專利名稱：雙參注射劑的質量控制方法
技術領域：
本發明是一種雙參注射劑的質量控制方法，屬于中藥的技術領域。
背景技術：
心腦血管疾病如冠心病、腦血栓、高血壓、腦梗塞等均是當今世界上最常見和危害最大的疾病之一，也是危害我國人民健康的常見病、多發病，已成為人口死亡的主要原因之一；據報告，近年來的發病率有逐年增高趨勢，而且中、青年患者不斷增加。為了治療這些疾病，北京奇源益德藥物研究所曾遞交了一份專利申請號為“200410022501.6”，名稱為“治療心腦血管疾病的中藥及其制備方法”的申請，該藥物由紅參(或人參)和丹參作為原料制備而成；藥物制劑必須要在保證產品質量穩定可控安全的基礎之上，才能不斷的更新發展，為了更好的控制該制劑的質量，保證用藥的安全性，更好的指導生產，使工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產品質地，需要研究、控制該注射劑質量的方法。
發明內容
本發明的目的在于提供一種雙參注射劑的質量控制方法，這種方法針對的是如下產品向相關的生產、檢測機構提供檢測的指標、檢測的手段、技術方法等，以便更好的控制該制劑的質量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導生產，使生產工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產品質地，所針對的產品為1)由紅參(或人參)藥材∶丹參藥材＝1∶1-10組方，分別或合并采用水或乙醇溶液提取，然后用沉淀法、柱層析法、溶劑萃取法和超臨界萃取法中的一種或幾種進行適當精制、混勻，然后制成注射劑，包括直接用于注射給藥的注射液、需稀釋后用于靜脈滴注的注射用濃溶液、直接供靜脈滴注的葡萄糖靜脈輸液和氯化鈉靜脈輸液以及用冷凍干燥法或噴霧干燥法制得的注射用無菌粉末和無菌塊狀物；2)由紅參(或人參)提取物∶丹參提取物＝1∶1-10組方制成的注射劑，包括直接用于注射給藥的注射液、需稀釋后用于靜脈滴注的注射用濃溶液、直接供靜脈滴注的葡萄糖靜脈輸液和氯化鈉靜脈輸液以及用冷凍干燥法或噴霧干燥法制得的注射用無菌粉末和無菌塊狀物，所述的提取物可以來源于市售，也可以采用水或乙醇溶液提取，然后用沉淀法、柱層析法、溶劑萃取法和超臨界萃取法中的一種或幾種進行適當精制之后得到。
或者是使用專利申請號200410022501.6，名稱為“治療心腦血管疾病的中藥及其制備方法”提供的制備方法制備的注射制劑。
本發明是這樣構成的雙參注射劑的質量控制方法，該方法包括以下全部或部分內容(1)雙參注射劑的指紋圖譜測試，包括以丹參成分特征為主的指紋圖譜和以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種；(2)紅參或人參藥材、丹參藥材、丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛、丹酚酸B或其鎂鹽、丹參酮IIA、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中全部或部分成分的鑒別測試方法；(3)丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛、丹酚酸B或其鎂鹽、丹參酮IIA、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、總酚、總皂苷中全部或部分成分的含量測試方法。
所述的雙參注射劑的質量控制方法，該方法包括如下指紋圖譜中的一種或兩種a、采用液相色譜法測試以丹參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測雙參注射制劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量丹參藥材中的主要活性成分對照品，包括丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛、丹酚酸B或其鎂鹽中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為乙腈或甲醇-0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉水溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鉀水溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸氫二鈉水溶液或水或0.1％～5％冰醋酸溶液或0.1％～5％甲酸溶液或0.02％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以丹參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有3～40個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測注射劑中以丹參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求中的部分或全部
I.計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.80～1.00；II.待測注射劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.待測注射劑指紋圖譜中有10％～50％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于±50％；b、采用液相色譜法測試以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測雙參注射制劑適量，加水溶解后上于已處理好的大孔吸附樹脂柱，依次用水、梯度乙醇溶液除雜后，再用50％～無水乙醇溶液洗脫，收集50％～無水乙醇洗脫部分，揮干，殘渣用水或甲醇或乙醇或流動相溶解并定至合適濃度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量紅參或人參藥材中的主要活性成分對照品，包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為乙腈或甲醇-水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個或蒸發光散射檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有3～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測藥物組合物中以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求中的部分或全部I.計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.80～1.00；II.待測注射劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.待測注射劑指紋圖譜中有50％～100％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于±50％。
(共有峰面積的比值是指以參照物峰面積作為1，計算各共有指紋峰面積與參照物峰面積的比值)
優選為所述的雙參注射劑的質量控制方法，該方法包括如下指紋圖譜中的一種或兩種a、采用液相色譜法測試以丹參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測雙參注射制劑適量，加水制成每1ml含10mg的溶液，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取丹參素鈉適量，加水制成每1ml含80μg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為甲醇，流動相B為1％冰醋酸水溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由5％升至61％；流速為1.0ml/min，檢測波長為280±2nm，柱溫為25℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以丹參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有10～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測注射劑中以丹參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求中的部分或全部I.計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90～1.00；II.待測注射劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.待測注射劑指紋圖譜中有15％～40％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于±30％；b、采用液相色譜法測試以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測雙參注射劑適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，量取適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、10％乙醇溶液、20％乙醇溶液、25％乙醇溶液洗脫除雜后，用80％乙醇溶液洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相A為乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至25分鐘，流動相A的比例由19升至20％，從25分鐘至60分鐘，流動相A的比例由20％升至40％，從60分鐘至70分鐘，流動相A的比例由40％升至45％，流速為1.2ml/min、檢測波長為203±2nm，柱溫40℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有3～15個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測藥物組合物中以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求中的部分或全部I.計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90～1.00；II.待測注射劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.待測注射劑指紋圖譜中有80％～100％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于±30％。
所述的雙參注射劑的質量控制方法所述注射劑的鑒別方法包括以下全部或部分內容a、注射劑中丹參、丹參酮IIA中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，用乙醚或石油醚(30～60℃)或石油醚(60～90℃)或二氯甲烷或三氯甲烷或醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷溶解，作為供試品溶液；另取丹參對照藥材，丹參酮IIA對照品中的一種或兩種，制備對照溶液；丹參對照藥材溶液的制備取丹參對照藥材，同法制成對照藥材溶液；對照品溶液的制備取丹參酮IIA對照品，加醋酸乙酯或甲醇或乙醇溶解并稀釋至合適濃度，作為對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各1～30μl，分別點于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以苯或甲苯或二甲苯-醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷2～40∶0.2～5為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，應顯相同顏色的斑點；b、注射劑中丹參酮IIA的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇或流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液20～90∶80～10為流動相，流速為0.5～2ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內；供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、注射劑中丹酚酸B或其鎂鹽的薄層色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，加甲醇或乙醇或三氯甲烷或二氯甲烷提取，濾過，濾液濃縮，作為供試品溶液；以丹酚酸B或其鎂鹽對照品的醋酸乙酯或10％～無水甲醇或10％～無水乙醇溶液為對照；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各1～30μl，分別點于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以苯或甲苯或二甲苯-三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇或乙醇或丙酮-甲酸或乙酸0.2～6∶0.5～8∶0.5～10∶0.1～3∶0.5～5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈365nm或254nm或日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，應顯相同顏色的斑點；d、注射劑中丹酚酸B或其鎂鹽的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹酚酸B或其鎂鹽對照品的水或10％～無水甲醇或10％～無水乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-水或0.2％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.2％～5％甲酸水溶液10～50∶2～30∶93～20為流動相，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內；供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；e、注射劑中丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛中一種或兩種的薄層色色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以丹參素鈉、原兒茶醛對照品中一種或兩種的甲醇或乙醇溶液為對照；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各1～30μl，分別點于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯或甲酸乙酯-丙酮或甲醇或乙醇-甲酸或冰醋酸1～25∶0.2～5∶0.2～5或苯或甲苯或二甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或冰醋酸2～25∶1～22∶0.2～10為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈365nm或254nm或日光下檢視或噴以三氯化鐵與鐵氰化鉀的混合溶液后日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，應顯相同顏色的斑點；f、注射劑中丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛中一種或兩種的液相色譜鑒別方法
