本發明涉及生物技術領域，具體的說，涉及一種栗蘑的液態菌種培養方法。
背景技術：
栗蘑，又名灰樹花、舞茸、貝葉多孔菌、云蕈、千佛菌、重菇，是一種真菌，屬于食用菌類，含有豐富的氨基酸、蛋白質等多種微量元素，具有松蕈樣芳香，栗蘑肉質柔嫩，味如雞絲，脆似玉蘭。它有利于大腦發育，抑制常見的高血壓、糖尿病，抗衰老，栗蘑中己知的有效成分為β一葡聚糖，尤其是d一組分；它能提高人體t細胞的數量，增強機體對腫瘤的免疫力，具有明顯抗腫瘤效果。而且，栗蘑的產出期在5-10月份，恰在其他食用菌菇產出的空檔季節，產品競爭優勢明顯，銷售市場十分廣闊，有著巨大的發展空間。
但是，目前栗蘑的液態菌種的培養方法大都工藝較為繁瑣，生產周期較長，污染較為嚴重、速度較慢，而且生產成本較高，同時，所制備得到的栗蘑的純度較低，不適宜于工廠化生產。
技術實現要素：
本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種栗蘑的液態菌種培養方法。
為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案是一種栗蘑的液態菌種培養方法，具體包括以下步驟：
提供一種栗蘑的液態菌種培養基；
將栗蘑的原種接種到所述栗蘑的液態菌種培養基中進行密封培養，當所述栗蘑的原種的菌絲萌發后，每天搖動所述栗蘑的液態菌種培養基1次直至獲得栗蘑的栽培種。
提供所述栗蘑的液態菌種培養基的步驟包括：
將松樹枝200-300g、土豆200-400g和水1200ml-1800ml進行混合，然后依次經過煮沸、冷卻、過濾處理得到濾液，將糖類物質15-30g加入到所述濾液中并溶解制得栗蘑的液態菌種營養濾液，取所述栗蘑的液態菌種營養濾液150ml置于培養瓶中，然后向所述培養瓶中加入洗凈烘干的谷殼10-30g和碳酸鈣1-5g，制得栗蘑的液態菌 種培養基。
基于上述，制備所述栗蘑的液態菌種營養濾液步驟中，所述糖類物質是指蔗糖、葡萄糖或麥芽糖等，優選地，用水浸泡新鮮麥粒300-400g，并在室溫下促使所述麥粒發芽直至麥芽長度約為所述麥粒長度的3-6倍，然后，將所述麥芽烘干并磨成麥芽粉，然后向所述麥芽粉中加入所述麥芽粉5-7倍質量的所述濾液，經糖化、過濾后制得栗蘑的液態菌種營養濾液。
所述栗蘑的原種菌絲萌發后，每間隔24小時搖動所述栗蘑的液態菌種培養基1次，使得所述栗蘑的液態菌種培養基中的谷殼完全被浸濕。簡言之，在培養期間，每天定時搖動所述栗蘑的液態菌種培養基1次，比如每天早上8點、每天上午10點或每天下午3點搖動所述栗蘑的液態菌種培養基1次，使谷殼完全浸沒在所述栗蘑的液態菌種培養基中等。
所述栗蘑的原種是通過對栗蘑的母種進行一級培養或二級培養而獲得的。
基于上述，所述栗蘑的母種進行一級培養的步驟包括：
將棉籽殼20-30g、谷殼20-30g、麩皮15-25g、玉米粉8-12g分別用水浸泡，過濾撈出后分別加水煮沸，撈出瀝干，然后進行混合制得混合料，向所述混合料中加入蔗糖5-10g、碳酸鈣1-5g和磷肥1-5g，混合均勻制得栗蘑的一級原種培養基；
對所述栗蘑的一級原種培養基進行高溫滅菌、冷卻處理，然后向所述栗蘑的一級原種培養基中接入栗蘑的母種進行培養，獲得栗蘑的一級原種。
