裸藻屬微藻類、多糖類的制造方法、及有機化合物的制造方法
【專利說明】裸藻屬微藻類、多糖類的制造方法、及有機化合物的制造方 法
[0001] 相關申請的相互參引
[0002] 本申請主張日本專利申請2013-067558號的優先權，該申請通過引用納入本申請 說明書的記載中。
技術領域
[0003] 本發明設及裸藻屬微藻類、多糖類的制造方法、及有機化合物的制造方法。
【背景技術】
[0004] 裸藻屬微藻類也稱為綠蟲藻，其作為通過培養產生裸藻淀粉等多糖類等的微生物 是已知的。
[000引 W化作為裸藻屬微藻類，已知有多種，例如，纖細裸藻(Euglenagracilis) NIES-48株是已知的（專利文獻1)。
[0006] 運種裸藻屬微藻類通過培養產生裸藻淀粉等多糖類，并在細胞內蓄積該多糖類。
[0007]另外，就運種裸藻屬微藻類而言，根據培養條件，可將蓄積的多糖類向蠟醋轉化， 或產生多糖類的同時也產生蛋白質。而且，所產生的在該微藻類的細胞內蓄積的多糖類、月旨 質、蛋白質等有機化合物可用于燃料和食品等用途。
[0008] 但是，運種裸藻屬微藻類存在產生多糖類等有機化合物的性能不一定充分的問 題。
[0009] 現有技術文獻：
[0010] 專利文獻
[0011] 專利文獻1:日本特開平07-070207號公報
【發明內容】
[001引發明要解決的課題
[0013] 本發明鑒于上述問題點等，課題在于提供一種至少能夠充分地產生多糖類的裸藻 屬微藻類。另外，本發明的課題在于提供一種能夠充分地得到多糖類的多糖類的制造方法。 另外，本發明的課題在于提供一種能夠充分地得到選自多糖類、脂質、維生素C、維生素E、 色素、及蛋白質所組成的群組中的至少1種有機化合物的有機化合物的制造方法。
[0014] 解決課題的方法
[0015] 為解決上述課題，本發明的裸藻屬微藻類的特征在于，其為纖細裸藻巧imlena 紅曰(；1115化孤-1株（保藏號陽觀BP-11530)或其變異株，并且為至少具有多糖類的產生能 力的裸藻屬微藻類。
[0016] 本發明的多糖類的制造方法的特征在于，通過培養作為纖細裸藻巧Uglena gracilis)E孤-1株(保藏號FERMBP-11530)或其變異株的至少具有多糖類的產生能力的 裸藻屬微藻類作為多糖類產生生物來制造多糖類。
[0017]作為本發明的多糖類的制造方法的一個方案，可W采用在所述培養中使用的培養 液含有15-30g/L葡萄糖的方案。
[0018]另外，作為本發明的多糖類的制造方法的其他方案，可W采用在所述培養中使用 的培養液含有酵母分解物的方案。
[0019]另外，作為本發明的多糖類的制造方法的其他方案，可W采用在所述培養中使用 的培養液具有Ara培養基的組成的方案。
[0020] 另外，作為本發明的多糖類的制造方法的其他方案，可W采用所述多糖類為裸藻 淀粉的方案。
[0021] 本發明的有機化合物的制造方法的特征在于，通過培養作為纖細裸藻巧imlena 曲acilis)E0D-l株(保藏號FERMBP-11530)或其變異株的至少具有多糖類的產生能力的 裸藻屬微藻類，制造選自多糖類、脂質、維生素C、維生素E、色素、及蛋白質所組成的群組中 的至少1種有機化合物。
【附圖說明】
[002引 圖1是比較纖細裸藻巧Uglena四'aciIis)的18SrRNA基因堿基序列的表。
[0023] 圖2是表示用18SrRNA基因作成的系統樹的圖。
[0024] 圖3A是表示RATO解析的帶型的照片。
[00巧]圖3B是表示RAro解析的帶型的照片。
[0026] 圖3C是表示RAro解析的帶型的照片。
[0027]圖4是表示在異養培養中的微藻類的葡萄糖轉化率及微藻類的干燥重量的圖表。
[0028] 圖5是表示在光能異養培養中微藻類的培養時間和微藻類的干燥重量的圖表。
[0029] 圖6是表示在抑條件不同的各培養基中光能異養培養時的微藻類的培養時間和 微藻類的干燥重量的圖表。
[0030] 圖7是表示在抑條件不同的各培養基中光能異養培養時的微藻類的培養時間和 微藻類的干燥重量的圖表。
[0031]圖8A是表示在光能異養培養中從好氧條件向厭氧條件轉換時的微藻類的培養時 間和單位細胞的裸藻淀粉含有率的圖表。
[0032]圖8B是表示在光能異養培養中從好氧條件向厭氧條件轉換時的微藻類的培養時 間和單位培養液的裸藻淀粉量的圖表。
[0033]圖9A是表示在光能異養培養中從好氧條件向厭氧條件轉換時的微藻類的培養時 間和單位細胞的脂質含有率的圖表。
[0034]圖9B是表示在光能異養培養中從好氧條件向厭氧條件轉換時的微藻類的培養時 間和單位培養液的脂質量的圖表。
【具體實施方式】
[0035]W下，對于本發明的裸藻屬微藻類的一實施方案詳細地進行說明。
[0036] 本實施方案的裸藻屬微藻類為纖細裸藻(Eluglena曲acilis)E孤-1株(保藏號 FERMBP-11530)或其變異株，其為至少具有多糖類的產生能力的裸藻屬微藻類（W下，也 簡稱為裸藻屬微藻類或微藻類）。
[0037] 本實施方案的裸藻屬微藻類起到至少能夠充分地產生多糖類的效果。
