪拌30分鐘后將混合物蒸發至干并溶于二氯甲烷中，通過快速柱色譜法純化，用10%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，得到標題化合物(35mg，78%)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)化合物以2種非對映體(1∶1)的混合物存在，并且每一異構體以兩種種構象異構體(比例2∶1)形式存在δ7.89-6.66(m，9H)，5.14-5.06(m，1H)，4.52-4.45(2dd，1H)，4.22-4.10(2md，1H)，3.58-3.44(2md，1H)，3.25-3.14(m，2H)，3.10-2.59(4dt，1H)，2.02(dd，6.2，14.7Hz，1/3H)，1.79-1.74(dd，1/3H)，1.60-1.40(m，3H)，1.37，1.31，1.28，1.28，1.26(4s，6H)，1.3-1.05(m，遮蓋)，0.71，0.49(2dt，5.6，13.5Hz，2/3H)，-0.20，-0.47(2dt，4.6，13.5Hz，2/3H).FAB-MS.計算值 C28H34N4O4，490;實測值491(M+H，100%).
實施例12N-[1(R)-[(3，4-二氫-螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟A3，4-二氫螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]在0℃下，向攪拌著的螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-4-(3H)-酮鹽酸鹽(53mg，0.21mmol)的甲醇(5ml)溶液中分數批加入硼氫化鈉(38mg，1mmol)。30分鐘后，將混合物蒸發，然后用濃鹽酸(2ml)處理30分鐘。蒸發得到剩余物，然后用在乙醇中的鈀/炭(10%，10mg)，H2(1個大氣壓)氫化兩小時。過濾除去催化劑得到粗中間體(89mg)，該中間體無需進一步純化即可使用。
1H NMR(400MHz，CD3OD)7.07(表現為d，5Hz，2H)，6.84(表現為t，7Hz，2H)，7.07-7.08(m，4H)，2.82(t，7Hz，2H)，2.02(寬.d，14.5Hz，2H)，1.90-1.85(m，4H).EI-MS計算值 C13H17NO，203;實測值203(M+，45%)步驟BN-[1(R)-[(3，4-二氫螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺按照標準肽偶合方法，由步驟A的產物和α(R)-[[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酸制得該中間體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)化合物以構象異構體(比例2∶1)的混合物存在δ8.04，8.02(2s，1H)，7.70，7.61(2d，8Hz，1H)，7.49-6.66(m，1H)，4.92(寬.s，1H)，4.30-4.20(m，1H)，3.4-3.1(m，4H)，2.85-2.45(m，3H)，1.68(t，7.6Hz，1H)，1.49，1.45，1.44，1.43，1.41(5s，12H)，1.30-1.21(m，3H)，1.11-1.07(dd，2.5，14Hz，1/3H)，0.68(dt，4.5Hz，13Hz，1/3H)，-0.33-0.43(dt，1/3H).FAB-MS計算值 C33H42N4O5，574;實測值575(M+H，35%).
步驟CN-[1(R)-[(3，4-二氫螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽按照實施例11步驟B所述方法，由步驟B的中間體制得標題化合物(90%)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)化合物以構象異構體(比例2∶1)的混合物存在δ8.31，8.21(2d，6.6Hz，2/3H)，7.58，7.52(2d，7.8Hz，1H)，7.37(d，8.2Hz，1H)，7.15-6.60(m，61/3H)，5.17-5.13(m，1H)，4.14(寬.d，13.2Hz，1H)，3.35-3.10(m，3H)，2.90-2.45(m，3H)，1.70(t，6.9Hz，1H)，1.60(s，6H)，1.60-1.40(m，遮蓋)，1.40-1.20(m，2H)，1.11(寬d.12.7Hz，2/3H)，0.57(dt，4.3，13Hz，2/3H)，-0.31(dt，4.3，13，2/3H).FAB-MS計算值 C28H34N4O3，474;實測值475(M+H，60%).
實施例13N-[1(R)-[(3，4-二氫-6-甲磺酰氨基-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽按照實施例10步驟A和B所述的方法，由α(R)-[[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]-氨基]-1H-吲哚-3-丙酸和3，4-二氫-6-甲磺酰氨基-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]制得標題化合物。
N-[1(R)-[(3，4-二氫-6-甲磺酰氨基-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺1H NMR(400MHz，CDCl3)化合物以構象異構體(比例2∶1)的混合物存在δ8.60，8.36(2寬.s，1H)，7.63-6.81(m，8H)，5.20(寬s，1H)，5.10-5.02(寬m，1H)，3.45-3.30(寬m，1H)，3.25-3.10(寬m，2H)，2.97-2.95(2s，3H)，2.75-2.56(m，1H)，2.28(v.寬s，1H)，2.18(d，16.6Hz，1H)，2.05(d，16.6Hz，1H)，1.86-1.45(m，遮蓋)，1.51，1.46，1.44，1.43，1.42，1.39(6s，12H)，1.30-1.20(m，2H)，0.55-0.45(m，2/3H)，-0.55-0.65(m，2/3H).FAB-MS計算值 C34H43N5O8S，681;實測值688(M+Li，40%).
N-[1(R)-[(3，4-二氫-6-甲磺酰氨基-4-氧代螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽1H NMR(400MHz，CD3OD)化合物以構象異構體(比例2∶1)的混合物存在δ7.63-6.92(m，8H)，5.14-5.08(m，1H)，4.18-4.08(2md，1H)，3.62-3.51(2md，1H)，3.25-3.10(m，2H)，2.91，2.89(2s，3H)，2.78-2.67(2dd，2Hz，15Hz，2H)，2.27(d，16.7Hz，1H)，2.19(d，16.6Hz，1H)，1.86-1.80(m，1/3H)，1.80-1.50(m，遮蓋)，1.60，1.59，1.48(3s，6H)，1.40-1.30(m，1H)，0.47(dt，4.8Hz，13Hz，2/3H)，-0.39(dt，4.8Hz，13Hz，2/3H).FAB-MS計算值 C29H35N5O6S，581;實測值582(M+H，75%).
實施例14N-[1(R)-[3，4-二氫-4(RS)-羥基-6-甲磺酰氨基螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺按照實施例11A所述的方法，由實施例13的標題化合物制得該標題化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)化合物以2種非對映體(1∶1)的混合物存在，每一異構體以兩種構象異構體存在δ7.62-7.50(m，1H)，7.42-7.29(m，2H)，7.17-6.98(m，4H)，6.68(d，8.7Hz，1H)，5.15-5.05(m，1H)，4.75-4.65(m，1/3H)，4.57(dd，7Hz，9Hz，1/3H)，4.44(dd，6.5Hz，9.0Hz，1/3H)，4.21-4.07(m，1H)，3.56-3.44(m，1H)，3.28-3.12(m，3H)，3.08-3.01(m，2/3H)，2.89，2.86(2s，3H)，12.82-2.55(m，1H)，2.03(dd，6.0Hz，13.8Hz，1/2H)，1.86(dd，6.0，13.7，1/2H)，1.70-1.35(m，3H)，1.33，1.32，1.31，1.28，1.24(5s，6H)，1.33-1.29(m，遮蓋)，1.06(br.d，13Hz，1/3H)，0.71(dt，4.6Hz，13Hz，1/3H)，0.49(dt，4.6Hz，13Hz，1/3H)，-0.21(dt，4.6Hz，13Hz，1/3H)，-0.49(dt，4.6Hz，13Hz，1/3H).FAB-MS計算值 C29H37N5O6S，583;實測值584(M+H，20%).
實施例15N-[1(R)-[(2-乙酰基-1，2，3，4-四氫螺[異喹啉-4，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟A1，3-二氫-1，3-二羥基螺[4H-2-苯并呋喃-4，4′-哌啶]-1′-羧酸1，1-二甲基乙酯在-78℃下，向攪拌著的螺[1H-茚-1，4′-哌啶]-1′-羧酸1，1-二甲基乙酯(800mg，2.8mmol)的甲醇(50ml)溶液鼓泡通入臭氧，直至溶液變藍。將混合物室溫下放置20分鐘，然后用氮氣清洗。加入二甲硫(3ml)，將混合物溫熱至室溫并攪拌2小時，蒸發溶劑得到粗產物(940mg)，無需純化即可使用。
步驟B1，2，3，4-四氫螺[異喹啉-4，4′-哌啶]-1′-羧酸1，1-二甲基乙酯將步驟A的中間體(100mg)在用氨飽和了的甲醇(2ml)中攪拌一天，蒸發除去氨。剩余物再溶于甲醇(3ml)中，加入氰基硼氫化鈉(50mg，過量)。將混合物攪拌過夜。蒸發并純化得到胺。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.35-6.96(m，4H)，4.00(s，2H)，3.14(s，2H)，3.90(寬s，2H)，2.05(br.s，2H)，1.95(寬t，2H)，0.69(d，2H)，1.49(s，9H).
步驟C2-乙酰基-1，2，3，4-四氫螺[異喹啉-4，4′-哌啶]-1′-羧酸-1，1-二甲基乙酯用吡啶(2ml)和乙酸酐(2ml)處理步驟A的中間體(16ml)2小時，將反應混合物真空蒸發得到所需的化合物(12mg)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)，化合物3∶1的旋轉異構體的混合物存在δ7.36-7.05(m，4H)，4.72(s，2/4H)，4.65(s，6/4H)，4.10-4.00(寬d，12.8Hz，2H)，3.85(寬s，3/4H)，3.65(s，1/4H)，3.11(t，13.1Hz，3/4H)，3.00(t，13.1Hz，1/4H)，2.19(s，3/4H)，2.18(s，9/4H)2.00-1.80(m，2H)，1/65-1.47(m，2H，遮蓋)，1.47(s，9/4H)，1.45(s，27/4H).
步驟D2-乙酰基-1，2，3，4-四氫螺[異喹啉-4，4′-哌啶]在0℃下，向步驟C的中間體(12mg)的乙酸乙酯(5ml)溶液中鼓泡通入HCl(氣體)直至溶液飽和。30分鐘后，真空蒸發反應混合物得到所需中間體。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.47-7.19(m，4H)，4.79(s，2H)，3.96(s，2H)，3.36(寬d，6.7Hz，2H)，2.30-2.24(m，1H)，2.21(s，3H)，1.76(d，13Hz).FAB-MS計算值 C15H20N2O，244;實測值245(M+1，100%)步驟EN-[1(R)-[(2-乙酰基-1，2，3，4-四氫螺[異喹啉-4，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺按照上面所述的方法，由步驟D的中間體制得標題化合物。
實施例16N-[1(R)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(2′，6′-二氟苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟Aα(R)-[[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-3-[(2′，6′-二氟苯基)甲氧基]丙酸甲酯在室溫下，將無油氫化鈉(通過用己烷(3X)洗滌60%氫化鈉的油分散體制備，1.2g，30.0mmol)的30ml N，N-二甲基甲酰胺懸浮液加到N-叔丁氧羰基-(D)-絲氨酸(3.07g，15.0mmol)的10ml N，N-二甲基甲酰胺溶液中。當不再有氣體放出時，加入2，6-二氟芐基溴(2.68g，12.9mmol)。在室溫下攪拌18小時后，將碘甲烷(1.0ml，16.0mmol)加到反應混合物中。將混合物再攪拌1小時，然后傾入水中，用乙醚萃取。有機層依次用水(5X)、鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。剩余物溶于20ml氯仿中，室溫下加入BOC-α-甲基丙氨酸，EDC，HOBT和Et3N。3小時后，將反應混合物傾入水中，用二氯甲烷萃取。用硫酸鈉干燥有機層并濃縮。通過色譜法純化(己烷/乙酸乙酯3/1)后得到標題化合物2.37g(35%)。
1H NMR(300MHz，CDCl3旋轉異構體的混合物)7.27(m，1H)，7.02-6.88(m，2H)，4.95(m，1H)，4.72(dt，8，3Hz，1H)，4.58(寬s，2H)，3.90(m，1H)，3.78(s，1H)，3.69(s，3H)，1.48(s，3H)，1.45(s，3H)，1.41(s，9H).
步驟BN-[1(R)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(2′，6′-二氟苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽將本實施例步驟A所得的中間體(2.37g，5.29mmol)的30ml甲醇溶液加到在3ml水中的氫氧化鋰(340mg，8.1mmol)中。室溫下攪拌2小時后，將反應混合物濃縮，然后用水稀釋，用乙醚萃取。去掉有機層。水層用1N鹽酸酸化至pH＝1.5，用乙醚萃取(3×)。將有機層用硫酸鈉干燥、過濾并濃縮得到2.18g(95%)酸。用實施例20步驟B所述方法(用鹽酸的乙醚溶液代替三氟乙酸)，由上面的酸(78mg，0.18mmol)和1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]鹽酸鹽(50mg，0.165mmol)制得標題化合物48mg(44%)。
1H NMR(400MHz，CD3OD旋轉異構體的混合物)
7.39(m，2H)，7.22(m，11/2H)，7.03(m，31/2H)，5.14(dd，13，7Hz，1H)，4.66(d，16Hz，2H)，4.49(m，1H)，4.09(m，1H)，3.92(寬s，2H)，3.76(m，2H)，3.25(m，1H)，2.97(s，3/2H)，2.96(s，3/2H)，2.87(m，1H)，1.95(m，1H)，1.76(m，3H)，1.61(s，3/2H)，1.57(s，33/2H)，FAB-MS565(M+1).
實施例17N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-3-環己基丙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟A叔丁氧羰基-(D)-六氫高苯丙氨酸將叔丁氧羰基-(D)-高苯丙氨酸(100mg，0.358mmol)的1ml乙酸溶液用PtO2于1個大氣壓下氫化16小時。用硅藻土過濾混合物，濃縮濾液并與甲苯共沸。
1H NMR(400MHz，CDCl3)5.03(d，8Hz，1H)，4.22(m，1H)，1.82(m，1H)，1.64(m，6H)，1.41(s，9H)，1.20(m，6H)，0.84(m，2H).
步驟Bα(R)-[[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-4-環己基丁酸芐酯將BOC-D-高苯丙氨酸的乙酸溶液用PtO2于1個大氣壓下氫化16小時。用硅藻土過濾混合物并濃縮。在室溫下向該剩余物(44mg)的15mol DMF液中加入芐基溴(198ml)和K2CO3(970mg)。攪拌過夜后，將混合物傾入200ml乙醚中，用水洗滌。將有機相用MgSO4干燥、過濾并濃縮。剩余物用快速色譜法純化(硅膠，75%乙酸乙酯的己烷溶液)得到534mg(95%)該中間體。將534mg該物質的10ml 1∶1TFA/CH2Cl2溶液攪拌1小時，然后剝離并與甲基共沸。剩余物溶于10ml CH2Cl2中，冷卻至0℃。加入BOC-α-甲基丙氨酸(362mg)，EDC，HOBT和NMM并攪拌過夜。將溶液傾入250ml乙酸乙酯中，依次用1NNaHSO4(aq.)，水和飽和NaHCO3水溶液洗滌。將有機相干燥、過濾并濃縮。通過快速色譜法純化(硅膠，乙酸乙酯/己烷)得到638mg標題化合物。
1H NMR(200MHz，CDCl3)8-.95(m，3H)，1.05-1.3(m，7H)，1.4-1.9(m，19H)，2.15(m，2H)，4.59(m，1H)，4.87(m，1H)，5.18(m，2H)，6.96(m，1H)，7.35(m，5H)，FAB-MS 計算值 C26H40N2O5460;實測值461.5(M+H).
步驟CN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-3-環己基丙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽將638mg步驟B得到的中間體和100mg 10% Pd/c的混合物在含有H2的氣球下攪拌4小時。通過硅藻土過濾混合物，濃縮濾液。將一部份該剩余物(87mg)溶于2ml CH2Cl2中，加入49.8mg 1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]鹽酸鹽，EDC和HOBT，并攪拌16小時。將該溶液傾入200ml乙酸乙酯中，并依次用1N NaHSO4(aq.)，水和飽和NaHCO3水溶液洗滌。將有機相干燥、過濾并濃縮。通過快速色譜法純化(硅膠，60%乙酸乙酯/己烷)得到55mg(47%)該中間體。將所有的該中間體物質溶于2ml 1∶1 TFA/CH2Cl2中，攪拌1/2小時。剝離溶液，剩余物通過快速色譜法純化(硅膠，甲醇，NH4OH(aq.)，CH2Cl2)。然后將化合物溶于CH2Cl2中，用HCl的乙醚溶液處理并濃縮，得到標題化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD).93(m，2H)，1.15-1.3(m，6H)，1.55-1.8(m，1H)，2.06(dt，15，4Hz，1H)，2.88(m，1H)，2.97(m，1H)，3.35(m，2H)，3.8-4.1(m，3H)，4.51(m，1H)，4.83(m，1H)，7.06(q，7Hz，1H)，7.22(m，2H)，7.37(d，8Hz，1H).
