本發明涉及二氫楊梅素環磷酰胺衍生物，及其在制藥中的應用，屬于醫藥技術領域。
背景技術：
文獻報道，二氫楊梅素對白血病細胞hl-60、k562以及肝癌細胞bel-7404、腹水型肝癌h22瘤株、人鼻咽癌hk-1和人乳腺癌mcf-7細胞的增殖均有顯著的抑制作用，體內對小鼠移植性b16黑色素瘤的生長也具有顯著的抑制作用，此外還有清除自由基、鎮咳祛痰、降脂保肝、抗血栓、抗氧化及降血糖等作用。二氫楊梅素在藤茶等植物中含量高，來源豐富，且具有多方面的顯著功效，以其為先導物，克服其溶解性和穩定性差的缺點，發現療效更好的新藥，是新藥研發的一個方向。
環磷酰胺為氮芥與磷酰胺基結合而成的化合物，即能非特異性殺傷抗原敏感性小淋巴細胞，又能抑制細胞增殖，限制其轉化為免疫母細胞，可用于治療各種自身免疫性疾病。臨床上用于治療白血病，淋巴瘤和實體瘤等惡性病，但它具有膀胱毒性，需要進一步結構修飾，降低毒性，提高療效。
本發明將環磷酰胺結構引入二氫楊梅素結構中，以期獲得抗腫瘤活性高、毒性低的藥物。
技術實現要素：
本發明的目的在于提供一種二氫楊梅素環磷酰胺衍生物，其具有抗癌作用。
本發明的另一目的在于提供上述二氫楊梅素環磷酰胺衍生物的制備方法。
本發明的再一目的在于提供上述二氫楊梅素環磷酰胺衍生物的用途。
以下對本發明進行詳細描述。
本發明提供的二氫楊梅素環磷酰胺衍生物或其藥學可接受的水合物，包括其立體異構體或互變異構體，結構如下所示：
式中，r各自獨立為h，酰基，甲基。
所述的二氫楊梅素環磷酰胺衍生物具體結構實例如下：
本發明還提供了上述化合物的制備方法：
式中，r各自獨立為h，酰基，甲基。
本發明的二氫楊梅素環磷酰胺衍生物或其藥學可接受的水合物，包括其立體異構體或互變異構體，具有抗腫瘤作用。
通過以下實施例進一步舉例說明本發明，但應注意本發明的范圍并不受這些實施例的任何限制。
具體實施方式
實施例1
中間體iia的制備
n2下，取二氫楊梅素200mg(0.62mmol)，溶于7ml無水dmf溶液中，加入無水552mg(2.5mmol)k2co3，緩慢加入383mg(2.7mmol)碘甲烷，40℃反應24h，停止反應，加1ml醋酸，過濾，減壓蒸干，回收溶劑，硅膠柱層析純化（v石油醚：v乙酸乙酯=6:1），得到7,3’,4’,5’-四甲氧基二氫楊梅素中間體（iia）。收率26.2%。
中間體iib的制備：
n2下，取二氫楊梅素200mg(0.62mmol)，溶于7ml無水dmf溶液中，加入無水690mg(3.1mmol)k2co3，緩慢加入710mg(3.1mmol)碘甲烷，40℃反應24h，停止反應，加1ml醋酸，過濾，減壓蒸干，回收溶劑，硅膠柱層析純化（v石油醚：v乙酸乙酯=6:1），得到3,7,3’,4’,5’-五甲氧基二氫楊梅素中間體（iib）。收率27.0%。
中間體iic的制備：
n2下，取二氫楊梅素200mg(0.62mmol)，溶于7ml無水dmf溶液中，加入無水828mg(3.8mmol)k2co3，緩慢加入852mg(3.8mmol)碘甲烷，其它操作同上，得到3,7,9,3’,4’,5’-六甲氧基二氫楊梅素中間體（iic）。收率36.2%。
中間體iid的制備：
n2下，取二氫楊梅素200mg(0.62mmol)，加入5ml醋酐中，超聲下混勻，避光放置2天，倒入冰水中研磨，過濾，干燥，乙酸乙酯-乙醇重結晶，得到3,7,3’,4’,5’-五乙酰基二氫楊梅素中間體（iid），收率73%，m.p.163-165℃。
中間體iie的制備：
n2下，取二氫楊梅素200mg(0.62mmol)，加入5ml醋酐中，超聲下混勻，避光放置2天，倒入冰水中研磨，過濾，干燥，乙酸乙酯-乙醇重結晶，得到3,5，7,3’,4’,5’-六乙酰基二氫楊梅素中間體（iie），收率68%，m.p.173-175℃。
中間體iif的制備：
n2保護下，將320mg(1.0mmol)二氫楊梅素溶于5mldmf中，加入5滴吡啶和112mg(1.1mmol)ac2o，室溫反應10h，減壓蒸除溶劑，柱層析純化（v氯仿：v乙醇=6:1,4:1,2:1梯度淋洗），得7-乙酰基二氫楊梅素。
n2保護下，將362mg(1.0mmol)7-乙酰基二氫楊梅素溶于5mldmf中，加入625mg(4.4mmol)mei和607mg(4.4mmol)k2co3,室溫反應過夜，過濾，加入10ml濃度為30%的乙二胺甲醇溶液，40℃反應8h，減壓蒸干，柱層析純化（v氯仿：v乙醇=6:1,4:1,2:1梯度淋洗），得3,3’,4’,5’-四甲氧基二氫楊梅素（中間體iif）,收率33%。
