專利名稱：多核苷酸微陣列和使用該微陣列檢測靶多核苷酸的方法
技術領域：
本發明涉及一種多核苷酸微陣列(polynucleotide microarray)和使用該微陣列檢測靶多核苷酸的方法，所述微陣列包括根據解鏈溫度(Tm)而被固定的多核苷酸。
背景技術：
微陣列是為相關技術領域人員所熟悉的。微陣列的實例在美國專利5,744,934和5,744,305中描述。利用光蝕刻技術(photolithography)制作(fabricate)微陣列的方法是已知的。根據一種利用光蝕刻技術制作多核苷酸微陣列的方法，用具有可去除的保護基的單體包被基質(substrate)的預定區域，并將所述區域暴露于能量源以去除所述保護基。然后，去保護的單體和具有可去除的保護基的單體偶聯。重復上述過程可產生多核苷酸微陣列。在這樣的情形下，將要被固定在多核苷酸微陣列上的多核苷酸可通過持續延伸多核苷酸單體來制備。可選地，可以將事先合成的多核苷酸固定于多核苷酸微陣列的預定區(也稱為“定點技術(spottingtechnique)”)。這種制作多核苷酸微陣列的方法也在美國專利5,744,305，5,143,854和5,424,186中舉例說明。上述有關多核苷酸微陣列及其制作方法的專利文件的全文內容包含在本文中作為參考。
然而，探針多核苷酸隨機固定在這些傳統的多核苷酸微陣列上。此外，單個微陣列使用覆蓋層(cover)覆蓋，該覆蓋層具有單一雜交溶液的入口和出口，并由此進行單一雜交反應。因此，傳統的微陣列技術不能指示探針多核苷酸可根據Tm進行固定，也不能指示包含多個區(aplurality of blocks)的多核苷酸微陣列。
已知多種檢測靶多核苷酸的方法。通常根據這些方法，靶多核苷酸用可檢測的標記物標記，然后和探針多核苷酸在多核苷酸微陣列上雜交。雜交完成后，分析雜交結果。例如美國專利5,871,928公開了檢測靶多核苷酸和探針多核苷酸的雜交的方法，包括(a)將標記物連接到靶多核苷酸；(b)在雜交條件下使標記的靶多核苷酸和固定在基質的已知區上的探針多核苷酸集合(collection)接觸；和(c)測定與靶多核苷酸雜交的探針多核苷酸的序列，所述集合包括至少100探針/cm2。
根據上述方法，使用固定在微陣列上的探針多核苷酸集合。然而，它們沒有涉及使用固定的探針多核苷酸區的方法，所述區是根據探針多核苷酸和靶多核苷酸之間的Tm分組的。
發明內容
本發明提供了多核苷酸微陣列，它包括固定在基質上的探針多核苷酸，其中所述探針多核苷酸根據這些探針多核苷酸和靶多核苷酸之間的解鏈溫度(Tm)分組。
本發明還提供了使用所述多核苷酸陣列檢測靶多核苷酸的方法，其中雜交是根據探針多核苷酸的區使用不同的雜交溶液進行的。
本發明一方面提供了一種多核苷酸微陣列，它包括兩組或多組點(spot)，這些點上固定了探針多核苷酸，其中每組的探針多核苷酸具有落在探針多核苷酸和靶多核苷酸之間的Tm的預定范圍內的Tm。
本發明另一方面提供了檢測靶多核苷酸的方法，包括將含有靶多核苷酸的樣品點樣(spotting)到探針多核苷酸上，所述探針多核苷酸固定在多核苷酸微陣列的各組點(the groups of the spots)上，然后進行雜交，其中至少一組點經雜交溶液處理(所述雜交溶液包括變性劑，穩定劑或其混合物)，使得固定于各組點上的探針多核苷酸和靶多核苷酸之間的Tm偏差在預定的范圍內。
本發明的上述和其它特征和優點通過示例性實施例的詳細描述并參考附圖會更明顯，圖1顯示了根據本發明包含兩個區(block)的一種多核苷酸微陣列的實例。
發明詳述本發明提供了一種多核苷酸微陣列，它包括兩組或多組點(下文也稱“區”)，其上固定了探針多核苷酸，其中每組探針多核苷酸具有落在探針多核苷酸和靶多核苷酸之間的Tm的預定范圍內的解鏈溫度(Tm)。
本文術語“多核苷酸微陣列”指一種分析系統，其中多核苷酸組以高密度固定于基質上。本文術語“點(spot)”指微陣列上的區域，在這樣的區域中相同的多核苷酸被固定于基質上。
在本發明的多核苷酸微陣列中例如首先選出靶多核苷酸。計算靶多核苷酸和用于探測它們的探針多核苷酸之間的Tm。根據由此獲得的Tm，對探針多核苷酸進行分組。例如，當特定靶多核苷酸和探針多核苷酸之間的Tm在30-60℃的范圍，所述探針多核苷酸可根據Tm分成三組，即30-40℃，40-50，和50-60℃。根據上述在固體基質上合成多核苷酸的傳統方法，將每組的探針多核苷酸固定在相同的區域。固定在相同區域的各組探針多核苷酸可用覆蓋物(cover)覆蓋，所述覆蓋物具有相應雜交溶液的入口和出口，以便將各組探針多核苷酸單獨暴露于相應的雜交溶液。結果固定每組探針多核苷酸的區域形成了獨立暴露于相應雜交溶液的隔室(compartment)。本發明中固定于相同區的各組探針多核苷酸之間Tm的差異沒有具體的限制，但優選為10℃或更低，且更優選5℃或更低。