取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參素鈉、原兒茶醛中一種或兩種對照品的水或甲醇或乙醇溶液為對照；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液5～40∶95～60為流動相，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內；供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；g、注射劑中紅參或人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，用水溶解后用氨飽和的正丁醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷提取，濾過，濾液揮干，殘渣用甲醇或乙醇溶解，作為供試品溶液；另取紅參或人參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中的一種或幾種，制備對照溶液；紅參或人參對照藥材溶液的制備取紅參或人參對照藥材適量，加三氯甲烷或二氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷或二氯甲烷液，殘渣加水飽和正丁醇或醋酸乙酯提取，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘渣用甲醇或乙醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中一種或幾種對照品的甲醇或乙醇溶液為對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各1～30μl，分別點于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷或正己烷或環己烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇或乙醇或丙酮-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～30 10℃以下放置的下層溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上層溶液或三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-水1～20∶0.2～10∶0.05～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％～50％硫酸乙醇試劑，在80℃～160℃烘至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，應顯相同顏色的斑點；h、注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，加水溶解后上于已處理好的大孔吸附樹脂柱，依次用水、梯度乙醇溶液除雜后，再用50％～無水乙醇溶液洗脫，收集50％～無水乙醇洗脫部分，揮于，殘渣用水或甲醇或乙醇或流動相溶解并定至合適濃度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸溶液5～40∶95～60為流動相或甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個或蒸發光檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內；供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
優選為a、注射劑中丹參、丹參酮IIA的薄層色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，加乙醚提取，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為供試品溶液；另取丹參對照藥材，丹參酮IIA對照品中的一種或兩種，制備對照溶液；丹參對照藥材溶液的制備取丹參對照藥材，加乙醚提取，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取丹參酮IIA對照品，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯19∶1為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；b、注射劑中丹參酮IIA的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對照品的甲醇溶液為對照；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液75∶25為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為270nm，柱溫為30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、注射劑中丹酚酸B的薄層色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，加75％甲醇溶液溶解，作為供試品溶液；以丹酚酸B對照品的75％甲醇溶液為對照；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸2∶3∶4∶0.5∶2為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈254nm檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；d、注射劑中丹酚酸B的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；取丹酚酸B對照品的75％甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為286nm，柱溫25℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；e、注射劑中丹參素、原兒茶醛中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取丹參素鈉和原兒茶醛對照品中的一種或兩種，分別加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸8∶7∶2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以新鮮配制的2％三氯化鐵與1％鐵氰化鉀等體積的混合液，在日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；f、注射劑中丹參素、原兒茶醛中一種或兩種的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參素鈉、原兒茶醛對照品的水溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液13∶87為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為280nm，柱溫30℃，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；g、注射劑中紅參或人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，用水溶解后用氨飽和的正丁醇提取，濾過，濾液揮干，殘渣用甲醇溶解，作為供試品溶液；另取紅參或人參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中的一種或幾種，制備對照藥材溶液；紅參或人參對照藥材溶液的制備取紅參或人參對照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘渣加水飽和正丁醇提取，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘渣用甲醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中一種或幾種對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水7.5∶2∶0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；h、注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射劑適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，量取適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、10％乙醇溶液、20％乙醇溶液、25％乙醇溶液洗脫除雜后，用80％乙醇溶液洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
所述的雙參注射劑的質量控制方法所述注射劑含量的測試方法應包括以下全部或部分內容a、注射劑中丹參素、原兒茶醛中一種或兩種的含量測定取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參素鈉、原兒茶醛對照品中一種或兩種的水或甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸溶液5～40∶95～60為流動相，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內；以外標一點法或標準曲線法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應為以下一項或幾項(1)每單位量含丹參素的限度不得少于2.25mg；(2)每單位量含原兒茶醛的限度不得少于1.0mg；(3)每單位量含丹參素和原兒茶醛的總和的限度不得少于3.25mg；b.注射劑中總酚的含量測定取待測雙參注射制劑適量，加水溶解并稀釋至合適濃度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，加50％甲醇或水1～25ml，加5％亞硝酸鈉溶液0.3ml～5ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液0.3ml～5ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4～25ml，再加50％甲醇或水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以蘆丁或原兒茶醛或丹參素鈉或丹酚酸B或其鎂鹽作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，采用分光光度法，在500±100nm處測定吸收度，以外標一點法或標準曲線法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總酚的限度以蘆丁或原兒茶醛或丹參素鈉或丹酚酸B或其鎂鹽計，不得少于7.5mg；
c.注射劑中丹酚酸B或其鎂鹽含量測定取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹酚酸B或其鎂鹽對照品的水或10％～無水甲醇或10％～無水乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸水溶液10～50∶2～30∶93～20為流動相，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內；以外標一點法或標準曲線法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含丹酚酸B或其鎂鹽的限度不得少于1.2mg；d、注射劑中丹參酮IIA的含量測定取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇或流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液20～90∶80～10為流動相，流速為0.5～2ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內；以外標一點法或標準曲線法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含丹參酮IIA的限度不得少于0.1mg；e、注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種的含量測定取待測雙參注射制劑適量，加水溶解后上于已處理好的大孔吸附樹脂柱，依次用水、梯度乙醇溶液除雜后，再用50％～無水乙醇溶液洗脫，收集50％～無水乙醇洗脫部分，揮干，殘渣用水或甲醇或乙醇或流動相溶解并定至合適濃度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸溶液5～40∶95～60或甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個或蒸發光檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內；以外標法或標準曲線法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應為以下一項或幾項
(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于0.35mg；(2)每單位量含人參皂苷Re的限度不得少于0.17mg；(3)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于0.2mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1中兩種或三種成分總和的限度不得少于0.52mg；f、注射劑中總皂苷的含量測定取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加蒸餾水或甲醇或乙醇適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛-冰醋酸溶液0.1ml～10ml，高氯酸0.1ml～15ml，搖勻，30℃～80℃水浴上加熱3～50分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或人參皂苷Re或人參皂苷Rf為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用分光光度法，在547±100nm的波長處測定吸收度，以外標法或標準曲線法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或人參皂苷Re或人參皂苷Rf計，不得少于4.0mg。
