1.引物組合,由引物ABO-F1、引物ABO-F2、引物ABO-F3、引物ABO-R1、引物ABO-R2和引物ABO-R3組成;
所述引物ABO-F1為如下A1)或A2):
A1)序列表中的序列1所示的單鏈DNA分子;
A2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子;
所述引物ABO-F2為如下A3)或A4):
A3)序列表中的序列2所示的單鏈DNA分子;
A4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子;
所述引物ABO-F3為如下A5)或A6):
A5)序列表中的序列3所示的單鏈DNA分子;
A6)將序列3經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列3具有相同功能的DNA分子;
所述引物ABO-R1為如下A7)或A8):
A7)序列表中的序列4所示的單鏈DNA分子;
A8)將序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子;
所述引物ABO-R2為如下A9)或A10):
A9)序列表中的序列5所示的單鏈DNA分子;
A10)將序列5經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列5具有相同功能的DNA分子;
所述引物ABO-R3為如下A11)或A12):
A11)序列表中的序列6所示的單鏈DNA分子;
A12)將序列6經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列6具有相同功能的DNA分子。
2.權利要求1所述引物組合的應用,為(b1)或(b2):
(b1)制備用于檢測ABO血型基因型的試劑盒;
(b2)檢測ABO血型基因型。
3.含有權利要求1所述引物組合的試劑盒;所述試劑盒用于檢測ABO血型基因型。
4.權利要求3所述試劑盒的制備方法,包括將各條引物單獨包裝的步驟。
5.一種檢測ABO血型基因型的方法,包括如下步驟:以待測樣本的基因組DNA或總DNA為模板,采用權利要求1所述引物組合進行PCR擴增,得到PCR擴增產物,然后進行如下判斷:
(d1)如果所述PCR擴增產物中含有DNA片段甲和DNA片段丁,且不含有DNA片段乙和DNA片段丙,則待測樣本的ABO血型基因型為AA;
(d2)如果PCR擴增產物中含有所述DNA片段甲、所述DNA片段乙和所述DNA片段丁,且不含有所述DNA片段丙,則待測樣本的ABO血型基因型為AB;
(d3)如果PCR擴增產物中含有所述DNA片段甲、所述DNA片段丙和所述DNA片段丁,且不含有所述DNA片段乙,則待測樣本的ABO血型基因型為AO;
(d4)如果PCR擴增產物中含有所述DNA片段乙和所述DNA片段丁,且不含有所述DNA片段甲和所述DNA片段丙,則待測樣本的ABO血型基因型為BB;
(d5)如果PCR擴增產物中含有所述DNA片段甲、所述DNA片段乙、所述DNA片段丙和所述DNA片段丁,則待測樣本的ABO血型基因型為BO;
(d6)如果PCR擴增產物中含有所述DNA片段甲和所述DNA片段丙,且不含有所述DNA片段乙和所述DNA片段丁,則待測樣本的ABO血型基因型為OO;
所述DNA片段甲的核苷酸序列如序列表中的序列7所示;
所述DNA片段乙的核苷酸序列如序列表中的序列8所示;
所述DNA片段丙的核苷酸序列如序列表中的序列9所示;
所述DNA片段丁的核苷酸序列如序列表中的序列10所示。
6.一種檢測ABO血型基因型的方法,包括如下步驟:檢測待測樣本的基因組DNA或總DNA中是否含有DNA片段甲、DNA片段乙、DNA片段丙或DNA片段丁,然后進行如下判斷:
(e1)如果待測樣本的基因組DNA或總DNA中含有所述DNA片段甲和所述DNA片段丁,且不含有所述DNA片段乙和所述DNA片段丙,則待測樣本的ABO血型基因型為AA;
(e2)如果待測樣本的基因組DNA或總DNA中含有所述DNA片段甲、所述DNA片段乙和所述DNA片段丁,且不含有所述DNA片段丙,則待測樣本的ABO血型基因型為AB;
(e3)如果待測樣本的基因組DNA或總DNA中含有所述DNA片段甲、所述DNA片段丙和所述DNA片段丁,且不含有所述DNA片段乙,則待測樣本的ABO血型基因型為AO;
(e4)如果待測樣本的基因組DNA或總DNA中含有所述DNA片段乙和所述DNA片段丁,且不含有所述DNA片段甲和所述DNA片段丙,則待測樣本的ABO血型基因型為BB;
(e5)如果待測樣本的基因組DNA或總DNA中含有所述DNA片段甲、所述DNA片段乙、所述DNA片段丙和所述DNA片段丁,則待測樣本的ABO血型基因型為BO;
(e6)如果待測樣本的基因組DNA或總DNA中含有所述DNA片段甲和所述DNA片段丙,且不含有所述DNA片段乙和所述DNA片段丁,則待測樣本的ABO血型基因型為OO;
所述DNA片段甲的核苷酸序列如序列表中的序列7所示;
所述DNA片段乙的核苷酸序列如序列表中的序列8所示;
所述DNA片段丙的核苷酸序列如序列表中的序列9所示;
所述DNA片段丁的核苷酸序列如序列表中的序列10所示。
7.一種作為ABO血型基因座的等位基因分型標準物的模板的DNA組合物,含有DNA片段甲、DNA片段乙、DNA片段丙和DNA片段丁;
所述DNA片段甲的核苷酸序列如序列表中的序列7所示;
所述DNA片段乙的核苷酸序列如序列表中的序列8所示;
所述DNA片段丙的核苷酸序列如序列表中的序列9所示;
所述DNA片段丁的核苷酸序列如序列表中的序列10所示。
8.一種作為ABO血型基因座的等位基因分型標準物的模板的重組質粒組合物,其特征在于:所述重組質粒組合物是通過如下方法制備的:將DNA片段甲、DNA片段乙、DNA片段丙和DNA片段丁分別插入到4個載體中,得到4個重組載體;將所述4個重組載體混合,得到重組質粒組合物;
所述DNA片段甲的核苷酸序列如序列表中的序列7所示;
所述DNA片段乙的核苷酸序列如序列表中的序列8所示;
所述DNA片段丙的核苷酸序列如序列表中的序列9所示;
所述DNA片段丁的核苷酸序列如序列表中的序列10所示。
9.如權利要求8所述重組質粒組合物,其特征在于:所述載體為克隆載體。
10.權利要求7所述DNA組合物、或、權利要求8或9所述重組質粒組合物的應用,為a1)或a2)或a3):
a1)作為ABO血型基因座的等位基因分型標準物的模板;
a2)制備ABO血型基因座的等位基因分型標準物;
a3)檢測ABO血型基因座的等位基因分型。