天然產物Cocosolide及其結構類似物的制作方法

天然產物Cocosolide及其結構類似物的制作方法
【專利摘要】本發明涉及從關島附近的淺石灘及Cocos環湖礁上的藻青菌種Symploco sp.中分離得到的含有木吡喃糖苷結構的二聚體大環內酯化合物Cocosolide及其結構類似物和它們的全合成方法，并驗證了它們對于T細胞生長因子IL?2的優良抑制活性，具有很強的醫藥工業的應用前景。
【專利說明】
天然產物Cocosol ide及其結構類似物
技術領域
[0001 ]本發明涉及含有木吡喃糖苷結構的二聚體大環內酯化合物Cocosol ide及其結構 類似物和它們的全合成方法，屬于有機與藥物化學領域。
【背景技術】
[0002] 天然產物的相關研究近年來發展迅速，越來越多的天然小分子化合物，多肽等被 從自然界中分離提取，并鑒定具有各種的生物活性，而可能被研發成為醫藥化合物。
[0003] 免疫疾病近年來發展迅速，嚴重影響人類健康，過度免疫反應將帶來炎癥等各種 不良狀況，然而錨定于治療免疫疾病的口服藥物的研究仍然進展緩慢，能夠用于治療免疫 疾病的天然產物近年來更是鮮有報道。
[0004] 可見，進一步的研究發現能夠用于治療免疫疾病的天然產物是亟待解決的技術問 題，確證其活性發現更多的結構類似物也將對于構效關系的研究以及候選藥物的儲備具有 非常重要的價值。
[0005] 因此，基于上述描述，發現新的能夠用于治療免疫疾病的天然產物化合物及其結 構類似物，仍是目前的研究熱點和重點，這也正是本發明得以完成的基礎所在和動力所倚。

【發明內容】

[0006] 如上所述，為了發現新的能夠用于治療免疫疾病的天然產物化合物及其結構類似 物，并為實現其工業應用性，開發其全合成方法，確證其生物活性，本發明人對此進行了深 入的研究，在付出大量創造性勞動后，從而完成了本發明。
[0007] 本發明涉及如下四個方面，更具體而言，第一個方面，本發明涉及具有如下式（I) 所示結構的化合物及其藥學上可接受的鹽，其中獨立的選自HA-C6的烷基? 6的 烷氧基，鹵素，羥基，氨基，硝基，氰基，疏基，R9_R1()獨立的選自&-C6的烷基，&-C6的烷氧基， 鹵素，羥基，氨基，硝基，氰基，疏基，R11-R12獨立的選自H、&-C6的烷基，&-C6的烷氧基，鹵素， 羥基，氣基，硝基，氛基，疏基，
[0009] 在本發明的所述化合物中，除非另有規定，鹵素或鹵代中的鹵素例如可為F、Cl、Br 或I。
[0010] 在本發明的所述化合物中，&-C6的烷基的含義是指具有1-6個碳原子的直鏈或支 鏈烷基，非限定性地例如可為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、 正戊基、異戊基或正己基等。
[0011 ]在本發明的所述化合物中，Cl-c6烷氧基是指上述定義的"&-C6烷基"與0原子相連 后的基團。
[0012]優選的所述式(I)所示化合物的結構如下：
[0014]第二個方面，本發明涉及上述化合物的合成方法。
[0015] Cocoso 1 i de (1)的合成方法，包括由化合物22經過脫保護基反應制備的步驟，其中 Pg獨立的選自常規的羥基保護基，進一步的，Pg優選TBS，脫保護基的步驟優選在四丁基氟 化銨(TBAF)存在下進行。
[0017]所述化合物22經由化合物21通過氧化成羧酸并酯化偶聯制備，進一步的，所述氧 化優選的在Tempo的存在下堿性條件下進行，所述酯化偶聯優選的在2，4，6-三氯苯甲酰氯、 DIPEA、DMAP的存在下進行，
[0019]所述化合物21經由化合物20在還原性的條件下脫除芐基制備，所述還原性的條件 優選的為氫氣條件，進一步的，氫氣還原的條件下優選的加入Pd/c作為催化劑
[0021] 所述化合物20經由化合物16和19在NBS的存在下制備
[0023]所述化合物19經由化合物18在羰基還原性的條件下制備，優選的在NaBH4的存在 下還原制備。
[0025] 所述化合物18經由化合物17在Os〇4、NMO、Nal 〇4的存在下制備。
[0027]具體的，Cocosolide(l)的合成方法的整體路線如下：
[0028]
[0029] 第三個方面，本發明涉及上述式(I)化合物和/或其藥學上可接受的鹽在制備治療 免疫疾病藥物中的用途，優選的所述免疫疾病為T細胞生長因子IL-2介導的免疫疾病。
[0030] 第四方面，本發明涉及上述式（I)化合物和/或其藥學上可接受的鹽的藥物組合 物，優選的上述式（I)化合物和/或其藥學上可接受的鹽與藥學上可接受的載體和/或其它 抗免疫疾病藥物組成的藥物組合物。所述藥物組合物可以采用有機領域公知的技術制備。
【附圖說明】
[0031 ]圖1是Cocosolide的單晶衍射圖譜。
[0032]圖2A是化合物1對Jurkat細胞活性和IL-2表達的影響。
[0033]圖2B是化合物26對Jurkat細胞活性和IL-2表達的影響。
[0034]圖2C是PMA/PHA條件刺激下化合物1及其類似物對Jurkat細胞IL-2表達的影響。
[0035] 圖2D是PMA/ionomycin條件刺激下化合物1及其類似物對Jurkat細胞IL-2表達的 影響。
[0036]圖2E是化合物1對T細胞增殖的影響。
[0037] 圖2A-2B中線條含義如下：

【具體實施方式】
[0042]下面通過具體的實施例對本發明進行詳細說明，但這些例舉性實施方式的用途和 目的僅用來例舉本發明，并非對本發明的實際保護范圍構成任何形式的任何限定，更非將 本發明的保護范圍局限于此。
[0043] 實施例1
[0044]天然產物Cocosolide的提取分離方法：
[0045] 天然產物是從礁石上收集到的海洋藻青菌Symploca sp.中分離得到的。凍干的物 料連續使用二氯甲烷-甲醇（1:1)和水-甲醇（1:1)進行萃取，萃取液在乙酸乙酯-水體系中 分層，取乙酸乙酯相濃縮，所得物用硅膠色譜柱反復分離，再用反相C18液相色譜分離得到 Cocosolide化合物（1，8.0毫克，占萃取物重量百分比0.08% )。
[0046] 核磁解析數據如下：
[0047]
[0048] COSY及氫質子。b N0ESY相關性順序
[0049] 實施例2
[0051 ]將化合物4(354mg，1 · 3mmol)溶于DCM( 10mL)并加入2，6_lutidine(0· 35mL， 4.1mmol)，在0°C下加入TES0Tf(0.31mL，1.9mmol)，該溫度下攪拌lh后用飽和碳酸氫鈉溶液 (lOmL)淬滅反應。用乙酸乙酯萃取(2X30mL)合并有機相并依次用飽和氯化銨溶液（lOmL) 和飽和飽和食鹽水(10mL)洗滌。有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。殘余物用硅膠 柱層析(正己烷/乙醚= 95/5)制得無色油狀化合物5(428mg，85% )4(^, = -10.2(0 5.0， DCM);1!! NMR(400MHz，CDC13)S7.38-7.26(m，5H)，4.48(t，J= 11.9Hz，2H)，4.08(dd，J = 8.6， 1.9Ηζ,1Η),3.63(s,3H),3.53-3.46(m,2H),1.81-1.67(m,lH),1.67-1.55(m,lH),1.16(s, 3H)，1.08(s，3H)，0.92(t，J = 7.9Hz，9H)，0.55(q，J = 8.0Hz，6H);13C NMR(100MHz，CDC13)S 177.53,138.41,128.34,127.71,127.53,74.09,72.88,67.65,51.64,48.31,33.55,21.14， 20.48,6.99,5.41；HRMS(ESI)m/z C21H3604NaSi(+)[(M+Na)+]:403.2275,403.2273.