FAB-MS 計算值 C27H42N4O4S 518;實測值519.7(M+H)
實施例18(方法1)N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟A1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]鹽酸鹽在0℃下，向1.20g(5.8mmol)1′-甲基-1，2-二氫螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶](按H.Ong等人，J.Med.Chem.1993，23，981-986所述方法制備)的20ml無水二氯甲烷溶液中加入三乙胺(0.90ml;6.4mmol)和甲磺酰氯(0.49ml;6.35mmol)并攪拌30分鐘。將反應混合物傾入15ml飽和碳酸氫鈉水溶液中，用二氯甲烷萃取(2×10ml)。合并的有機液用鹽水(20ml)洗滌，用無水碳酸鉀干燥，過濾，減壓下除去溶劑，得到1.44g甲磺酰胺衍生物，為淺黃色油狀物，無需純化即可使用。
在0℃下，向上述粗產物的20ml無水1，2-二氯乙烷溶液中加入1.0ml(9.30mmol)氯甲酸1-氯乙酯，然后在室溫下攪拌30分鐘，最后回流1小時。濃縮反應混合物至大約三分之一體積，然后用20ml無水甲醇稀釋并回流1.5小時。將反應混合物冷卻至室溫并濃縮至大約二分之一體積。過濾沉淀，用少量體積的冷的甲醇洗滌。得到1.0g哌啶鹽酸鹽，為白色固體。濃縮濾液，加入少量體積的甲醇，接著加入乙醚。再將沉淀的物質過濾，用冷甲醇洗滌并干燥，得到另外的0.49g所需產物，總產量1.49g(70%)。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ7.43-7.20(m，3H)，7.10(dd，1H)，3.98(bs，2H)，3.55-3.40(bd，2H)，3.35-3.10(m，2H)，2.99(s，3H)，2.15(t，2H)，2.00(t，2H).
步驟BN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺向在13ml二氯甲烷中的0.35g(1.15mmol)(2R)-2-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基-3-[2-(苯基甲氧基)乙基]-1-丙酸中加入1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]鹽酸鹽(0.325g;1.07mmol)、0.18ml(1.63mmol)N-甲基嗎啉、0.159g(1.18mmol)1-羥基苯并三唑(HOBT)，并攪拌15分鐘。加入EDC(0.31g，1.62mol)并繼續攪拌1小時。加入另外60μl N-甲基嗎啉并攪拌45分鐘。將反應混合物傾入5ml水中，分離有機層。用5ml 0.5N鹽酸水溶液和5ml飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌機層。合并的有機液用無水硫酸鎂干燥并濃縮，得到0.627g產物，為黃色泡沫狀物，無需純化即可使用。
向0.627g(1.07mmol)上述產物的5ml二氯甲烷溶液中加入1.0ml三氟乙酸，并在室溫下攪拌75分鐘，加入另外1.00ml三氟乙酸并攪拌10分鐘。濃縮反應混合物，用5.0ml二氯甲烷稀釋，通過傾入10ml 10%碳酸鈉水溶液中小心進行堿化，分離有機層，水層用2×15ml二氯甲烷進一步萃取。合并的有機液用5ml水洗滌，用碳酸鉀干燥，過濾并濃縮，得到0.486g胺，為淺黃色泡沫狀物，無需純化即可使用。
向0.486g(1.01mmol)胺和10ml二氯甲烷中加入0.26g(1.28mmol)2-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基-2-甲基-丙酸、0.173g(1.28mmol)1-羥基苯并三唑(HOBT)和EDC(0.245g;1.28mmol)，并在室溫下攪拌過夜。將反應混合物傾入5.0ml水中，分離有機層。用5ml二氯甲烷反萃取水層，合并的有機液用5.0ml 0.5N鹽酸水溶液、5ml飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥并濃縮得到0.751g粗產物，為黃色泡沫狀物。將此粗產物的二氯甲烷溶液用25g硅膠進行色譜純化，首先用己烷/丙酮/二氯甲烷(70/25/5)洗脫，然后用己烷/丙酮/二氯甲烷(65/30/5)洗脫，得到0.63g標題化合物，為白色固體。
1H NMR(CDCl3，400MHz)化合物以3∶2的旋轉異構體的混合物存在δ7.40-7.10(m，6H)，7.06(d，1/3H)，7.02(t，1/3H)，6.90(t，1/3H)，6.55(d，1/3H)，5.15(m，1H)，4.95(bs，1H)，4.63(bd，1/3H)，4.57-4.40(m，22/3H)，4.10(bd，1/3H)，4.00(bd，1/3H)，3.82(t，1H)，3.78-3.62(m，2H)，3.60-3.50(m，1H)，3.04(q，1H)，2.87(s，1H)，2.86(s，2H)，2.80-2.60(m，1H)，1.90(bs，1H)，2.85-2.75(m，1H)，1.82-1.60(m，3H)，1.55-1.45(m，1H)，1.45(s，4H)，1.42(s，2H)，1.39(s，9H).
步驟CN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽向0.637g(0.101mmol)步驟B的中間體的5ml二氯甲烷溶液中加入2.5ml三氟乙酸并在室溫下攪拌30分鐘。濃縮反應混合物得到油狀物，然后將其溶于10ml乙酸乙酯中，用8ml 10%碳酸鈉水溶液洗滌。用5ml乙酸乙酯進一步萃取水層。合并的有機液用10ml水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到0.512g游離堿，為白色泡沫狀物。
在0℃下，向0.512g游離堿在5ml乙酸乙酯中的溶液中加入0.2ml飽和鹽酸的乙酸乙酯溶液，并攪拌1.5小時。在氮氣中過濾該白色沉淀，用乙醚洗，干燥得到0.50g標題化合物，為白色固體。
1H NMR(400MHz，CD3OD)，化合物以3∶2的旋轉異構體的混合物存在
δ7.40-7.28(m，4H)，7.25-7.17(m，2H)，7.08(t，1/3H)，7.00(t，1/3H)，6.80(d，1/3H)，5.16(ddd，1H)，4.60-4.42(m，3H)，4.05(t，1H)，3.90(bs，2H)，3.83-3.70(m，2H)，3.30-3.15(m，1H0，2.97(s，1H)，2.95(s，2H)，2.90-2.78(m，1H)，1.96(t，1/3H)，1.85-1.65(m，4H)，1.63(s，2H)，1.60(s，4H).
實施例19(方法2)N-[1(R)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟A(2R)-[[[-2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基-2-(苯基甲氧基)乙基]-1-丙酸烯丙基酯將(2R)-2-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基-3-(苯基甲氧基)乙基丙酸和烯丙醇在CH2Cl2中的EDC和DMAP存在下進行偶合反應，制得標題化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.25(s，5H)，5.8(m，1H)，5.2(dd，2H)，5.0(bs，1H)，4.7(m，1H)，4.6(m，2H)，4.4(dd，2H)，3.9(dd，1H)，3.6(dd，1H)，1.45(d，6H)，1.39(s，9H).
步驟B(2R)-[[[-2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]-氨基-2-(苯基甲氧基)乙基)-1-丙酸向攪拌著的步驟A中得到的粗中間體(6.7g，15.9mmol)、四(三苯基膦)鈀(1.8g，0.1當量)和三苯基膦(1.25g，0.3當量)溶液中加入2-乙基己酸鉀(35ml，0.5M的EtOAc溶液)溶液。將反應混合物在室溫氮氣氛下攪拌1小時，然后用乙醚(100ml)稀釋，倒入冰水中。分離有機層，含水部份用檸檬酸(20%)酸化，然后用EtOAc萃取。EtOAc萃取液用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發，得到固體標題化合物。
1H NMR(400Hz，CD3OD)δ7.3(s，5H)，4.7(m，1H)，4.5(s，2H)，4.0(m，1H)，3.6(m，1H)，1.4(d，6H)，1.3(s，9H).
步驟CN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基-2-甲基丙酰胺向1.0g(3.44mmol)1-甲磺酰基螺[二氫吲哚-3，4′-哌啶]鹽酸鹽、1.44g(3.78mmol)(2R)-[[-2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]-氨基-2-(苯基甲氧基)乙基)-1-丙酸、N-甲基嗎啉(0.58ml;5.20mmol)和1-羥基苯并三唑(HOBT)(0.58g;3.78mmol)的50ml二氯甲烷溶液中加入EDC(1.03g;5.20mmol)，并在室溫下攪拌16小時。將反應混合物用另外的50ml二氯甲烷稀釋，用碳酸氫鈉水溶液(50ml)洗滌，用無水硫酸鎂干燥、過濾并濃縮。粗油狀剩余物通過快速色譜法(50g硅膠)純化得到2.148g(90%)所需物質，為無色泡沫狀物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)，化合物以3∶2的旋轉異構體的混合物存在δ7.40-7.10(m，6H)，7.06(d，1/3H)，7.02(t，1/3H)，6.90(t，1/3H)，6.55(d，1/3H)，5.15(m，1H)，4.95(bs，1H)，4.63(bd，1/3H)，4.57-4.40(m，22/3H)，4.10(bd，1/3H)，4.00(bd，1/3H)，3.82(t，1H)，3.78-3.62(m，2H)，3.60-3.50(m，1H)，3.04(q，1H)，2.87(s，1H)，2.86(s，2H)，2.80-2.60(m，1H)，1.90(bs，1H)，2.85-2.75(m，1H)，1.82-1.60(m，3H)，1.55-1.45(m，1H)，1.45(s，4H)，1.42(s，2H)，1.39(s，9H).
步驟DN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽向2.148g(3.41mmol)步驟C的中間體的10ml二氯甲烷溶液中加入5ml三氟乙酸并攪拌1小時。濃縮反應混合物，用100ml 5%碳酸鈉水溶液堿化并用二氯甲烷(3×50ml)萃取。合并的有機液用鹽水(50ml)洗滌，用無水碳酸鉀干燥，過濾并濃縮，得到無色泡沫狀物。0℃下，向泡沫狀物的25ml乙酸乙酯溶液中加入4ml 1M鹽酸的乙酸乙酯溶液。過濾沉淀，首先用乙酸乙酯洗滌，然后用乙酸乙酯-乙醚(1∶1)洗滌，干燥得到1.79g(93%)標題化合物，為無色固體。
1H NMR(400MHz，CD3OD)，化合物以3∶2的旋轉異構體的混合物存在δ7.40-7.28(m，4H)，7.25-7.17(m，2H)，7.08(t，1/3H)，7.00(t，1/3H)，6.80(d，1/3H)，5.16(ddd，1H)，4.60-4.42(m，3H)，4.05(t，1H)，3.90(bs，2H)，3.83-3.70(m，2H)，3.30-3.15(m，1H0，2.97(s，1H)，2.95(s，2H)，2.90-2.78(m，1H)，1.96(t，1/3H)，1.85-1.65(m，4H)，1.63(s，2H)，1.60(s，4H).
實施例20N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-5-溴-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽步驟AN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-5-溴-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基-2-甲基丙酰胺向300mg(1.03mmol)1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]鹽酸鹽的5ml冰醋酸溶液中加入0.28g(2.06mmol)溴，并在室溫下攪拌1小時。將反應混合物濃縮至干，用10ml 5%碳酸鈉水溶液堿化，用二氯甲烷(3×10ml)萃取，合并的有機液用鹽水(10ml)洗滌，用無水碳酸鉀干燥，過濾并濃縮，得到0.25g粗產物，為黃色油狀物，無需純化即可使用。
步驟B向上面粗產物的10ml二氯甲烷溶液中加入0.43g(1.13mmol)實施例19步驟B的中間體、0.17g(1.13mmol)HOBT和0.34g(1.70mmol)EDC，并在室溫下攪拌16小時，反應混合物用15ml乙醚稀釋，用10%檸檬酸水溶液(15ml)、飽和碳酸氫鈉水溶液(15ml)洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到粗油狀產物，該剩余物通過快速色譜法純化(15g SiO2;CH2Cl2-丙酮(10∶1)作為洗脫劑)，得到0.184g(26%兩步)偶合物質，為無色泡沫狀物。
向0.184g(0.26mmol)上面產物的2ml二氯甲烷溶液中加入2ml三氟乙酸，并在室溫下攪拌1小時。將反應混合物蒸發至干，得到0.146g(93%)標題化合物，為白色固體。
FAB-MS計算值C27H34BrN4O5S608;實測值609.5。
實施例21N-[1(R)-[(1，2-二氫-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺二鹽酸鹽步驟A螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]在室溫下，向1.0g(5.0mmol)1′-甲基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶](按H.Ong等人在J.Med.Chem.1983，23，981-986中所述方法制備)和1.0g粉狀碳酸鉀的30ml無水二氯甲烷溶液中加入0.50g溴化氰，并攪拌1小時。通過硅藻土濾板過濾反應混合物，用氯仿-甲醇(95∶5)洗滌。濃縮濾液，剩余物通過硅膠濾板，用氯仿-甲醇(95∶5)作為洗脫劑沖洗，得到大約1.2g黃色油狀物，無需純化即可使用。
在0℃下，向上面化合物的30ml無水DME懸浮液中加入0.30g氫化鋁鋰，并溫熱至室溫，最后回流1小時。將反應混合物冷卻至0℃，用0.3ml水、0.30ml 15%氫氧化鈉水溶液和0.90ml水使反應中止。通過硅藻土濾板過濾出固體，用氯仿-甲醇(10∶1)充分洗滌。濃縮濾液得到0.74g化合物，為黃色泡沫狀物。該物質是標題化合物和1′-甲基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]的1∶1的混合物。
步驟B(2R)-[[2-[[1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酸芐酯向5.0g(16.5mmol)市場上可買到的N-t-BOC-D-色氨酸的100ml氯仿溶液中加入1.80ml(16.5mmol)芐醇、0.20g(1.65mmol)4-N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)和3.20gEDC，并攪拌16小時。將反應混合物傾入100ml水中，分離有機層。用2×100ml氯仿進一步萃取水層。合并的有機溶液用50ml 10%檸檬酸水溶液、100ml 10%碳酸氫鈉水溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到粘稠油狀物。
向上面油狀物的10ml二氯甲烷溶液中加入20ml三氯乙酸并攪拌1小時。濃縮反應混合物，用飽和碳酸氫鈉水溶液小心堿化，用氯仿(2×100ml)萃取。合并的有機液用鹽水(100ml)洗滌，用碳酸鉀干燥，過濾并濃縮，得到5.46g胺，為棕色油狀物，無需純化即可使用。
向5.46g上面產物的100ml氯仿溶液中加入3.40g(22.2mmol)HOBT、4.60g(22.2mmol)N-BOC-α-甲基-丙氨酸和5.32g(28.0mmol)EDC，并攪拌16小時。將反應混合物傾入100ml水中，分離有機層。用2×100ml氯仿進一步萃取水層。合并的有機液用50ml 10%檸檬酸水溶液、100ml 10%碳酸氫鈉水溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，得到6.94g產物，為粘稠油狀物。快速色譜法純化(200g SiO2;己烷-乙酸乙酯作為洗脫劑)得到4.75g所需的物質，為無色泡沫狀物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ8.48(bs，1H)，7.54(bd，1H)，7.38-7.23(m，3H)，7.19(bd，2H)，7.15-7.00(m，1H)，6.90(d，1H)，6.86(d，1H)，5.06(bs，2H)，4.95(ddd，1H)，3.30(2dd，2H)，1.40(s，15H)步驟C(2R)-[[-2-[[1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酸向4.75g步驟B的物質的100ml乙醇溶液中加入1.0g 10%Pd/C，并在室溫氫氣球下攪拌18小時。通過硅藻土濾板濾除催化劑，并用乙酸乙酯洗滌。濃縮濾液得到2.96g所述酸，為無色泡沫狀物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ8.60(bs，1H)，7.55(d，1H)，7.26-6.90(m，3H)，6.88(bd，1H)，4.80(m，1H)，3.32(2dd，2H)，1.37(s，3H)，1.35(s，12H)步驟DN-[1(R)-[(1，2-二氫-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基-2-甲基丙酰胺于室溫下，向0.122g(0.542mmol)1∶1的步驟A的中間體和1′-甲基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]的混合物的5ml無水氯仿溶液中加入0.105g(0.271mmol)步驟C的中間體、41mg(0.271mmol)HOBT和80mg(0.41mmol)EDC，并在室溫下攪拌2小時。反應混合物用10ml氯仿稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)和10ml鹽水洗滌，用無水碳酸鉀干燥，過濾并濃縮。快速色譜法純化(10g SiO2;2% MeOH-CHCl3)剩余物，得到94mg所需產物，為黃色泡沫狀物。
化合物以3∶2的旋轉異構體的混合物存在1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.37(d，1/3H)，8.35(d，2/3H)，8.19(d，1H)，7.72(d，2/3H)，7.60(d，1/3H)，7.38(d，2/3H)，7.32(d，1/3H)，7.22-7.08(m，3H)，7.00(2t，1H)，6.93(d，1/3H)，6.69(t，1H)，6.60(d，1/3H)，6.56(d，2/3H)，6.50(d，2/3H)，5.30-5.15(m，1H)，5.00(bs，1H)，4.34(m，1H)，3.62-3.50(m，1H)，3.30-3.11(m，4H)，2.90(dt，1H)，2.40(dt，1/3H)，1.70-1.55(m，12/3H)，1.34(s，2H)，1.31(s，4H)，1.28(s，1H)，1.31(s，9H)，1.20-1.11(m，1H)，0.32(dt，1/3H)步驟EN-[1(R)-[(1，2-二氫-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺二鹽酸鹽向27.5mg步驟D的中間體中加入1.0ml甲醇和1.0ml濃鹽酸，并在室溫下攪拌1小時。濃縮反應混合物，用5ml 10%碳酸鈉水溶液堿化，用氯仿(3×5ml)萃取。合并的有機液用鹽水(10ml)洗滌、用碳酸鉀干燥，過濾并濃縮得到粘稠油狀物。制備型TLC(0.50mm板，氯仿-甲醇96∶5+1%NH4OH)得到12mg所需產物，為黃色固體。
該化物以3∶2的旋轉異構體的混合物存在1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.37(d，1/3H)，8.35(d，2/3H)，8.19(d，1H)，7.72(d，2/3H)，7.60(d，1/3H)，7.38(d，2/3H)，7.32(d，1/3H)，7.22-7.08(m，3H)，7.00(2t，1H)，6.93(d，1/3H)，6.69(t，1H)，6.60(d，1/3H)，6.56(d，2/3H)，6.50(d，2/3H)，5.30-5.15(m，1H)，4.34(m，1H)，3.62-3.50(m，1H)，3.30-3.11(m，4H)，2.90(dt，1H)，2.40(dt，1/3H)，1.70-1.55(m，12/3H)，1.34(s，2H)，1.31(s，4H)，1.28(s，1H)，1.20-1.11(m，1H)，0.32(dt，1/3H).