中間體iig的制備：
n2保護下，稱取1.6g（5mmol）二氫楊梅素（含量98%)置于50ml的三角瓶中，然后依次加入15ml醋酸酐和1.2g硼酸，混勻，避光放置3天，倒入冰水中研磨，有黃色硼酸絡合物析出，過濾，將所得黃色固體物加入40ml含有10%的hc1溶液，于60℃反應30min，除去硼酸，有黃白色固體生成，過濾，用水淋洗至中性，收集固體，干燥后即得粗品。用etoh重結晶，得白色晶體，即二氫楊梅素四乙酰化產物(中間體iig)，產率89%。m.p.205-206℃。
實施例2
中間體iiia-g和8-硝基二氫楊梅素的制備:
n2下，分別將0.2ml70%hno3與10ml醋酸混合，65℃分別滴加0.5mmol中間體iia-g/250ml醋酸的溶液，滴畢，反應2h，冷卻，反應液倒入200ml冰水中，攪拌，析出固體，過濾，水洗，乙醇重結晶，分別得到iiia，收率70%；iiib，收率76%；iiic，收率77%；iiid，收率79%；iiie，收率81%；iiif，收率78%；iiig，收率71%。
用0.5mmol二氫楊梅素代替0.5mmol中間體iia-g，其它操作不變，得到8-硝基二氫楊梅素，收率67%。
實施例3
中間體iva-g和8-氨基二氫楊梅素的制備:
高壓釜中，分別將0.5mmol的iiia-g加入到100ml乙醇中，分別加入30mg10%的pd-c，用n2置換空氣后，通入h2，80℃反應2h，冷卻，過濾，旋蒸出乙醇，硅膠柱層析純化，分別得到iva，收率87%；iva，收率87%；ivb，收率89%；ivc，收率89%；ivd，收率90%；ive，收率91%；ivf，收率87%；ivg，收率89%。
用0.5mmol8-硝基二氫楊梅素代替0.5mmol中間體iiia-g，其它操作不變，得到8-氨基二氫楊梅素，收率92%。
實施例4
中間體va-g和8-（3-羥基丙氨基）二氫楊梅素的制備:
n2下，分別將0.5mmol的iva-g溶于50ml丙酮，分別加入56.4mg(0.6mmol)的3-氯丙醇和82.8mg(0.6mmol)的k2co3，回流反應7h，冷卻，過濾，蒸除溶劑，硅膠柱層析純化，分別得到va，收率67%；vb，收率71%；vc，收率69%；vd，收率72%；ve，收率67%；vf，收率65%；vg，收率69%。
用0.5mmol的8-氨基二氫楊梅素代替0.5mmol的iva-g，得到8-（3-羥基丙氨基）二氫楊梅素，收率70%。
實施例5
化合物（1-8）的制備:
n2下，分別將0.5mmol的va-g或8-（3-羥基丙氨基）二氫楊梅素溶于50ml丙酮，冷卻至0℃，分別加入141mg(0.55mmol)氮芥磷酰二氯和111mg(1.1mmol)et3n，自然升至室溫，反應8小時，過濾，濾液濃縮，柱層析純化，分別得化合物（1-8）。
化合物（1）：收率80%；esi-ms(m/z):578[m]+；1hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.86(m,2h),3.15(m,2h),3.34(m,4h),3.68(m,4h),4.42(d,j=11hz,1h),4.45(m,2h),4.93(d,j=11hz,1h),5.57(s,1h),5.87(s,1h),7.40(s,2h),8.19(s,1h),8.90(s,2h),10.07(s,1h),11.85(s,1h)。
化合物（2）：收率84%；esi-ms(m/z):634[m]+；1hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.85(m,2h),3.16(m,2h),3.34(m,4h),3.68(m,4h),3.91(s,9h),3.94(s,3h),4.42(d,j=11hz,1h),4.45(m,2h),4.93(d,j=11hz,1h),5.56(s,1h),5.86(s,1h),7.40(s,2h),11.85(s,1h)。