基于上述，其中制備栗蘑的一級原種培養基過程中，將所述棉籽殼浸泡30-35小時，且每5小時換水一次，所述谷殼浸泡3-4小時，所述麩皮、玉米粉浸泡1-3小時。
基于上述，所述栗蘑的母種進行二級培養的步驟包括：
將松針100-200g和水1200ml-1800ml進行混合、煮沸，冷卻、過濾處理，制得栗蘑的二級原種營養液，然后將小麥20-30g、玉米25-40g、谷殼15-25g、米糠15-25g、蔗糖1-5g、石膏1-5g、磷肥1-5g混合均勻制得栗蘑的二級原種培養基混合料，并加入到與所述栗蘑的二級原種培養基混合料等質量的所述栗蘑的二級原種營養液中，混合均勻制得栗蘑的二級原種培養基；
將所述栗蘑的二級原種培養基進行高溫滅菌、冷卻處理，然后將栗蘑的一級原種接入到所述栗蘑的二級原種培養基中進行培養，獲得栗蘑的二級原種。
基于上述，所述栗蘑的母種的培養方法包括如下步驟：
將土豆50-60g、瓊脂8-14g、維生素b劑0.5-0.8g及葡萄糖5-7g加入1500ml的水中進行加熱，直至所述瓊脂全部煮化，得到栗蘑的母種培養基；對所述栗蘑的母種培養基進行高溫滅菌、冷卻處理，然后將栗蘑的菌株菌絲接入到所述栗蘑的母種培養基進行培養，獲得所述栗蘑的母種。
本發明相對現有技術具有突出的實質性特點和顯著的進步，具體的說，本發明所提供的栗蘑的液態菌種培養方法，在栗蘑的液態菌種培養的過程中，不需要對培養基進行連續搖動，只需每天對栗蘑的液態菌種培養基搖動一次即可，降低了培養過程所利用的設備的利用率，從而降低了生產成本，而且該培養方法簡單、易于操作；每天采用定時搖動保證了所述栗蘑的液態菌種菌絲營養液的均勻性。進一步講，栗蘑的菌絲的生長以谷殼為載體，利用谷殼之間的間隙吸收營養，并附著在液態表面上的谷殼上進行生長，無需額外向其培養基中通入無菌空氣，減少了繁雜的操作和許多昂貴的無菌設備，節約了成本并縮短了菌種的培育時間。
更進一步講，本發明中所述栗蘑的液態菌種培養基的原料經過煮汁后再使用，使得菌種培養基的養料分布比較均勻，有利于栗蘑的菌絲體吸收利用，產出的菌種整齊均勻。在菌種培育的各階段采用不同的培養基原料，使得不同培養階段的栗蘑的能夠對培養基中的營養成分充分吸收，達到最好的培育效果。
具體實施方式
下面通過具體實施方式，對本發明的技術方案做進一步的詳細描述。
實施例1
本實施例提供一種栗蘑的液態菌種培養方法，選用粗柄栗蘑的926號原種作為栗蘑的栽培種的菌株進行培養，具體包括以下步驟：
將松樹枝200g、土豆200g和水1800ml混合、煮沸并保持30分鐘，然后冷卻至室溫，過濾后制得濾液；將蔗糖30g加入到所述濾液中并溶解制得栗蘑的液態菌種營養濾液，取所述栗蘑的液態菌種營養濾液150ml置于培養瓶中，然后向所述培養瓶中加入洗凈烘干的谷殼20g和碳酸鈣5g，制得栗蘑的液態菌種培養基。
將所述栗蘑的液態菌種培養基放置于滅菌鍋中，在1.5kg/cm3、110℃下滅菌0.5小時，取出冷卻至室溫后，將裝有所述栗蘑的液態菌種培養基的三角瓶置于接種箱中密封2小時，然后將粗柄栗蘑的926號原種接入到所述栗蘑的液態菌種培養基中，置于30℃的培養室中進行密封培養，當所述栗蘑的原種菌絲萌發后，每天上午10點整 定時搖動所述培養基1次至所述培養基中的谷殼完全被浸濕，直至獲得粗柄栗蘑的926號栽培種。