[0052] 實施例3
[0054] 將化合物5(5.38，13.90111111〇1)溶于正戊烷（1001^)，冷卻至0°(：后加入三甲基硅基 甲基鋰（27 · 5mL，27 · 50mmol，1 ·0M in pentane)，攪拌5小時后緩慢加入MeOH( 15mL)并持續 攪拌2小時。加入飽和碳酸氫鈉溶液(30mL)淬滅反應后用乙酸乙酯（2 X60mL)萃取。合并有 機相并依次用飽和氯化銨（30ml)和飽和食鹽水(30ml)洗滌。有機相用無水硫酸鈉干燥，過 濾后減壓濃縮。殘余物用硅膠柱層析（正己烷/乙醚= 95/5)制得無色油狀化合物6(5.0g， 98% )。[0]。2。= -10.4((： 10.0.DCM);1!! NMR(500MHz，CDC13)S7 ·39-7·24(ι?，5H) ,4.54-4.44 (dd,J= 11.83,14.75Hz,2H),4.08(dd,J = 8.5,2.6Ηζ,1Η) ,3.51 (dd,J = 7.8,5.4Hz,2H), 2.14(s,3H),1.79-1.67(m,lH),1.61-1.51(m,lH),1.12(s,3H),1.07(s,3H),0.95(t,J= 7.9Hz，9H)，0.60(q，J = 7.8Hz，6H) .13C 匪R(125MHz，CDC13)S213.46，138.52，128.42， 127.77,127.62,74.25,73.00,67.55,53.30,34.21,26.95,21.78,20.15,7.11,5.54；HRMS (ESI)m/z C21H36Na03Si( + )[(M+Na) + ]:387.2326,387.2323.
[0055] 實施例4
[0057] 將化合物6(2.6g，7. lmmol)溶于THF(35mL)，冷卻至-78°C后緩慢加入KHMDS (11.5mL，9.2mmol，0.8M in THF)該溫度下持續攪拌一小時后緩慢滴加^ phenyltrif luoromethanesulfonimide(2.9g,8. lmmol)的THF( lOmL)溶液并持續攬摔2小 時。加入飽和氯化銨溶液(20mL)淬滅反應并用正己烷(2 XIOOmL)萃取。合并有機相并依次 用飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)和飽和食鹽水(50ml)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾后 減壓濃縮。殘余物用硅膠柱層析(正己烷/乙醚= 96/4)制得無色油狀化合物7(3.2g，91%)。 [a]D20 = -l〇.6(c 2.0,0010:? NMR(400MHz，αχη3)δ7· 35-7.25(m，5H)，5.13((1, J = 4.3Hz， 1H) ,5.01(d ,J = 4.3Hz,lH) ,4.49(dd, J= 11.90,15.33Hz , 2H), 3.83(dd, J = 8.8,2.2Hz , lH),3.56-3.44(m,2H),1.88(dtd,J=14.1,8.0,2.2Hz,lH),1.63-1.51(m,2H),1.57(s, 1H) ,1.15( s,3H) ,1.09( s,3H) ,0.92( t,J = 8.0Hz, 9H) ,0.56(q, J = 7.9Hz,6H) ;13C 匪 R (100MHz，CDCl3)Sl62.09，138.34，128.33，127.67，127.54，102.59,72.92,72.87,67.55， 45.33,33.31,22.74,20.40,6.98,5.35；HRMS(ESI)m/z C22H35F3Na05SSi(+)[(M+Na)+]: 519.1819,519.1820.
[0058] 實施例5
[0060]在干燥的圓底燒瓶中加入LiCl (900mg，21.2mmol)并在減壓條件下火焰灼燒干燥 并用氬氣換氣三次。待冷卻后加入化合物7 (2.5g，5. lmmo 1)的乙醚(40mL)溶液，冷卻至0°C 后依次加入四三苯基膦鈀(47 lmg，0 · 4mmo 1)和三甲基硅基甲基氯化鎂（13 · OmL，13 · Ommo 1， 1.0M in Et20)，此溫度下攪拌5小時后使用硅藻土過濾并用乙醚（100mL)洗滌。合并有機相 并依次用飽和碳酸氫鈉(50mL)和飽和食鹽水(50mL)洗滌。有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾 后減壓濃縮。殘余物用硅膠柱層析（正己烷/乙醚= 99/1)得到無色油狀化合物8(1.8g， 81% )。[0]。2。= -0.96(。2.4,0010:? NMR(500MHz，CDC13)S7.40-7.20(m，5H)，4.84(s，lH)， 4.70(s,lH),4.51(dd ,J=12.09,13.57Hz,2H),3.85(dd ,J = 8.8,1.9Hz,lH),3.58-3.46(m, 2H),1.86(dtd,J=14.3,8.1,2.0Hz,1H),1.65-1.44(m,3H),1.02(s,3H),1.02(s,3H),0.99 (t，J = 7.9Hz，9H)，0.63(q，J = 7.6Hz，6H)，0.07(s，9H);13C NMR( 125MHz，CDC13)S152.70， 138.83,128.39,127.69,127.51,109.21,75.07,72.88,68.37,45.16,33.69,25.85,21.41， 20.50,7.27,5.71,-0.32；HRMS(ESI)m/z C25H46Na02Si2(+)[(M+Na)+]:457.2929, 457.2927.
[0061 ] 實施例6
[0063] 將化合物8 ( 450mg，1 · 04mmo 1)溶于MeOH ( 5ml)中，室溫下加入樟腦磺酸 (camphorsulfonic acid) (21mg，0 · 09mmol)的Me0H( 1 · 5mL)溶液。攬摔2小時后加入Et3N (lmL)淬滅反應。有機相加乙酸乙酯（100ML)稀釋后依次用飽和氯化銨（20mL)、飽和碳酸氫 鈉(50mL)和飽和食鹽水(20mL)洗滌。有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮。殘余物用 硅膠柱層析(正己烷/乙酸乙酯= 6/1)制得無色油狀化合物9(25〇!^，75%)。[<^2() = -7.3((3 2.0，DCM)NMR(500MHz，CDCl3)S7.37-7.27(m，5H)，4.86(d，J=1.0Hz，lH)，4.79(d，J = 0·7Ηζ，1Η)，4.53(dd，J= 11.88,14.53Hz，2H) ,3.75-3.64(m，3H)，2.46(d，J = 2.1Hz，lH)， 1.76(ddd,J=11.6,6.6,1.4Hz,lH),1.62(s,2H),1.66-1.57(m,3H),1.53(s,2H),1.05(s, 3H)，1.00(s，3H)，0.06(s，9H); 13C NMR(125MHz，CDC13)S152.61，138.38，128.48，127.76， 127.70,109.85,74.47,73.37,69.85,44.33,31.33,22.19,22.16,21.22,-0.42；HRMS(ESI) m/z C19H32Na02Si(+)[(M+Na)+]:343.2064,343.2064.
[0064] 實施例7
[0066]將氫化鈉(2.5g，60mmol)加入干燥的甲苯中制得懸濁液，冷卻至0 °C后緩慢加入乙 酰磷酸三已酯（13) (13mL，65mmo 1)。劇烈攪拌10分鐘后緩慢加入環氧化合物10 (4.2mL， 50mmo 1)。室溫攪拌攪拌6小時后加入30 %NaOH溶液50mL。加熱回流兩個小時后分液保留水 相，〇°C下緩慢滴加稀鹽酸至體系PH值至2-3。用乙酸乙酯（2 X200mL)萃取合并有機相后用 飽和食鹽水(3 X50mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮。殘余物用硅膠柱 層析(正己燒/乙酸乙酯= 1/1)得到淡黃色油狀液體化合物ll(4.7g，82；L[a]D2() = -88.4(c l-O^CM);1!! NMR(500MHz，CDCl3)Sll.30(b，lH)，1.44-1.35(m，lH)，1.35-1.24(m，3H)，1.18 (dt,J = 8.7,4.3Hz,lH),0.95(t,J = 7.3Hz,3H),0.75(ddd,J = 8.0,6.4,4.1Hz,1H)；13C NMR (125MHz，CDC13)S181.43,26.19,25.72,19.98,16.21,13.17;HRMS(ESI)m/z C6H902(_) [M-]:113.0608,113.0608.