優選為a.注射劑中丹參素、原兒茶醛中一種或兩種的含量測定取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。以丹參素鈉、原兒茶醛中一種或兩種對照品的水溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液13∶87為流動相，檢測波長為280nm，柱溫30℃，以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應為以下一項或幾項(1)每單位量含丹參素的限度不得少于4.5mg；(2)每單位量含原兒茶醛的限度不得少于2mg；(3)每單位量含丹參素和原兒茶醛的總和的限度不得少于6.5mg；b.注射劑中總酚含量測定取待測雙參注射制劑適量，加水制成每1ml含2.5mg的溶液，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以原兒茶醛作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在518nm處測定吸收度，以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總酚的限度以原兒茶醛計，不得少于15.0mg；c、注射劑中丹酚酸B含量測定取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹酚酸B對照品的75％甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為286nm，柱溫25℃；以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含丹酚酸B的限度不得少于2.4mg；d、注射劑中丹參酮IIA的含量測定取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對照品的甲醇溶液為對照；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液75∶25為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為270nm，柱溫為30℃；以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含丹參酮IIA的限度不得少于0.2mg；e、注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種的含量測定取待測雙參注射劑適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，量取適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、10％乙醇溶液、20％乙醇溶液、25％乙醇溶液洗脫除雜后，用80％乙醇溶液洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應為以下一項或幾項(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于0.7mg；(2)每單位量含人參皂苷Re的限度不得少于0.34mg；(3)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于0.4mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中兩種或三種成分總和的限度不得少于1.04mg；f、注射劑中總皂苷的含量測定
取待測雙參注射制劑適量，置10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取0.6ml，至25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻2分鐘，用冰醋酸定至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計，不得少于8.0mg。
雙參所述注射劑中的酚類、皂苷類及其它所有可測成分的總含量占制劑中扣除輔料量和水分量的總固體量的25％以上。
(總固體量是指內容物的重量減去輔料量和水分量后的重量)與現有技術相比，本發明能更加完善的控制以紅參或人參、丹參制成的雙參注射劑產品質量。該產品成分復雜，如果只用其中一、兩種成分來說明其內在質量，具有一定的片面性，更無法判斷其藥效的指標成分。因此本申請人制定了以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜和以丹參成分特征為主的指紋圖譜來全面控制注射劑的質量；但是雙參注射劑中化學成分復雜性及兩種藥材所含成分相互之間的干擾影響，導致雙參制劑中紅參或人參部分、丹參部分的指紋圖譜特征峰發生改變，增加了制定指紋圖譜的難度，使得各部分指紋圖譜特征不穩定，采用常規的檢測紅參或者丹參的液相色譜條件，各成分特征峰的分離效果很難滿足要求必須通過系統考查、控制流動相等色譜條件，采用本發明的條件，選用適宜的參數進行梯度洗脫，才能得到專屬、準確、穩定、可操作性強的理想的指紋圖譜。
通過實驗證明，本發明質量控制方法對以紅參或人參、丹參制成的中藥注射劑產品的質量控制更為有效，方法精密度、穩定性均較高。
實驗例1 以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜的制備a、實驗儀器、試劑及樣品對照品人參皂苷Rg1中國藥品生物制品檢定所b、色譜條件與系統適應性實驗1.色譜柱的選擇研究過程中，選用了常規的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Diamonsil ODS(均為C18，4.6mm×200mm，5μm)三種牌號的色譜柱，結果顯示三種牌號的色譜柱均可達到較好的分離效果，其中Inertsil ODS-3色譜柱分離效果最好，柱效最高。故最終選用Inertsil ODS-3色譜柱(4.6mm×200mm，5μm)為實驗研究柱。
2.流動相的選擇研究過程中分別考察了(1)甲醇-水(20∶80)，(2)乙腈-水(10∶90)，(3)乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鈉(梯度洗脫)(4)乙腈-0.1％磷酸溶液(梯度洗脫)，溶劑比例為從0分鐘至25分鐘，流動相A的比例由19升至20％，從25分鐘至60分鐘，流動相A的比例由20％升至40％，從60分鐘至70分鐘，流動相A的比例由40％升至45％四種流動相系統。結果顯示流動相(1)條件下，峰形較差，1小時內出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動相(2)流動相條件下，峰形較差，分離不好；(3)條件下，峰拖尾嚴重，出峰不完全；流動相(4)條件下，峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而最終被選用。
3.檢測波長的確定研究中在乙腈-0.1％磷酸溶液(梯度洗脫)流動相條件下，分別考察了在不同波段典型波長203、210、230、254下的色譜峰情況，結果顯示，在203nm下色譜峰較多，峰形較好，故最終選用203nm作為檢測波長。
4.儀器、色譜柱及積分參數4.1儀器參數選用了液相色譜分析領域主流配置和性能良好的Agilent 1100系列高效液相色譜儀，Chemstation色譜工作站。色譜柱為Inertsil ODS-3(4.6mm×200mm，5μm)；柱溫40℃，流速1.2ml/min。
4.2積分參數Slope Sensitivity1，peak width0.05，最小峰面積為參照物(S)峰峰面積的5％，最小峰高為S峰峰高的5％。如此設定可以避免一些很小面積的色譜峰(單峰面積占總峰面積小于0.5％)的計算，同時保證與參照物的相關性。
5.供試品溶液的制備取待測雙參注射劑適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，量取適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、10％乙醇溶液、20％乙醇溶液、25％乙醇溶液洗脫除雜后，用80％乙醇溶液洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。
6.參照物溶液的制備人參皂苷Rg1為紅參或人參主要活性成分之一，其積分面積在指紋圖譜中所占比例較大且較穩定，同時兼顧中間體和藥材的研究，因此選定人參皂苷Rg1作為參照物。
7.指紋圖譜及技術參數根據10批樣品制定標準指紋圖譜，將供試品指紋圖譜與標準指紋圖譜比較，相似度均在0.90～1.00之間。
實驗例2 以丹參成分特征為主的指紋圖譜的制備a、實驗儀器、試劑及樣品對照品丹參素鈉中國藥品生物制品檢定所。
b、色譜條件與系統適應性實驗1.色譜柱的選擇研究過程中，選用了常規的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Kromasil ODS(均為C18，250mm×4.6mm，5μm)三種牌號的色譜柱，結果顯示三種牌號的色譜柱均可達到較好的分離效果，其中Kromasil ODS色譜柱分離效果最好，柱效最高，。故最終選用Kromasil ODS色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)為實驗研究柱。
2.流動相的選擇研究過程中分別考察了(1)甲醇-水(20∶80)，(2)乙腈-水(10∶90)，(3)乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鈉(梯度洗脫)(4)甲醇-1％冰醋酸水溶液(梯度洗脫)，溶劑比例為從0分鐘至80分鐘，甲醇的比例由5％升至61％四種流動相系統。結果顯示流動相(1)條件下，峰形較差，1小時內出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動相(2)流動相條件下，峰形較差，分離不好；(3)條件下，峰拖尾嚴重，出峰不完全；流動相(4)條件下，峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而最終被選用。
3.檢測波長的確定研究中在甲醇-1％冰醋酸水溶液(梯度洗脫)流動相條件下，分別考察了在不同波段典型波長203、210、230、280、300nm下的色譜峰情況，結果顯示，在280nm下色譜峰較多，峰形較好，故最終選用280nm作為檢測波長。
4.儀器、色譜柱及積分參數4.1儀器參數選用了液相色譜分析領域主流配置和性能良好的SHIMADZU LC-2010AHT系列高效液相色譜儀。色譜柱為Kromasil ODS(4.6mm×200mm，5μm)；柱溫25℃，流速1.0ml/min。
5.供試品溶液的制備精密稱取待測雙參注射制劑適量，加水制成每1ml含10mg的溶液，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。
6.參照物溶液的制備丹參素為丹參中主要活性成分之一，其積分面積在指紋圖譜中所占比例較大且較穩定，同時兼顧中間體和藥材的研究，因此選定丹參素鈉作為參照物。
7.指紋圖譜及技術參數根據10批樣品制定標準指紋圖譜，將供試品指紋圖譜與標準指紋圖譜比較，相似度均在0.90～1.00之間。
實驗例3雙參注射劑中丹參、丹參酮IIA的薄層色譜鑒別方法為了突出丹參的特征，選擇了丹參、丹參酮IIA作為其特征斑點，但是由于藥材中存在較多與丹參酮IIA結構相近、極性相似的成分，普通條件難以達到質量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對丹參酮IIA進行了展開
經過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以苯-醋酸乙酯(19∶1)硅膠G薄層板為展開劑，在此條件下，丹參酮IIA的Rf值適中，和其它斑點分離清晰，陰性無干擾。
實驗例4雙參注射劑中丹參酮IIA的液相色譜鑒別方法為了突出丹參的特征，除了薄層鑒別方法以外，選擇了丹參酮IIA作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與丹參酮IIA結構相近、極性相似的成分，普通條件難以達到質量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動相對丹參酮IIA進行了分離
經過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，甲醇-1％冰醋酸水溶液(75∶25)為流動相，在此條件下，丹參酮IIA保留時間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
實驗例5 雙參注射劑中丹酚酸B或其鎂鹽的薄層色譜鑒別方法為了突出丹參的特征，選擇了丹酚酸B或其鎂鹽作為其特征斑點，但是由于藥材中存在較多與丹酚酸B或其鎂鹽結構相近、極性相似的成分，普通條件難以達到質量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對丹酚酸B或其鎂鹽進行了展開
經過篩選，確定了以硅膠GF254薄層板為固定相，以甲苯-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(2∶3∶4∶0.5∶2)為展開劑，在此條件下，丹酚酸B或其鎂鹽的Rf值適中，和其它斑點分離清晰，陰性無干擾。
實驗例6 雙參注射劑中丹酚酸B或其鎂鹽的液相色譜鑒別方法為了突出丹參的特征，除了薄層鑒別方法以外，選擇了丹酚酸B或其鎂鹽作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與丹酚酸B或其鎂鹽結構相近、極性相似的成分，普通條件難以達到質量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動相對丹酚酸B或其鎂鹽進行了分離
經過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，甲醇5％冰醋酸水溶液(35∶65)為流動相，在此條件下，丹酚酸B或其鎂鹽保留時間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
實驗例7 雙參注射劑中丹參素、原兒茶醛的薄層色譜鑒別方法為了突出丹參的特征，選擇了丹參素、原兒茶醛作為其特征斑點，但是由于藥材中存在較多與丹參素、原兒茶醛結構相近、極性相似的成分，普通條件難以達到質量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對麥冬進行了展開
經過篩選，確定了以硅膠GF254薄層板為固定相，以苯-醋酸乙酯-甲酸(8∶7∶2)為展開劑，在此條件下，丹參素、原兒茶醛的Rf值適中，和其它斑點分離清晰，陰性無干擾。
實驗例8 雙參注射劑中丹參素、原兒茶醛的液相色譜鑒別方法為了突出丹參的特征，除了薄層鑒別方法以外，選擇了丹參素、原兒茶醛作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與丹參素、原兒茶醛結構相近、極性相似的成分，普通條件難以達到質量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動相對丹參素、原兒茶醛進行了分離
經過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，甲醇-1％冰醋酸水溶液(13∶87)為流動相，在此條件下，丹參素、原兒茶醛保留時間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
實驗例9 雙參注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf的薄層色譜鑒別方法為了突出紅參或人參的特征，選擇了人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf作為其特征斑點，但是由于藥材中存在較多與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf結構相近、極性相似的成分，普通條件難以達到質量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對麥冬進行了展開