實施例22N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲基羰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽在0℃下，向26mg實施例21步驟D的中間體的1.0ml 1，2-二氯乙烷和55μl(0.14mmol)N-甲基嗎啉溶液中加入6.6μl(0.93mmol)乙酰氯，并攪拌1小時。將反應混合物用5ml乙醚稀釋，用5ml 10%檸檬酸水溶液、5ml飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥、過濾并濃縮，得到淺黃色泡沫狀物，無需純化即可使用。
向上面產物的1.0ml二氯甲烷溶液中加入1.0ml三氟乙酸并在室溫下攪拌1小時。濃縮反應混合物，用5ml 10%碳酸鈉水溶液堿化，用氯仿(3×5ml)萃取。合并的有機液用鹽水(10ml)洗滌，用碳酸鉀干燥，過濾并濃縮得到粘稠油狀物，向此物質的1.0ml甲醇溶液中加入1.0ml 4M鹽酸的二噁烷溶液并濃縮至干，得到16mg標題化合物，為淺黃色固體。
該化合物以3∶2的旋轉異構體的混合物存在1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.43(d，1H)，8.35(t，1H)，7.72(d，2/3H)，7.61(d，1/3H)，7.40-7.25(m，2H)，7.20-7.08(m，3H)，7.05-6.95(m，22/3H)，6.50(d，1/3H)，5.25-5.10(m，1H)，5.00-4.84(2bd，1H)，3.68-3.45(m，3H)，3.20(m，2H)，2.60-2.48(m，11/3H)，2.30(dt，1/3H)，2.00(s，1H)，1.98(s，2H)，1.81-1.40(m，4H)，1.35(s，2H)，1.33(s，2H)，1.32(s，1H)，1.30(s，1H)，1.25-1.15(m，1H)，1.10-1.00(m，1H)，0.20(dt，1/3H)
實施例23N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-苯磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺在0℃下，向26mg(0.050mmol)實施例21步驟D的中間體的1.0ml1，2-二氯乙烷和5μl N-甲基嗎啉溶液中加入7.5μl苯磺酰氯，并攪拌1小時，反應混合物用10ml乙醚稀釋，用5ml 10%檸檬酸水溶液、5ml飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾并濃縮得到29.8mg粗產物，為淺黃色泡沫狀物。向此物質的2ml甲醇的溶液中加入1.0ml濃鹽酸并攪拌1小時。減壓除去溶劑得到棕色固體標題化合物。
此化合物以3∶2的旋轉異構體的混合物存在1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.30(bs，1/3H)，8.20(bs，2/3H)，8.05(bs，2/3H)，7.88(d，1/3H)，7.72-7.45(m，5H)，7.43-7.30(m，4H)，7.20-7.05(m，2H)，7.00-6.90(m，22/3H)，6.35(d，1/3H)，5.25-5.10(m，1H)，4.90(bs，1H)，4.30(dt，1H)，4.15(dt，1H)，3.95(dd，1H)，3.60-3.40(m，3H)，3.25-3.20(m，2H)，2.90(dt，1H)，2.73(dt，22/3H)，2.35(m，11/3H)，1.80(m，1H)，1.50(s，1H)，1.43(s，2H)，1.39(s，3H)，1.30-1.20(m，2H)，1.00(bd，1/3H)，0.90-0.70(m，2H)，0.55(bd，1/3H)，0.48(dd，2/3H)，-0.90(dt，1/3H)實施例24N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽在0℃下，向0.258g(0.50mmol)實施例21步驟D的中間體的10ml無水二氯甲烷溶液中加入0.39ml(1.00mmol)N-甲基嗎啉和45μl(0.60mmol)甲磺酰氯并攪拌30分鐘。反應混合物用10ml乙醚稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液(5ml)、鹽水(5ml)洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾并濃縮得到淺黃色泡沫狀產物，無需純化即可使用。向該物質的3.0ml二氯甲烷溶液中加入1.0ml三氟乙酸并在室溫下攪拌1小時。濃縮反應混合物，用5ml 10%碳酸鈉水溶液堿化，用氯仿(3×15ml)萃取。合并的有機液用鹽水(10ml)洗滌，用碳酸鉀干燥，過濾并濃縮得到粘稠油狀物。向此物質的3.0ml甲醇溶液中加入200μl 4M鹽酸的二噁烷溶液，并濃縮至干，得到98mg所需物質，為淺黃色固體。
該化合物以3∶2的旋轉異構體的混合物存在1H NMR(CD3OD，400MHz)δ8.43(d，1H)，8.35(t，1H)，7.72(d，2/3H)，7.61(d，1/3H)，7.40-7.25(m，2H)，7.20-7.08(m，3H)，7.05-6.95(m，22/3H)，6.50(d，1/3H)，5.25-5.10(m，1H)，5.00-4.84(2bd，1H)，3.68-3.45(m，3H)，3.20(m，2H)，2.82(s，1H)，2.80(s，2H)，2.60-2.48(m，11/3H)，2.30(dt，1/3H)，1.81-1.40(m，4H)，1.35(s，2H)，1.33(s，2H)，1.32(s，1H)，1.30(s，1H)，1.25-1.15(m，1H)，1.10-1.00(m，1H)，0.20(dt，1/3H)實施例25N-1(R)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-[3-苯基丙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟AN-1(R)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-3-苯基丙基]-2-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基-2-甲基丙酰胺用實施例18步驟B所述的偶合方法，由(2R)-2-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基-4-苯基-1-丁酸和1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]鹽酸鹽，制備標題化合物。用硅膠純化粗產物，用5%丙酮的CH2Cl2溶液洗脫。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.2(m，9H)，4.9(m，1H)，4.5(m，1H)，3.8(m，2H)，3.2(m，2H)，2.9(s，3H)，2.7(m，2H)，2.3(s，2H)，2.0(m，2H)，1.7(m，4H)，1.5(s，6H)，1.4(s，9H).
步驟BN-1(R)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-3-苯基丙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽用實施例18步驟C所述的去保護方法，由步驟A得到的中間體制備標題化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.3(m，9H)，4.5(m，1H)，3.9(m，2H)，3.5(m，2H)，3.2(m，2H)，2.9(s，3H)，2.7(m，4H)，2.0(m，4H)，1.6(s，6H).
實施例26N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-三氟甲磺酰基-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽步驟A1，2-二氫-1-芐氧羰基-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]向7.82g 60%氫化鈉中加入已烷，然后潷析液體。向其中加入11.10ml(89mmol)2，5-二氟苯基乙腈的150ml DMSO溶液，并攪拌30分鐘。然后滴加入15.10g 1-氯甲基乙胺鹽酸鹽的150ml DMSO溶液，并在75℃下加熱4小時。將反應混合物傾入600g冰中，用乙醚(5×200ml)萃取。合并的有機液用3×100ml 2N鹽酸洗滌。合并的水萃取液用50%氫氧化鈉水溶液堿化至pH＝9，用乙醚(3×200ml)萃取。合并的有機液用鹽水(100ml)洗滌，用碳酸鉀干燥并濃縮得到15.54g粘稠油狀物。
在0℃下，將乙醇(24ml)以滴加的方式加入到在250ml DME中的9.90g氫化鋁鋰中，然后溫熱至回流。加入上面化合物的250ml DME溶液并回流72小時。然后將反應混合物冷卻至0℃，用水(10ml)、10ml 15% NaOH和30ml水使反應中止。將漿狀液用K2CO3干燥，過濾并濃縮得到13.6g粘稠油狀物。用己烷研制該粗產物，濾出固體，再用己烷洗滌。固體(2.6g)的200MHz NMR(CDCl3)表明有大約75%所需的螺二氫吲哚。
在0℃下，向1.02g上面混合物的50ml CH2Cl2溶液中加入1.0ml三乙胺和0.80ml CBZ-Cl，并在室溫上攪拌1小時。將反應混合傾入50ml 5% Hcl中，分離水層。水層用50% NaOH堿化至pH＝10，用CH2Cl2(3×25ml)萃取。合并的有機液用鹽水(50ml)洗滌，用K2CO3干燥并濃縮，得到1.26g粘稠油狀的化合物。
1H NMR(200MHz，CDCl3)δ7.7-7.90(m，1H)，7.50-7.15(m，6H)，6.95-6.60(m，2H)，5.28(bs，2H)，3.90(bs，2H)，2.85(bd，2H)，2.30(s，3H)，2.20-1.80(m，4H)，1.65(bd，2H).
步驟BN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-芐氧羰基-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺在0℃下，向1.62g(4.62mmol)上面步驟A的中間體的10ml 1，2-二氯乙烷溶液中加入0.65ml ACE-Cl，并回流1小時。濃縮反應混合物至三分之一體積，用10ml甲醇稀釋并加熱回流1小時。濃縮反應混合物至干，用乙醚研制得到棕色固體。將此物質溶于飽合碳酸氫鈉溶液(25ml)中，用二氯甲烷(2×25ml)萃取。合并的有機液用K2CO3干燥并濃縮得到0.384g游離堿。
向0.384g上述物質的15ml CH2Cl2溶液中加入0.483g實施例21步驟C中得到的酸中間體、0.189g HOBT和0.34g EDC，并攪拌18小時。將反應混合物傾入10ml水中，用CH2Cl2(2×10ml)萃取。合并的有機液用20ml 10%檸檬酸、20ml飽和NaHCO3溶液洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。剩余物用25g硅膠進行快速色譜法純化，用己烷-丙酮(1∶1)作為洗脫劑，得到0.389g所需物質。
1H NMR(200MHz，CDCl3)δ7.7-7.90(m，1H)，7.50-7.15(m，6H)，6.95-6.60(m，2H)，5.28(bs，2H)，3.90(bs，2H)，2.85(bd，2H)，2.30(s，3H).2.20-1.80(m，4H)，1.65(bd，2H).
步驟CN-[1(R)-[(1，2-二氫-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺向0.363g步驟B得到的中間體的5ml乙醇溶液中加入0.10g 20%氫氧化鈀/炭，并在氫氣球下氫化1小時，濾除催化劑，用較多的甲醇洗滌。濃縮濾液得到0.262g所需物質。
1H NMR(400MHz，CDCl3)，該物質為2∶1的旋轉異構體的混合物。δ8.85-8.60(2bs，1H)，7.70(d，2/3H)，7.55(d，1/3H)，7.38(d，2/3H)，7.30(d，1/3H)，7.28-7.15(m，4H)，7.13-7.02(m，2H)，6.65(dt，2H)，6.50(dd，1/3H)，6.45(dd，2/3H)，6.14(dd，2/3H)，5.30-5.13(m，1H)，5.10(bs，1H)，4.30(bd，2/3H)，4.22(bd，1/3H)，3.50-3.30(m，1H)，3.30-3.00(m，4H)，3.00-2.80(m，1H)，2.73(t，1H)，2.53-2.40(m，11/3H)，2.20(t，1/3H)，1.49(s，3H)，1.45(s，3H)，1.41(s，9H)，1.20(dt，1/3H)，0.95(bd，2/3H)，0.90(dt，2/3H)，-0.05(dt，1/3H).
步驟DN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-三氟甲磺酰基-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-1[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺在0℃下，向30mg步驟C所得的中間體的1ml二氯甲烷溶液中加入0.050ml三乙胺和0.020ml三氟甲磺酸酐并攪拌5分鐘。濾除催化劑，用較多的甲醇洗滌。將反應混合物傾入5ml 5%碳酸鈉水溶液中并攪拌5分鐘。用CH2Cl2(2×5ml)萃取水層，合并的有機液用MgSO4干燥，過濾并濃縮。將剩余物用3g硅膠進行快速色譜法純化，用CH2Cl2-丙酮(4∶1)作為洗脫劑，得到21mg產物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)，該物質是2∶1的旋轉異構體的混合物。
δ8.40(bs，2/3H)，8.25(bs，1/3H)，7.70(d，2/3H)，7.60(d，1/3H)，7.40(d，2/3H)，7.35-7.10(m，5H)，6.90-6.80(m，2H)，6.18(dd，1H)，5.30-5.13(m，1H)，4.95(bs，2/3H)，4.90(s，1/3H)，4.45(bd，2/3H)，4.35(bd，1/3H)，385-3.70(m，2H)，3.70-3.55(m，2H)，3.30-3.10(m，2H)，2.70(t，1H)，2.45(t，1/3H)，2.35(t，2/3H)，1.49(s，3H)，1.45(s，3H)，1.41(s，9H)，1.20(dt，1/3H)，0.95(bd，2/3H)，0.90(dt，2/3H)，-0.05(dt，1/3H).
步驟EN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-三氟甲磺酰基-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽將21mg步驟D得到的中間體的1ml二氯甲烷和1ml三氟乙酸溶劑在室溫下保持30分鐘。將揮發物蒸發至干，用乙醚研制，得到黃色固體。
1H NMR(400MHz，CD3OD)，該物質是2∶1的旋轉異構體的混合物。
δ7.65(d，2/3H)，7.60(d，1/3H)，7.42(d，2/3H)，7.35-7.10(m，5H)，6.93-6.80(m，2H)，6.24(dd，1H)，5.30-5.13(m，1H)，4.95(bs，2/3H)，4.90(s，1/3H)，4.45(bd，2/3H)，4.35(bd，1/3H)，3.85-3.70(m，2H)，3.70-3.55(m，2H)，3.30-3.10(m，2H)，2.70(t，1H)，2.45(t，1/3H)，2.35(t，2/3H)，1.49(s，3H)，1.45(s，3H)，0.93(bd，2/3H)，0.90(dt，2/3H)，-0.05(dt，1/3H).
實施例27N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-[甲氧羰基]甲磺酰基-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽步驟AN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-[甲氧羰基]甲磺酰基-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽在0℃下，向77mg實施例26步驟C得到的中間體的1ml二氯甲烷溶液中加入0.30ml N-甲基嗎啉和0.024ml 2-甲氧羰基甲磺酰氯并攪拌1小時。將反應混合物傾入5ml 5%碳酸鈉水溶液中并攪拌5分鐘。用CH2Cl2(2×5ml)萃取水層，合并的有機液用鹽水(5ml)洗滌，用MgSO4干燥，過濾并濃縮。剩余物用5g硅膠快速色譜法純化，用CH2Cl2-丙酮(4∶1)作為洗脫劑，得到64mg產物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)，該物質是2∶1的旋轉異構體的混合物。
δ8.48(bs，2/3H)，8.35(bs，1/3H)，7.70(d，2/3H)，7.60(d，1/3H)，7.40(d，2/3H)，7.32(d，1/3H)，7.25-7.00(m，4H)，6.90-6.78(m，2H)，6.18(dd，1H)，5.30-5.20(m，1H)，4.97(bs，2/3H)，4.91(s，1/3H)，4.50-4.35(2bd，1H)，4.02(s，2/3H)，3.99(s，1/3H)，3.76(q，2H)，3.58(s，1H)，3.56(s，2H)，3.08-3.07(m，2H)，2.72(t，1H)，2.50-2.30(2t，1H)，1.65(t，1/3H)，1.50(s，2H)，1.46(s，4H)，1.40(s，9H)，1.30(m，1/3H)，1.10(bd，2/3H)，0.88(dt，2/3H)-0.13(dt，1/3H).