[0067] 實施例8
[0069] 將化合物11(1 .5g，40mmol)溶于lOOmL乙醚中0°C下分批加入LiAlH4(3.5g, 30mmol)。緩慢升至室溫后持續攪拌2小時。重新冷卻至0°C后緩慢滴加 MeOH(lOmL)淬滅反 應。隨后加入飽和酒石酸鉀鈉溶液(Rochelle's) (lOOmL)并在室溫下攪拌4小時。用乙醚(2 X 100mL)萃取，有機相依次用飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)和飽和食鹽水(50mL)洗滌。有機相 用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮得到微黃色油狀化合物11-OH并直接用于下一步反應 。咕 NMR(500MHz，CDCl3)S3.40(dd，J = 7.1，2.5Hz，2H)，1.64(s，lH)，1.27-1.19(m，2H)，0.92 (t,J=7.4Hz,3H),0.84-0.75(m,lH),0.59-0.50(m,lH),0.35-0.29(m,lH),0.29-0.24(m, 1H); 13C NMR( 125MHz，CDCl3)S = 67 · 25，26 · 70，21 · 08，19 · 09，13 · 74，9 · 80 ·
[0071] 將一級醇化合物ll-OH(30mmol)溶于乙醚（lOOmL)中并加入碳酸氫鈉（7.6g, 90mmol)和TEMP0(468mg, 3 · Ommol)。冷卻至0°C 后加入TCCA(7 · 7g, 33mmol)。該溫度下攬摔1 小時〇°C，反應液直接經短硅膠柱減壓過濾并用乙醚(2 X30mL)洗滌。有機相依次用飽和碳 酸氫鈉溶液(30mL)、飽和氯化銨溶液(30mL)和飽和食鹽水(30mL)洗滌。有機相用無水硫酸 鈉干燥，過濾并低溫下減壓濃縮得到的醛直接用于下一步。
[0072] 將脫鹽的（-)-B-Allyl bis(Isopinocampheyl)borane(35mmol)乙釀（50mL)溶液 冷卻至-82°C后加入新制得醛的乙醚(30mL)溶液(滴加過程中保持溫度低于-80°C)。在該溫 度下攪拌2小時候緩慢升至室溫，升至室溫后加入3摩爾每升的Na0H(40mL)溶液并緩慢滴加 出0 2(30%，801^)。室溫攪拌18小時后用虹乙醚(21 2001111)萃取合并有機相后依次用飽和碳 酸氫鈉溶液(50mL)、飽和氯化銨溶液(50mL)和飽和食鹽水(50mL)洗滌。有機相用無水硫酸 鈉干燥，過濾并低溫下減壓濃縮制得烯丙基化產物和(-)_異松蒎醇的油狀混合物。將該混 合物溶解在THF(300mL中冷卻至0°C后分批加入氫化鈉(6.0g，150mmol)。待反應體系無明顯 氣體產生后再攪拌0.5小時，依次加入BnBr (16mL，135mmol)和四丁基碘化銨（3.5g， 9.5mmol)。室溫攪拌24后重新冷卻至0°C緩慢加入Me0H(20mL)和水(30mL)淬滅反應，用乙醚 萃取(2x 300mL合并有機相依次用飽和氯化銨溶液(50mL)和飽和食鹽水(50mL)洗滌。有機 相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮。殘余物用硅膠柱層析(正己烷/乙醚= 95/5)除去大 極性化合物，制得目標芐醚化合物與(-)_異松蒎醇芐醚的混合油狀液體。
[0073] 將上文所得油狀液體溶于水(60mL)和丙酮的（200mL)的混合溶劑，依次加入2，6-二甲基吡啶（7·0mL，60mmol)，四氧化鋨（50mL, lmmol ,0·02M in t-BuOH)和高鵬酸鈉(8 ·5g, 40mmo 1)。攪拌3小時用娃藻土過濾并用乙酸乙酯（2 X 200mL)洗滌。有機相依次用飽和碳酸 氫鈉溶液(50mL)和飽和食鹽水(50mL)洗滌。有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮。殘 余物用硅膠柱層析（正己烷/乙醚= 90/15)得到無色油狀化合物12(1.84g，26%5步總收 率）<3[a]D20 = -34.0(c 2.0,0010:? NMR(500MHz，CDCl3)S9.81(t，J = 2.4Hz，lH) ,7.38-7.24 (m,5H),4.67(dd ,J=126.1,11.6Hz,2H),3.29(td ,J = 8.5,4.2Hz,lH),2.77(ddd ,J=15.9, 8.2,2.8Hz,lH),2.63(ddd,J=15.9,4.1,2.0Hz,1H),1.45-1.33(m,lH),1.33-1.22(m,lH), 1.03(t,J = 7.4Hz,3H),0.89-0.77(m,lH),0.73(ddd,J= 13.4,8.9,4.8Hz,lH) ,0.34-0.21 (m，2H).13C NMR(125MHz，CDC13)S201.61，138.56，128.47，127.69，127.67,78.42,70.90， 49.47,26.71,22.30,21.43,13.51,8.03；HRMS(ESI)m/z C15H2002Na(+)[(M+Na)+]: 255.1356,255.1355.
[0074] 實施例9
[0076]在圓底燒瓶中加入火焰灼燒干燥的分子篩加入化合物12( 19mg，82μπι〇1)的乙醚 (2mL)溶液，冷卻至-78°后加入化合物9(20mg，62μπι〇 1)的乙醚(2mL)溶液。在該溫度下攪拌 30分鐘后緩慢加入11^(^￡(17以1^94以111〇1)并持續攪拌1小時，加入飽和碳酸氫鈉溶液 (0.5 m L)淬滅反應。混合物用乙酸乙酯（2 X 2 5 m L)萃取，有機相依次用飽和氯化銨溶液 (1 OmL)，飽和食鹽水（1 OmL)洗滌。有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮。殘余物用娃 膠柱層析(正己烷/乙醚= 95/5)得到無色油狀化合物17(221^，76%)。[€^2° = -58.4((31.0， DCM)NMR(500MHz，CDC13)J7.37-7 ·24(ι?，10H)，4.73(d，J= 11·7Ηζ，1Η)，4· 71 (s，lH)， 4.65(s，lH),4.51(d，J=11.7Ηζ，1Η)，4.47(s，2H),3.59-3.53(m，lH),3.53-3.46(m，2H)， 3.12(dd ,J= 10.7,1.7Hz,lH), 2.90(dt,J = 8.5,6.7Hz,lH) ,2.24-2.16(m,lH) ,2.08-2.00 (m,2H),1.85(ddd ,J = 9.5,7.9,3.9Hz,lH),1.68(ddd ,J = 9.1,6.5,2.1Hz, 2H), 1.44-1.34 (m,lH),l.27-1.18(m,2H),l.06-0.97(m,9H),0.74-0.66(m,lH),0.63-0.56(m,1H),0.28-0.20(m，2H); 13C 匪R(125MHz，CDC13)S153.97，139.32，138.76，128.41，128.38，127.73， 127.71,127.53,127.43,106.09,81.59,79.50,76.10,73.10,70.54,68.33,42.37,39.68, 39.48,30.23,26.90,22.58,22.47,20.59,20.14,13.65,8.36；HRMS(ESI)m/z C31H4203Na (+ )[(M+Na) + ]:485.3026,485.3027.