經過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以三氯甲烷-甲醇-水(7.5∶2∶0.2)為展開劑，在此條件下，人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf的Rf值適中，和其它斑點分離清晰，陰性無干擾。
實驗例10 雙參注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re的液相色譜鑒別方法為了突出紅參或人參的特征，除了薄層鑒別方法以外，選擇了人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re結構相近、極性相似的成分，普通條件難以達到質量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動相對人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re進行了分離
經過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％，在此條件下，人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re保留時間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
實驗例11 雙參注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re的含量測定方法1、儀器、試劑儀器SHIMADZU 2010AHT 高效液相色譜儀普析通 TU-1810SPC紫外/可見分光光度儀SARTORIUSBP211D電子分析天平KQ250DB超聲波清洗機試劑甲醇 分析純北京市通廣精細化工公司乙腈 色譜純CALEDON
磷酸 優級純 北京化工廠純凈水 娃哈哈2、色譜分析條件色譜儀SHIMADZU2010AHT HPLC固定相Kromasil-C18250mm×4.6mm 5μm流動相乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％。
流速1ml/min柱溫30℃進樣量10μl檢測波長203nm3、系統適用性試驗 根據上述儀器條件得到的人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、混合對照品、樣品色譜圖，其理論板數以人參皂苷Re計算大于2500。樣品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5。
4、陰性干擾試驗 為考察其它藥材是否干擾人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1的測定，取陰性對照品(缺紅參)與供試品溶液同法制成陰性對照品溶液并測定。結果表明，陰性樣品對人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf的含量測定無干擾。
5、測定波長的選擇 人參皂苷Rg1精密稱取人參皂苷Rg11.10mg，人參皂苷Re1.02mg，人參皂苷Rb11.13mg，分置10ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，分別在190nm～400nm的波長范圍內進行掃描，結果表明，人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1均在203nm處有最大吸收，因此選擇203nm作為測定人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1含量的檢測波長。
6、線性關系的考察人參皂苷Rg1人參皂苷Rb1人參皂苷Re精密稱取人參皂苷Rg110.38mg，人參皂苷Rb16.94mg，人參皂苷Re4.71mg，共置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取0.5、1.5、2.5、3.5、4.5ml，分置5ml量瓶中，加甲醇定至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，分別以對照品的量(μg)為橫坐標，峰面積的峰面積為縱坐標作圖，繪制標準曲線。人參皂苷Rg1回歸方程Y＝368831.8280X+1343.0250
決定系數γ＝0.9999人參皂苷Rg1在0.4152～3.7368μg范圍內線性良好。
人參皂苷Rg1線性關系
人參皂苷Rb1回歸方程Y＝292441.2824X+339.3決定系數γ＝0.9999人參皂苷Rb1在0.2776～2.4984μg范圍內線性良好。
人參皂苷Rb1線性關系
人參皂苷Re回歸方程Y＝289499.4692X-831.3000決定系數γ＝0.9999人參皂苷Rg1在0.1884～1.6956μg范圍內線性良好。
人參皂苷Re線性關系
7、精密度和對照品溶液穩定性試驗 精密稱取人參皂苷Rg113.84mg，人參皂苷Rb110.25mg，人參皂苷Re7.19mg，共置100ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，分別在0、2、6、10、24小時重復測定，考察對照品溶液的精密度和穩定性。
人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和人參皂苷Re對照品精密度試驗
結果表明，對照品溶液精密度良好，在24小時內穩定。
8、供試品溶液的穩定性試驗取裝量差異項下本品5瓶，取內容物，混勻，精密稱取0.51236g，至10ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取5ml，，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱(柱子300×8mm，裝量180mm)，依次用100ml水、100ml10％乙醇溶液、100ml20％乙醇溶液、50ml25％乙醇溶液洗脫除雜后，用50ml80％乙醇溶液洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解并定量轉移至5ml量瓶中，放至室溫，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續濾液10μl，注入液相色譜儀，分別在0、2、6、10、24小時重復測定，考察供試品溶液的穩定性。
供試品穩定性試驗
結果表明，供試品溶液在24小時內穩定性良好。
9、重復性試驗 取裝量差異項下本品5瓶，取內容物，混勻，從中取約0.5g(共5份)，分至10ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取5ml，，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱(柱子300×8mm，裝量180mm)，依次用100ml水、100ml10％乙醇溶液、100ml20％乙醇溶液、50ml25％乙醇溶液洗脫除雜后，用50ml80％乙醇溶液洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解并定量轉移至5ml量瓶中，放至室溫，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
供試品重復性試驗
結果表明，供試品重復性良好。
10、加樣回收率試驗 采用加樣回收法，取裝量差異項下本品5瓶，取內容物，混勻，從中取約0.25g(共5份)，精密稱定；精密稱取人參皂苷Rg1對照品5.88mg，人參皂苷Rb1對照品5.03mg，共置10ml量瓶中，加水適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1.0ml；精密稱取人參皂苷Re對照品12.74mg，置5ml量瓶中，加50％甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取0.3ml；共置10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取5ml，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱(柱子300×8mm，裝量180mm)，依次用100ml水、100ml10％乙醇溶液、100ml20％乙醇溶液、50ml25％乙醇溶液洗脫除雜后，用50ml80％乙醇溶液洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解并定量轉移至5ml量瓶中，放至室溫，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
注射用雙參中人參皂苷Rg1含量為0.277％；注射用雙參中人參皂苷Rb1含量為0.175％；注射用雙參中人參皂苷Re含量為0.155％。
人參皂苷Rg1回收率
人參皂苷Rg1平均回收率＝100.35％ RSD＝0.71％人參皂苷Rb1回收率
人參皂苷Rb1平均回收率＝97.87％ RSD＝0.89％人參皂苷Re回收率
人參皂苷Re平均回收率＝99.30％ RSD＝1.77％11、三批中試樣品含量測定三批中試樣品人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re含量測定
根據三批樣品含量測定結果暫定，本品每瓶含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re含量合計不得少于0.72mg。
實驗例12雙參注射劑中人參總皂苷的含量測定方法1、儀器、試藥(1)儀器普析通 TU-1810SPC紫外/可見分光光度儀SARTORIUSBP211D電子分析天平(2)試藥香草醛 分析純天津市化學試劑三廠冰醋酸 分析純天津市化學試劑三廠高氯酸 分析純天津市化學試劑三廠純凈水 娃哈哈2、檢測波長的選擇 精密稱取人參皂苷Rg18.31mg，置100ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，在700～400nm波長范圍內進行掃描，結果表明，人參皂苷Rg1在547nm處有最大吸收，空白無干擾，因此選擇547nm為分光光度法測定注射用雙參中人參總皂苷的檢測波長。
3、線性關系的考察 精密稱取人參皂苷Rg1對照品6.85mg，置100ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VA)，在547nm的波長處測定吸收度。以吸收度為縱坐標，人參皂苷Rg1的量(μg)為橫坐標，繪制標準曲線。
回歸方程Y＝0.0044X-0.0009；決定系數γ＝0.9999人參皂苷Rg1在27.40～137.00μg范圍線性良好。
人參皂苷Rg1標準曲線測定數據
4、精密度和對照品溶液穩定性試驗 精密稱取人參皂苷Rg1對照品6.53mg，置100ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，60℃水浴15分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻2分鐘，精密加冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VA)，在547nm的波長處測定吸收度，分別在0、5、10、20、30分鐘時重復測定一次。
人參皂苷Rg1精密度實驗
結果表明，對照品溶液精密度良好，在30分鐘內穩定。
5、供試品溶液的穩定性實驗 取裝量差異項下本品5瓶，取內容物，混勻，從中精密稱取0.12203g，置10ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.2ml，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，60℃水浴15分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻2分鐘，精密加冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VA)，在547nm的波長處測定吸收度，計算，即得。分別在0、5、10、20、30分鐘時重復測定。
供試品溶液穩定性實驗
結果表明，供試品溶液在30分鐘內穩定。
6、重復性試驗 取裝量差異項下本品5瓶，取內容物，混勻，從中取約0.1g，精密稱定，分置10ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.2ml，，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，60℃水浴15分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻2分鐘，精密加冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VA)，在547nm的波長處測定吸收度，計算，即得。
人參總皂苷重復性實驗
人參總皂苷平均含量＝12.25mg/瓶；RSD＝1.83％。
結果表明，重復性良好。
7、回收率試驗 采用加樣回收法，取裝量差異項下本品5瓶，取內容物，混勻，從中取約50mg(共5份)，精密稱定；取人參皂苷Rg1對照品約1.8mg，精密稱定，共置10ml量瓶中，加水適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加水定至刻度，搖勻，精密量取0.2ml，，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，60℃水浴15分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻2分鐘，精密加冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VA)，在547nm的波長處測定吸收度，計算，即得。
注射用雙參中總皂苷的含量3.68％人參總皂苷加樣回收率實驗
平均回收率＝99.43％ RSD＝1.65％8、三批中試樣品含量測定三批中試樣品人參總皂苷含量測定
根據三批樣品含量測定結果暫定，本品每瓶含人參總皂苷以人參皂苷Rg1計不得少于8.0mg。
實驗例13雙參注射劑中丹參素、原兒茶醛的含量測定方法
1、儀器、試劑儀器SHIMADZU 10A 高效液相色譜儀普析通 TU-1810SPC紫外/可見分光光度儀SARTORIUS BP211D電子分析天平KQ250DB 超聲波清洗機試劑甲醇 分析純北京市通廣精細化工公司冰醋酸 分析純北京化學試劑公司純凈水 娃哈哈2、色譜分析條件色譜儀SHIMADZU 10AHPLC固定相Kromasil-C18 250mm×4.6mm 5μm流動相甲醇-1％冰醋酸水溶液(13∶87)流速1ml/min柱溫25℃進樣量10μl檢測波長280nm3、系統適用性試驗 根據上述儀器條件得到的丹參素鈉、原兒茶醛對照品、樣品色譜圖，其理論板數以丹參素鈉計算大于2500。樣品中丹參素、原兒茶醛與相近峰分離清晰完全，分離度大于1.5。
4、陰性干擾試驗 為考察其它藥材是否干擾丹參素、原兒茶醛的測定，取陰性對照品(缺丹參)與供試品溶液同法制成陰性對照品溶液并測定。結果表明，陰性樣品對丹參素、原兒茶醛的含量測定無干擾，5、測定波長的選擇 精密稱取丹參素鈉2.03mg、原兒茶醛1.86mg，分置100ml棕色量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，在200nm～400nm的波長范圍內進行掃描。結果表明，丹參素鈉、原兒茶醛均在280nm處有最大吸收，因此選擇280nm作為測定丹參素鈉、原兒茶醛含量的檢測波長。
6、線性關系的考察 精密稱取丹參素鈉8.65mg，原兒茶醛4.02mg，共置10ml棕色量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.25、0.75、1.25、1.75、2.25ml，分置10ml棕色量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定。分別以的量(μg)為橫坐標，峰面積為縱坐標作圖，繪制標準曲線。
