一種基于油茶枝粉的蜜環菌培養基以及蜜環菌液體菌種制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種基于油茶枝粉的蜜環菌培養基，包括以下重量份組分：油茶枝粉、麩皮、可溶性淀粉、花椒籽提取物、納米級電氣石粉、細菌納米纖維素等。本發明采用主料油茶枝粉、麩皮、黃豆粉、可溶性淀粉等為培養基制備蜜環菌液體菌種，實現了油茶枝粉在蜜環菌液體菌種培養中的營養，有利于增強蜜環菌液體菌種的抗氧化性；加入了納米細菌纖維素，通過納米細菌纖維素改善液體培養基的均勻性、穩定性，為液體菌種菌絲球的生長發育提供了良好的空間，使得菌絲球分布均勻，大小合適，可以滿足移栽需要，而無需進一步的機械破碎；通過采用納米細菌纖維素對具有抑制雜菌功效的花椒提取的包埋處理，為菌絲球向子實體轉化替換了良好的生存空間。
【專利說明】
一種基于油茶枝粉的蜜環菌培養基以及蜜環菌液體菌種制備方法
技術領域
[0001]本發明涉及液體菌種技術領域，尤其涉及一種基于油茶枝粉的蜜環菌培養基以及蜜環菌液體菌種制備方法。
【背景技術】
[0002]蜜環菌生產過程中，液體菌種具有固體菌種所不可比擬的優勢，液體菌種具有生產周期短，菌齡短而一致，純度高、活力強，接種簡便快捷，易實行工廠化、規模化、標準化生產等優點。現在，越來越多的人都在研究和使用液體菌種，而液體菌種的推廣和使用也是實現食用菌工廠化、規模化、標準化的必然趨勢。但是液體菌種也存在著自身的缺陷和不足:
1、液體菌種萌發點多生長速度快，但是穿透力不強，培養料過粗菌絲不易吃透培養料，菌絲將沿著培養料表面快速生長，培養料內部菌絲量很少，嚴重影響了菌種產量和質量的問題；
2、常規的液體菌種雖然解決了固體菌種存在的一些問題，能明顯縮短栽培周期、增強菌種活力和抗逆性、降低菌種污染率、使得菌種質量整齊度提高，但仍存在例如發酵得到的液體菌種中菌球的密度、大小、均勻度等物理特性不是很理想等不足，如果用攪拌剪切的方法將菌球打碎，得到的菌種均勻度會更理想，但是，高速攪拌粉碎和打漿的剪切力對菌種傷害極大，對菌種整體的質量影響較為嚴重。開發分布均勻且具有更小粒徑菌絲球的高質量的液體菌種具有重要意義。公開號CN105309194A《食用菌微粒液體菌種生產新技術》提供了一種菌絲球粒徑在0.5mm的食用菌微粒液體菌種，采用的增加食用菌液體菌種培養液通氣量，使通氣量在1: 0.6—0.9V/V.min為適宜，同時在通氣發酵罐內裝置攪拌器使培養液渦流運動延長氣泡的運動路線的技術操作方法，該生產微粒液體菌種的方法是從生產工藝上進行改進，并沒有液體菌種培養基方面進行改進，實施起來技術難度要求高;公開號CN105130516A《分子級生物培養基制作方法》提到了分子級生物培養基營養成分可以快速全面的被吸收，促進液體菌種的生長，但是并沒有提到分子級生物培養基對液體菌種菌絲球直徑大小的影響。發展一種基于液體菌種培養基原材料成分改進液體菌種菌絲球直徑改善食用菌菌種產量和質量的技術，具有重要的意義。
[0003]細菌納米纖維素是自然界的豐富的可再生產物之一，細菌納米纖維素是纖維素的物理最小結構單元，是指直徑1-1OOnm之間的纖維，細菌納米纖維素質輕，生物相容性好，可降解、可再生，反應活性高，且具有楊氏模量高，聚合度高，潔凈度高，強度高，比表面積大等優勢。將細菌納米纖維素作作為食用菌液體菌種培養基原材料，對食用菌液體菌種的菌絲球分布以及直徑具有一定的影響，進而起到改善食用菌菌種質量的作用。
【發明內容】
[0004]本發明目的就是為了彌補已有技術的缺陷，提供一種基于油茶枝粉的蜜環菌培養基以及蜜環菌液體菌種制備方法。
[0005]本發明是通過以下技術方案實現的: 一種基于油茶枝粉的蜜環菌培養基，包括以下重量份組分:油茶枝粉25-26、麩皮38-40、可溶性淀粉27-28、葡萄糖9-10、麥芽糖8-9、胰蛋白胨11-12、酵母膏9-10、芋酸4-5、胺鮮酯1-1.2、乙酸鈉1.2-1.3、碳酰二胺0.9-1、麥精1.2-1.3、花椒籽提取物2.2-2.3、七水硫酸鎂1.2-1.3、石膏0.6-0.7、磷酸二氫鉀0.5-0.6、過磷酸鈣0.7-0.8、納米級電氣石粉5.6-6、細菌納米纖維素6.2-6.5、適量的水。