[0077] 實施例10
[0079] 將17(193mg，0.42mmol)溶于水(6mL)和丙酮（20.0mL)的混合溶劑。依次加入四氧 化鋨（0 · 5mL，0 · 05mmol，0 · 1M in t-BuOH)和N-甲基嗎啉氧化物（467mg，1 · 67mmol)。攪拌24 小時后加入高碘酸鈉(450mg，2. lOmmol)的水（10mL)溶液。生成的黃色液體持續攪拌3小時 反應體系用硅藻土過濾并用乙酸乙酯（2 X 50mL)洗滌，有機相依次用飽和碳酸氫鈉溶液 (30mL)，飽和食鹽水(30mL)洗滌。有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮。殘余物用娃 膠柱層析（正己烷/乙醚= 85/15)制得無色油狀化合物18(16411^，85%)。[€^2() = -87.4(0 l-O^CM);1!!匪R(500MHz，CDC13)S7 ·35-7·25(ι?，10H)，4.74(d，J= 11.6Hz，1H)，4.45(s， 2H),4.45(d,2H),3.86-3.75(m,lH),3.61-3.47(m,2H),3.39(dd,J=8.6,3.8Hz,lH),2.87 (dt ,J = 8.6,6.5Hz,lH) ,2.47(dd ,J=14.2,11.9Hz,lH) ,2.24(dd ,J=14.2,2.6Hz,lH), 2.10(dt,J=13.9,7.0Hz,1H),1.82-1.75(m,2H),1.75-1.65(m,lH),1.42-1.31(m,lH), 1.26-1.15(m,1H),1.08(s,3H),1.02-0.96(m,6H),0.73-0.65(m,lH),0.65-0.51(m,1H), 0.28-0.15(m，2H);13C 匪R(125MHz，CDC13)S211.80，139.04，138.56，128.46，127.69， 127.66,127.64,127.56,80.63,79.28,74.59,73.12,70.67,67.58,49.15,44.70,42.50, 29.87,26.83,22.35,20.40,19.40,18.91,13.62,8.27；HRMS(ESI)m/z C30H40Na04(+)[(M+ Na)+]:487.2819,487.2815.
[0080] 實施例11
[0082] 將化合物18 (4lmg，88μπιο 1)的甲醇（1 · 5mL)溶液冷卻至-40 °C后緩慢加入NaBH4 (10mg，0.26mmol).該溫度下持續攪拌30分鐘后加飽和氯化銨溶液（10mL)淬滅反應。混合物 用乙酸乙酯萃取（2X50mL)，合并有機相并依次用飽和碳酸氫鈉溶液（15mL)，飽和食鹽水 (15mL)洗滌。有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮。殘余物用硅膠柱層析(正己烷/乙 酸乙酯=3/1)得到無色油狀化合物19(391^，92%)。[€1]廣=-49.1((3 1.0,001〇;1!1匪1? (500MHz，CDCl3)S7 · 38-7 · 27(m，10H)，4.75((1, J= 11 ·6Ηζ，1Η)，4.46(d，J= 11·5Ηζ，3H)， 3.60(dd，J=11.2,5.6Hz，lH) ,3.58-3.53(m，lH) ,3.53-3.46(m，lH)，3.39(dd，J = ll .4， 4.3Hz，lH)，3.08(d，J = 9.5Hz，lH)，2.88(dd，J=15.2,6.7Hz，lH)，2.02(dt，J = 14.1, 7.2Hz,lH),1.87-1.78(m,lH),1.68-1.63(m,2H),1.44-1.34(m,2H),1.32(d,J=12.0Hz, 1H)，1.25(dt，J=14.0,7.6Hz，2H)，1.01(t，J = 7.4Hz，3H)，0.93(s，3H)，0.83(s，3H) ,0.71 (dd，J=12.3,5.7Hz，lH)，0 ·64-0·56(ι?，1H) ,0.28-0.21 (m，2H);13C NMR( 125MHz，CDCl3)S 139.29,138.74,128.43,128.39,127.75,127.70,127.56,127.46,80.28,79.54,76.04， 73·08,73·04,70·62,68·13,42.04,38.85,37.13,29.53,26.90,22.42,20.24,13.65， 12.55,8.29；HRMS(ESI)m/z C30H4204Na(+)[(M+Na)+]:489.2975,489.2974.
[0083] 實施例12
[0085] 在干燥的圓底燒瓶中加入火焰灼燒干燥的4人分子篩（90mg)并加入化合物16 (16mg，42μπι〇1)的乙腈（lmL)溶液。室溫攪拌1 ·5小時后冷卻至-25°C，緩慢加入NBS(7· 5mg， 42ymol)的丙酮(0.5mL)溶液。10分鐘加入化合物19(10mg，21ymol)的丙酮(0.5mL)溶液。在 該溫度下持續攪拌30分鐘后緩慢升至室溫。加入飽和碳酸氫鈉溶液（10mL)淬滅反應，用乙 酸乙酯（2X50mL)萃取。有機相依次用氯化銨（15mL)，飽和食鹽水（15mL)，有機相用無水硫 酸鈉干燥，過濾并干燥，減壓濃縮得到兩個構型的混合物(α:β = 3:5)，用硅膠柱層析(正己 燒/乙酸乙酯= 3/1)制得9.4mg無色油狀β構型產物（20) (60%yield)。[a]D2Q = -51.8(c 1.0,0010^11^^(50010^,0)(:13)37.37-7.27(111,1010,4.74((1,1=11.5^,111),4.46(8, 2H) ,4.45(dJ=11.6Hz,lH),4.23(d,J = 7.3Hz,lH),3.93(ddJ=11.5,5.2Hz,lH),3.63-3.57(m,2H),3.55(s,3H),3.52(m,lH),3.48(m,2H),3.44(s,3H),3.41-3.34(m,lH),3.30-3.22(m,2H) ,3.09(dd,J = 21.0,10.9Hz,2H) ,3.00(t ,J = 8.7Hz,lH) ,2.92-2.86(m,lH), 2.05-1.98(m,lH),1.83(m,lH),1.78(m,lH),1.64(m,lH),l.42-1.33(m,lH),l.25-1.17(m, 1H), 1.01( t,J = 7.4Hz,3H) ,0.95(s , 3H), 0.92(s, 9H) ,0.89(m,5H) ,0.68(m, 1H), 0.59(m, 1H)，0.28-0.22(m，2H)，0·13(s，6H) ;13C 匪R(100MHz，CDC13)S139.23，138.61，128.32， 128.29,127.61,127.44,127.34,106.17,86.26,84.56,80.68,80.44,79.96,77.33,77.01, 76.69,74.31,72.95,70.71,67.92,63.13,61.01,58.34,41.97,38.97,36.66,29.69, 29.20,26.82,26.08,22.32,20.06,18.11,13.61,13.49,8.23,-3.70,-4.11；HRMS(ESI)m/z C43H6808NaSi( + )[(M+Na) + ]:763.4576,763.4579.
[0086] 實施例13
[0088] 將化合物20(21mg，28ymol)溶于MeOH(3mL)中并加入10%Pd/C(5mg)將反應體系用 氫氣置換三次，在氫氣氛圍下攪拌2小時，待反應完成后使用氬氣置換三次并用硅藻土過 濾，濾液減壓濃縮殘余物用硅膠柱層析（正己烷/乙酸乙酯= 2/1)得到無色油狀化合物21 3.95(dd ,J=11.4,5.2Hz, 1H) ,3.71 (dd,J= 10.4,4.4Hz, 2H) ,3.60(dd,J=l 1.6,8.8Hz, 1H) ,3.53( s,3H) ,3.43( s,3H) ,3.35 (dd,J = 8.7,7.3Hz,lH) ,3.24(ddd,J=l 1.8,8.2, 4.9Hz,2H),3.18-3.13(m,lH),3.10(dd ,J=11.4,10.1Hz,2H),2.98(t ,J = 8.7Hz,lH),2.58 (s,2H),1.85-1.75(m,2H),1.65(dd ,J=11.3,6.4Hz,3H), 1.29-1.16(m,3H),0.93(dd,J = 9.4,5.1Hz,6H),0.90(d ,J=1.7Hz,12H),0.65(dd ,J=13.3,8.1Hz,lH),0.60(dt ,J=12.9, 4.2Hz，lH) ,0 ·33-0·27(ι?，1H) ,0.27-0.21 (m，lH)，0.10(s，6H) ;13C 匪R( 125MHz，CDC13)S 106.24,86.27,83.95,80.81,76.35,75.42,74.42,63.22,61.70,60.96,58.36,42.78, 39.06,37.06,31.08,26.80,26.17,25.60,22.44,18.88,18.19,13.74,13.62,9.32,0.06,-3.65,-4.01;HRMS(ESI)m/z C29H56Na08Si(+)[(M+Na)+]:583.3637,583.3534.