本文術語“解鏈溫度(Tm)”指50％的雙鏈多核苷酸在變性條件下分解成單鏈或50％的單鏈多核苷酸在雜交條件下雜交的溫度。所述Tm隨使用的溶液，堿基組成，和多核苷酸序列的長度，以及變性劑和穩定劑的濃度而不同。Tm可通過實驗確定，或使用相關公式根據影響Tm的參數計算。例如，Tm可通過以下公式算出Tm＝81.5+16.6×log10M+0.41(％GC)-0.61(％甲酰胺)-500/長度(bp)其中M是Na+的摩爾濃度(mM)，％甲酰胺是甲酰胺的％(v/v)(見Meinkoth，J.和Wahl，G；(1984)Anal.Biochem.138，269)。
計算Tm的公式，例如上述公式，可以根據反應溶液中含有的變性劑或穩定劑來選用。本領域熟練技術人員可輕易獲得計算Tm的這些公式。
當由此制作的多核苷酸微陣列用于檢測靶多核苷酸的方法中時，可以提高該方法的敏感性和迅速性(rapidity)。例如在檢測靶多核苷酸時，當固定在本發明的多核苷酸微陣列上的各組探針多核苷酸采用的雜交溶液中含有不同濃度的變性劑時，可以調整具有高Tm的探針多核苷酸組的Tm，使之接近具有最低Tm的探針多核苷酸組的Tm。因此，更多能在同一溫度下雜交的探針多核苷酸可固定在單一的微陣列上。結果，可在單一微陣列上檢測更多的靶多核苷酸。此外，使用單一微陣列可提高檢測速率。
本發明還提供了檢測靶多核苷酸的方法，它包括將含有靶多核苷酸的樣品點到固定在本發明多核苷酸微陣列各組點上的探針多核苷酸上，然后進行雜交，其中至少一組點經雜交溶液處理(所述雜交溶液包括變性劑，穩定劑或其混合物)，使得固定于各組點上的探針多核苷酸和靶多核苷酸之間的Tm的偏差在預定的范圍內。優選，所述偏差在0-5℃的范圍內，更優選在0-3℃的范圍內。
本發明的方法還還包括使用熒光來檢測雜交結果。在這種情形下，靶多核苷酸可由多種可檢測標記物標記。例如，標記物可以是放射活性物質，熒光物質，酶，或配體。優選，靶多核苷酸用熒光物質標記。
本文所用變性劑是一種使得雙鏈多核苷酸不穩定的物質，但沒有具體限制。優選，所述變性劑是具有自由電子(free electron)的化合物，它能滅活多核苷酸堿基之間的氫鍵。例如，所述變性劑選自甲酰胺，尿素，氯化胍(guanidine chloride)，二甲基甲酰胺(DMF)，及其混合物。本文的穩定劑是穩定雙鏈多核苷酸的化合物，且沒有具體限制。由于多核苷酸通常是帶負電的，已知帶正電的化合物可穩定雙鏈多核苷酸。優選，所述穩定劑是含有陽離子如Na+，K+，Ca2+和Mg2+的金屬鹽。
本發明中變性劑和穩定劑的濃度可通過實驗按經驗確定，或可選地通過上述Tm公式來計算。
本發明中雜交的溫度可根據所需的特異性和敏感性變化。可在比Tm低20-25℃的溫度進行雜交，但不限于此。
以下將更具體的通過實施例描述本發明。然而，以下實施例只作為舉例而不是限制。
實施例實施例1制作具有根據Tm分組的點的多核苷酸微陣列在本實施例中，靶多核苷酸采用啟動子和野生型HNF-1α(肝細胞核因子-1α(hepatocyte nuclear factor 1-α))基因的外顯子1-10，所述基因與年輕人的成人發病型糖尿病(MODY3)相關。10種靶多核苷酸的多重PCR(multiple PCR)使用10對引物(SEQ ID NOS1-20)(每種引物10pmol)和來自人血液的gDNA(0.2μg)作為模板(見表1)進行。在以下條件中進行多重PCR95℃起始變性5分鐘；然后以95℃變性30秒，64℃退火10秒，和72℃延伸30秒的條件共進行30個循環；并且在72℃最后延伸3分鐘。在PCR中，加入Cy3-dUTP(Amersham Biosciences，Uppsala，Sweden)來制備使用熒光染料標記的靶多核苷酸。
表1源自HNF-1α基因的靶多核苷酸的擴增中使用的引物
設計了與這些靶核苷酸完全相配或錯配的探針多核苷酸。這些探針多核苷酸的特性總結在下表2中。如表2中所述，這些探針多核苷酸被分成兩組，即Tm為52.8-56.9℃的一組探針多核苷酸和Tm為69.4-77.8℃的一組探針多核苷酸，且這兩組分別固定在區1(block1)和2(block2)(見圖1)。
表2探針多核苷酸的序列和特性
表2所示的Tm值是通過使用PERL語言和Santa Lucia 98參數執行的一種程序(Samsung，Korea)來計算的。本領域普通技術人員可輕易獲得這些參數。
通過定點技術(spotting technique)使用放射狀聚乙二醇衍生物(radialpolyethyleneglycol derivative)(水凝膠(hydrogel))制作根據本發明的多核苷酸微陣列。所述舉例性多核苷酸微陣列制作法如下。