[0006]—種采用上述的培養基制備蜜環菌液體菌種的方法，包括以下步驟:
(I )、將納米級電氣石粉和水按照0.lg/L混合，通電激發制備無菌水備用;將七水硫酸鎂、石膏、磷酸二氫鉀、過磷酸鈣的總量和無菌水按lg/L混合在30°C攪拌溶解得溶液一;將葡萄糖、麥芽糖、胰蛋白胨、酵母膏、胺鮮酯、乙酸鈉、碳酰二胺、麥精的總量和無菌水按20g/L混合攪拌溶解得溶液二;將油茶枝粉、麩皮、芋酸一起放入鍋中加入總重量4倍的水小火文煮3h，之后過濾，得濾液和濾渣，將濾液、可溶性淀粉的總量和無菌水按300g/L混合攪拌，并在進行98°C進行巴氏滅菌滅酶lOmin，得溶液三;將濾渣和一半的納米細菌纖維素混合攪拌均勻放入超微納米粉碎機中進行粉碎處理20min，之后采用高溫膨化機處理15min得改性超微復合粉備用；
(2 )、將溶液三保持20 0C、溶液二保持25 0C、溶液一保持30 V，先將溶液一加入到溶液二中混合攪拌均勻得復合液，在將該復合液加入到溶液三中混合攪拌均勻得營養液，并調整pH，此后對該營養液進行通電激發處理30min得液體培養基備用；
(3)、將蜜環菌母種在無菌環境中先接種到一半的液體培養基上進行液體發酵，發酵條件為pH5.4-5.5、接種量14%、溫度26-28°C、搖床轉速190r/min、培養24-25h，得蜜環菌液體菌種一；
(4)、將剩余一半細菌納米纖維素、花椒籽提取物以及總重量I倍的無菌水混合攪拌均勻之后，采用噴霧干燥技術進行包埋處理，得具有抑制雜菌功效的細菌納米纖維素備用;將剩余一半的液體培養基、具有抑制雜菌功效的細菌納米纖維素混合均勻，之后加入改性超微復合粉以及總重量3倍的無菌水，高壓均質之后，通電激化配合高溫再次滅菌，并放置到無菌培養瓶中，得復合培養基，將步驟(3)得到的蜜環菌液體菌種一按50%的接種量在無菌環境中接種到該培養瓶中，溫度24-25°C，搖床轉速190r/min、并鼓入無菌氧氣，培養50-55h即得。
[0007]本發明的優點是:
本發明采用主料油茶枝粉、麩皮、黃豆粉、可溶性淀粉、葡萄糖、麥芽糖、胰蛋白胨配合營養物質碳酰二胺、芋酸、酵母膏、胺鮮酯、花椒籽提取物、乙酸鈉、麥精等為培養基制備蜜環菌液體菌種，實現了油茶枝粉在蜜環菌液體菌種培養中的營養，有利于增強蜜環菌液體菌種的抗氧化性;采用的原材料價格成本低，可以實現了蜜環菌液體菌種的經濟獲取；同時，在培養基的制備過程中，加入了納米細菌纖維素，通過納米細菌纖維素改善液體培養基的均勻性、穩定性，為液體菌種菌絲球的生長發育提供了良好的空間，使得菌絲球分布均勻，大小合適，可以滿足移栽需要，而無需進一步的機械破碎;另外，培養基中加入了納米電氣石粉，通過納米電氣石粉的輔助作用，可以耗能較少的實現培養基的滅菌;再者;通過采用納米細菌纖維素對具有抑制雜菌功效的花椒提取的包埋處理，為菌絲球向子實體轉化替換了良好的生存空間。
【具體實施方式】
[0008]一種基于油茶枝粉的蜜環菌培養基，包括以下重量份組分:油茶枝粉25、麩皮38、可溶性淀粉27、葡萄糖9、麥芽糖8、胰蛋白胨11、酵母膏9、芋酸4、胺鮮酯1、乙酸鈉1.2、碳酰二胺0.9、麥精1.2、花椒籽提取物2.2、七水硫酸鎂1.2、石膏0.6、磷酸二氫鉀0.5、過磷酸鈣
0.7、納米級電氣石粉5.6、細菌納米纖維素6.2、適量的水。
[0009]—種采用上述的培養基制備蜜環菌液體菌種的方法，包括以下步驟:
(I )、將納米級電氣石粉和水按照0.lg/L混合，通電激發制備無菌水備用;將七水硫酸鎂、石膏、磷酸二氫鉀、過磷酸鈣的總量和無菌水按lg/L混合在30°C攪拌溶解得溶液一;將葡萄糖、麥芽糖、胰蛋白胨、酵母膏、胺鮮酯、乙酸鈉、碳酰二胺、麥精的總量和無菌水按20g/L混合攪拌溶解得溶液二;將油茶枝粉、麩皮、芋酸一起放入鍋中加入總重量4倍的水小火文煮3h，之后過濾，得濾液和濾渣，將濾液、可溶性淀粉的總量和無菌水按300g/L混合攪拌，并在進行98°C進行巴氏滅菌滅酶lOmin，得溶液三;將濾渣和一半的納米細菌纖維素混合攪拌均勻放入超微納米粉碎機中進行粉碎處理20min，之后采用高溫膨化機處理15min得改性超微復合粉備用；
