一種巴豆苷的制備方法及其抗腫瘤應用
【專利摘要】本發明公開了一種巴豆苷的制備方法及其抗腫瘤應用。制備方法包括以下步驟：將巴豆粉碎，過20目篩；加入4~6倍的50~60%的乙醇溶液進行超聲提取，過濾，濾液減壓濃縮，濃縮液上硅膠柱，氯仿?甲醇洗脫，收集洗脫液，濃縮后經高速逆流色譜法分離純化，冷凍干燥即得產品。通過體外腫瘤細胞體外抑制試驗，觀察巴豆苷的抗腫瘤作用，結果表明，巴豆苷對腹水型S180、P338、HL?60等均有一定抑制作用，且其毒副作用小。將巴豆苷與醫學上可接受的輔料一起制成抗腫瘤的藥物，藥物的劑型為注射劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑、合劑、口服液中的一種。
【專利說明】
一種巴豆苷的制備方法及其抗腫瘤應用
技術領域
[0001] 本發明公開了一種巴豆苷的制備方法及其抗腫瘤應用。
【背景技術】
[0002] 巴豆為大戟科植物巴豆的干燥成熟種子，性辛、熱，有大毒，歸胃、大腸經；內服瀉 下寒積、逐水消腫、祛痰利咽，外用蝕瘡，可用惡瘡疥癬。
[0003] 巴豆苷是一種以生物堿為苷元的核糖苷，目前巴豆苷主要采用水提，但提取率不 高，雜質多、純度低且易變質等，不利于進一步開展相關藥學、藥效、活性機制研究。近年 來，大量研究表明巴豆中生物堿類成分具有限制的抗腫瘤作用，如能誘導人肝癌SMMC-7721 細胞、人胃腺癌SGC-7901細胞等腫瘤凋亡。
[0004] 通過文獻檢索，國內尚未見巴豆苷在抗腫瘤藥物中的應用。
【發明內容】
[0005] 為滿足臨床需要，擴大用藥品種，更好地治療癌癥，提供一種巴豆苷的制備方法及 其抗腫瘤應用。
[0006] 為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案： 將巴豆粉碎，過20目篩;加入4~6倍的50~60%的乙醇溶液，置于頻率為40KHz的超聲裝置 中，于超聲功率500W、超聲溫度60~70°C的條件下提取2~3h，過濾，濾液減壓濃縮，濃縮液上 硅膠柱，體積比為10:1~50: 3的氯仿-甲醇洗脫，洗脫劑流速為2.0~2.5mL/min，TLC跟蹤監 測，收集洗脫液，濃縮后經高速逆流色譜法分離純化，冷凍干燥即得產品。
[0007] 所述的高速逆流色譜法溶劑系統為環己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，體積比為（3-5): (2-5) :(6-8): (2-4)，上相為固定相，下相為流動相。
[0008] 通過體外腫瘤細胞體外抑制試驗，觀察巴豆苷的抗腫瘤作用，結果表明，巴豆苷對 腹水型S180、P338、HL-60等均有一定抑制作用，且其毒副作用小。
[0009] 本發明的有益效果通過以下實驗得到了驗證： 實驗方法： 1、 受試提取物:純度大于98%的巴豆苷 2、 細胞株:細胞株S180、P338、HL-60 3、 給藥劑量和方法 巴豆苷組：l〇mg/kg/天，灌胃給藥，隔一天一次，共五天。
[00?0] 陰性對照組：10mg/kg/天，生理鹽水肌注給藥，隔一天一次，共五天。
[0011]陽性對照組:30mg/kg/天，5-氟尿啼啶肌注給藥，隔一天一次，共五天。
[0012]灌胃后2h，用HPLC檢須恤漿藥物濃度。
[0013] 4、種植瘤模型的建立與給藥 (1)皮下種植:分別將上述細胞培養至90%融合，收集細胞，取2 X 10 6細胞懸液，注射至 小鼠肋下皮下組織，于術后15天取材，稱量瘤重。另取同樣模型，觀察30天，計算藥物對模型 動物存活率的影響。
[0014] (2)脾內種植瘤肝轉移模型：取2X10 6細胞懸液注射至小鼠脾包膜內，于術后15天 取脾和肝臟，測量瘤重和肝轉移數。
[0015] (3)給藥方式:種植瘤細胞同時給藥。
[0016] 5、結果 結果如表1、表2和表3顯示，巴豆苷用藥均有不同程度的抑制腫瘤生長和轉移的作用， 可延長實驗小鼠的生存期。
[0017] 表1巴豆苷對種植瘤的抑制作用(n=20，i土 S)
表2巴豆苷對腫瘤肝轉移發生率的影響(n=20，％)
表3巴豆苷對實驗小鼠生存率的影響(n=20，％)
由表1、表2和表3可以看出，巴豆苷用藥抑制腫瘤生長、轉移的效果與陽性對照組基本 相當，可有效延緩實驗小鼠的生存壽命，其效果明顯優于對照組。
[0018] 本發明用于制備抗腫瘤藥物時，將巴豆苷與醫學上可接受的輔料一起制成抗腫瘤 的藥物，藥物的劑型為注射劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑、合劑、口服液中的一種。
[0019] 下面將結合【具體實施方式】進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限 于下列實施方式。
【具體實施方式】
[0020] 實施例1 巴豆苷的制備 將巴豆粉碎，過20目篩;加入5倍的60%的乙醇溶液，置于頻率為40KHZ的超聲裝置中，于 超聲功率500W、超聲溫度65 °C的條件下提取3h，過濾，濾液減壓濃縮，濃縮液上硅膠柱，體積 比為50:3的氯仿-甲醇洗脫，洗脫劑流速為2. OmL/min，TLC跟蹤監測，收集洗脫液，濃縮后經 高速逆流色譜法溶劑系統為環己烷-乙酸乙酯-甲醇-水、體積比為5:4:7:3、上相為固定相、 下相為流動相分離純化，冷凍干燥得產品，經檢測，純度為98.4%。
[0021] 實施例2 片劑：巴豆苷40g，淀粉140g，鵝去氧膽酸鹽20g，制粒，壓片制成1000片。服用方法:成人 一次1片，一日2次。
[0022] 實施例3 膠囊：巴豆苷40g，淀粉140g，殼聚糖20g，混勻，制成1000粒。服用方法:成人一次1粒，一 日2次。
【主權項】
1. 一種巴豆苷的制備方法，其特征在于包括以下步驟:將巴豆粉碎，過20目篩;加入4~6 倍的50~60%的乙醇溶液，置于頻率為40KHz的超聲裝置中，于超聲功率500W、超聲溫度60~70 °C的條件下提取2~3h，過濾，濾液減壓濃縮，濃縮液上硅膠柱，體積比為10:1~50: 3的氯仿-甲醇洗脫，洗脫劑流速為2.0~2.5mL/min，TLC跟蹤監測，收集洗脫液，濃縮后經高速逆流色 譜法分離純化，冷凍干燥即得產品。2. 根據權利要求1所述的一種巴豆苷的制備方法，其特征在于，所述的高速逆流色譜法 溶劑系統為環己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，體積比為(3-5) : (2-5) : (6-8) : (2-4)，上相為固定 相，下相為流動相。3. 根據權利要求1~2所述方法制備的巴豆苷在制備抗腫瘤藥物中的應用。
【文檔編號】C07H1/08GK106046090SQ201610303001
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月10日
【發明人】楊成東
【申請人】南京澤朗醫藥科技有限公司