丹參素鈉回歸方程Y＝7910186.8208X-4661.7000決定系數γ＝0.9999丹參素鈉在0.21625～1.94625μg范圍內線性良好。
丹參素鈉線性關系
原兒茶醛回歸方程Y＝2426365.1741X+2949.9000決定系數γ＝0.9999原兒茶醛在0.1005～0.9045μg范圍內線性良好。
原兒茶醛線性關系
7、精密度和對照品溶液試驗 精密稱取丹參素鈉8.58mg，原兒茶醛4.07mg，共置100ml棕色量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，分別在0、2、6、10、24小時重復測定一次。
精密度和對照品溶液試驗
結果表明，對照品溶液精密度良好，在24小時內穩定。
8、供試品溶液的穩定性試驗 取裝量差異項下本品5瓶，取內容物，混勻，從中精密稱取42.83mg，置10ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續濾液10μl，注入液相色譜儀，分別在0、2、6、10、24小時重復測定。
供試品穩定性試驗
結果表明，供試品溶液在24小時內穩定性良好。
9、重復性試驗 取裝量差異項下本品5瓶，取內容物，混勻，從中取約40mg(5份)，精密稱定，置10ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
重復性試驗
結果表明，供試品重復性良好。
10、加樣回收率試驗 采用加樣回收法，取裝量差異項下本品5瓶，取內容物，混勻，從中取約20mg(5份)，精密稱定；精密稱取丹參素鈉對照品3.84mg，原兒茶醛對照品1.86mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，共置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
注射用雙參中丹參素含量為1.74％；注射用雙參中原兒茶醛含量為0.760％。
丹參素回收率
丹參素平均回收率＝98.54％ RSD＝1.28％原兒茶醛回收率
原兒茶醛平均回收率＝98.12％ RSD＝1.10％12、三批中試樣品含量測定
根據三批樣品含量測定結果暫定，本品每瓶含丹參素(以丹參素鈉計)不得少于2.5mg，含原兒茶醛不得少于1mg。
實驗例14雙參注射劑中總酚的含量測定方法1、儀器、試藥(1)儀器普析通 TU-1810SPC 紫外/可見分光光度儀SARTORIUS BP211D 電子分析天平(2)試藥亞硝酸鈉分析純 天津市化學試劑三廠硝酸鋁 分析純 天津市化學試劑三廠氫氧化鈉分析純 天津市化學試劑三廠純凈水 娃哈哈2、檢測波長的選擇 精密稱取原兒茶醛對照品9.35mg，置100ml量瓶中，加水適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加水至刻度，搖勻，精密量取3.0ml，置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，在700～400nm波長范圍內進行掃描，結果表明，原兒茶醛在518nm處有最大吸收，空白無干擾，因此選擇518nm為分光光度法測定注射用雙參中總酚的檢測波長。
3、線性關系的考察 精密稱取原兒茶醛對照品10.85mg，置100ml量瓶中，加水適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加水至刻度，搖勻，精密量取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VA)，在518nm的波長處測定吸收度。以吸收度為縱坐標，濃度(μg/ml)為橫坐標，繪制標準曲線。
回歸方程Y＝0.0266X+0.0078；決定系數γ＝0.9999；原兒茶醛在4.34～21.70μg/ml范圍線性良好。
原兒茶醛標準曲線測定數據
4、精密度和對照品溶液穩定性試驗 精密稱取原兒茶醛對照品10.04mg，置100ml量瓶中，加水適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加水至刻度，搖勻，精密量取3.0ml，置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，以隨行溶劑為空白，在518nm的波長處測定吸收度，分別在0、5、10、20、30分鐘時重復測定一次。
原兒茶醛精密度和穩定性實驗
結果表明，對照品溶液精密度良好，在30分鐘內穩定。
5、供試品溶液的穩定性實驗 取裝量差異項下本品5瓶，取內容物，混勻，從中精密稱取52.33mg，置10ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，以隨行溶劑為空白，在518nm的波長處測定吸收度，計算，即得，分別在0、5、10、20、30分鐘時測定。
供試品溶液穩定性實驗
結果表明，供試品溶液在30分鐘內穩定。
6、重復性試驗 取裝量差異項下本品5瓶，取內容物，混勻，從中取約50mg(5份)，精密稱定，置10ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，以隨行溶劑為空白，在518nm的波長處測定吸收度，計算，即得。
重復性實驗
丹參總酚平均含量＝20.13mg/瓶；RSD＝1.93％7、回收率試驗 采用加樣回收法，取裝量差異項下本品(031101批)5瓶，取內容物，混勻，從中精密稱取25mg(5份)，精密稱定；取原兒茶醛對照品約1.5mg，精密稱定，共置10ml量瓶中，加水適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加水定至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，以隨行溶劑為空白，在518nm的波長處測定吸收度，計算，即得。
注射用雙參中總酚的含量6.06％加樣回收率實驗
平均回收率＝98.39％ RSD＝1.73％8、三批中試樣品含量測定
根據三批樣品含量測定結果暫定，本品每瓶含丹參總酚以原兒茶醛計不得少于7.5mg。
實驗例15雙參注射劑中丹酚酸B的含量測定方法1儀器與試藥儀器Agilent1100高效液相色譜儀，chemstationsys工作站；TU-1800SPC紫外分光光度計。
試藥丹酚酸B中國藥品生物制品檢定所；試劑均為分析純；色譜用試劑為色譜純。
2檢測波長的選擇 精密稱取丹酚酸B對照品適量，加75％甲醇溶解，在190-400nm波長范圍掃描。結果表明丹酚酸B在286nm處有最大吸收，因此選擇286nm作為含量測定的檢測波長。
3色譜條件色譜柱Dikma ODS(4.6mm×250mm，5μm)；流動相甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60；檢測波長286nm；柱溫30℃；流速1.0ml/min。
4系統適用性試驗4.1對照品溶液的制備 精密稱取丹酚酸B對照品適量，加75％甲醇制成每1ml含0.14mg的溶液，即得。
4.2供試品溶液的制備 取裝量差異項下本品，取內容物，混勻，從中取約0.4g，精密稱定，置25ml量瓶中，加75％甲醇超聲處理使溶解，取出，放至室溫，加75％甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過，取續濾液作為供試品溶液。
4.3陰性供試品溶液的制備 稱取不含丹參的陰性樣品，照供試品溶液的制備方法制備，作為陰性供試品溶液。
4.4測定法 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖。
根據上述條件得到丹酚酸B對照品色譜圖、供試品色譜圖，其理論板數n均大于2000。供試品中丹酚酸B色譜峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5，陰性無干擾。
5線性關系 精密稱取丹酚酸B對照品適量，加75％甲醇制成每1ml中含2.688mg的對照品溶液，精密量取0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分置10ml量瓶中，加75％甲醇至刻度，搖勻，配制成0.053760mg/ml、0.10752mg/ml、0.16128mg/ml、0.21504mg/ml、0.26880mg/ml的對照品溶液。分別從中精密吸取10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定，記錄峰面積。以丹酚酸B的量(μg)為縱坐標，峰面積為橫坐標，繪制標準曲線。
丹酚酸B線性關系
回歸方程Y＝0.0008X+0.0046相關系數γ＝0.9999結果表明，丹酚酸B在0.5376μg～2.6880μg之間線性關系良好。
經過計算，丹酚酸B標準曲線為一過原點的直線，因此選擇外標一點法測定雙參注射液中丹酚酸B的含量。
6精密度和對照品溶液穩定性試驗 精密吸取丹酚酸B對照品溶液(0.1385mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，分別在0、2、4、6、10小時進樣測定。
精密度和對照品溶液穩定性試驗
結果表明，對照品溶液精密度良好，在10小時內穩定。
7供試品溶液穩定性試驗 取裝量差異項下本品，取內容物，混勻，從中精密稱取0.38557g，按供試品溶液的制備和測定法項下操作，分別在0、2、4、6、10小時進樣測定。
供試品溶液穩定性試驗結果
結果表明，供試品溶液在10小時內穩定性良好。
8重復性試驗 取裝量差異項下本品，取內容物，混勻，從中取約0.4g，精密稱定，按供試品溶液的制備和測定法項下操作，測定，即得。
重現性試驗
結果表明，重復性良好。
9加樣回收率試驗 精密量取本品5ml(共6份)，分置10ml量瓶中；精密吸取丹酚酸B對照品溶液(1.185mg/ml)1.5ml(共6份)，分置上述10ml量瓶中，加75％甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液，測定，即得。
注射用雙參中丹酚酸B含量0.8887％。
加樣回收率試驗
平均回收率＝97.89％；RSD＝0.95％10樣品含量測定
根據三批樣品含量測定結果暫定，本品每瓶含丹酚酸B不得少于1.2mg。
實驗例16雙參注射劑中丹參酮IIA的含量測定方法1儀器與試藥儀器SHIMADZU LC-2010AHT；TU-1800SPC紫外分光光度計。
試藥丹參酮IIA中國藥品生物制品檢定所；試劑均為分析純；色譜用試劑為色譜純。
2檢測波長的選擇 精密稱取丹參酮IIA對照品適量，加甲醇溶解，在190-400nm波長范圍掃描。結果表明丹參酮IIA在270nm處有最大吸收，因此選擇270nm作為含量測定的檢測波長。
3色譜條件色譜柱Dikma ODS(4.6mm×250mm，5μm)；流動相甲醇-1％冰醋酸水溶液75∶25；檢測波長270nm；
柱溫30℃；流速1.0ml/min。
4系統適用性試驗4.1對照品溶液的制備 精密稱取丹參酮IIA對照品適量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。
4.2供試品溶液的制備 取雙參注射液作為供試品溶液。
4.3陰性供試品溶液的制備 稱取不含丹參的陰性樣品，照供試品溶液的制備方法制備，作為陰性供試品溶液。
4.4測定法 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖。
根據上述條件得到丹參酮IIA對照品色譜圖、供試品色譜圖，其理論板數n均大于2000。供試品中丹參酮IIA色譜峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5，陰性無干擾。
5線性關系 精密稱取丹參酮IIA對照品適量，加甲醇制成每1ml中含0.4112mg的對照品溶液，精密量取0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，配制成0.008224mg/ml、0.016448mg/ml、0.024672mg/ml、0.032896mg/ml、0.04112mg/ml的對照品溶液。分別從中精密吸取5μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定，記錄峰面積。以丹參酮IIA的量(μg)為縱坐標，峰面積為橫坐標，繪制標準曲線。
丹參酮IIA線性關系
回歸方程Y＝0.000000-0.000025相關系數γ＝0.9999結果表明，丹參酮IIA在0.0411μg～0.2056μg之間線性關系良好。
6精密度和對照品溶液穩定性試驗 精密吸取丹參酮IIA對照品溶液(0.02056mg/ml)5μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，分別在0、2、4、10、24小時進樣測定。
精密度和對照品溶液穩定性試驗
結果表明，對照品溶液精密度良好，在10小時內穩定。
7供試品溶液穩定性試驗 精密吸取雙參注射液5μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積。
供試品溶液穩定性試驗結果
結果表明，供試品溶液在4小時內穩定性良好。
8重復性試驗 精密吸取雙參注射液5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
重現性試驗
結果表明，重復性良好。
9加樣回收率試驗 精密量取本品5ml(共6份)，分置10ml量瓶中；精密吸取丹參酮IIA對照品溶液(0.1256mg/ml)1ml(共6份)，分置上述10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液，測定，即得。
雙參注射液中丹參酮IIA含量0.2494mg/支。
加樣回收率試驗
平均回收率＝97.95％；RSD＝0.79％10樣品含量測定
根據三批樣品含量測定結果暫定，本品每瓶含丹參酮IIA不得少于0.1mg。
具體實施例方式