[0089] 實施例14
[0091]將化合物 21(13mg,23ymol)溶于 DCM(300yL)后加入 TEMP0(0·2mg，l·2μmol)和飽和 碳酸氫鈉溶液（130yL)。冷卻至0°C后依次加入KBr(50yL，2.5μπιο1，0.05M水溶液）和BiuNCl (30yL，1.5μπι〇1，0.05M水溶液)劇烈攪拌下依次緩慢加入碳酸氫鈉溶液(33yL)，飽和食鹽水 (61yL)和次氯酸鈉(4(^1^，0.06臟〇1，1.51〇持續攪拌30分鐘至反應完全。加入水(21^)和0〇1 (2mL)稀釋后用10%的檸檬酸酸化至ρΗ = 3。用乙酸乙酯（2X30mL)萃取合并有機相用飽和 食鹽水（15mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮得到羧酸并直接用于下一 步反應。將上文得到的羧酸（8mg，0.02mmol)溶于甲苯（2ml)中并依次加入DIPEA(30yL， 0· 18mmol)和2，4，6-trichlorobenzoyl chloride(20yL，0· 13mmol)室溫下攬摔2小時，將該 反應液取出后在3小時內滴加至DMAP (35mg，0.29mmo 1)的DCM(8mL)溶液中。持續攪拌10小時 后加入飽和氯化銨溶液（15mL)淬滅反應。用乙酸乙酯(2 X 40mL)萃取，有機相依次用飽和碳 酸氫鈉溶液（15mL )，飽和食鹽水（15mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮。 殘余物用硅膠柱層析（正己烷/乙酸乙酯= 3/1)得到化合物22(5.5mg，43%)無色油狀物. 7.2Hz，2H)，3.90(dd，J=11·3,5·0Ηζ，2Η)，3.47(s，6H),3.40-3.38(m，2H)，3.37(s，6H)， 3.34(dd，J=11.6,4.8Hz，2H)，3.28(dd，J = 8.6,7.2Hz，2H)，3.22-3.16(m，2H)，3.11(dd，J = 11.2,9.7Hz,2H) ,2.95(t ,J = 8.5Hz,2H) ,2.66(s,2H) ,2.37(dd ,J=17.3,1.7Hz,2H), 2.08-2.05(m,2H) ,1.80(dd,J = 4.9,2.5Hz,2H) ,1.79-1,75(m,2H) ,1.66(dd,J=14.5, 2.9Hz,2H),1.39-1.32(m,4H),0.93(d,J=7.6Hz,2H),0.90(s,18H),0.87(s,6H),0.85(t,J =7.0Hz,6H),0.81(s,6H),0.72(dd,J=11.5,6.9Hz,2H),0.69-0.64(m,2H),0.40-0.32(m, 2H)，0·26-0·18(m，2H)，0·10(s，6H)，0·09(s，6H); 13C NMR(125MHz，CD3CN)S170.94,108.71， 105.74,89.27,85.95,84.05,83.39,81.51,80.62,80.27,79.95,77.24,76.86,76.60, 75.78,74.56,74.34,66.23,62.71,61.46,60.11,57.62,57.44,56.42,40.72,39.14, 38.51,38.15,36.89,36.08,35.11,27.12,26.37,26.27,25.61,24.40,23.98,21.95, 21.57,20.41,19.77,18.81,17.84,14.61,12.97,9.29,8.97,8.27,-4.32,-4.63；HRMS (ESI)m/z C58H104Na016Si2(+)[(M+Na)+]:1135.6755,1135.6753.
[0092] 實施例15
[0094] 將化合物22(2 .Omg，1.8μπιο1)溶于THF(1.5mL)中，冷卻至0°C后加入四丁基氟化銨 (TBAF)(300yL，lM in THF，300ymol)。反應體系在室溫下攪拌3小時后加入乙酸乙酯（20mL) 和水（10mL).分液后水相用乙酸乙酯(2x 20mL)萃取.合并有機相依次用飽和碳酸氫鈉溶液 (15mL)，飽和氯化銨溶液（15mL)，飽和食鹽水（15mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾 并減壓蒸餾。殘余物用硅膠柱層析（正己烷/乙酸乙酯= 1/1)制得無色油狀化合物（1) 4.23(d，J = 7.3Hz，2H)，3.90(dd，J=ll ·3,4·8Ηζ，2Η)，3.50(s，6H)，3.40(dd，J = 8.2， 1 ·5Ηζ，2Η) ,3.39-3.38(m，2H) ,3.38(s，6H)，3.34(dd，J= 11.6,4·9Ηζ，6Η)，3.32((1, J = 4.7Hz,6H),3.21-3.18(m,2H),3.18-3.15(m,2H),3.10(dd,J=11.2,9.7Hz,2H),3.02(t,J = 8.5Hz,2H),2.39(dd ,J=17.2,1.7Hz,2H),2.07(dd ,J=17.2,8.3Hz,2H),1.84-1.81(m, 2H),1.81-1.78(m,2H),1.69-1.64(m,2H),1.40-1.36(m,2H),1.35-1.31(m,2H),0.93-0.90 (m,2H),0.88(s,6H),0.87-0.84(m,6H),0.80(s,6H),0.75-0.70(m,2H),0.70-0.66(m,2H), 0.37(dt,J = 8.7,4.8Hz，2H) ,0.24(dt, J = 8.5,5.0Hz,2H) ;13C 匪R(125MHz,CD3CN)S 171.79,106.37,85.42,85.21,80.64,80.00,77.60,76.36,74.19,63.36,60.29,58.44, 41·52，39·26，37·49，35·98，27·18，24·73，22·23，20·60，13·78，13·48,9·78;HRMS(ESI)m/z C46H76Na016(+)[(M+Na)+]:907.5026,907.5023.
[0095] 實施例16
[0097] 將化合物14( 1 · 3g，5 · 2mmol)溶于DCM(50mL)冷卻至-45°C后依次緩慢滴加 BF3 · Et20(980μL，8mmol)和PhSH(650μL，6.3mmol)。室溫下持續攪拌2小時后加入Et 3N(5mL)淬滅 反應。用水(50mL)和乙酸乙酯（150mL)稀釋，分液后水相用乙酸乙酯（100mL)萃取，合并有機 相并依次用飽和碳酸氫鈉溶液(30mL)，氯化銨（30mL)和飽和食鹽水(30mL)洗滌，有機相用 無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮。殘余物用硅膠柱層析(正己烷/乙酸乙酯= 1/1)得到無 色油狀化合物15(65011^，36%)。[0]。2° = -29.9(。1.0,0〇10;1!1匪1?(5001!^，〇0(：13)37.60-7·38(m，2H)，7·36-7.15(m，3H)，4.93(t，J = 7.9Hz，lH)，4.76(d，J = 8.1Hz，lH) ,4.32-4.08 (m，lH)，3.53(s，3H)，3.47(s，3H)，3.34(ddd，J = 24.0，14.0,5.7Hz，3H)，2.14(s，3H);13C NMR(125MHz，αχη 3)δ169· 72,133.78,131.96,129.01,127.71,86.75,82.61,78.30,71.03， 65.69,59.92,58.61,21.15；HRMS(ESI)m/z C19H32Na02Si(+)[(M+Na)+]:343.2064, 343.2064；HRMS(ESI)m/z C19H32Na02Si(+)[(M+Na)+]:335.0924,335.0922.