1合成具有環氧基(epoxy group)的放射狀聚乙二醇衍生物3-氯-1，2-環氧丙烷(Epichlorohydrin)(7.5mL)和溴化四丁基銨(tetrabutylammonium bromide)(0.32g)加入NaOH水溶液(50wt％，2mL)中并攪勻。然后，將乙氧基季戊四醇(pentaerythritol ethoxylate)(1g)逐漸加入上述溶液中，并在室溫攪拌18小時。通過薄層色譜(TLC)確定反應終點。當反應不徹底時，進一步在60℃攪拌反應溶液1小時。所得溶液用水(30mL)稀釋，并使用二氯甲烷(40mL)萃取3次以獲得有機層。使用飽和NaHCO3(40mL)將有機層洗三次，并加入無水MgSO4，然后進行干燥并在低壓除去溶劑。隨后，真空干燥兩天，以去除3-氯-1，2-環氧丙烷殘余物。結果獲得含有環氧基的放射狀聚乙二醇衍生物，用H-NMR鑒定，然后使用0.1N HBr/乙酸(冰(glacial))滴定環氧基。
2.合成二胺交聯劑戊(1，2-亞乙基二醇)二-甲苯磺酸酯(penta(ethyleneglycol)di-tosylate)(5g，9.2mmol)溶于二甲基甲酰胺(DMF)(40mL)。將NaN3(4.2g，64.1mmol)和吡啶(0.5mL)序貫加入上述溶液中，140℃攪拌18小時。低壓去除反應液中的溶劑，加入水(200mL)并同時攪拌。反應溶液使用二氯甲烷(40mL)萃取3次以便獲得有機層。有機層用鹽水(brine)(100ml)洗三次，并加入無水MgSO4，然后進行干燥并在低壓中除去溶劑，然后經(flash)柱層析(EA∶nHex＝1∶2)，得到二疊氮中間體(diazide intermediate)。將該二疊氮中間體溶于甲醇(30mL)，加入10％Pd-C(0.1當量)，并在氫氣環境中還原18小時。使用硅藻土片(Celite pad)從所得溶液中除去催化劑，并使用乙醇清洗該硅藻土片。將所得的濾出液(filtrate)和乙醇洗液混合，然后低壓除去溶劑，得到二胺交聯劑(diamine crosslinking agent)。
3.使用交聯劑制備凝膠基質溶液(gel matrix solution)將分子量為1,500道爾頓的聚乙二醇(PEG)加入2N NaOH水溶液中，并在冰浴中攪拌，以便制備PEG交聯劑溶液。
然后，將第一節中合成的具有環氧基的放射狀聚乙二醇衍生物溶于碳酸鹽緩沖液(0.1M，pH9.1)。將預先制備好的PEG交聯劑溶液逐漸加入上述溶液中，并在室溫攪拌3小時。當鑒定出反應終止時，所得溶液使用二氯甲烷萃取，低壓除去溶劑后保存在4℃。
4.通過在芯片上點樣(spotting)凝膠基質-DNA偶聯物溶液來制作多核苷酸微陣列將預先制備的探針多核苷酸加入第3節中制備的凝膠基質溶液中，使具有環氧基的放射狀聚乙二醇，二胺交聯劑，和探針多核苷酸的當量比為4∶1∶4，并在37℃溫育14小時同時進行攪拌，從而獲得基質-DNA偶聯物溶液。用所述基質-DNA偶聯物溶液作為點樣溶液。
玻璃表面經處理具有胺基，將點樣溶液點樣在該玻璃上，并在37℃的潮濕小室內溫育14小時。然后為進行背景對照，即為防止靶多核苷酸附著于玻璃表面，處理該玻璃表面使得玻璃表面未點樣處的胺基基團帶負電，然后在干燥器中溫育。
同時，制作對照多核苷酸微陣列。在對照多核苷酸微陣列中，固定在基質上的探針多核苷酸沒有根據Tm分組，使得雜交在相同的雜交條件下進行。
實施例2靶多核苷酸的雜交和檢測用實施例1中野生型HNF-1α基因的10種區序列的混合物作為靶多核苷酸。
在實施例1所制作的含有兩個區的多核苷酸微陣列中，區1(block 1)使用不含甲酰胺的雜交溶液。而區2(block 2)使用含有7.5％甲酰胺的雜交溶液。
經1.8％瓊脂糖凝膠電泳后，通過與分子量標記物進行對比來鑒定實施例1獲得的多重PCR產物。所述多重PCR產物揭示了所有10個靶基因位點(579，459，365，308，332，241，286，230，414，和171bp)的擴增。使用PCR產物純化試劑盒(Qiagen)純化PCR產物。純化的DNA與0.5U DNase I(Boehringer Mannheim，Germany)37℃溫育10分鐘，然后加入終止混合物(stop mix)終止反應。將切割的DNA產物的濃度調節到150-187.5nM，94℃變性5分鐘，并在冰上保溫2分鐘。將冷卻的(cooled)DNA溶液和相同量的雜交緩沖液(6×SSPE-0.1％Triton X-100)混合，然后加入到多核苷酸微陣列的雜交室(hybridization chamber)內。32℃溫育所述微陣列16小時，并使用洗滌緩沖液I(6×SSPE-Triton X-1000.05％)室溫洗5分鐘，接著用洗滌緩沖液II(3×SSPE-Triton X-1000.005％)室溫洗5分鐘。所述微陣列室溫干燥15分鐘，并進行掃描(試驗組)。在掃描中，使用GenePix 4000B型掃描儀(Axon Instruments，American)生成圖像，并使用GenePix Pro軟件(Axon Instruments，American)進行圖像分析。測定532nm的熒光。