實施例1采用液相色譜法測定以丹參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測雙參注射制劑適量，加水制成每1ml含10mg的溶液，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取丹參素鈉適量，加水制成每1ml含80μg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為甲醇，流動相B為1％冰醋酸水溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由5％升至61％；流速為1.0ml/min，檢測波長為280±2nm，柱溫為25℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以丹參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有14個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測注射劑中以丹參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，符合下列要求計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，為0.90～1.00；實施例2采用液相色譜法測定以紅參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測雙參注射劑適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，量取適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、10％乙醇溶液、20％乙醇溶液、25％乙醇溶液洗脫除雜后，用80％乙醇溶液洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相A為乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至25分鐘，流動相A的比例由19升至20％，從25分鐘至60分鐘，流動相A的比例由20％升至40％，從60分鐘至70分鐘，流動相A的比例由40％升至45％，流速為1.2ml/min、檢測波長為203±2nm，柱溫40℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以紅參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有5個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測藥物組合物中以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，符合下列要求計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，為0.90～1.00；實施例3采用液相色譜法測定以丹參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測雙參注射制劑適量，加甲醇制成每1ml含10mg的溶液，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取原兒茶醛適量，加水制成每1ml含40μg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為1％冰醋酸水溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由4％升至40％；流速為1.0ml/min，檢測波長為280±2nm，柱溫為25℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以丹參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有15個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測注射劑中以丹參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，符合下列要求I.計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，為0.90～1.00；II.待測注射劑指紋圖譜中，非共有峰面積不超過總峰面積的5％；III.待測注射劑指紋圖譜中有15％～40％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不大于±30％。
實施例4采用液相色譜法測定以人參成分特征為主的指紋圖譜
(1)供試品溶液的制備取待測雙參注射劑適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，量取適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、20％乙醇溶液、25％乙醇溶液洗脫除雜后，用85％乙醇溶液洗脫，收集85％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用甲醇適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取人參皂苷Rb1對照品，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相A為甲醇，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至25分鐘，流動相A的比例由22升至25％，從25分鐘至60分鐘，流動相A的比例由25％升至45％，從60分鐘至70分鐘，流動相A的比例由45％升至48％，流速為1.1ml/min、檢測波長為203±2nm，柱溫40℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有7個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測藥物組合物中以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，符合下列要求中的全部I.計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，為0.90～1.00；II.待測注射劑指紋圖譜中，非共有峰面積不超過總峰面積的5％；III.待測注射劑指紋圖譜中有80％～100％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不大于±30％。
實施例7凍干粉針中丹參、丹參酮IIA的薄層色譜鑒別取待測凍干粉針適量，加乙醚提取，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為供試品溶液；丹參對照藥材溶液的制備取丹參對照藥材，加乙醚提取，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取丹參酮IIA對照品，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯19∶1為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例8凍干粉針中丹參酮IIA的液相色譜鑒別
取待測凍干粉針適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對照品的甲醇溶液為對照；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液75∶25為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為270nm，柱溫為30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例9凍干粉針中丹酚酸B的薄層色譜鑒別取待測凍干粉針適量，加75％甲醇溶液溶解，作為供試品溶液；以丹酚酸B或其鎂鹽對照品的75％甲醇溶液為對照；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸2∶3∶4∶0.5∶2為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈254nm檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；實施例10葡萄糖輸液劑中丹酚酸B的液相色譜鑒別取待測凍干粉針適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；取丹酚酸B或其鎂鹽對照品的75％甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為286nm，柱溫25℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例11凍干粉針中丹參素、原兒茶醛的薄層色色譜鑒別取待測凍干粉針適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取丹參素鈉和原兒茶醛對照品中，分別加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸8∶7∶2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以新鮮配制的2％三氯化鐵與1％鐵氰化鉀等體積的混合液，在日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
實施例12凍干粉針中丹參素、原兒茶醛的液相色譜鑒別取待測凍干粉針適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參素鈉、原兒茶醛對照品的水溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液13∶87為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為280nm，柱溫30℃，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例13凍干粉針中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的薄層色譜鑒別取待測凍干粉針適量，用水溶解后用氨飽和的正丁醇提取，濾過，濾液揮干，殘渣用甲醇溶解，作為供試品溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品，分別加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水7.5∶2∶0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例14氯化鈉輸液劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的液相色譜鑒別取待測雙參注射劑適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，量取適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、10％乙醇溶液、20％乙醇溶液、25％乙醇溶液洗脫除雜后，用80％乙醇溶液洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.05％磷酸溶液21∶79為流動相；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例15凍干粉針中丹參、丹參酮IIA的薄層色譜鑒別取待測凍干粉針適量，加三氯甲烷提取，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為供試品溶液；丹參對照藥材溶液的制備取丹參對照藥材，加三氯甲烷提取，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取丹參酮IIA對照品，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯19∶1為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例16凍干粉針中丹參酮IIA的液相色譜鑒別取待測凍干粉針適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對照品的甲醇溶液為對照；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸水溶液70∶30為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為270nm，柱溫為30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例17凍干粉針中丹酚酸B的薄層色譜鑒別取待測凍干粉針適量，加80％甲醇溶液溶解，作為供試品溶液；以丹酚酸B對照品的80％甲醇溶液為對照；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以苯-二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸2∶3∶4∶0.5∶2為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈254nm檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；實施例18凍干粉針中丹酚酸B鎂鹽的液相色譜鑒別取待測凍干粉針適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；取丹酚酸B鎂鹽對照品的80％甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-1.5％甲酸水溶液25∶15∶60為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為286nm，柱溫25℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例19凍干粉針中丹參素、原兒茶醛的薄層色色譜鑒別取待測凍干粉針適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取丹參素鈉和原兒茶醛對照品，分別加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸9∶6∶2.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以新鮮配制的2％三氯化鐵與1％鐵氰化鉀等體積的混合液，在日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
實施例20凍干粉針中丹參素、原兒茶醛的液相色譜鑒別取待測凍干粉針適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參素鈉、原兒茶醛對照品的水溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸水溶液10∶90為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為280nm，柱溫30℃，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例21凍干粉針中紅參或人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf的薄層色譜鑒別取待測凍干粉針適量，用水溶解后用氨飽和的醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘渣用甲醇溶解，作為供試品溶液；紅參或人參對照藥材溶液的制備取紅參或人參對照藥材適量，加二氯甲烷回流提取，棄去二氯甲烷液，殘渣加水飽和正丁醇提取，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘渣用甲醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠H薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-水7.5∶2∶0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例22凍干粉針中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re的液相色譜鑒別取待測雙參注射劑適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，量取適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、5％乙醇溶液、15％乙醇溶液、20％乙醇溶液、25％乙醇溶液洗脫除雜后，用85％乙醇溶液洗脫，收集85％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例23注射液中丹參、丹參酮IIA的薄層色譜鑒別取待測注射液適量，加醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為供試品溶液；丹參對照藥材溶液的制備取丹參對照藥材，加醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