[0098] 實施例17
[0100] 將化合物15( 142mg，0.45mmol)溶于Me0H(5mL)，室溫下加入催化量的NaOMe并持續 攪拌1小時，減壓濃縮除去MeOH。殘余物溶于干燥的DCM(15mL)后冷卻至0°C依次緩慢加入2， 6_lutidine(0· 18mL, 1 ·5mmol)和TBSOTf (0·22mL, 1 ·Ommol) ?在干溫度下持續攬摔1小時，用 飽和碳酸氫鈉溶液（10mL)淬滅反應并用乙酸乙酯（2 X 30mL)萃取，合并有機相依次用飽和 氯化銨（10mL)和飽和食鹽水（10mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮。殘余 物用硅膠柱層析（正己烷/乙醚= 95/5)得到無色油狀化合物16(15〇1^，86%)。[0]，=-42.7(c 1.0.DCM);1!! NMR(400MHz，CDC13)S7.56-7.38(m，2H),7.36-7.15(m，3H)，4.57(d，J = 9.1Hz,lH) ,4.13-4.04(m,lH) ,3.58(s,2H) ,3.51-3.47(m,lH) ,3.45(d,J = 6.3Hz,3H), 3.35-3.28(m,lH),3.17(dd,J=11.4,9.9Hz,lH),3.08(t,J = 8.4Hz,lH),0.95(s,9H) ,0.19 (s，3H)，0.14(d，J = 6.9Hz，3H);13C NMR(100MHz，CDC13)S134.77，131.24，128.87，127.16， 90.38,87.12,80.30,73.20,66.55,60.93,58.27,26.10,18.31,-3.89,-4.34；HRMS(ESI)m/ z C19H32Na02Si(+)[(M+Na)+]:407.1683,407.1684.
[0101] 實施例18
[0103]在干燥的圓底燒瓶中加入火焰灼燒干燥的4人分子篩（60mg)并加入化合物16 (12mg，3Ιμπιο 1)的二氯甲烷（lmL)溶液。室溫攪拌1.5小時候冷卻至-78°C，該溫度下加入19 (10mg，21ymol)(在干燥二氯甲烷0.5mL)，充分攪拌10分鐘后依次緩慢加入NIS(7mg，31y mol)的二氯甲烷(0.5mL)，和Tf0H(0.30yL，3.4μπιο1).持續攪拌0.5小時后緩慢升至室溫，加 入TEA (2mL)淬滅反應后加入水（15mL)和乙酸乙酯（50mL)萃取分液，水相用乙酸乙酯（50mL) 萃取。合并有機相后依次用飽和碳酸氫鈉溶液（10mL)、氯化銨（10mL)和飽和食鹽水（10mL) 洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，殘余物用硅膠柱層析(正己烷/乙酸乙酯 =1〇/1)得到無色油狀化合物23(1111^，71%)。[€[]。 2() = 3.3((3 1.0,0〇1〇;1!1匪1?(50冊!^， CDCl3)S7.37-7.22(m，10H)，4.73((1, J= 11.7Hz，lH)，4.69(d，J = 3.7Hz，lH)，4.48(d，J = 12.0Hz,lH),4.47(s,2H) ,3.68(dd,J=11.0,5.7Hz,lH) ,3.58(s,3H),3.54(ddd,J=12.3, 8.5,3.0Hz,3H),3.49(s,3H),3.48-3.42(m,lH),3.36(dd ,J=11.4,4.4Hz,lH),3.30(t ,J = 9.1Hz,lH),3.22(ddd ,J=10.6,8.9,5.8Hz,lH),3.10(d ,J = 9.3Hz,lH),2.85(dd ,J=15.3, 6.7Hz,lH),2.08-1.99(m,lH),1.89-1.80(m,lH),1.77-1.71(m,lH),1.68-1.62(m,lH), 1.38(dt ,J = 21.2,7.0Hz,lH) ,1.21(dd ,J=14.5,9.2Hz,2H) ,1.00(dd ,J=14.2,6.8Hz, 6H),0.90(d,J=4.8Hz,3H),0.89-0.85(m,9H),0.72-0.64(m,lH),0.61-0.54(m,lH),0.24 (ddd，J = 8.4,6.6,4.2Hz，2H)，0.08(s，3H)，0.00(s，3H) ;13C NMR(125MHz，CDC13)S139.28， 138.78,128.41,128.39,127.73,127.67,127.52,127.47,94.90,83.35,80.55,80.51, 79.46,79.02,73.16,73.05,72.73,70.49,68.15,61.27,60.28,58.91,42.41,38.50, 32.61,29.78,29.50,26.88,25.92,23.31,22.35,20.12,18.08,13.63,13.43,8.28,-4.57,-4.62；HRMS(ESI)m/z C43H6808NaSi(+)[(M+Na)+]:763.4576,763.4579.
[0104] 實施例19
[0106] 將化合物23(72mg,97ymol)溶于Me0H(6mL)中并加入10%Pd/C(10mg)將反應體系 用氫氣置換三次，在氫氣氛圍下攪拌2小時，待反應完成后使用氬氣置換三次并用硅藻土過 濾，濾液減壓濃縮殘余物用硅膠柱層析（正己烷/乙酸乙酯= 2/1)得到無色油狀化合物24 3.79-3.70(m，2H)，3.68(dd，J=11·0,5·7Ηζ，1Η)，3.58(s，3H),3.54-3.47(m，2H)，3.49(s， 3H),3.37(dd ,J=11.3,4.3Hz,lH),3.30(t ,J = 9.1Hz,lH),3.25-3.16(m,2H),3.15-3.05 (m,1H),1.88-1.80(m,2H),1.74-1.64(m,4H),1.60(b,3H),1.39-1.31(m,2H),1.24-1.19 (m,lH),0.98(s,3H),0.97-0.93(m,6H),0.91(s,9H),0.73-0.65(m,lH),0.65-0.58(m,lH), 0·35-0·31(m，lH),0.3卜0.23(m，lH)，0.10(s，3H)，0.05(s，3H) ;13C NMR(125MHz，CDCl3)S 95·04，83·87，83·33，80·48，75·91，73.16,61.72,61.28,60.35,58.95,42.93,38.54， 32.81,29.77,26.79,25.89,25.58,23.22,18.89,18.09,13.72,13.46,9.34,-4.56,-4.62； HRMS(ESI)m/z C29H56Na08Si(+)[(M+Na)+]:583.3637,583.3534.
[0107] 實施例20
[0109]將二醇化合物24(35mg，62μπιο 1)溶于DCM(0 · 7mL)后依次加入TEMPO(0 · 5mg，3 · 2μ mol)和碳酸氫鈉（380yL)。冷卻至0°C后劇烈攪拌下依次緩慢加入KBr(125yL，6.2ymol， 0.05M水溶液）、BiuNCl (1 OOyL，5 . Ομπιο 1，0.05M水溶液）、飽和碳酸氫鈉(90yL)溶液、飽和食 鹽水（165yL)和次氯酸鈉（108yL，0.16mmol，1.5M)。該溫度下持續攪拌30分鐘并TLC監測反 應。反應完全后加入水(2mL)和DCM(2mL).稀釋并用檸檬酸(0.3mL，10%wt水溶液)酸化至pH =4。用乙酸乙酯（2 X50mL)，合并有機相后用飽和食鹽水（15mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過 濾并減壓濃縮得到目標羧酸化合物(22mg，38ym 〇l)并直接用于下一步反應。
[0110] 將上文所得羧酸化合物溶于干燥的甲苯依次加入DIPEA(15yL，90μπι〇1)和2,4,6_ trichlorobenzoyl chloride(10yL，64ymol)并在在室溫下攪拌2小時。將所制得溶液溶液 取出后緩慢加入DMAP (17mg，0 · 14mmo 1)的甲苯（1 OmL)熱溶液(80 °C )持續攪拌3小時后冷卻 至室溫，加入飽和氯化銨溶液（15mL)淬滅反應。用乙酸乙酯（2 X 70mL)萃取，有機相依次用 飽和碳酸氫鈉溶液（15ml )，飽和食鹽水（15ml )，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃 縮。殘余物用硅膠柱層析(正己烷/乙酸乙酯= 3/1)得到無色油狀化合物25(2.5mg，40%)。 8.5Hz,2H),3.66(ddJ=11.0,5.3Hz,2H),3.49(d,J = 4.6Hz,6H),3.51-3.46(m,2H),3.46-3.41(m,2H),3.39(s,6H),3.38(d,J=7.5Hz,4H),3.33-3.27(m,2H),3.21-3.10(m,4H), 2.40(dd,J=16.2,1.4Hz,2H) ,2.09(s,2H),1.95-1.85(m,4H) ,1.68(dd,J=13.6,5.3Hz, 2H),1.34(dt,J=20.0,6.5Hz,2H),1.20-1.12(m,2H),1.00-0.93(m,2H),0.91(s,6H),0.90 (s,18H),0.87(t ,J = 7.2Hz,6H), 0.84(s,6H), 0.78-0.73(m,2H), 0.71 (dd,J= 11.2,6.1Hz, 2H) ,0 ·40-0·30(ι?，2H) ,0.30-0.22(m，2H)，0.08(s，6H)，0.05(s，6H) ;13C 匪R( 125MHz, CD3CN)5171.36,95.16,83.25,80.42,80.29,78.55,76.44,74.84,73.04,60.46,60.04, 57.98,41.18,38.03,35.41,32.83,26.36,25.42,23.68,22.26,19.85,17.81,12.98, 12.76,9.06,-5.26,-5.34；HRMS(ESI)m/z C58H104Na016Si2(+)[(M+Na)+]:1135.6755, 1135.6753.