在對照實驗中，如上所述，所用多核苷酸微陣列中具有固定的探針多核苷酸，并使得雜交在相同的條件中進行，即所用的多核苷酸微陣列未根據Tm分區。使用不含甲酰胺的雜交溶液在32℃(對照1)和40℃(對照2)進行雜交。對照1和2的其他條件相同。
結果顯示在下表3中。關于表3中區的描述僅限于試驗組。
表3雜交結果
Wp與靶多核苷酸完全相配的探針多核苷酸MP與靶多核苷酸錯配的探針多核苷酸比例In(Wp/Mp)值試驗組區1；0％甲酰胺，32℃；區2，7.5％甲酰胺，32℃對照10％甲酰胺，32℃對照20％甲酰胺，40℃如表3所示，固定在試驗微陣列的區1上的探針多核苷酸具有與對照微陣列1相同的條件。因此，熒光強度和In(Wp/Mp)幾乎沒有差異。與對照微陣列1相比，固定在試驗微陣列的區2上的探針多核苷酸的熒光強度略低，但In(Wp/Mp)值顯著增加。與對照微陣列2相比，固定在試驗微陣列的區2上的探針多核苷酸的熒光強度和In(Wp/Mp)值均增強。即，相同溫度條件下，使用具有兩個固定在基質上的多核苷酸區的微陣列進行的雜交可獲得與使用兩個微陣列相同的結果。
在單一溫度中進行具有較寬范圍的Tm分布的探針多核苷酸的雜交時，必須用的雜交溫度是具有低Tm的探針組和具有高Tm的探針組中的之一或兩組的最佳雜交溫度。如本實施例所述，根據本發明，將變性劑或穩定劑加入雜交溶液，能使得在單一微陣列和單一溫度中進行雜交。
從上述內容明顯可見，本發明的多核苷酸微陣列包括固定的探針多核苷酸，其中根據Tm將所述多核苷酸分區。因此，使用單一微陣列可檢測的靶多核苷酸數量以及檢測的速率可提高，由此降低檢測成本。
此外，本發明的多核苷酸微陣列還提高檢測靶多核苷酸的敏感性和迅速性。
根據本發明檢測靶多核苷酸的方法，可在高敏感度下迅速檢測所述靶多核苷酸。
盡管本發明具體顯示并根據示例性實施方式描述，本領域熟練技術人員應理解可進行各種形式和細節變化，而不偏離以下權利要求所定義的本發明的精神和范疇。
<序列表>
<110>三星電子株式會社(Samsung Electronis Co.Ltd.)<120>多核苷酸微陣列和使用該微陣列檢測靶多核苷酸的方法<130>PN051215<160>40<170>KopatentIn 1.71<210>1<211>41<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>1taatacgact cactataggg tggccgtgag catcctctgc c 41<210>2<211>40<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>2gtaaccctca ctaaagggag cgtgggttgc gtttgcctgc 40<210>3<211>40<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>3taatacgact cactataggg cgtggccctg tggcagccga 40<210>4<211>40<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>4gtaaccctca ctaaagggag ggctcgttag gagctgaggg 40
<210>5<211>42<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>5taatacgact cactataggg cccttgctga gcagatcccg tc 42<210>6<211>40<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>6gtaaccctca ctaaagggag ggatggtgaa gcttccagcc40<210>7<211>40<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>7taatacgact cactataggg gcaaggtcag gggaatggac40<210>8<211>42<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>8gtaaccctca ctaaagggac gccgttgtac ctattgcact cc 42<210>9<211>43<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物