取丹參酮IIA對照品，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠H薄層板上，以二甲苯-三氯甲烷19∶2為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例24注射液中丹參酮IIA的液相色譜鑒別取待測注射液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對照品的甲醇溶液為對照；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液75∶25為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為270nm，柱溫為30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例25注射液中丹酚酸B鎂鹽的薄層色譜鑒別取待測注射液適量，揮干，殘渣加甲醇溶液溶解，作為供試品溶液；以丹酚酸B鎂鹽對照品的甲醇溶液為對照；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以二甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-丙酮-乙酸3∶3∶5∶4∶2為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈254nm檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；實施例26注射液中丹酚酸B的液相色譜鑒別取待測注射液適量，置量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；取丹酚酸B對照品的乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-1.8％冰醋酸水溶液30∶10∶60為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為286nm，柱溫25℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例27注射液中丹參素、原兒茶醛的薄層色色譜鑒別取待測注射液適量，揮干，殘渣用乙醇溶解并定至合適濃度，搖勻，作為供試品溶液；另取丹參素鈉和原兒茶醛對照品，分別加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠H薄層板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸9∶6∶2.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以新鮮配制的2％三氯化鐵與1％鐵氰化鉀等體積的混合液，在日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
實施例28注射液中丹參素、原兒茶醛的液相色譜鑒別取待測注射液適量，置量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參素鈉、原兒茶醛對照品的乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.5％冰醋酸水溶液13∶87為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為280nm，柱溫30℃，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例29注射液中人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf的薄層色譜鑒別取待測注射液適量，用氨飽和的正丁醇提取，濾過，濾液揮干，殘渣用甲醇溶解，作為供試品溶液；人參對照藥材溶液的制備取人參對照藥材適量，加二氯甲烷回流提取，棄去二氯甲烷液，殘渣加水飽和正丁醇提取，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘渣用甲醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水10∶3∶0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例30注射液中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re的液相色譜鑒別量取待測雙參注射劑適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、15％乙醇溶液、27％乙醇溶液洗脫除雜后，用95％乙醇溶液洗脫，收集95％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.2％磷酸水溶液為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例31凍干粉針中丹參素、原兒茶醛的含量測定取待測凍干粉針適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。以丹參素鈉、原兒茶醛對照品的水溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液13∶87為流動相，檢測波長為280nm，柱溫30℃，以外標一點法進行計算，待測凍干粉針以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應為以下幾項(1)每單位量含丹參素的限度不得少于4.5mg；(2)每單位量含原兒茶醛的限度不得少于2mg；(3)每單位量含丹參素和原兒茶醛的總和的限度不得少于6.5mg。
實施例32凍干粉針中總酚含量測定取待測凍干粉針適量，加水制成每1ml含2.5mg的溶液，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以原兒茶醛作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在518nm處測定吸收度，以外標一點法進行計算，待測凍干粉針以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總酚的限度以原兒茶醛計，不得少于15.0mg。
實施例33凍干粉針中丹酚酸B含量測定取待測凍干粉針適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹酚酸B或其鎂鹽對照品的75％甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為286nm，柱溫25℃；以外標一點法進行計算，待測凍干粉針以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含丹酚酸B的限度不得少于2.4mg。
實施例34凍干粉針中丹參酮IIA的含量測定取待測凍干粉針適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對照品的甲醇溶液為對照；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液75∶25為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為270nm，柱溫為30℃；以外標一點法進行計算，待測凍干粉針以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含丹參酮IIA的限度不得少于0.2mg。
實施例35凍干粉針中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的含量測定取待測雙參注射劑適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，量取適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、10％乙醇溶液、20％乙醇溶液、25％乙醇溶液洗脫除雜后，用80％乙醇溶液洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.05％磷酸溶液21∶79為流動相；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應為每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的總和的限度不得少于1.15mg。
實施例36凍干粉針中注射劑中總皂苷的含量測定取待測凍干粉針適量，置10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取0.6ml，至25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻2分鐘，用冰醋酸定至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計，不得少于8.0mg。
實施例37凍干粉針中丹參素、原兒茶醛的含量測定取待測凍干粉針適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參素鈉、原兒茶醛對照品的水溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸水溶液10∶90為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為280nm，柱溫30℃，以外標一點法進行計算，待測凍干粉針以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應為每單位量含丹參素和原兒茶醛的總和的限度不得少于3.25mg。
實施例38凍干粉針中總酚含量測定取待測凍干粉針適量，加水制成每1ml含2.5mg的溶液，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，加水至10ml，加10％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液2ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以蘆丁作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在518nm處測定吸收度，以外標一點法進行計算，待測凍干粉針以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總酚的限度以蘆丁計，不得少于7.5mg。
實施例39凍干粉針中丹酚酸B含量測定取待測凍干粉針適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；取丹酚酸B對照品的80％甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-1.5％甲酸水溶液25∶15∶60為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為286nm，柱溫25℃；以外標一點法進行計算，待測凍干粉針以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含丹酚酸B或其鎂鹽的限度不得少于1.2mg。
實施例40凍干粉針中丹參酮IIA的含量測定取待測凍干粉針適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對照品的甲醇溶液為對照；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸水溶液70∶30為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為270nm，柱溫為30℃；以外標一點法進行計算，待測凍干粉針以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含丹參酮IIA的限度不得少于0.1mg。
實施例41凍干粉針中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re的含量測定取待測雙參注射劑適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，量取適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、5％乙醇溶液、15％乙醇溶液、20％乙醇溶液、25％乙醇溶液洗脫除雜后，用85％乙醇溶液洗脫，收集85％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應為以下幾項(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于0.35mg；(2)每單位量含人參皂苷Re的限度不得少于0.17mg；(3)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于0.2mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的總和的限度不得少于0.52mg。
實施例42凍干粉針中注射劑中總皂苷的含量測定取待測凍干粉針適量，置10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取0.6ml，至25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液1ml，高氯酸2.0ml，搖勻，65℃水浴上加熱10分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻5分鐘，用冰醋酸定至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以人參皂苷Rb1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rb1計，不得少于4.0mg。
實施例43注射液中丹參素的含量測定取待測注射液適量，置量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參素鈉對照品的乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.5％冰醋酸水溶液13∶87為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為280nm，柱溫30℃，以外標一點法進行計算，待測注射液以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應為每單位量含丹參素的限度不得少于4.5mg。
實施例44注射液中總酚含量測定取待測注射液1ml，置20ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，加水至5ml，加5％亞硝酸鈉溶液2ml，搖勻，放置6分鐘，加5％硝酸鋁溶液5ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以丹參素鈉作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在518nm處測定吸收度，以外標一點法進行計算，待測注射液以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總酚的限度以丹參素鈉計，不得少于15.0mg。