[0111] 實施例21
[0113]將化合物25(2 · Omg, 1 · 8ymol)溶于THF( lmL)中，0°C下緩慢加入TBAF(200yL, 1M in THF，200ymol)后生成棕黃色溶液，此溫度下持續攪拌3小時后加入乙酸乙酯（20mL)和水 (10 m L)稀釋分液，水相用乙酸乙酯（2 X 2 0 m L)萃取。有機相依次用飽和碳酸氫鈉溶液 (15mL)，、氯化銨溶液（15mL)和飽和食鹽水（15mL)洗滌。有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾后 減壓濃縮殘余物用硅膠柱層析（正己烷/乙酸乙酯= 1/1)得到化合物無色油狀26(1.2mg， 75%)。[0]。2°=18.0(。l-O^CM); 1!! NMR(500MHz，CD3CN)S4.81(d，J = 3.8Hz，2H)，4.32(t，J =8.1Hz，2H)，3.69(dd，J=11.0,4.9Hz，2H)，3.54(s，6H),3.50-3.42(m，6H)，3.41(s，6H)， 3.39-3.32(m,4H) ,3.24-3.12(m,4H) ,2.70(d,J = 9.0Hz,2H) ,2.70(b,2H) ,2.44(dd,J = 16.8,1,5Hz,2H),1.92-1,84(m,4H),1.73(dd,J=14.8,3.1Ηz,2Η),1.38(dd,J=14.9, 7.6Hz,4H),1.00-0.94(m,2H),0.93(s,6H),0.91-0.85(m,12H),0.75(dd,J=10.7,7.9Hz, 4H) ,0 ·44-0·34(ι?，2H)，0.27(dd，J= 13.5,4.9Hz, 2H);13C 匪R( 125MHz，CD3CN)S171.12， 95.36,83.23,80.15,79.38,79.34,76.64,75.25,72.00,60.21,59.71,57.87,40.88, 37.89,35.33,32.80,29.43,26.38,23.84,22.23,19.80,12.98,12.84,9.01；HRMS(ESI)m/z C46H76Na016(+)[(M+Na)+]:907.5026,907.5023.
[0m] 實施例22
[0116] 將化合物19(3711^，0.08111111〇1)溶于001(1.511^)后加入2,6-二甲基吡啶（2,6-1扯丨(1丨116)(0.3011^，0.24111111〇1)冷卻至0°(：后加入了85(^'(0.2611^，0.12111111〇1)在該溫度下持 續攪拌1小時。加入碳酸氫鈉溶液（1 OmL).淬滅反應，用乙酸乙酯（2 X 30mL);有機相依次用 飽和氯化銨溶液（10mL)和飽和食鹽水（10mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓 濃縮。殘余物用硅膠柱層析(正己烷/乙醚= 85/15)制得目標硅醚化合物(25mg，54%)。
[0117] 將上文所得產物溶于乙酸乙酯（lmL)中并加入10%Pd/C(5mg)。將反應體系用氫氣 置換三次，在氫氣氛圍下攪拌2小時，待反應完成后使用氬氣置換三次并用硅藻土過濾，濾 液減壓濃縮殘余物用硅膠柱層析（正己烷/乙酸乙酯= 3/1)制得無色油狀二醇化合物 (17mg,99%)〇
[0118] 將上文二醇化合物（17mg，0 · 043μπιο1)溶于 DCM(300yL)后依次加入 ΤΕΜΡ0(0 · 3mg，2 μπιο 1)、飽和碳酸氫鈉溶液（115yL)。冷卻至0 °C后依次加入KBr (10yL，5μπιο 1，0 · 05M水溶液） 和BrnNCl (40yL，3.2μπι〇1，0.08M水溶液)劇烈攪拌下依次緩慢加入碳酸氫鈉溶液(31yL)，飽 和食鹽水(60yL)and次氯酸鈉(85卩1^0.136臟〇1，1.61〇持續攪拌30分鐘至反應完全。加入水 (2mL)和DCM(2mL)稀釋后用10%的檸檬酸酸化至pH = 3。用乙酸乙酯（2X30mL)萃取合并有 機相用飽和食鹽水（15mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮得到羧酸并直 接用于下一步反應。
[0119] 將上文得到的羧酸（8mg，0.02mmol)溶于DCM(0.6ml)中并依次加入DIPEA(40yL， 0·24mmol)和2，4，6-trichlorobenzoyl chloride(20yL，0· 13mmol)室溫下攬摔2小時，將該 反應液取出后在3小時內滴加至DMAP (35mg，0.29mmo 1)的DCM(8mL)溶液中。持續攪拌10小時 后加入飽和氯化銨溶液（15mL)淬滅反應。用乙酸乙酯(2 X 40mL)萃取，有機相依次用飽和碳 酸氫鈉溶液（15mL )，飽和食鹽水（15mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓濃縮。 殘余物用硅膠柱層析（正己烷/乙酸乙酯= 3/1)得到無色油狀化合物27(2.8mg，36%)。 6·5Ηζ，4Η)，3.39(dd，J=ll ·3,4·9Ηζ，2Η)，2.40(dd，J=17.4，1.6Hz，lH)，2.24(dd，J = 17.4,8.2Hz,2H),1.95-1.84(m,2H),1.69(dd ,J=14.9,3.5Hz,2H),1.55(d ,J = 5.0Hz,2H), 1.43-1.33(m,4H),1.33-1.27(m,2H),0.91-0.88(m,18H),0.86(s,6H),0.80(s,6H),0.79 (s,6H),0.67(ddd ,J=13.4,9.0,4.7Hz,2H) ,0.41-0.31(m,2H) ,0.26(dt ,J = 9.7,4.8Hz , 2H)，0.04(s，6H)，0.00(s，6H);13C 匪R(100MHz，CDC13)S171.3,79.6,77.2,75.7,75.6， 41.0,38.8,38.1,35.3,29.7,26.6,25.8,24.3,22.7,19.8,18.0,13.5,12.9,9.6,-3.9,-5·0;HRMS(ESI)m/z C44H8108Si2( + )[(M+H) + ]:793·5464，793·5502。
[0120] 實施例23
[0122] 將化合物27(2.Omg，2.5μπιο1)溶于THF(lmL)中，冷卻至0°C后加入四丁基氟化銨 (TBAF)(lmL，0.5mmol，0.5M in THF)。反應體系在室溫下攪拌28小時后加入乙酸乙酯 (20mL)和水（10mL).分液后水相用乙酸乙酯(2x 20mL)萃取.合并有機相依次用飽和碳酸氫 鈉溶液（15mL)，飽和氯化銨溶液（15mL)，飽和食鹽水（15mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干 燥，過濾并減壓蒸餾。殘余物用硅膠柱層析(正己烷/乙酸乙酯= 2/1)得到無色油狀化合物 28(1.〇11^，71%)。[0]。2° = 5.0(。Ο.Ι?ΟΜ);1!! NMR(300MHz，CDCl3)S4.41(t，J = 9.1Hz，2H)， 3.52-3.37(m,6H),2.45-2.24(m,4H),2.02-1.88(m,2H),1.83-1.69(m,4H),1.41-1.30(m, 4H),1.00-0.93(m,2H),0.90(s,6H),0.87(d,J=6.4Hz,6H),0.82(s,6H),0.74-0.63(m, 2H),0.40-0.31(m，2H),0.3卜0.22(m，2H); 13C 匪R(100MHz，CDC13)S171.3,79.9,77.2, 75.5,75.3,41·1,38.4,35.1，26·6,24·2,22·2,19.9,13.5,12.5,9.6;HRMS(ESI)m/z C32H5308( + )[(M+H) + ]:565·3735，565·3732。