步驟BN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-[甲氧羰基]甲磺酰基-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽將24mg步驟A得到的中間體在1ml二氯甲烷和1ml三氟乙酸中的溶液在室溫下保持30分鐘，將揮發物蒸發至干，用乙醚研制，得到23mg無色固體。
1H NMR(400MHz，CD3OD)，該物質是2∶1的旋轉異構體的混合物。
δ8.70(bs，1/3H)，8.60(bs，2/3H)，7.60(m，2/3H)，7.50(d，2/3H)，7.48(m，1/3H)，7.40(d，2/3H)，7.31(d，1/3H)，7.25-7.00(m，4H)，6.95-6.85(m，1H)，6.70(dd，1/3H)，6.15(dd，2/3H)，5.20-5.10(m，1H)，4.38(bd，1/3H)，4.28(bd，2/3H)，4.02(s，2/3H)，3.99(s，1/3H)，3.76(q，2H)，3.58(s，1H)，3.56(s，2H)，3.08-3.07(m，2H)，2.72(t，1H)，2.50-2.30(2t，1H)，1.65(t，1/3H)，1.65(s，2H)，1.60(s，4H)，1.30(m，1/3H)，1.00(bd，2/3H)，0.88(dt，2/3H)，-0.10(dt，1/3H).
實施例28N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟AN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-芐氧羰基-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺在室溫下，向0.330g實施例26步驟A得到的1，2-二氫-1-芐氧羰基-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]的10ml1，2-二氯乙烷溶液中加入0.35g N-tBOC-O-芐基-D-絲氨酸、0.195g HOBT和0.30gEDC并攪拌18小時。將反應混合物傾入10ml水中，用CH2Cl2(2×10ml)萃取。合并的有機液用20ml 10%檸檬酸、20ml飽和NaHCO3溶液洗滌。用MgSO4干燥并濃縮。
向步驟A得到的中間體的5ml CH2Cl2溶液中加入5ml三氟乙酸，并在室溫下攪拌30分鐘。濃縮反應混合物，用5.0ml二氯甲烷稀釋，用10ml 10%碳酸鈉水溶液小心堿化。分離有分機層，用2×15ml二氯甲烷進一步萃取水層。合并的有機液用5ml水洗滌，用碳酸鉀干燥，過濾并濃縮，得到0.39g粘稠油狀的胺。
在室溫下，向0.39g上面中間體的10ml 1，2-二氯乙烷溶液中加入0.24g N-tBOC-α-甲基丙氨酸、0.195g HOBT和0.30g EDC，并攪拌18小時。將反應混合物傾入10ml水中，用CH2Cl2(2×10ml)萃取。合并的有機液用20ml 10%檸檬酸、20ml飽和NaHCO3溶液洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。用30g硅膠快速色譜法純化剩余物，用己烷-乙酸乙酯(2∶1)作為洗脫劑，得到0.33g產物。
1H NMR(200MHz，CDCl3)δ7.80(bs，1H)，7.50-7.15(m，5H)，7.10(bd，1H)，6.90-6.70(m，1H)，6.27(bd，1H)，7.35-7.10(m，5H)，5.35-5.10(m，3H)，4.99(s，1H)，4.70-4.40(m，3H)，3.90-3.50(m，4H)，3.15-2.90(m，2H)，2.80-2.50(m，2H)，1.80-1.40(m，2H)，1.50(3H)，1.42(s，6H).
步驟BN-[1(R)-[(1，2-二氫-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺向0.330g步驟A得到的中間體的5ml乙醇溶液中加入1滴三乙胺，并用氫氣球氫化3小時。通過硅藻土濾板過濾出催化劑，用乙酸乙酯洗滌，濃縮濾液得到0.269g無色泡沫狀產物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.35-7.20(m，4H)，7.17-7.08(m，2H)，6.80-6.65(m，2/2/3H)，6.27(dt，1/3H)，5.20-5.10(m，1H)，4.90(s，1H)，4.60-4.40(m，3H)，4.00(bt，1H)，3.75-3.60(m，1H)，3.55-3.40(m，3H)，3.18-3.30(m，2H)，2.90-2.65(m，1H)，1.83-1.50(m，4H)，1.48(s，4H)，1.42(s，2H)，1.39(s，9H).
步驟CN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺向0.134g步驟B的中間體的5ml二氯甲烷溶液中加入0.080ml N-甲基嗎啉和0.022ml甲磺酰氯并在0℃下攪拌30分鐘。反應混合物用另外的5ml二氯甲烷稀釋，用5ml飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水(5ml)洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。用20g硅膠快速色譜法純化剩余物，得到0.101g所需產物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.40-7.20(m，5H)，7.08(d，1H)，6.95-6.80(m，2/1/3H)，6.23(dd，2/3H)，5.20-5.10(m，1H)，4.90(bs，1H)，4.60(bd，2/3H)，4.58-4.40(m，3/1/3H)，4.10-4.00(m，1H)，3.388-3.70(m，21/3H)，3.66-3.60(m，1/2H)，3.60-3.50(m，1H)，3.10-2.95(m，1H)，2.86(s，1H)，2.84(s，2H)，2.80(t，1/3H)，2.65(t，2/3H)，2.90-2.50(m，4H)，1.45(s，4H)，1.44(s，2H)，1.42(s，3H)，1.40(s，6H).
步驟DN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽向0.101g步驟C的中間體的1ml二氯甲烷溶液中加入1.0ml三氟乙酸并在室溫下保持30分鐘。將反應混合物蒸發至干，用10%碳酸鈉水溶液(10ml)堿化，用二氯甲烷(3×5ml)萃取。合并的有機液用鹽水(5ml)洗滌，用碳酸鉀干燥并濃縮。將該物質溶于2ml乙酸乙酯中，在0℃下加入0.10ml 4M HCl的EtOAc溶液。在氮氣氛下濾出沉淀，用EtOAc/乙醚(1∶1)洗滌并干燥得到62mg白色固體產物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.40-7.20(m，5H)，7.08(d，1H)，6.95-6.80(m，2/1/3H)，6.23(dd，2/3H)，5.20-5.10(m，1H)，4.60(bd，2/3H)，4.58-4.40(m，3/1/3H)，4.10-4.00(m，1H)，3.388-3.70(m，21/3H)，3.66-3.60(m，1/2H)，3.60-3.50(m，1H)，3.10-2.95(m，1H)，2.86(s，1H)，2.84(s，2H)，2.80(t，1/3H)，2.65(t，2/3H)，2.90-2.50(m，4H)，1.45(s，4H)，1.44(s，2H).
實施例29步驟AN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-苯磺酰基-5-氟-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽向0.026g實施例27步驟B的中間體的2ml二氯甲烷溶液中加入0.020ml N-甲基嗎啉和0.012ml苯磺酰氯，并在0℃下攪拌1小時。將反應混合物傾入10ml乙醚中，用5ml飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。用10g硅膠快速色譜法純化剩余物，用CH2CH2-乙醚(2∶1)作為洗脫劑，得到0.019g產物。
將上述物質用1ml二氯甲烷和1ml三氟乙酸處理1小時。將反應混合物蒸發至干，剩余物用乙醚研制，得到18mg白色固體的所需產物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.80(d，2H)，7.70-7.55(m，2H)，7.55-7.50(m，2H)，7.40-7.20(m，42/3H)，7.03-6.92(m，1H)，6.82(dt，2/3H)，6.47(dt，2/3H)，5.08(dt，1H)，4.60-4.48(m，2H)，4.33(bt，1H)，3.94-3.85(m，3H)，3.75-3.65(m，2H)，3.10(dt，1H)，2.80(dt，1H)，1.73(dt，1H)，1.58(s，4H)，1.56(s，2H)，1.50(dt，1H)，1.38(dt，1H)，1.10(dt，2H).
實施例30N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-乙磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟AN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-芐氧羰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺在室溫下，向5g 1，2-二氫-1-芐氧羰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]鹽酸鹽的100ml二氯甲烷溶液中加入3.64g N-tBOC-O-芐基-D-絲氨酸、1.83g HOBT，2.60ml N-甲基嗎啉和3.70g EDC并攪拌18小時。將反應混合物傾入100ml水中，用CH2Cl2(2×100ml)萃取。合并的有機液用100ml 10%檸檬酸、100ml飽和NaHCO3溶液洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。
向步驟A得到的中間體的20ml CH2Cl2溶液中加入20ml三氟乙酸并在室溫下攪拌30分鐘，濃縮反應混合物，用50ml二氯甲烷稀釋，用100ml 10%碳酸鈉水溶液小心堿化。分離有機層，用2×50ml二氯甲烷進一步萃取水層，合并的有機液用50ml水洗滌，用碳酸鉀干燥，過濾并濃縮得到粘稠油狀的胺。
在室溫下，向上述中間體的50ml二氯甲烷溶液中加入2.50gN-tBOC-α-甲基丙氨酸、1.83g HOBT和3.70g EDC并攪拌18小時。將反應混合物傾入10ml水中，用CH2Cl2(2×10ml)萃取。合并的有機液用20ml 10%檸檬酸、20ml飽和NaHCO3溶液洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。用己烷-乙酸乙酯(2∶1)作為洗脫劑，通過300g硅膠快速色譜法純化剩余物，得到8.1g產物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.85(bs，1H)，7.45-7.20(m，10H)，7.20-7.05(m，22/3H)，6.95(t，1/3H)，6.88(t，1/3H)，6.53(dd，2/3H)，5.35-5.20(m，2H)，5.20-5.10(m，1H)，4.92(bs，1H)，4.65-4.20(m，4H)，4.05(bd，2/3H)，4.00-3.80(m，1，1/3H)，3.80-3.60(m，1H)，3.10(t，2/3H)，3.00-2.85(m，1/3H)，2.82-2.60(2t，1H)，1.90-1.55(m，5H)，1.49(s，4H)，1.42(s，2H)，1.40(s，9H).
步驟BN-[1(R)-[(1，2-二氫-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺向8.10g步驟A得到的中間體的80ml乙醇溶液中加入1g 20%氫氧化鈀/炭，并用氫氣球氫化1小時。通過硅藻土濾板濾出催化劑，用乙酸乙酯洗滌，濃縮濾液得到4.69g產物，為無色泡沫狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.35-7.20(m，5H)，7.18(d，1/2H)，7.10(d，1/2H)，7.04-6.98(m，2H)，6.75-6.60(m，2H)，5.20-5.10(m，1H)，4.97(bs，1H)，4.55-4.40(m，3H)，3.95(dd，1H)，3.73-3.61(m，1H)，3.60-3.50(m，1H)，3.50-3.33(m，3H)，3.10(dd，1H)，2.83(dt，1H)，1.85-1.55(m，5H)，1.47(s，4H)，1.42(s，2H)，1.39(s，9H).
步驟CN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-乙磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺向0.158g步驟B的中間體的5ml二氯甲烷溶液中加入0.053ml N-甲基嗎啉和0.034ml乙磺酰氯，并在0℃下攪拌30分鐘，在室溫下攪拌1小時。反應混合物用另外5ml二氯甲烷稀釋，用5ml飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水(5ml)洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。以CH2Cl2-乙醚(3∶1)作為洗脫劑，用10g硅膠快速色譜法純化剩余物，得到0.057g所需產物。
向0.057g上面中間體的1ml二氯甲烷溶液中加入1.0ml三氟乙酸并在室溫下保持30分鐘。將反應混合物濃縮至干，用乙醚研制，得到0.034g黃色固體產物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.40-7.25(m，5H)，7.25-7.13(m，21/2H)，7.03(t，1/2H)，6.95(t，1/2H)，6.80(d，1/2H)，5.18(dt，1H)，4.60-4.42(m，3H)，4.08(t，1H)，3.96(s，2H)，3.83-3.70(m，2H)，3.29-3.15(m，3H)，2.84(dt，1H)，1.90(dt，1H)，1.74-1.62(m，4H)，1.62(s，2H)，1.60(s，4H)，1.33(dt，3H).
實施例31N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-[2-甲基-2-丙磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺向0.212g實施例29步驟B的中間體的2ml1，2-二氯乙烷溶液中加入0.083ml三乙胺和0.054ml異丙基磺酰氯，并在0℃下攪拌30分鐘，在室溫下攪拌3小時。反應混合物用5ml二氯甲烷稀釋，用5ml飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水(5ml)洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。以CH2Cl2-乙醚(3∶1)作為洗脫劑用10g硅膠快速色譜法純化剩余物，得到0.113g所需產物。
向0.101g上面中間體的1ml二氯甲烷溶液中加入1.0ml三氟乙酸并在室溫下保持30分鐘。將反應混合物蒸發至干，用10%碳酸鈉水溶液(10ml)堿化，用二氯甲烷(3×5ml)萃取。合并的有機液用鹽水(5ml)洗滌，用碳酸鉀干燥并濃縮。將該物質溶于2ml乙酸乙酯中，在0℃下加入0.10ml 4M HCl的EtOAc溶液。在氮氣氛下濾出沉淀，用EtOAc/乙醚(1∶1)洗滌并干燥，得到88mg白色固體產物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.40-7.20(m，5H)，7.08(d，1H)，6.95-6.80(m，2/1/3H)，6.23(dd，2/3H)，5.20-5.10(m，1H)，4.60(bd，2/3H)，4.58-4.40(m，3/1/3H)，4.10-4.00(m，1H)，3.388-3.70(m，21/3H)，3.66-3.60(m，1/2H)，3.60-3.50(m，1H)，3.10-2.95(m，1H)，2.86(s，1H)，2.84(s，2H)，2.80(t，1/3H)，2.65(t，2/3H)，2.90-2.50(m，4H)，1.45(s，4H)，1.44(s，2H).
實施例32步驟AN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-[2-甲氧羰基甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽向0.50g實施例29步驟B的中間體的10ml二氯甲烷溶液中加入0.21ml N-甲基嗎啉和0.10ml 2-甲氧羰基甲磺酰氯，并在0℃下攪拌30分鐘。反應混合物用10ml二氯甲烷稀釋，用5ml飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水(5ml)洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。以CH2Cl2-乙醚(3∶1)作為洗脫劑，用20g硅膠快速色譜法純化剩余物，得到0.529g所需產物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.39-7.20(m，5H)，7.20-7.10(m，21/2H)，7.08(dt，1H)，6.92(t，1/2H)，6.55(d，1/2H)，5.20-5.10(m，1H)，4.94(bs，1H)，4.60(bd，1H)，4.53-4.40(m，2H)，4.10(2bs，2H)，4.05-3.90(m，2H)，3.70(dt，1H)，3.63(s，11/2H)，3.61(s，11/2H)，3.59-3.50(m，1H)，3.05(dt，1H)，2.70(dt，1H0，1.90-1.50(m，4H)，1.49(s，4H)，1.44(s，2H)，1.39(s，9H).
步驟BN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-[2-甲氧羰基甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽向0.113g上面中間體的1ml二氯甲烷溶液中加入1.0ml三氟乙酸，并在室溫下保持30分鐘。將反應混合物蒸發至干，用10%碳酸鈉水溶液(10ml)堿化，用二氯甲烷(3×5ml)萃取。合并的有機液用鹽水(10ml)洗滌，用碳酸鉀干燥并濃縮。將該物質溶于2ml乙酸乙酯中，在0℃下加入0.20ml 4M HCl的EtOAc溶液。加入乙醚，在氮氣氛下濾出沉淀，用乙醚洗滌并干燥，得到0.108g白色固體產物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.40-7.20(m，5H)，7.08(d，1H)，6.95-6.80(m，2/1/3H)，6.23(dd，2/3H)，5.20-5.10(m，1H)，4.60(bd，2/3H)，4.58-4.40(m，3/1/3H)，4.10-4.00(m，1H)，3.388-3.70(m，21/3H)，3.66-3.60(m，1/2H)，3.60-3.50(m，1H)，3.10-2.95(m，1H)，2.86(s，1H)，2.84(s，2H)，2.80(t，1/3H)，2.65(t，2/3H)，2.90-2.50(m，4H)，1.45(s，4H)，1.44(s，2H).