<400>9taatacgact cactataggg ggctcatggg tggctatttc tgc43<210>10<211>42<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>10gtaaccctca ctaaagggac gtgtcccttg tccccacata cc 42<210>11<211>42<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>11taatacgact cactataggg tgctgaggca ggacactgct tc 42<210>12<211>42<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>12gtaaccctca ctaaagggat acaagcaagg acactcacca gc 42<210>13<211>41<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>13taatacgact cactataggg cccggacaca gcttggcttc c 41<210>14<211>42<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>14gtaaccctca ctaaagggaa tccccaccag cttaccgatg ac 42<210>15<211>40<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>15taatacgact cactataggg caggcctggc ctccacgcag40<210>16<211>40<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>16gtaaccctca ctaaagggag gggctctgca gctgagccat40<210>17<211>41<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>17taatacgact cactataggg ggcccagtac acccacacgg g 41<210>18<211>40<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>18gtaaccctca ctaaagggag ggcagggaca gtaagggagg40<210>19<211>41<212>DNA<213>人工序列
<220>
<223>引物<400>19taatacgact cactataggg gccttgtttg cctctgcagt g 41<210>20<211>41<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>20gtaaccctca ctaaagggag gccatctggg tggagatgaa g 41<210>21<211>11<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>21gggagtcctg c 11<210>22<211>11<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>22ggaagtcctg c 11<210>23<211>12<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>23ccaacacctc aa 12<210>24<211>12
<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>24ccaacgcctc aa 12<210>25<211>12<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>25acccagaacc cc 12<210>26<211>12<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>26acccagagcc cc 12<210>27<211>12<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>27ctgccggcat cc 12<210>28<211>12<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>28ctgccagcat cc 12