[0123] 實施例24
[0125]將化合物化合物1(1 .Omg)溶于lmL的乙醇中并加入0. lmL氫氧化鈉的水溶液(氫氧 化鈉質量分數10%)。65°(：下攪拌1小時減壓蒸餾除去乙醇，殘余物冷卻至5°C后用稀鹽酸中 和酸化并用二氯甲烷萃取，有機相干燥后旋干得到白色泡沫狀單體酸（1.〇mg)。將得到的單 體酸（1 . Omg)溶于lmL甲醇并冷卻至4 °C，冷卻后的溶液中加入三甲基硅基重氮甲烷 (TMSCH2N2，50yL，2.0M乙醚溶液)減壓蒸餾除去MeOH和過量的三甲基硅基重氮甲烷，殘余物 用硅膠柱層析(正己烷/乙酸乙酯= 3/1)得到白色泡沫狀化合物3(1.〇!^)。[<^25 = -42.8((： 0.17,Me0H)；IR(film)vmax 3520,2959,1741,1435,1370,1259,1162,1096,1073,991cm_1 ；ΧΗ Mffi(CD3CN)4.23(lH，d，J = 7.6Hz)，3.90(lH，dd，J=11.0,4.8Hz)，3.59(3H，s)，3.55(lH， m)，3.50(3H，s) ,3.45( lH，dd，J = 8.2,2·0Ηζ)，3· 37(3H，s) ,3.35( lH，dd，J= 11 ·4,4·8Ηζ)， 3.18(lH,m),3.17(lH,m),3.10(lH,dd,J=l 1.0,9.6Hz) ,3.02(lH,t,J = 8.3Hz),2.98( 1H, m) ,2.87( lH,d,J = 2.8Hz) ,2.46( lH,dd,J= 17.2,2.0Hz), 2.27( lH,dd,J= 17.2,8.2Hz), 1.80(lH,ddd,J=13.0,4.8,2.0Hz),1.63(lH,m,H-8a),1.55(lH,m,H-8b),1.43(lH,ddd,J = 13.0,11.4,11.0Hz),1.20(2H,m),0.93(3H,s),0.93(3H,t J = 6.9Hz),0.82(3H,s) ,0.58 (lH,m),0.48(lH,m),0.30(lH,m),0.16(lH,m)；13C NMR(CD3CN),173.3,106.4,85.4,84.9, 81.4,79.9,75.9,74.1,73.9,63.3,60.3,58.4,52.0,43.8,39.3,37.3,35.6,27.4,25.6, 22.2,18.9,13.9,13.4,9.2；HRESI/APCIMS m/z C24H4209Na[(M+Na)+]:497.2738, 497.2721。
[0126] 生物學實驗：
[0127] 在96孔板鋪上Jurkat細胞（1X105/孔，150uL/孔），靜置1小時。然后細胞用化合物 1，3,26,28與TCR-依賴型刺激物（PMA 80nM in DMS0和PHA 10ug/mL in water)或者非TCR-依賴型刺激物（PHA80nM in DMSO和衣曲諾霉素 luM in DMSO)共同處理，并以乙醇/DMSO作 為陰性對照。由于PMA/PHA和PMA/衣曲諾霉素的毒性，細胞也用化合物分別單獨進行處理。 DMS0的濃度維持在0.21 %以降低其對Jurkat細胞的毒性。孵育24小時，每孔取出50uL的培 養基上清液放入單獨培養皿，用alphaLISA試劑盒(PerkinElmer，Waltham，MA)來測量IL-2 的濃度。48小時后測量細胞活性(MTT法）。
[0128] 我們以永生T-細胞〇1^1?^)為模型測試了(：〇(3〇8〇11(16分子的免疫調節功能。刺激 T-細胞產生IL-2采用了兩種方式，一種是T-細胞受體(TCR)依賴型方法，一種是TCR非依賴 型方法。TCR依賴型方法采用佛波醇-12-肉豆蔻酸-13-酯(PMA，80nM)加植物血球凝聚素 (PHA，10ug/mL)的條件；非TCR依賴型方法是采用PMA(80nM)和衣曲諾霉素（luM)刺激。 Cocosolide 1和化合物26都可以降低IL-2的濃度，而不影響細胞的生存能力（圖SAAhTCR 非依賴型的敏感性更強，而兩種模式下都是劑量依賴性的。大環28和單體酯3顯示了較低的 活性(圖2C和D)，表明糖和二聚結構對靶蛋白的識別和活性非常重要。
[0129] 綜上所述，發明人付出了大量的創造性勞動，分離得到了含有木吡喃糖苷結構的 二聚體大環內酯化合物Cocosolide，并完成了它以及結構類似物的全合成方法，驗證了它 們具有良好的T細胞生長因子IL-2的抑制活性和較小的細胞毒性，可以作為免疫抑制劑用 于免疫疾病治療的候選化合物，對于免疫疾病治療藥物的研發具有及其重要的意義和工業 應用價值。
[0130] 應當理解，這些實施例的用途僅用于說明本發明而非意欲限制本發明的保護范 圍。此外也應理解，在閱讀了本發明的技術內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種 改動、修改和/或變型，所有這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍 內。
【主權項】
1. 具有通式（I)所示結構的化合物及其藥學上可接受的鹽:其中，R1-R8獨立的選自H、 C1-C6的烷基，C1-C6的烷氧基，鹵素，羥基，氨基，硝基，氰基，巰基，R 9-Riq獨立的選自C1-C6的 烷基，C 1-C6的烷氧基，鹵素，羥基，氨基，硝基，氰基，巰基，R11-R12獨立的選自H、C 1-C6的烷基， Ci-C6的烷氧基，[if素，羥基，氣基，硝基，氛基，疏基，2. 根據權利要求1所述的化合物，其特征在于:優選的，其中R1-R8為HSC1-C 3的烷基，R9-Rit^C1-C3 的烷基，R11-R12SHSC1-C3 的烷基。3. 根據權利要求2所述的化合物，其特征在于:優選的，其中R1-R4為IR5-R 8SC1-C3的烷 基，R9_RlQ為Cl -C3 的烷基，Rll_Rl2為H。4. 根據權利要求1-3所述的化合物，其特征在于:優選的，所述化合物的結構如下：5. -種權利要求4所述化合物Cocosol ide (1)的合成方法，其特征在于，包括由化合物 22經過脫保護基反應制備的步驟，其中Pg獨立的選自常規的羥基保護基，進一步的，Pg優選 TBS，脫保護基的步驟優選在四丁基氟化銨(TBAF)存在下進行6. 根據權利要求5所述的方法，其特征在于:所述化合物22經由化合物21通過氧化成羧 酸并酯化偶聯制備，進一步的，所述氧化優選的在Tempo的存在下堿性條件下進行，所述酯 化偶滕優詵的亦2.4.6-=氳蘢甲酰氳、DTPRA、DMAP的存亦下講桿，7. 根據權利要求6所述的方法，其特征在于:所述化合物21經由化合物20在還原性的條 件下脫除芐基制備，所述還原性的條件優選的為氫氣條件，進一步的，氫氣還原的條件下優 選的加入Pd/C作為催化劑8. 包含權利要求1-4任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物。9. 權利要求1-4任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在制備治療免疫疾病藥物 中的用途，優選的所述免疫疾病為T細胞生長因子IL-2介導的免疫疾病。10. 具有如下結構的Cocosolide結構類似物：
【文檔編號】A61P37/00GK105884843SQ201610231604
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月14日
【發明人】葉濤, 許正雙, 李洋, H·盧斯奇, V·J·保羅, S·P·古納塞克拉
【申請人】北京大學深圳研究生院, 深圳乾延藥物研發科技有限公司