實施例33步驟AN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-[2-羧基甲基磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽在0℃下，向0.126g實施例32步驟A的中間體的3ml甲醇和1ml水的溶液中加入2滴5N氫氧化鈉水溶液并攪拌30分鐘。反應混合物用0.50N鹽酸水溶液酸化至pH＝2，用鹽水(5ml)稀釋，用CH2Cl2(2×5ml)萃取。合并的有機液用鹽水(10ml)洗滌，用MgSO4干燥并濃縮，得到0.098g白色泡沫狀物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.80(bs，1H)，7.45(d，1/2H)，7.40-7.13(m，7H)，7.02(t，1/2H)，6.90(t，1/2H)，6.50(d，1/2H)，5.22-5.10(m，1H)，4.60-4.40(m，3H)，4.20-4.00(m，3H)，3.92(d，1H)，3.70-5.50(m，2H)，3.04(dt，1H)，2.70(dt，1H)，1.93-1.50(m，4H)，1.42(s，6H)，1.33(s，9H).
步驟BN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-[2-羧基乙磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺向0.098g步驟A的中間體的1ml二氯甲烷溶液中加入1ml三氟乙酸并攪拌30分鐘。將反應混合物蒸發至干，用乙醚研制得到0.096g白色固體產物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.40-7.28(m，6H)，7.24-7.15(m，21/2H)，7.00(dt，1H)，6.80(d，1/2H)，5.17(dt，1H)，4.60-4.45(m，2H)，4.22(d，2H)，4.14-4.00(m，3H)，3.81-3.70(m，2H)，3.22(dt，1H)，2.83(dt，1H)，1.96(dt，1/2H)，1.80-1.64(m，41/2H)，1.62(s，1H)，1.60(s，5H).
實施例34步驟AN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-[2-羥基乙磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽在室溫下，向0.222g實施例32步驟A的中間體的2ml無水四氫呋喃溶液中加入0.48ml 2M硼氫化鋰的四氫呋喃溶液，并攪拌3小時。反應混合物用0.5ml丙酮使反應中止，用15ml水稀釋，用CH2Cl2(2×15ml)萃取。合并的有機液用鹽水(10ml)洗滌，用MgSO4干燥并濃縮得到0.27g白色泡沫狀物。以CH2Cl2-丙酮(2∶1)作為洗脫劑用10g硅膠快速色譜法純化剩余物，得到0.129g粘稠油狀的所需物質。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.32-7.20(m，6H)，7.20-7.10(m，2H)，7.09(d，1/2H)，6.98(t，1/2H)，6.90(t，1/2H)，6.54(d，1/2H)，5.17-5.10(m，1H)，5.00(bs，1H)，4.61-4.39(m，3H)，4.10-3.95(m，5H)，3.93-3.74(m，2H)，3.66(ddd，1H)，3.53(dt，1H)，3.27(dt，2H)，3.00(dt，1H)，2.70(dt，1H)，1.90-1.50(m，4H)，1.43(s，4H)，1.41(s，2H)，1.36(s，9H).
步驟BN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-[2-羥基乙磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽向0.129g步驟A的中間體的1ml二氯甲烷溶液中加入1ml三氟乙酸并攪拌30分鐘。將反應混合物蒸發至干，用乙醚研制得到0.113g白色固體產物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.40-7.25(m，6H)，7.25-7.13(m，21/2H)，6.98(dt，1H)，6.80(d，1/2H)，5.20-5.10(m，1H)，4.60-4.43(m，3H)，4.10-3.90(m，5H)，3.81-3.70(m，2H)，3.40-3.33(dt，2H)，3.20(dt，1H)，3.82(dt，1H)，2.00-1.63(m，4H)，1.61(s，1H)，1.58(s，5H).
實施例35步驟AN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-三氟甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽向0.150g實施例29步驟B的中間體的5ml二氯甲烷溶液中加入0.10ml N-甲基嗎啉和0.057ml三氟甲磺酸酐，并在0℃下攪拌15分鐘。反應混合物用5ml飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋，用2×5ml二氯甲烷萃取。合并的有機液用鹽水(5ml)洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。以己烷-丙酮(3∶1)作為洗脫劑用10g硅膠快速色譜法純化剩余物，得到0.136g所需產物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.40-7.15(m，6H)，7.15-6.93(m，21/2H)，6.53(d，1/2H)，5.20-5.10(m，1H)，4.90(bs，1H)，4.70-4.60(m，3H)，4.15-3.90(m，3H)，3.70(ddd，1H)，3.60-3.50(m，1H)，3.00(dt，1H)，2.70(dt，1H)，1.93-1.55(m，4H)，1.46(s，4H)，1.43(s，2H)，1.40(s，9H).
步驟BN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-三氟甲磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽向0.136g上面中間體的1ml二氯甲烷溶液中加入1.0ml三氟乙酸并在室溫下保持30分鐘。將反應混合物蒸發至干，用10%碳酸鈉水溶液(5ml)堿化，用乙酸乙酯(2×5ml)萃取。合并的有機液用鹽水(5ml)堿化，用碳酸鉀干燥，并濃縮。將所得物質溶于2ml乙酸乙酯中，在0℃下加入0.20ml 4M HCl的EtOAc溶液。加入乙醚，在氮氣氛下濾出沉淀，用乙醚洗滌并干燥得到0.94g白色固體產物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.40-7.15(m，6H)，7.15-6.93(m，21/2H)，6.53(d，1/2H)，5.20-5.10(m，1H)，4.90(bs，1H)，4.70-4.60(m，3H)，4.15-3.90(m，3H)，3.70(ddd，1H)，3.60-3.50(m，1H)，3.00(dt，1H)，2.70(dt，1H)，1.93-1.55(m，4H)，1.46(s，4H)，1.43(s，2H).
實施例36步驟AN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-苯磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽向0.148g實施例29步驟B的中間體的3ml二氯甲烷溶液中加入0.30ml N-甲基嗎啉和0.022ml苯磺酰氯，并在室溫下攪拌1小時。反應混合物用10ml二氯甲烷稀釋，用10ml飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。以己烷-丙酮(3∶1)作為洗脫劑用10g硅膠快速色譜法純化剩余物，得到0.190g所需產物。
向0.190g上面中間體的3ml二氯甲烷溶液中加入3ml三氟乙酸并在室溫下保持30分鐘。將反應混合物蒸發至干，用10%碳酸鈉水溶液(5ml)堿化，用乙酸乙酯(2×5ml)萃取。合并的有機液用鹽水(5ml)洗滌，用碳酸鉀干燥并濃縮。將所得物質溶于2ml乙酸乙酯中，在0℃下加入0.40ml 4M HCl的EtOAc溶液。加入乙醚，在氮氣氛下濾出沉淀，用乙醚洗滌并干燥得到0.136g白色固體產物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.82(d，2H)，7.67-7.58(m，2H)，7.52(t，2H)，7.40-7.20(m，6H)，7.10-6.90(m，11/2H)，6.68(d，1/2H)，5.10(dt，1H)，4.53(ABq，2H)，4.35(t，1H)，4.00-3.80(m，3H)，3.75-3.65(m，2H)，3.10(dt，1H)，2.73(dt，1H)，1.75(dt，1/2H)，1.48(m，11/2H)，1.20-1.05(m，2H).
實施例37步驟AN-[1(R)-[(1，2-二氫-[1-脲基甲基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽向0.148g實施例29步驟B的中間體的5ml 1，2-二氯乙烷溶液中加入0.10ml異氰酸甲酯并在室溫下攪拌1小時。將反應混合物蒸發至干。以CH2Cl2-丙酮(2∶1)作為洗脫劑用15g硅膠快速色譜法純化剩余物，得到0.137g所需產物。
在室溫下，用3ml二氯甲烷和3ml三氟乙酸處理上面物質30分鐘。將反應混合物蒸發至干，用乙醚研制，得到0.126g淺黃色固體。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.82(dd，1H)，7.42-7.35(m，5H)，7.30-7.20(m，21/2H)，6.75(d，1/2H)，5.19(dt，1H)，4.60-4.50(m，3H)，4.13(bd，1H)，3.90-3.68(m，4H)，3.25(t，1H)，2.90-2.70(2s，4H)，1.98(dt，1/2H)，1.85-1.65(m，31/2H)，1.62(s，2H)，1.59(s，4H).
實施例38N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-[1-甲氧羰基-1-甲基-乙磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽步驟A1，2-二氫-1-[1-甲氧羰基-1-甲基-乙磺酰基]-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]向5.06g 1，2-二氫-1-芐氧羰基-螺[3H-吲哚-3，4-哌啶]鹽酸鹽的50ml二氯甲烷溶液中加入3.0ml三乙胺和3.40g碳酸二叔丁酯，并在室溫下攪拌3小時。將反應混合物蒸發至干，用100ml乙醚稀釋，用50ml 0.50N鹽酸水溶液、50ml鹽水洗滌，用MgSO4干燥并濃縮，向所得粗產物的50ml乙醇溶液中加入1g 20%氫氧化鈀/炭，并用氫氣球氫化過夜。在0℃下，向0.506g所得化合物的15ml二氯甲烷溶液中加入0.74ml三乙胺和0.41ml甲氧羰基甲磺酰氯并攪拌1小時。反應混合物用25ml乙醚稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液(20ml)洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。以己烷-乙酸乙酯4∶1作為洗脫劑用25g硅膠快速色譜法純化剩余物，得到1.79g粘稠油狀的所需物質。
用己烷洗滌氫化鈉(0.102g，60%礦物油液)，然后懸浮于5ml無水DMF中。加入0.158g上面中間體的1ml DMF溶液并攪拌30分鐘。加入甲基碘(1.85mmol)并攪拌3小時。將反應混合物傾入15ml飽和氯化銨水溶液中，用乙醚(2×15ml)萃取。合并的有機液用水(15ml)、鹽水(15ml)洗滌，用MgSO4干燥并濃縮，得到0.179g所需物質。
1H NMR(200MHz，CDCl3)δ7.32(d，1H)，7.20-6.90(m，3H)，4.13(bd，2H)，2.83(bt，2H)，1.85-1.70(m，4H)，1.69(s，6H)，148(s，9H).
步驟BN-[1(R)-[(1，2-二氫-[1-甲氧羰基-1-甲基乙磺酰基-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺向0.179g步驟A的中間體溶液中加入1ml二氯甲烷和1ml三氟乙酸并攪拌30分鐘。將反應混合物蒸發至干，用10ml 10%碳酸鈉水溶液堿化，用2×10ml二氯甲烷萃取。合并的有機液用鹽水(10ml)洗滌，用碳酸鉀干燥，過濾并濃縮得到0.120g粘稠油狀的哌啶。向所得化合物的5ml二氯甲烷溶液中加入0.132g實施例21步驟B制得的酸中間體、0.055g HOBT，0.102gEDC并攪拌18小時。反應混合物用25ml乙醚稀釋，用15ml 0.05N HCl、飽和碳酸氫鈉溶液(15ml)洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。以CH2Cl2-丙酮(5∶1)作為洗脫劑用20g硅膠快速色譜法純化剩余物，得到0.094g所需產物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.60(s，2/3H)，8.50(s，1/3H)，7.70(d，2/3H)，7.60(d，1/3H)，7.35(d，2/3H)，7.30(d，1/3H)，7.26-7.00(m，5H)，6.90(t，11/3H)，6.40(d，2/3H)，5.28-5.16(m，1H)，5.05(bs，1H)，4.41(bd，2/3H)，4.32(bd，1/3H)，3.78-3.65(m，2H)，3.56(s，2H)，3.55(s，1H)，3.50(bd，1H)，3.20(dt，1H)，3.15(ddd，1H)，2.75(t，1H)，2.42(m，1H)，1.18(d，2H)，1.24(s，4H)，1.50(s，2H)，1.48(s，4H)，1.42(s，9H)，1.30-1.18(m，1H)，1.10-0.90(m，11/3H)，0.03(dt，2/3H).
步驟CN-[1(R)-[(1，2-二氫-[1-甲氧羰基-1-甲基乙磺酰基]-螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽用1ml二氯甲烷和1ml三氟乙酸處理0.094g步驟C的中間體溶液30分鐘，蒸發至干，用乙醚研制，得到0.082g所需產物。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ7.70(d，2/3H)，7.60(d，1/3H)，7.35(d，2/3H)，7.30(d，1/3H)，7.26-7.00(m，5H)，6.90(t，11/3H)，6.40(d，2/3H)，5.28-5.16(m，1H)，5.05(bs，1H)，4.41(bd，2/3H)，4.32(bd，1/3H)，3.78-3.65(m，2H)，3.56(s，2H)，3.55(s，1H)，3.50(bd，1H)，3.20(dt，1H)，3.15(ddd，1H)，2.75(t，1H)，2.42(m，1H)，1.18(d，2H)，1.24(s，4H)，1.50(s，2H)，1.48(s，4H)，1.30-1.18(m，1H)，1.10-0.90(m，11/3H)，0.03(dt，2/3H).
實施例39N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-3-氨基-3-甲基丁酰胺鹽酸鹽步驟AN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-3-氨基-3-甲基丁酰胺向1.14g 1，2-二氫-1-甲磺酰基螺-[3H-吲哚-3，4′-哌啶]鹽酸鹽(按實施例18(方法1)步驟A所述方法制備)的50ml二氯甲烷懸浮液中加入0.80ml N-甲基嗎啉、1.00g N-tBOC-D-色氨酸、0.80g HOBT和1.20gEDC并在室溫下攪拌18小時。將反應混合物用100ml乙醚稀釋，用50ml 0.05N HCl、50ml飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。
在0℃下用HCl(g)處理上面所得的中間體的50ml乙酸乙酯溶液2分鐘，然后攪拌1小時。加入無水乙醚(50ml)，然后過濾收集沉淀出的固體。產量為1.44g。
向0.86g所述胺鹽酸鹽的30ml二氯甲烷溶液中加入0.24ml N-甲基嗎啉、0.36g HOBT，0.56gEDC，并攪拌過夜。反應混合物用100ml乙醚稀釋，用0.05N HCl(50ml)、50ml飽和NaHCO3溶液洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。以CH2Cl2-丙酮(5∶1)作為洗脫劑用20g硅膠快速色譜法純化剩余物，得到0.74g所需產物。
在0℃下，向0.74g上面中間體的5ml乙酸乙酯溶液中鼓泡通入無水HCl氣體2分鐘，并攪拌30分鐘。加入乙醚至完全沉淀出產物。濾出固體，在氮氣氛下用乙醚洗滌并干燥，得到0.57g所需產物。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ7.69(d，2/3H)，7.55(d，1/3H)，7.37-6.90(m，5H)，6.82(bt，11/3H)，6.43(d，2/3H)，5.31-5.18(m，1H)，4.40(bd，2/3H)，4.30(bd，1/3H)，3.63-3.38(m，4H)，3.22-3.05(m，2H)，2.83-2.75(m，1H)，2.80(s，1H)，2.74(s，2H)，2.63(dd，1H)，2.55-2.43(m，2H)，2.20(bd，1H)，1.70-1.53(m，1H)，1.38(2H)，1.36(s，2H)，1.35(s，1H)，1.34(s，1H)，1.18(bd，1H)，1.20-0.94(m，11/3H)，0.03(dt，2/3H).
實施例40N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-[3-[2(R)-3-二羥基丙基]氨基]-3-甲基丁酰胺鹽酸鹽步驟AN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[3-[2(R)-3-二羥基丙基]氨基]-3-甲基丁酰胺鹽酸鹽向0.30g實施例39步驟B得到化合物的5ml無水甲醇溶液中加入1.5g無水乙酸鈉、0.30g (R)-1，2-亞異丙基甘油醛(Tetrahedron 1985，41，3117)，并攪拌1小時。加入氰基硼氫化鈉(8.7ml，1M溶液)的THF溶液并攪拌18小時。反應混合物用20ml水稀釋，用二氯甲烷(3×10ml)萃取。合并的有機液用飽和碳酸氫鈉溶液(10ml)洗滌，用K2CO3干燥并濃縮。以CH2Cl2-甲醇(98∶2)作為洗脫劑用10g硅膠快速色譜法純化剩余物，得到0.146g還原氨化的化合物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.70-8.40(m，2H)，7.63(d，2/3H)，7.55(d，1/3H)，7.37(t，1H)，7.32(d，1/3H)，7.28(d，2/3H)，7.20-6.95(m，41/3H)，6.52(d，2/3H)，5.20-5.08(m，1H)，4.55-4.24(m，3H)，4.10(t，2/3H)，4.05(t，1/3H)，3.80-3.70(m，1H)，3.70-3.50(m，4H)，3.30-3.10(m，2H)，2.84(s，1H)，2.80(s，2H)，2.80-2.70(m，2H)，2.68-2.45(m，1H)，2.37(s，2H)，1.70(t，2/3H)，1.52(bd，1/3H)，1.44(s，2H)，1.43(s，1H)，1.35(s，2H)，1.33(s，1H)，1.25(s，3H)，1.33(s，6H)，1.20-1.05(m，2H)，0.90-0.65(m，1/3H)，0.30(dt，2/3H).