[0038] 所述裸藻屬微藻類為在水中浮游并生存的生物。另外，所述裸藻屬微藻類為單細 胞性，其是因株不同而稍微不同的大小大概為10ym到50ym的微小的藻類。
[0039]W下示出所述裸藻屬微藻類的性質的詳細情況。
[0040] (裸藻屬微藻類的形態性質）
[0041] 所述裸藻屬微藻類的營養型細胞具有鞭毛，并活躍地運動。另外，細胞的形狀大致 為紡鍵形。在細胞內，除了核、葉綠體、線粒體等一般的細胞器W外，還有稱為眼點的紅色的 細胞器。
[0042](裸藻屬微藻類的生理學性質或生物化學性質）
[0043] (1)培養基：在主要由淡水構成的培養液中能夠增殖（即使利用來自廢水的有機 物也可增殖）。
[0044] (2)光合作用能力：能夠通過光合作用進行光能自養增殖。
[0045] (3)含有色素：包括葉綠素a、葉綠素b、及其他類胡蘿h素類。
[004引 （4)同化蓄積物質：蛋白質、脂質（蠟醋）、多糖類（裸藻淀粉）。
[0047] 妨增殖溫度范圍：15°C-35°C(最適溫度25°C)。
[0048] (6)合適增殖抑范圍：P冊.5-5. 5 (但是，即使在左側所述抑范圍外也可增殖）
[0049](裸藻屬微藻類的基因信息）
[0050] 所述裸藻屬微藻類具有W序列編號1表示的18SrDNA(18SrRNA基因）。
[0051] 此外，18SrRNA基因的解析可通過作為微藻類的鑒定方法而常用的方法來進行。 具體地，18SrRNA基因的解析可通過例如實施例中記載的方法來進行。
[0052] 就所述裸藻屬微藻類的18SrRNA基因中的堿基序列而言，可W用BLAST同源性檢 索，與從GenBank得到的已知的裸藻屬微藻類的18SrRNA基因的堿基序列進行比較。對于 與已知的裸藻屬微藻類的序列相同性的一致程度比較后的結果，在后面的實施例中示出。
[0053] 此外，作為數據庫，也可W使用EMBLWBJ等。
[0054] 進一步地，可W使用分子系統樹作成軟件MegaS程序（Tamura等.2011，M〇1.Biol. Evol. 28 :2731-2739)，根據最大似然法作成分子系統樹。關于作成的分子系統樹，在后面的 實施例中示出詳細內容。
[0055] 通過如上所述方法，由后述實施例的結果，所述裸藻屬微藻類被鑒定為Euglena gracilis,并命名為纖紹]裸藻(Euglen曰Rr曰cilis化孤-1株。
[0056] 所述纖細裸藻化Uglena gracilis)EOD-I株在2013年6月28日（原保藏日2013 年3月25日）在獨立行政法人制品評價技術基盤機構專利生物保藏中屯、（WTE-IP0D(郵政 編號292-0818日本千葉縣木更津市上總鑲足2-5-8120號室）在布達佩斯條約的規定下， W保藏號陽RMBP-11530進行國際保藏。
[0057] 如上所述，所述裸藻屬微藻類因為在細胞內具有葉綠體，所W通過光合作用可增 殖。目P，所述裸藻屬微藻類為光能自養生物。
[0058]另外，所述裸藻屬微藻類利用葡萄糖等有機營養素作為營養素也可增殖。目P，所述 裸藻屬微藻類也是異養生物。
[0059] 運樣，所述裸藻屬微藻類僅通過光能自養可增殖，僅通過異養可增殖，同時進行光 能自養及異養也可增殖。
[0060] 就所述變異株而言，例如，通過實施一般的突然變異處理、或由繼代培養引起適應 或者自然變異來制作。
[0061] 可用一般的變異原進行所述突然變異處理。作為變異原，例如，可列舉具有變異原 作用的藥劑、紫外線等。作為具有變異原作用的藥劑，例如，可列舉鏈霉素、氧氣沙星、甲橫 酸乙醋、N-甲基-N'-硝基-N-亞硝基脈、漠尿喀晚等核巧酸堿基類似物、或日丫晚類等。
[0062] 接著，對于本發明的多糖類的制造方法的一實施方案進行說明。
[0063] 本實施方案的多糖類的制造方法是通過培養所述裸藻屬微藻類至少制造多糖類 的方法。
[0064] 本實施方案的多糖類的制造方法起到能夠充分地得到多糖類的效果。
[0065] 詳細地，就本實施方案的多糖類的制造方法而言，具有在至少含有水的培養液中 培養所述裸藻屬微藻類的培養步驟。
[0066] 作為所述培養液，優選含有促進微藻類增殖的營養素和水的培養液。
[0067]作為所述營養素，可列舉無機營養素或有機營養素等。
[0068] 作為所述無機營養素，例如，可列舉含氮的無機化合物、含憐的無機化合物等。另 夕F，作為所述無機營養素，例如，可列舉鐘離子、鐵離子、儘離子、鉆離子、鋒離子、銅離子、鋼 離子、儀離子等。
[0069] 所述無機營養素的培養液的濃度通常為一般所知的程度的濃度。
[0070] 作為所述有機營養素，例如，可列舉葡萄糖（glucose)、果糖（化UCtose)等單糖 類；維生素B6、B12等維生素類；精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸等氨基酸；蘋果 酸、巧樣酸、班巧酸、乙酸等有機酸；乙醇等醇類等。
[007。 作為所述培養液的組成，例如，可采用后述的"AF-6培養基"的組成、 "化amer-Myers培養基"的組成、"化tner培養基"的組成、或者與運些組成類似的組成等。
[0072] 在所述培養步驟中，優選培養液含有15-30g/