<210>29<211>14<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>29gagatgaagg tctc14<210>30<211>14<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>30gagatgaaga tctc14<210>31<211>14<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>31tggtgggccg cctc14<210>32<211>14<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>32tggtggagcg cctc14<210>33<211>12<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>33cgggccgccc tg 12
<210>34<211>12<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>34cgggccaccc tg 12<210>35<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>35caaccggcgc aaagaa 16<210>36<211>13<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>36accggcacaa aga 13<210>37<211>15<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>37cccccagtaa ggtcc 15<210>38<211>15<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸
<400>38cccccagtaa aggtc 15<210>39<211>13<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>39ccggcccacc ggc 13<210>40<211>13<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>探針多核苷酸<400>40ccggcccacg ggc 1權利要求
1.一種多核苷酸微陣列，包含兩組或多組可將探針多核苷酸固定于其上的點，其中所述每組探針多核苷酸具有在探針多核苷酸和靶多核苷酸之間的Tm的預定范圍內的解鏈溫度(Tm)。
2.權利要求1的多核苷酸微陣列，其中各組點之間的Tm的差異是10℃或更小。
3.權利要求1的多核苷酸陣列，其中各組點之間的Tm的差異是5℃或更小。
4.檢測靶多核苷酸的方法，包括將含有靶多核苷酸的樣品點樣到探針多核苷酸上，然后進行雜交，其中所述探針多核苷酸固定在權利要求1的多核苷酸微陣列的點組上，其中至少一組點用雜交溶液處理，使得固定在各組的點上的探針多核苷酸和靶多核苷酸之間的Tm的差異在預定的范圍內，其中所述雜交溶液含有變性劑，穩定劑，或其混合物。
5.權利要求4的方法，其中所述靶多核苷酸用熒光標記物標記，而且所述方法進一步包括使用熒光來檢測雜交的結果。
6.權利要求4的方法，其中所述變性劑選自甲酰胺，尿素，氯化胍，二甲基甲酰胺(DMF)，及其混合物。
7.權利要求4的方法，其中所述穩定劑選自Na+，K+，Ca2+，和Mg2+。
8.權利要求4的方法，其中所述Tm的偏差在0℃-5℃的范圍內。
9.權利要求4的方法，其中所述Tm的偏差在0℃-3℃的范圍內。
全文摘要
本發明涉及一種多核苷酸微陣列，包括兩組或多組可將探針多核苷酸固定在其上的點，其中所述每組探針多核苷酸具有落在探針多核苷酸和靶多核苷酸之間的Tm的預定范圍內的解鏈溫度(Tm)。本發明還提供了使用多核苷酸微陣列檢測靶多核苷酸的方法。
文檔編號G01N33/53GK1737160SQ200410078710
公開日2006年2月22日 申請日期2004年9月17日 優先權日2003年12月3日
發明者白象鉉 申請人:三星電子株式會社