步驟B將0.146g上面中間體在3ml甲醇和0.100ml濃鹽酸中攪拌30分鐘。將反應混合物蒸發至干，用乙醚洗滌固體并干燥得到0.109g所需物質。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.63(d，2/3H)，7.55(d，1/3H)，7.41(d，2/3H)，7.38(d，1/3H)，7.32(d，1/3H)，7.26(d，2/3H)，7.21-7.10(m，4H)，7.08-7.00(m，21/3H)，6.63(d，2/3H)，5.25(dd，2/3H)，5.19(dd，1/3H)，4.36(bd，2/3H)，4.30(bd，1/3H)，3.92-3.83(m，1H)，3.80-3.50(m，6H)，3.28-3.10(m，3H)，3.05-2.95(m，2H)，2.90(s，1H)，2.86(s，2H)，2.78-2.55(m，4H)，1.83-1.65(m，1H)，1.43(s，2H)，1.39(s，2H)，1.37(s，1H)，1.32(s，1H)，1.36-1.20(m，1H)，0.04-0.18(m，22/3H)，-0.08(dt，2/3H).
實施例41N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-[3-[2(R)-羥基丙基]氨基]-3-甲基丁酰胺鹽酸鹽步驟AN-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-[3-[2(R)-羥基丙基]氨基]-3-甲基丁酰胺鹽酸鹽向0.26g實施例39步驟B的中間體中加入5ml無水甲醇、1.5g無水乙酸鈉、新制得的0.10g 2(R)-(四氫吡喃基)氧基丙醛，并在室溫下攪拌1小時。加入氰基硼氫化鈉的THF溶液(8.5ml 1M溶液)并攪拌18小時。反應混合物用10ml飽和碳酸氫鈉溶液稀釋，用二氯甲烷(2×15ml)萃取。合并的有機液用鹽水(10ml)洗滌，用K2CO3干燥并濃縮。以CH2Cl2-甲醇(98∶2)作為洗脫劑，用10g硅膠快速色譜法純化剩余產物，得到0.219g所需產物。
將上面物質在3ml無水甲醇和0.10ml濃鹽酸中攪拌，蒸發至干，用乙醚研制剩余物，得到0.174g標題化合物，為淺黃色泡沫狀物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.63(d，2/3H)，7.55(d，1/3H)，7.41(d，2/3H)，7.38(d，1/3H)，7.32(d，1/3H)，7.26(d，2/3H)，7.21-7.10(m，4H)，7.08-7.00(m，21/3H)，6.63(d，2/3H)，5.25(dd，2/3H)，5.19(dd，1/3H)，4.36(bd，2/3H)，4.30(bd，1/3H)，3.92-3.83(m，1H)，3.80-3.50(m，4H)，3.28-3.10(m，3H)，3.05-2.95(m，2H)，2.90(s，1H)，2.86(s，2H)，2.78-2.55(m，4H)，1.83-1.65(m，1H)，1.43(s，2H)，1.39(s，2H)，1.37(s，1H)，1.32(s，1H)，1.36-1.20(m，1H)，1.28(d，3H)，0.04-0.18(m，22/3H)，-0.08(dt，2/3H).
實施例42N-[1(R)-[[3-氧代螺[異苯并呋喃-1(3H)，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽步驟A向0.165g按實施例19步驟B所述制得的酸中間體的10ml CH2Cl2溶液中加入0.095g 3-氧代螺[異苯并呋喃-1(3H)，4′-哌啶]、0.067gHOBT和0.110g EDC，并在室溫下攪拌4小時。將反應混合物傾入10mlCH2Cl2中，用20%檸檬酸水溶液(5ml)、飽和碳酸氫鈉溶液(5ml)洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。以己烷-丙酮(3∶1)作為洗脫劑用10g硅膠快速色譜法純化剩余物，得到0.234g偶合產物。
向0.024g上面中間體的1ml CH2Cl2溶液中加入1.0ml三氟乙酸，并在室溫下保持30分鐘。蒸發揮發物，用乙醚研制剩余物，得到21mg固體標題化合物。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ7.85(d，1/2H)，7.80(d，1/2H)，7.63(t，1/2H)，7.54-7.40(m，21/2H)，7.35-7.20(m，51/2H)，7.06(d，1H)，6.58(d，1/2H)，5.25-5.15(m，1H)，4.93(s，1H)，4.69(bd，1H)，4.55-4.40(m，2H)，4.14(bd，1H)，3.70-3.40(m，2H)，3.18-3.10(m，1H)，2.13(dt，1H)，2.90-2.75(m，2H)，2.70-2.50(m，2H)，1.47(s，1.5H)，1.46(s，1.5H)，1.44(s，1.5H)，1.43(s，1.5H).
實施例43N-[1(R)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-4-苯基丁基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟AN-[1(R)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-4-苯基丁基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽用制備實施例18化合物所述的化學方法，由2(R)-N-叔丁氧羰基-5-苯基戊酸和1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]鹽酸鹽，制得該標題化合物。
FAB-MS計算值C28H38N4O4SMW＝526.2;實測值m/e＝(m+1)527.9。
實施例44N-[1(R)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-苯基甲硫基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽步驟AN-[1(R)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-苯基甲硫基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽用制備實施例18化合物所述的化學方法，由市場上可買到的N-t-BOC-S-芐基-D-半胱氨酸和1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]鹽酸鹽，制得標題化合物。
FAB-MS計算值C27H36N4O4S2MW＝544.7;實測值m/e＝(m+1)548.5。
實施例45N-[1(R，S)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(2′-吡啶甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽步驟AN-[1(R，S)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(2′-吡啶甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽步驟AN-[1(R，S)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-羥基-2-氨基甲酸1，1-二甲基乙酯在室溫下，向N-t-BOC-(D)-絲氨酸(56mg，274mmol)的2.5ml THF溶液中加入1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]鹽酸鹽(由實施例18步驟A制得，83mg，0.274mmol)、三乙胺(45ml，0.33mmol)、HOBt(44mg，0.33mmol)和EDC(63mg，0.33mmol)。3小時后，混合物用乙酸乙酯稀釋，然后依次用水、鹽水洗滌。將有機層用硫酯鈉干燥、過濾并濃縮。通過MPLC(硅膠，100%乙酸乙酯)純化剩余物，得到112mg(90%)標題化合物。
步驟BN-[1(R，S)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(2′-吡啶甲氧基)乙基]氨基甲酸1，1-二甲基乙酯向在0.3ml THF中的無油氫化鈉(用己烷(3×)洗滌60%氫化鈉的油分散體來制備，9mg，0.21mmol)中加入2-吡啶甲基氯(16mg，0.1mmol)的0.3ml DMF溶液。5分鐘后，將步驟A所得的中間體(45mg，0.1mmol)加到反應混合物中，將混合物在室溫下攪拌兩小時，然后用乙醚稀釋，乙醚層用水(5×)、鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥。純化(制備型TLC，硅膠，100%乙酸乙酯)后，分離得到16mg標題化合物(29%)。
1H NMR(400MHz，CDCl3，旋轉異構體的混合物)8.53(m，1H)，7.77-6.83(m，7H)，5.75(m，1/2H)，4.98(m，2H)，4.67(m，21/2H)，4.25(m，1/2H)，4.10(m，1/2H)，3.91-3.67(m，4H)，3.17(m，1H)，2.91(s，3/2H)，2.89(s，3/2H)，2.79(m，1H)，1.95-1.69(m，4H)，1.42(s，9/2H)，1.41(s，9/2H).
步驟CN-[1(R，S)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(2′-吡啶甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽將步驟B得到的中間體(16mg，0.029mmol)的0.5ml三氟乙酸溶液在室溫下攪拌半小時，然后濃縮。向該剩余物的1ml氯仿溶液中加入叔丁氧羰基-α-甲基丙氨酸(6.5mg，0.032mmol)、HOBt(4.3mg，0.032mmol)，三乙胺(10ml，0.064mmol)和EDC(6mg，0.032mmol)。在室溫下12小時后，混合物用二氯用烷稀釋，然后用水和鹽水洗滌，將有機層用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。通過制備型TLC純化(硅膠，100%乙酸乙酯)剩余物。濃縮純化的化合物。室溫下向剩余物中加入三氟乙酸。1小時后，濃縮該混合物得到標題化合物(5.3mg)。
1H NMR(400MHz，CD3OD，旋轉異構體的混合物)8.70(寬s，1H)，8.30(m，1H)，7.84(m，1H)，7.77(m，1H)，7.36(m，1H)，7.24(m，11/2H)，7.06(m，11/2H)，5.24(t，6Hz，1H)，4.86(m，2H)，4.56(d，13Hz，1H)，4.08(m，1H)，3.95(m，4H)，3.36(m，1H)，2.97(s，3/2H)，2.96(s，3/2H)，2.01-1.78(m，4H)，1.63(s，3/2H)，1.61(s，3/2H)，1.59(s，3/2H)，1.58(s，3/2H).
實施例46N-[1(R，S)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(2′-吡啶硫基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽步驟AN-[1(R，S)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(2′-吡啶硫基)乙基]氨基甲酸1，1-二甲基乙酯在-10℃下，向無油的氫化鈉(600mg，7.5mmol)的20ml DMF懸浮液中加入N-t-BOC-D-半胱氨酸(1.2g，5.4mmol)的20ml DMF溶液。將混合物溫熱至室溫并再攪拌1小時。向反應混合物中加入2-溴吡啶(0.514ml，5.4mmol)的10ml DMF溶液。在80℃下加熱20小時后，向該反應混合物中加入Cul(1.03g，5.4mmol)，并在同樣溫度下再攪拌20小時。將混合物冷卻至室溫，并傾入0.5N鹽酸中，用乙醚萃取。通過硅藻土過濾乙醚層，用硫酸鈉干燥并濃縮。通過MPLC(硅膠，二氯甲烷/甲醇＝10/1)純化剩余物。向純化的化合物(170mg，0.57mmol)的二氯甲烷溶液中加入1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]鹽酸鹽(由實施例18步驟A制得，172mg，0.57mmol)、三乙胺(95ml，0.68mmol)、HOBt(92mg，0.68mmol)和EDC(130mg，0.68mmol)，并按照實施例45步驟A所述的方法進行反應，得到標題化合物(310mg，99%)。
步驟BN-[1(R，S)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(2′-吡啶硫基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽用TFA去保護方法，由步驟A得到的中間體(290mg，0.53mmol)，制得標題化合物(102mg)。
1H NMR(400MHz，CD3OD，旋轉異構體的混合物)8.45(dd，5，1Hz，1H)，7.61(m，1H)，7.39-7.05(m，6H)，5.27(m，1H)，4.52(t，12Hz，2H)，4.01(m，3H)，3.80(m，1H)，3.45(m，1H)，2.98(s，3H)，2.90(m，1H)，2.10-1.79(m，4H)，1.63(s，3/2H)，1.60(s，3/2H)，1.59(s，3/2H)，1.58(s，3/2H).FAB-MS532.7(M+1).
實施例47N-[1(R，S)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(環己基硫基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽步驟AN-t-Boc-環己基半胱氨酸在室溫下，向環己基硫醇(1ml，8.18mmol)和2-乙酰氨基丙烯酸甲酯(1.29g，9mmol)的THF溶液中加入催化劑量的氫化鈉。7天后，濃縮反應混合物。將剩余物的20ml 6N鹽酸溶液回流4小時并冷卻至室溫。將所得溶液放置12小時并過濾。真空干燥固體，向此鹽酸鹽在1N氫氧化鈉溶液(15ml)中的混合物中加入連二碳酸二叔丁酯(1.68g，7.7mmol)的15ml 1，4-二噁烷溶液。12小時后，將混合物傾入0.5N鹽酸中，用乙酸乙酯萃取。有機層用水、鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥、過濾并濃縮后，分離得到標題化合物，產率92%(2.23g)。
步驟BN-[1(R，S)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(環己基硫基)乙基]氨基甲酸1，1-二甲基乙酯用實施例45步驟A所述方法，由步驟A得到的中間體(303mg，1.0mmol)，制得標題化合物(420mg)，產率76%。
步驟CN-[1(R，S)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(環己基硫基)乙基]-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺將步驟B得到的中間體(420mg，0.76mmol)的5ml三氟乙酸溶液在室溫下攪拌半小時，然后濃縮并干燥。向該剩余物的10ml氯仿溶液中加入叔丁氧羰基-α-甲基丙氨酸(170mg，0.84mmol)、HOBt(113mg，0.84mmol)、三乙胺(116ml，0.84mmol)和EDC(160mg，0.84mmol)。室溫下12小時后，混合物用二氯甲烷稀釋，用水和鹽水洗滌。有機層用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。剩余物通過MPLC純化(硅膠，己烷/乙酸乙酯＝1/1)，得到標題化合物(430mg)，產率89%。
步驟DN-[1(R，S)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(環己基硫基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺三氟乙酸鹽將步驟C得到的中間體(35mg，0.055mmol)的0.5ml三氟乙酸溶液在室溫下攪拌半小時，然后濃縮，得到標題化合物(33mg)。
1H NMR(400MHz，CD3OD，旋轉異構體的混合物)7.38(d，8Hz，1H)，7.25-7.17(m，2H)，7.06(m，1H)，5.02(m，1H)，4.52(m，1H)，4.11(m，1H)，3.97(m，2H)，3.39(m，1H)，3.02(m，1H)，2.98(s，3H)，2.90-2.71(m，3H)，2.05-1.74(m，9H)，1.62(s，3/2H)，1.61(s，3/2H)，1.60(s，3/2H)，1.57(s，3/2H)，1.32(m，5H).FAB-MS537.9(M+1).
實施例48N-[1(R，S)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(環己基亞磺酰基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽在室溫下，向實施例47步驟C得到的中間體(35mg，0.055mmol)的1ml甲醇溶液中加入高碘酸鈉的1ml水溶液。兩小時后，反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用亞硫酸鈉水溶液洗滌。有機層用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。用三氟乙酸方法(實施例47、步驟D)使剩余物去保護，得到粗產物，將其通過制備性TLC純化(硅膠，二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨＝10/1/0.1)。用HCl的乙醚溶液再酸化純化了的產物得到標題化合物(21mg)。
1H NMR(400MHz，CD3OD，非對映異構體和旋轉異構體的混合物)7.38-7.04(m，4H)，5.43(m，1H)，4.50(m，1H)，4.05(m，1H)，3.96(m，2H)，3.38(m，1H)，3.13(m，1H)，2.98(s，3H)，2.90-2.71(m，3H)，2.05-1.74(m，9H)，1.62(m，6H)，1.51-1.32(m，5H).FAB-MS553.9(M+1).
實施例49N-[1(R，S)-[1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(環己基磺酰基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽在室溫下，向實施例47步驟C得到的中間體(35mg，0.055mmol)的1ml甲醇溶液中加入過硫酸氫鉀制劑的1ml水溶液。兩小時后，反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用亞硫酸鈉水溶液洗滌。有機層用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。用實施例47步驟D所述方法，向剩余物中加入三氟乙酸，得到粗產物，將其通過制備性TLC純化(硅膠，二氯甲烷/甲醇/氫氧化銨＝10/1/0.1)。用HCl的乙醚溶液再酸化純化了的產物得到標題化合物(12mg)。
1H NMR(400MHz，CD3OD，旋轉異構體的混合物)7.36(dd，7，2Hz，1H)，7.22(m，2H)，7.06(m，1H)，5.53(m，1H)，4.51(m，1H)，4.11(m，1H)，3.95(m，2H)，3.49(m，2H)，3.38(m，1H)，3.10(m，1H)，2.98(s，3/2H)，2.97(s，3/2H)，2.91(m，1H)，2.20-1.74(m，9H)，1.62(s，3/2H)，1.61(s，3/2H)，1.58(s，3/2H)，1.57(s，3/2H)，1.51-1.32(m，5H).FAB-MS569.9(M+1).