為了更好的了解不同時期栗蘑的菌絲體的生長情況，確定液態培養時間，在生長時間為0-144h范圍內，利用專用的采樣器每12h進行1次取樣，測定栗蘑的菌絲生物量。具體操作步驟為：栗蘑的菌種每階段培養結束后選用采樣器抽取所述三角瓶中適量的液體，以轉速為4000r/min速度離心15min，然后棄去清液，將得到的栗蘑的菌絲體用蒸餾水清洗數次后，置于真空干燥箱中，40℃下烘干至恒重，計算培養得到的栗蘑的菌絲生物量。
實施例2
本實施例提供一種栗蘑的液態菌種培養方法，選用粗柄栗蘑的926號原種作為栗蘑的栽培種的菌株進行培養，具體培養步驟如下：將松樹枝300g、土豆400g和水1800ml混合、煮沸并保持30分鐘，然后冷卻至室溫，過濾后制得濾液；取新鮮的麥粒400g，在清水中浸泡12小時，室溫下讓其發芽，待其芽長約為麥粒的3倍時，取出在60-80℃下烘干，磨成麥芽粉，然后將所述麥芽粉加入所述濾液中，加入的所述濾液是所述麥芽粉的6倍，在50℃的條件下糖化6小時經4層紗布過濾后制得栗蘑的液態菌種營養濾液；取所述栗蘑的液態菌種營養濾液150ml置于培養瓶中，然后向所述培養瓶中加入洗凈烘干的谷殼20g和碳酸鈣5g，制得栗蘑的液態菌種培養基。
將所述栗蘑的液態菌種培養基放置于滅菌鍋中，在1.5kg/cm3、110℃下滅菌0.5小時，取出冷卻至室溫后，將裝有所述栗蘑的液態菌種培養基的三角瓶置于接種箱中密封2小時，然后將粗柄栗蘑的926號原種接入到所述栗蘑的液態菌種培養基中，置于30℃的培養室中進行密封培養，當所述栗蘑的原種菌絲萌發后，每天上午10點整定時搖動所述培養基1次至所述培養基中的谷殼完全被浸濕，直至獲得粗柄栗蘑的926號栽培種。
實驗測得采用此液態菌種培養基培養出的粗柄栗蘑的926號的生物量為平均值為8.545g/l，生產成本為0.355元/g。
實施例3
本實施例提供一種栗蘑的液態菌種培養方法，選用粗柄栗蘑的926號原種作為栗蘑的栽培種的菌株進行培養，與實施例1不同的是，所述粗柄栗蘑的926號栽培種的培養過程中所采用的培養基原料如下：麥麩40g、玉米粉20g、黃豆粉10g、kh2po41g、 mgso41g，實驗測得采用此液態菌種培養基培養出的粗柄栗蘑的926號的生物量為平均值為7.148g/l，生產成本為0.465元/g。
實施例4
本實施例提供一種栗蘑的液態菌種培養方法，選用粗柄栗蘑的926號原種作為栗蘑的栽培種的菌株進行培養，與實施例1、實施例2和實施例3均不同的是，所述粗柄栗蘑的926號栽培種的培養過程中所采用的培養基原料如下：土豆200g、蔗糖30g、酵母膏5g、kh2po40.5g、mgso40.5g，實驗測得采用此液態菌種培養基培養出的粗柄栗蘑的926號的生物量為平均值為6.754g/l，生產成本為0.41元/g。
最后應當說明的是：以上實施例僅用以說明本發明的技術方案而非對其限制；盡管參照較佳實施例對本發明進行了詳細的說明，所屬領域的普通技術人員應當理解：依然可以對本發明的具體實施方式進行修改或者對部分技術特征進行等同替換；而不脫離本發明技術方案的精神，其均應涵蓋在本發明請求保護的技術方案范圍當中。