化合物（3）：收率83%；esi-ms(m/z):648[m]+；1hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.86(m,2h),3.15(m,2h),3.35(m,4h),3.44(s,3h),3.68(m,4h),3.91(s,9h),3.94(s,3h),4.42(d,j=11hz,1h),4.45(m,2h),4.93(d,j=11hz,1h),5.86(s,1h),7.40(s,2h),11.85(s,1h)。
化合物（4）：收率81%；esi-ms(m/z):662[m]+；1hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.86(m,2h),3.16(m,2h),3.35(m,4h),3.44(s,3h),3.68(m,4h),3.91(s,12h),3.94(s,3h),4.42(d,j=11hz,1h),4.45(m,2h),4.93(d,j=11hz,1h),5.86(s,1h),7.40(s,2h)。
化合物（5）：收率81%；esi-ms(m/z):788[m]+；1hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.85(m,2h),2.28(s,6h),2.30(s,6h),2.35(s,3h),3.15(m,2h),3.35(m,4h),3.68(m,4h),5.82(m,1h),4.45(m,2h),5.93(m,1h),6.96(s,1h),7.40(s,2h),11.37(s,1h)。
化合物（6）：收率85%；esi-ms(m/z):830[m]+；1hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.85(m,2h),2.28(s,6h),2.30(s,6h),2.35(s,6h),3.15(m,2h),3.35(m,4h),3.68(m,4h),5.82(m,1h),4.45(m,2h),5.93(m,1h),6.96(s,1h),7.40(s,2h)。
化合物（7）：收率77%；esi-ms(m/z):634[m]+；1hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.86(m,2h),3.16(m,2h),3.35(m,4h),3.44(s,3h),3.68(m,4h),3.91(s,6h),3.94(s,3h),4.42(d,j=11hz,1h),4.45(m,2h),4.93(d,j=11hz,1h),5.86(s,1h),7.40(s,2h),10.02(s,1h)11.85(s,1h)。
化合物（8）：收率76%；esi-ms(m/z):746[m]+；1hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.85(m,2h),2.28(s,6h),2.30(s,6h),3.15(m,2h),3.35(m,4h),3.68(m,4h),5.82(m,1h),4.45(m,2h),5.93(m,1h),6.96(s,1h),7.40(s,2h),10.01(s,1h)11.85(s,1h)。
實施例6
分別將1mmol化合物（1-8）加入含水丙酮溶液中，攪拌2h，過濾，干燥，分別得到化合物（1-8）的一水合物。
實施例7
二氫楊梅素環磷酰胺衍生物抗腫瘤活性研究
化合物體外抗腫瘤活性用ic50值評定：將細胞按一定密度接種于含10體積%小牛血清的rpmi1640培養基（內含適量青霉素、鏈霉素和谷氨酰胺）的96孔板中，5wt%co2，37℃條件下培養24小時后，換用不同濃度授試藥物（用pbs配制成1μg/ml工作液，使用時按需要用培養基稀釋）的新鮮培養基，不同稀釋濃度的陽性對照藥5-氟尿嘧啶藥液為陽性對照，每組設6個平行孔，繼續培養48小時。取出96孔培養板，每孔加入20μl5mg/ml的mtt，繼續培養4小時。取出培養板，倒出培養基，每孔加入200μldmso，平板搖床震搖5分鐘，待結晶溶解后，置酶聯檢測儀，于570nm波長下測定各孔的od值。用bliss法求出半數抑制濃度ic50。
二氫楊梅素環磷酰胺衍生物對hl60（白血病細胞）、mcf-7（人乳腺癌）、hela（人宮頸癌）、sgc-803（胃癌）和hepg2（肝癌）腫瘤細胞株的抑制活性如表1所示。結果顯示，二氫楊梅素環磷酰胺衍生物具有好的抗癌活性。