實施例50N-[1(R)-[螺[苯并[b]噻吩-3(2H)，4′-哌啶]-1′-基羰基-2-吲哚-3-基)乙基-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟A1-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-3-羥基-4-亞甲基-1，2，5，6-四氫吡啶在0℃下，向碘化甲基三苯基鏻(30g，74mmol)的150ml THF懸浮液/溶液中緩慢加入丁基鋰(2.5N，25.5ml，63.7mmol)。在室溫下攪拌1小時后，將N-t-BOC保護的4-哌啶酮(按Protective Groups in Organic Synthesis T.W.Greene，John Wiley and Sons，NY.1981.中所述方法，由4-哌啶酮-水合物鹽酸鹽制備)的50ml THF溶液在室溫下緩慢加入到反應混合物中。將反應混合物攪拌2小時并過濾，濃縮濾液并純化(MPLC，硅膠，己烷/乙酸乙酯＝10/1)，得到Wittig產物(7.9g)，產率82%。
向二氧化硒/硅膠(按Chem、Lett.1981，1703中所述方法制備)的30ml二氯甲烷懸浮液中加入叔丁基氫過氧化物(1.23ml)。15分鐘后，加入Wittig產物(0.72g，3.69mmol)的5ml二氯甲烷溶液。將該混濁的溶液攪拌3小時，通過硅藻土過濾。濾液用水、鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥。將有機層濃縮，通過快速色譜法純化(己烷/乙酸乙酯＝4/1)，得到標題化合物，產率52%(0.41g)。
步驟B1-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-氯甲基-1，2，5，6-四氫吡啶將步驟A得到的中間體(400mg，1.88mmol)溶于10ml苯中，加入亞硫酰氯(165ml，2.26mmol)并加熱至60℃，在此溫度下保持25分鐘。將所得混合物傾入NaHCO3(aq.)中，用乙醚萃取。用硫酸鎂干燥乙醚層并濃縮，得到標題化合物(333mg，77%)。
步驟C1-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-[[(2-溴苯基)硫基]甲基-1，2，5，6-四氫吡啶將步驟B得到的中間體(330mg，1.43mmol)溶于10ml丙酮中，加入2-溴苯硫酚(172ml，1.43mmol)和碳酸鉀(390mg，2.86mmol)。將反應混合物加熱至60℃并保持1小時，然后通過硅膠(100%乙醚)過濾。濃縮有機層，通過快速色譜法純化(硅膠，己烷/乙酸乙酯＝10/1)，得到標題化合物(460mg)，產率84%。
步驟D1′-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-螺[苯并[b]噻吩-3-(2H)，y′-哌啶將步驟C所得的中間體(450mg，1.17mmol)溶于60ml苯中，加入AIBN(10mg)和氫化三丁基錫(644ml，2.39mmol)。將該混合物回流2小時并濃縮。將剩余物溶于乙醚中，加入溴直至反應溶液變成棕色。在室溫下以滴加方式向該棕色溶液中加入DBU(650ml)。通過硅膠過濾所得的混濁溶液，并用乙醚洗滌。濃縮乙醚溶液，剩余物通過徑向色譜法純化(硅膠，己烷/乙酸乙酯＝10/1)，得到標題化合物(157mg)，產率43%。
步驟EN-[1(R)-[螺[苯并(b)噻吩-3(2H)，y′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽將步驟D得到的中間體(50mg，0.164mmool)的0.5ml TFA溶液在室溫下攪拌半小時，然后濃縮。剩余物用氯仿稀釋，用NaHCO3(aq.)洗滌。有機層用硫酸鈉干燥、過濾并濃縮得到游離胺(32mg)，產率95%。在室溫下，向游離胺(5.1mg，0.025mmol)的1ml氯仿溶液中加入實施例21步驟C所得到的中間體(9.2mg，0.0246mmol)、HOBt(4.0mg，0.0295mmol)和EDC(5.6mg，0.0295mmol)。12小時后，將反應混合物傾入水中，用氯仿萃取。氯仿層用硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。剩余物通過制備性-TLC純化(硅膠，己烷/乙酸乙酯＝1/1)得到無色泡沫狀物(13mg，94%)。按實施例18步驟C所述方法，由該無色泡沫狀物得到標題化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)旋轉異構體的混合物δ7.62(d，8Hz，2/3H)，7.54(d，8Hz，1/3H)，7.39(d，8Hz，2/3H)，7.35(d，8Hz，1/3H)，7.19-7.00(m，61/3H)，2.62(m，1H)，1.72-1.65(m，21/3H)，1.61(s，4H)，1.50(s，2H)，0.94(m，1H)，0.10(m，2/3H).FAB-MS477(m+1).
實施例51步驟A1′，2-二甲基螺[異二氫吲哚-1-酮-3，4′-哌啶]
在0℃氬氣氛下，向攪拌著的2-甲基異二氫吲哚-1-酮(1.47g，10mmol，從Aldrich Chemical Company購買)和甲基二氯乙基胺鹽酸鹽(2.9g，15mmol)的DMF(50ml)溶液中緩慢加入氫化鉀(35%礦物油液，4.5g，40mmol)。然后將反應混合物緩慢溫熱至室溫，再攪拌3小時。TLC分析(60%乙酸乙酯的己烷溶液)表明反應已完全。將混合物慢慢傾入冰中，用乙酸乙酯萃取六次。將合并的有機萃取液干燥(Na2SO4)并蒸發。剩余物通過快速色譜法純化，用梯度溶劑5-10%甲醇的二氯甲烷液洗脫，得到1.17g產物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.85(dd，J＝1.5Hz，6.5Hz，1H)，7.81(d，J＝7.1Hz，1H)，7.50-7.40(m，2H)，3.03(s，3H)，2.95-2.90(m，2H)，2.71(dt，J＝2.6Hz，11.4Hz，2H)，2.46(s，3H)，2.31(dt，J＝4.7Hz，13Hz，2H)，1.44(dd，J＝1.6Hz，13Hz，2H).
FAB-MS 計算值 C14H18N2O，230;實測值231(M+H).
步驟B2-甲基螺[異二氫吲哚-1-酮-3，4′-哌啶]按照Tidwell和Buchwald，J.Org.Chem.1992，57，6380-6832的脫甲基化方法，在0℃下，向攪拌著的步驟A產物(1.0g，4.35mmol)的1，2-二氯乙烷(10ml)溶液中加入氯甲酸1-氯乙酯(0.56ml，5.2mmol)，將混合物攪拌20分鐘。加入甲醇(10ml)，將所得混合物回流1小時。蒸發并用快速柱色譜法純化，用10-20% NH4OH-MeOH(1∶10)的氯仿液洗脫，得到0.63g產物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.02(d，J＝8Hz，1H)，7.85(d，J＝8Hz，1H)，7.70(t，J＝8Hz，1H)，7.60(t，J＝8Hz，1H)，3.75-3.60(m，4H)，3.10(s，3H)，2.60-2.51(m，2H)，1.72(寬d，J＝14Hz，2H).EI MS 計算值 C13H16N2O，216;實測值301(M+，5%)，216(M+)，185，160.
步驟C2-甲基螺[異二氫吲哚-1-酮-3，4′-哌啶]-1′-羧酸1，1-二甲基乙酯在0℃氬氣氛下，向攪拌著的2-甲基異二氫吲哚-1-酮(100mg)的DMF(2ml)溶液中加入過量的KH的礦物油液。5分鐘后，加入氨基甲酸雙(2-溴乙基)叔丁基酯(300mg)，將混合物在室溫下攪拌1小時，在80℃下加熱過夜。將混合物傾入冰中，用乙酸乙酯萃取。將有機萃取液干燥(Na2SO4)并蒸發。剩余物通過制備性-TLC純化，用60%乙酯乙酯的己烷溶液洗脫，得到16mg產物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.89(dd，J＝1.3Hz，5.8Hz，1H)，7.75(d，J＝6.5Hz，1H)，7.54-7.40(m，2H)，4.35-4.10(br.m，2H)，3.02(s，3H)，2.14(dt，J＝5.3Hz，13Hz，2H)，1.49(s，9H)，1.46-1.40(m，2H).FAB-MS計算值C18H24N3O3，316;實測值317(M+H，100%).
步驟D2-甲基螺[異二氫吲哚-1-酮-3，4′-哌啶]在室溫下，用濃HCl和MeOH處理步驟C的中間體(16mg)2小時并蒸發得到所需產物。
該化合物的所有光譜數據與步驟B中的化合物相同。
步驟EN-[1(R)-[(2-甲基螺[異二氫吲哚-1-酮-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺按照常規肽偶合技術，由α(R)-[[(2-[[(1，1-二甲基乙氧基]羰基]氨基]-2，2-二甲基-1-氧代乙基]氨基]-1H-吲哚-3-丙酸(25mg)和步驟B的產物制得標題化合物。
1H NMR(400MHz.CDCl3)δ8.58，8.44(2br.s，1H)，7.80-7.15，6.44(m，d，J＝7.6Hz，總共10H)，5.43-5.36，5.22-5.15，(2m，1H)，4.98(寬.s，1H)，4.60-4.50(寬.m，1H)，3.64-3.50(寬.m，1H)，3.40-3.05，2.72-2.64(2m，4H)，2.88，2.51(2s，3H)，2.00-1.90(m，2H)，1.52，1.51(2s，3H)，1.49(s，3H)，1.45，1.44(2s，9H)，1.40-0.40(幾個m，2H).FAB-MS計算值C33H41N5O5，587;實測值588(M+H)，532，488.
步驟FN-[1(R)-[(2-甲基螺[異二氫吲哚-1-酮-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽由步驟E的產物，用HCl的乙酸乙酯溶液制備標題化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.84-6.89(m，9H)，5.30，5.15(2dd，1H)，4.50-4.40(m，1H)，3.85-3.77(m，1H)，3.65-3.50(m)，3.40-3.15(m)，2.95，2.58(2s，3H)，2.95-2.85(m)，2.55-2.47(m)，2.22-2.15(m)，2.09-2.00(m)，1.65，1.64，1.60(3s，6H)，1.50-1.20(m)，1.15-1.05(m)，0.9-0.8(m)，0.61-0.52(m).
FAB-MS 計算值C28H33N5O3，471;實測值472(M+H).
實施例52N-[1(R)-[[1-[[[[[6-[[[4-疊氮基-2-羥基-5-碘苯基]羰基]氨基]己基]氨基]羰基]甲基]磺酰基]-2，3-二氫螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基]羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽向可從市場上買到的N-羥基琥珀酰亞氨基-4-疊氮基-2-羥基-苯甲酸酯的5ml CH2Cl2溶液中加入6-N-叔丁氧羰基-正己胺鹽酸鹽和0.10ml Hunig堿，并攪拌4小時。將反應混合物蒸發至干并通過15g硅膠色譜法純化，用己烷-乙酸乙酯(2∶1)洗脫，得到0.229g酰化產物。向29mg上面產物中加入2ml THF和2ml 0.01M NaOH水溶液、25mg碘化鉀。加入氯胺T(15mg)并攪拌30分鐘。反應用2ml飽和硫代硫酸鈉溶液中止，用5ml 0.05N HCl稀釋，并用乙酸乙酯(2×5ml)萃取。合并的有機相用鹽水(5ml)洗滌，經MgSO4干燥并濃縮。剩余物用快速色譜法(5g硅膠)純化，用己烷-乙醚(3∶1)洗脫，得到26mg碘化物質。用4M HCl的乙酸乙酯溶液進行N-叔丁氧羰基的去保護，得到21.4mg鹽酸鹽。
向該物質的5ml CH2Cl2溶液中加入49mg實施例33步驟A的酸中間體、0.016mml NMM、19.8mg HOBT和29mg·EDC，并攪拌18小時。按常規方法處理反應混合物并純化。
再用4MHCl的乙酸乙酯溶液進行N-叔丁氧羰基的去保護。得到黃棕色固體標題化合物。將該物質通過溶于2ml飽和NaHCO3溶液中進行堿化，并用CH2Cl2(2×3ml)萃取。合并的有機相經Na2SO4干燥，并濃縮為標題化合物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)化合物以3∶2的旋轉異構體的混合物存在δ8.40-8.20(m，1H)，7.95(s，2/3H)，7.90(s，1/3H)，7.40-6.90(m，91/3H)，6.70(s，2/3H)，6.55(m，1H)，5.20-5.10(m，1H)，4.70-4.40(m，4H)，4.10-3.80(m，5H)，3.80-3.50(m，4H)，3.40-3.10(m，4H)，3.10-3.00(m，1H)，2.70(dt，1H)，1.90-1.20(m，14H)，1.30(s，6H).
實施例53N-[1(S)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲磺酰基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽步驟AN-[1(S)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲磺酰基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺將試樣N-[1(S)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲硫基)乙基]-2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2-甲基丙酰胺(實施例44，步驟C)72mg溶于0.5ml甲醇中，并在冰浴中冷卻。攪拌下向其中滴加101mg OXONE(TM)的0.5ml水溶液。通過在硅膠GF板上用2∶1 EtOAc己烷展開的TLC對反應監測數小時;通過消耗起始原料觀察到逐漸又形成兩個極化點。當起始原料基本用完時，在氮氣流下使反應混合物接近干燥，剩余物用氯仿萃取。MgSO4干燥過的萃取液經過制備性TLC，在8M×8M×1，000μ硅膠GF板上用EtOAc己烷展開;分離出兩個譜帶。將極性較小的組分溶于0.5ml苯甲醚中，在冰浴中冷卻，并用0.5ml TFA處理。將反應物塞好并移出冷浴。30分鐘后，用抽氣泵抽真空的條件下除去大部分TFA，在氮氣流下蒸發出大部分剩余的苯甲醚。剩余物溶于氯仿中并與1M K2HPO4一起震蕩，向其中加入足夠的NaOH使PH＞9。然后除去氯仿，水相用氯仿萃取數次，合并的有機相用MgSO4干燥，減壓濃縮得到膠狀物。通過制備性TLC純化，在硅膠GF板上用0.5∶5∶95濃NH4OH∶MeOH∶CHCl3展開，得到標題化合物的游離堿。
C27H36N4O6S2計算值MW＝576.7;實測值m/e＝(m+1)577.5。
步驟BN-[1(S)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基]羰基]-2-(苯基甲磺酰基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽用上述標準方法制備上面步驟A化合物的鹽酸鹽，得到標題化合物。
實施例54兩種N-[1(S)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲亞磺酰基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽的制備步驟AN-[1(S)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲亞磺酰基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺使實施例53步驟A的極性較大的譜帶經過所述的TFA/苯甲醚去保護步驟，然后用同樣的制備性TLC處理，分離出兩個譜帶，它們相應于預期的兩個非對映的亞砜。對極性較小的非對映體C27H36N4O5S2計算值MW＝560.7;實測值m/e＝(m+1)561.7。對極性較大的非對映體C27H36N4O5S2計算值MW＝560.7;實測值m/e＝(m+1)561.7。
步驟BN-[1(S)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲亞磺酰基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺鹽酸鹽用上面步驟A分離出的兩種化合物之一代替用于制備實施例53步驟B的化合物的實施例53步驟A中制備的化合物，得到標題化合物。
實施例55N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽該化合物的制備是用甲磺酸處理實施例18步驟C中得到的游離堿。將該化合物經乙酸乙酯-乙醇-水重結晶，得到標題化合物。m.p.＝166-168℃。
實施例562，3，3a，4，6，6a，-六氫-2-氧代-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑-4(S)-戊酸-6-[[[[[1′-[[(29R)-[[2-氨基-2-甲基-1-氧代丙基]氨基]-3-(苯基甲氧基)-1-氧代丙基]-2，3-二氫螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基]磺酰基]甲基]羰基]氨基]己基酯三氟乙酸鹽向0.108g實施例33步驟A中制備的中間體的5ml CH2Cl2溶液中加入20mg 6-氨基己醇、28mg HOBT和42mg EDC，并攪拌4小時。反應混合物用10ml CH2Cl2稀釋，用0.5N HCl(5ml)、飽和NaHCO3水溶液(5ml)洗滌，經MgSO4干燥并濃縮。以CH2Cl2-丙酮(1∶1)作洗脫劑通過快速色譜法(10g硅膠)純化剩余物。
向56.2mg上面中間體的2ml CH2Cl2和2ml DMF溶液中加入23mg生物素、14mg DMAP、28mg EDC，并攪拌18小時。按常規方法處理反應混合物。剩余物通過硅膠(5g)快速色譜法以CH2Cl2-丙酮(1∶1)作洗脫劑進行純化，得到22mg生物素軛合物。在CH2Cl2-TFA中進行N-叔丁氧羰基的去保護，得到18.9mg標題化合物，為白色固體。
1H NMR(CDCl3，400MHz)化合物為3∶2的旋轉異構體的混合物。
d8.45-8.23(m，1H)，7.9(s，1H)，7.40-7.28(m，4H)，7.25-7.17(m，2H)，7.00(dt，2/3H)，6.80(d，1/3H)，5.21-5.14(m，1H)，4.60-4.42(m，4H)，4.28(bt，1H)，4.15-4.00(m，6H)，3.85-3.70(m，2H)，3.20-3.10(m，3H)，2.90(dd，1H)，2.83(dt，1H)，2.70(d，1H)，2.40-2.25(m，2H)，2.00-0.60(m，18H)，1.62(s，3H)，1.60(s，3H).