(2 )、將溶液三保持20 0C、溶液二保持25 0C、溶液一保持30 V，先將溶液一加入到溶液二中混合攪拌均勻得復合液，在將該復合液加入到溶液三中混合攪拌均勻得營養液，并調整pH，此后對該營養液進行通電激發處理30min得液體培養基備用；
(3)、將蜜環菌母種在無菌環境中先接種到一半的液體培養基上進行液體發酵，發酵條件為pH5.4、接種量14%、溫度26°C、搖床轉速190r/min、培養24h，得蜜環菌液體菌種一；
(4)、將剩余一半細菌納米纖維素、花椒籽提取物以及總重量I倍的無菌水混合攪拌均勻之后，采用噴霧干燥技術進行包埋處理，得具有抑制雜菌功效的細菌納米纖維素備用;將剩余一半的液體培養基、具有抑制雜菌功效的細菌納米纖維素混合均勻，之后加入改性超微復合粉以及總重量3倍的無菌水，高壓均質之后，通電激化配合高溫再次滅菌，并放置到無菌培養瓶中，得復合培養基，將步驟(3)得到的蜜環菌液體菌種一按50%的接種量在無菌環境中接種到該培養瓶中，溫度24°C，搖床轉速190r/min、并鼓入無菌氧氣，培養50h即得。
【主權項】
1.一種基于油茶枝粉的蜜環菌培養基，其特征在于，包括以下重量份組分:油茶枝粉25-26、麩皮38-40、可溶性淀粉27-28、葡萄糖9_10、麥芽糖8_9、胰蛋白胨11_12、酵母膏9-10、芋酸4-5、胺鮮酯1-1.2、乙酸鈉1.2-1.3、碳酰二胺0.9-1、麥精1.2-1.3、花椒籽提取物2.2-2.3、七水硫酸鎂1.2-1.3、石膏0.6-0.7、磷酸二氫鉀0.5-0.6、過磷酸鈣0.7-0.8、納米級電氣石粉5.6-6、細菌納米纖維素6.2-6.5、適量的水。2.—種采用權利要求1所述的培養基制備蜜環菌液體菌種的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)、將納米級電氣石粉和水按照0.1g/L混合，通電激發制備無菌水備用；將七水硫酸鎂、石膏、磷酸二氫鉀、過磷酸鈣的總量和無菌水按lg/L混合在30°C攪拌溶解得溶液一;將葡萄糖、麥芽糖、胰蛋白胨、酵母膏、胺鮮酯、乙酸鈉、碳酰二胺、麥精的總量和無菌水按20g/L混合攪拌溶解得溶液二;將油茶枝粉、麩皮、芋酸一起放入鍋中加入總重量4倍的水小火文煮3h，之后過濾，得濾液和濾渣，將濾液、可溶性淀粉的總量和無菌水按300g/L混合攪拌，并在進行98°C進行巴氏滅菌滅酶lOmin，得溶液三;將濾渣和一半的納米細菌纖維素混合攪拌均勻放入超微納米粉碎機中進行粉碎處理20min，之后采用高溫膨化機處理15min得改性超微復合粉備用； (2)、將溶液三保持20°C、溶液二保持25°C、溶液一保持30°C，先將溶液一加入到溶液二中混合攪拌均勻得復合液，在將該復合液加入到溶液三中混合攪拌均勻得營養液，并調整pH，此后對該營養液進行通電激發處理30min得液體培養基備用； (3)、將蜜環菌母種在無菌環境中先接種到一半的液體培養基上進行液體發酵，發酵條件為pH5.4-5.5、接種量14%、溫度26-28°C、搖床轉速190r/min、培養24-25h，得蜜環菌液體菌種一； (4)、將剩余一半細菌納米纖維素、花椒籽提取物以及總重量I倍的無菌水混合攪拌均勻之后，采用噴霧干燥技術進行包埋處理，得具有抑制雜菌功效的細菌納米纖維素備用;將剩余一半的液體培養基、具有抑制雜菌功效的細菌納米纖維素混合均勻，之后加入改性超微復合粉以及總重量3倍的無菌水，高壓均質之后，通電激化配合高溫再次滅菌，并放置到無菌培養瓶中，得復合培養基，將步驟(3)得到的蜜環菌液體菌種一按50%的接種量在無菌環境中接種到該培養瓶中，溫度24-25°C，搖床轉速190r/min、并鼓入無菌氧氣，培養50-55h即得。
【文檔編號】C12N1/14GK106085882SQ201610552286
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年7月14日
【發明人】儲榮生
【申請人】安徽天明生態林農科技開發有限公司