權利要求
1.下式化合物及其可藥用鹽以及其各個非對映體
R1是C1-C10烷基、芳基、芳基(C1-C6烷基)和C3-C7環烷基(C1-C6烷基)或C1-C5烷基-K-C1-C5烷基、芳基(C0-C5烷基)-K-(C1-C5烷基)、C3-C7環烷基(C0-C5烷基)-K-(C1-C5烷基)，其中K是O、S(O)m、N(R2)C(O)、C(O)N(R2)、OC(O)、C(O)O、或-CR2=CR2-或-C≡C-，其中芳基如下所定義，而且R2和烷基可以被1至9個鹵原子、S(O)mR2a、1至3個OR2a或C(O)OR2a進一步取代，而芳基可被下列基團進一步取代苯基、苯氧基、鹵代苯基、1-3個C1-C6烷基、1至3個鹵原子、1至2個OR2、亞甲二氧基、S(O)mR2、1至2個CF3、OCF3、硝基、N(R2)(R2)、N(R2)C(O)R2、C(O)OR2、C(O)N(R2)(R2)、SO2N(R2)(R2)、N(R2)S(O)2芳基或N(R2)SO2R2；R2是氫、C1-C6烷基、C3-C7環烷基，并且當兩個C1-C6烷基存在于一個原子上時，它們可以任意連接形成任選包括氧、硫或NR2m的C3-C8環；R2a是氫或C1-C6烷基；R3a和R3b獨立地是氫、鹵素、C1-C6烷基、OR2、氰基、OCF3、亞甲二氧基、硝基、S(O)mR、CF3或C(O)OR2，當R3a和R3b彼此處于鄰位時，它們可以連接形成任選包括1或2個選自氧、硫或氮雜原子的C5至C8脂環或芳環；R4和R5獨立地是氫、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基，其中取代基可以是1至5個鹵原子、1至3個羥基、1至3個C1-C10鏈烷酰氧基、1至3個C1-C6烷氧基、苯基、苯氧基、2-呋喃基、C1-C6烷氧羰基、S(O)m(C1-C6烷基)；或R4和R5可以一起形成-(CH2)1La(CH2)s-，其中La是C(R2)2、O、S(O)m或N(R2)，r和s獨立地是1至3，R2如上所定義；R6是氫或C1-C6烷基；A是
其中x和y獨立地是0-3；Z是N-R2或O；R7和R7a獨立地是氫、C1-C6烷基、OR2、三氟甲基、苯基、取代的C1-C6烷基，其中取代基是咪唑基、苯基、吲哚基、對羥基苯基、OR2、1至3個氟、S(O)mR2、C(O)OR2、C3-C7環烷基、N(R2)(R2)、C(O)N(R2)(R2)；或R7和R7a可以獨立地與R4與R5基團之一或兩者連接起來，在末端氮與R7或R7a基團的烷基之間形成亞烷基橋，其中亞烷基橋含有1至5個碳原子；B、D、E和F獨立地是C(R8)(R10)、O、C=O、S(O)X或NR9，所以一個或兩個B、D、E或F可以任意地不存在以便提供一個5、6或7元環；條件是只有當其余的B、D、E或F基團之一同時是O、S(O)m或NR9時，B、D、E或F才可以是C(R8)(R10)或C=O；B和D或D和E可以一起為N=CR10-或CR10=N，或B和D或D和E可以一起為CR8=CR10，其條件是其它的B和E或F之一同時是O、S(O)m或NR9；R8和R10獨立地是氫、R2、OR2、(CH2)q芳基、(CH2)qC(O)OR2、(CH2)qC(O)O(CH2)q芳基或(CH2)q-(1H-四唑-5-基)，芳基可以被1至3個鹵原子、1至2個C1-C8烷基、1至3個OR2或1至2個C(O)OR2任意地取代；R9是R2、(CH2)q芳基、C(O)R2、C(O)R2、C(O)(CH2)q芳基、SO2R2、SO3(CH2)q芳基、C(O)N(R2)(R2)、C(O)N(R2)(CH2)q芳基、C(O)OR2、1H四唑-5-基、SO3H、SO2NHC≡N、SO2N(R2)芳基、SO2N(R2)(R2)、(CH2)q可以被1至2個C1-C4烷基任意取代，R2和芳基可以被下列基團任意地進一步取代1至3個OR2a、O(CH2)q芳基、1至2個C(O)OR2a、1至2個C(O)O(CH2)q芳基、1至2個C(O)N(R2a)(R28)、1至2個C(O)N(R2a)(CH2)q芳基、1至5個鹵原子、1至3個C1-C4烷基、1，2，4-三唑基、1H-四唑-5-基、C(O)NHSO2R28、S(O)mR2a、C(O)NHSO2(CH2)q芳基、SO2NHC≡N、SO2NHC(O)R2a、SO2NHC(O)(CH2)q芳基、N(R2)C(O)N(R2a)(R2a)、N(R2a)C(O)N(R2a)(CH2)q芳基、N(R2a)(R2a)、N(R2a)C(O)R2a、N(R2a)C(O)(CH2)q芳基、OC(O)N(R2a)(R2a)、OC(O)N(R2a)(CH2)q芳基；SO2(CH2)qCONH-(CH2)wNHC(O)R11，其中w是2-6，R11可以是生物素、芳基或被1或2個OR2、1-2個鹵原子、疊氮基或硝基取代的芳基；m是0、1或2；n是1或2；q可以任意地是0、1、2、3或4；以及G、H、I和J是碳、氮、硫或氧原子，并且至少一個是雜原子G、H、I或J之一可以任意地不存在以便得到5或6元雜芳環。
2.權利要求1的下式化合物及其可藥用鹽以及其各個非對映體
其中R1是C1-C10烷基、芳基(C1-C4烷基)、C3-C6環烷基(C1-C4烷基)、(C1-C4烷基)-K-(C1-C4烷基)、芳基(C0-C5烷基)-K-(C1-C4烷基)、(C3-C7環烷基)(C0-C5烷基)-K-(C1-C4烷基)，其中K是O、S(O)m、-CR2＝CR2-或-C≡C-;或N(R2)C(O)，其中R2和烷基可以被1至7個鹵原子、S(O)m-C1-C4烷基、OR2a或C(O)OR2a進一步取代，芳基可以被下列基團進一步取代C1-C4烷基、1至2個鹵原子、1至2個OR2、CF3、OCF3、亞甲二氧基、S(O)mR2、SO2N(R2)(R2)、N(R2)SO2R2或C(O)OR2;R2是氫、C1-C6烷基、C3-C7環烷基，并且如果兩個C1-C6烷基存在于一個原子上，它們可以任意地連接形成任選包括1至2個選自氧、硫或NR2a雜原子的C4-C6環;R2a是氫或C1-C6烷基;R3a和R3b獨立地是氫、鹵素、C1-C4烷基、OR2、亞甲二氧基、硝基、S(O)mC1-C4烷基、CF3或C(O)OR2，R4和R5獨立地是氫、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基，其中取代基可以是1至5個鹵原子、1至2個羥基、1至2個C1-C6鏈烷酰氧基、1至2個C1-C6烷氧基或S(O)m(C1-C4烷基);A是
其中x和y獨立地是0、1或2;R7和R7a獨立地是氫、C1-C4烷基、取代的C1-C4烷基，其中取代基是1至3個氟或咪唑基、苯基、吲哚基、S(O)mC1-C4烷基、C(O)OR2、或R7和R7a可以獨立地與R4和R5基團之一或兩者連接起來，在末端氮與R7或R7a基團的烷基之間形成亞烷基橋，其中亞烷基橋含有1至3個碳原子;B、D和F獨立地是C(R8)(R10)、C＝O、O、S(O)m或NR9，所以B、D或F之一可以任意地不存在以便得到5或6元環;條件是只有當其余的B、D和F基團之一同時是O、S(O)m或NR9時，B、D和F之一才是C(R8)(R10)或C＝O;R8和R10獨立地是氫、R2、OR2、(CH2)q芳基、(CH2)qC(O)OR2、(CH2)qC(O)O(CH2)q芳基、(CH2)q-(1H-四唑-5-基)，芳基可以被1至3個鹵原子、1至2個C1-C4烷基、1至3個OR2或1至2個C(O)OR2任意地取代;R9是R2、(CH2)q芳基、C(O)R2、C(O)(CH2)q芳基、SO2R2、SO2(CH2)q芳基、C(O)N(R2)(R2)、C(O)N(R2)(CH2)q芳基、1H-四唑-5-基、SO2NHC≡N、SO2N(R2)芳基、SO2N(R2)(R2)，(CH2)q可以被1至2個C1-C2烷基任意地取代，R2可以被下列基團任意地取代1至2個OR2a、O(CH2)q芳基、1至2個C(O)OR2a、C(O)N(R2a)(R2a)、S(O)mR2a、1H-四唑-5-基、C(O)NHSO2R2a、C(O)NHSO2(CH2)q芳基、N(R2a)C(O)N(R2a)(R2a)或N(R2a)C(O)N(R2a)(CH2)q芳基，芳基可以被下列基團任意取代1至2個OR2a、1至2個鹵原子、1至2個C1-C4烷基、C(O)OR2a或1H-四唑-5-基;SO2(CH2)wCONH(CH2)w-NHC(O)R11，其中w＝1-6，R11可以是生物素、芳基、或被1或2個OR2、1-2個鹵原子、疊氮基或硝基取代的芳基;m是0、1或2;q是0、1、2或3;以及芳基是苯基、萘基、吡啶基、噻吩基、吲哚基、噻唑基或嘧啶基。
3.權利要求2的化合物，其中F不存在。
4.權利要求3的下式化合物及其可藥用鹽以及其各個非對映體
R1是C1-C10烷基、芳基(C1-C4烷基)、C5-C6環烷基(C1-C4烷基)或(C1-C4烷基)-K-C1-C2烷基-、芳基(C0-C2烷基)-K-(C1-C2烷基)、C3-C6環烷基-(C0-C2烷基)-K-(C1-C2烷基)，其中K是O或S(O)m，芳基可以被1至2個C1-C4烷基、1至2個鹵原子、OR2、C(O)OR2、CF3或S(O)mR2進一步取代。R2是氫、C1-C4烷基、環C3-C6烷基，并且如果兩個C1-C4烷基存在于一個原子上，它們可以任意地連接形成任選包括氧或NR2a雜原子的C5-C6環;R2a是氫或C1-C4烷基;R3a和R3b獨立地是氫、鹵素、C1-C4烷基、C(O)OR2、羥基、C1-C4烷氧基、S(O)mC1-C4烷基或CF3;R4和R5獨立地是氫、C1-C4烷基、取代的C1-C4烷基，其中取代基可以是1至2個羥基或S(O)m(C1-C3烷基);A是
其中x是0或1;R7和R7a獨立地是氫、C1-C3烷基;或R7和R7a可獨立地與R4和R5基團之一或兩者連接起來，在末端氮與R7或R7a基團的烷基之間形成亞烷基橋以形成包含末端氮的5或6元環;B和D獨立地是C(R8)(R10)、C＝O、O、S(O)m、NR9，條件是只有當B和D的另一個是O、S(O)m或NR9時，B和D之一可以是C(R8)(R10)或C＝O;R8和R10獨立地是氫、R2、OR2或(CH2)q芳基，芳基可以被1至2個鹵原子、1至2個C1-C4烷基、OR2或1至2個C(O)OR2任意地取代;R9是C(O)R2、C(O)(CH2)q芳基、SO2R2、SO(CH2)q芳基、C(O)N(R2)(R2)、C(O)N(R2)(CH2)q芳基，而(CH2)q可以被1至2個C1-C2烷基任意取代，R2可以被下列基團任意地取代1至2個OR2a、O(CH2)q芳基、C(O)OR2a、C(O)N(R2a)(R2a)、S(O)mR2a、1H-四唑-5-基、C(O)NHSO2R2a或N(R2a)C(O)N(R2a)(R2a)，芳基可以被下列基團任意地取代1至2個OR2a、1至2個鹵原子、1至2個C1-C2烷基、C(O)OR2、1H-四唑-5-基或S(O)mR2a;SO2(CH2)qCONH(CH2)wNHC(O)R11，其中w＝2-6，R11可以是生物素、芳基，芳基可被1至2個OR2、1至2個鹵原子、疊氮基、硝基任意地取代;m是0、1或2;q可以任意是0、1、2或3;芳基是苯基、萘基、吡啶基、吲哚基、噻吩基或四唑基。
5.權利要求1的下式化合物及其可藥用鹽以及其各個非對映體
R3a是H，fluoro;D是O，S，S(O)m，N(R2)，NSO2(R2)，NSO2(CH2)t芳基，NC(O)(R2)，NSO2(CH2)qOH，NSO2(CH2)qCOOR2，N-SO2(CH2)qC(O)-N(R2)(R2)，N-SO2(CH2)qC(O)-N(R2)(CH2)wOH，
而且芳基是苯基或吡啶基、苯基可以被1-2個鹵原子取代;R2是H、C1-C4烷基;m＝1、2;t是0、1、2;q是1、2、3;w是2-6。
6.權利要求1的化合物，它們是下列化合物及其可藥用鹽N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲羰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-苯磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;N-[1(R)-[(3，4-二氫-螺[2H-1-苯并吡喃-2，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;N-[1(R)-[(2-乙酰基-1，2，3，4-四氫螺[異喹啉-4，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺甲磺酸鹽;N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(2′，6′-二氟苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-5-氟螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;N-[1(S)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲硫基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-3-苯基丙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-3-環己基丙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;或者N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-4-苯基丁基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-甲磺酰基-5-氟螺[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;N-[1(R)-[(1，2-二氫-1-(2-乙氧羰基)甲磺酰基螺-[3H-吲哚-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺;N-[1(R)-[(1，2-二氫-1，1-二氧代螺[3H-苯并噻吩-3，4′-哌啶]-1′-基)羰基]-2-(苯基甲氧基)乙基]-2-氨基-2-甲基丙酰胺。
7.權利要求1的下式化合物
其中R1、R2、R3a、R3b、R4、R5、R6、A、B、D、E、F、G、H、I、J和n如權利要求1中所定義。
8.用于制備權利要求1的化合物的方法，該方法包含使下式化合物
與下式化合物反應，
其中R1、R2、R3a、R3b、R4、R5、R6、A、B、D、E、F、G、H、I、J和n如權利要求1中所定義，L是保護基，如果存在的話可將其隨后除去，如果需要可以形成鹽。
9.用于制備權利要求1的化合物的方法，該方法包含使下式化合物
與下式化合物反應，
其中R1、R2、R3a、R3b、R4、R5、R6、A、B、D、E、F、G、H、I、J和n如權利要求1中所定義，L是保護基，如果存在的話可將其隨后除去，如果需要可以形成鹽。
10.提高人或動物的內源性生長激素水平的方法，該方法包含給所述人或動物給藥有效量的權利要求1的化合物。
11.用于提高人或動物的生長激素的內源產生或釋放的組合物，該組合物包含惰性載體和有效量的權利要求1的化合物。
12.用于提高人或動物的生長激素的內源產生或釋放的組合物，該組合物包含惰性載體和與其他生長激素促分泌素如GHRP-6、GHRP-1、GHRP-2、生長激素釋放因子(GRF)、其類似物之一或IGF-1或IGF-2一起使用的有效量的權利要求1的化合物。
13.治療骨質疏松癥的方法，該方法包含用與權利要求1化合物組合的雙磷酸鹽化合物治療患有骨質疏松癥的病人。
14.權利要求13的方法，其中雙磷酸鹽化合物是alendronate。
15.治療骨質疏松癥的組合物，該組合物包含惰性載體、雙磷酸鹽化合物和權利要求1化合物。
16.權利要求15的組合物，其中雙磷酸鹽化合物是alendronate。
全文摘要
本發明公開了確定為螺哌啶類化合物及其同系物的某些新的化合物，它們可促進人和動物的生長激素的釋放。這種特性可被用于促進食用動物的生長，從而使食用肉類產品的生產更加有效，可用于治療人的以生長激素分泌缺乏為特征的生理或醫學上的癥狀，如生長激素缺乏的兒童的身材矮小，以及治療可被生長激素的合成代謝作用改善的醫學上的癥狀。本發明還公開了含有這類螺環化合物作為其活性成分的釋放生長激素的組合物。
文檔編號C07D519/00GK1092071SQ93112858
公開日1994年9月14日 申請日期1993年12月11日 優先權日1992年12月11日
發明者M·H·陳, D·B·R·約翰斯敦, R·P·納功, A·A·帕徹特, J·R·他塔, L·-H·楊 申請人:麥克公司