實施例45注射液中丹酚酸B鎂鹽含量測定取待測注射液適量，置量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；取丹酚酸B鎂鹽對照品的乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-1.8％冰醋酸水溶液30∶10∶60為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為286nm，柱溫25℃；以外標一點法進行計算，待測注射液以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含丹酚酸B鎂鹽的限度不得少于2.4mg。
實施例46注射液中丹參酮IIA的含量測定取待測注射液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對照品的甲醇溶液為對照；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液75∶25為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為270nm，柱溫為30℃；以外標一點法進行計算，待測注射液以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含丹參酮IIA的限度不得少于0.2mg。
實施例47注射液中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re的含量測定量取待測雙參注射劑適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、15％乙醇溶液、27％乙醇溶液洗脫除雜后，用95％乙醇溶液洗脫，收集95％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.2％磷酸水溶液為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；以外標一點法進行計算，待測注射液以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應為每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re的總和的限度不得少于1.44mg。
實施例48注射液中注射劑中總皂苷的含量測定取待測注射液適量，置10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取0.6ml，至25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加10％香草醛-冰醋酸溶液1ml，高氯酸3.0ml，搖勻，50℃水浴上加熱20分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻5分鐘，用冰醋酸定至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以人參皂苷Re為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在550nm的波長處測定吸收度，以外標一點法進行計算，待測注射液以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rb1計，不得少于8.0mg。
實施例49凍干粉針中總酚含量測定取待測凍干粉針適量，加水制成每1ml含2.5mg的溶液，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，加水至10ml，加10％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液2ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以丹酚酸B作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在518nm處測定吸收度，以外標一點法進行計算，待測凍干粉針以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總酚的限度以丹酚酸B計，不得少于7.5mg。
權利要求
1.一種雙參注射劑的質量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內容(1)雙參注射劑的指紋圖譜測試，包括以丹參成分特征為主的指紋圖譜和以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種；(2)紅參或人參藥材、丹參藥材、丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛、丹酚酸B或其鎂鹽、丹參酮IIA、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中全部或部分成分的鑒別測試方法；(3)丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛、丹酚酸B或其鎂鹽、丹參酮IIA、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、總酚、總皂苷中全部或部分成分的含量測試方法。
2.按照權利要求1所述的雙參注射劑的質量控制方法，其特征在于該方法包括如下指紋圖譜中的一種或兩種a、采用液相色譜法測試以丹參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測雙參注射制劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量丹參藥材中的主要活性成分對照品，包括丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛、丹酚酸B或其鎂鹽中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為乙腈或甲醇-0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉水溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鉀水溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸氫二鈉水溶液或水或0.1％～5％冰醋酸溶液或0.1％～5％甲酸溶液或0.02％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以丹參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有3～40個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測注射劑中以丹參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求中的部分或全部I.計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.80～1.00；II.待測注射劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.待測注射劑指紋圖譜中有10％～50％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于±50％；b、采用液相色譜法測試以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測雙參注射制劑適量，加水溶解后上于已處理好的大孔吸附樹脂柱，依次用水、梯度乙醇溶液除雜后，再用50％～無水乙醇溶液洗脫，收集50％～無水乙醇洗脫部分，揮干，殘渣用水或甲醇或乙醇或流動相溶解并定至合適濃度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量紅參或人參藥材中的主要活性成分對照品，包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為乙腈或甲醇-水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個或蒸發光散射檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有3～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測藥物組合物中以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求中的部分或全部I.計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.80～1.00；II.待測注射劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.待測注射劑指紋圖譜中有50％～100％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于±50％。
3.按照權利要求2所述的雙參注射劑的質量控制方法，其特征在于該方法包括如下指紋圖譜中的一種或兩種a、采用液相色譜法測試以丹參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測雙參注射制劑適量，加水制成每1ml含10mg的溶液，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取丹參素鈉適量，加水制成每1ml含80μg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為甲醇，流動相B為1％冰醋酸水溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由5％升至61％；流速為1.0ml/min，檢測波長為280±2nm，柱溫為25℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以丹參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有10～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測注射劑中以丹參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求中的部分或全部I.計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90～1.00；II.待測注射劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.待測注射劑指紋圖譜中有15％～40％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于±30％；b、采用液相色譜法測試以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測雙參注射劑適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，量取適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、10％乙醇溶液、20％乙醇溶液、25％乙醇溶液洗脫除雜后，用80％乙醇溶液洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相A為乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至25分鐘，流動相A的比例由19升至20％，從25分鐘至60分鐘，流動相A的比例由20％升至40％，從60分鐘至70分鐘，流動相A的比例由40％升至45％，流速為1.2ml/min、檢測波長為203±2nm，柱溫40℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有3～15個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測藥物組合物中以紅參或人參成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求中的部分或全部I.計算待測注射劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90～1.00；II.待測注射劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.待測注射劑指紋圖譜中有80％～100％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于±30％。
4.按照權利要求1所述的雙參注射劑的質量控制方法，其特征在于所述注射劑的鑒別方法包括以下全部或部分內容a、注射劑中丹參、丹參酮IIA中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，用乙醚或石油醚(30～60℃)或石油醚(60～90℃)或二氯甲烷或三氯甲烷或醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷溶解，作為供試品溶液；另取丹參對照藥材，丹參酮IIA對照品中的一種或兩種，制備對照溶液；丹參對照藥材溶液的制備取丹參對照藥材，同法制成對照藥材溶液；對照品溶液的制備取丹參酮IIA對照品，加醋酸乙酯或甲醇或乙醇溶解并稀釋至合適濃度，作為對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各1～30μl，分別點于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以苯或甲苯或二甲苯-醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷2～40∶0.2～5為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材及對照品中一種或兩種的色譜相應位置上，應顯相同顏色的斑點；b、注射劑中丹參酮IIA的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇或流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液20～90∶80～10為流動相，流速為0.5～2ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內；供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、注射劑中丹酚酸B或其鎂鹽的薄層色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，加甲醇或乙醇或三氯甲烷或二氯甲烷提取，濾過，濾液濃縮，作為供試品溶液；以丹酚酸B或其鎂鹽對照品的醋酸乙酯或10％～無水甲醇或10％～無水乙醇溶液為對照；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各1～30μl，分別點于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以苯或甲苯或二甲苯-三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇或乙醇或丙酮-甲酸或乙酸0.2～6∶0.5～8∶0.5～10∶0.1～3∶0.5～5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈365nm或254nm或日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，應顯相同顏色的斑點；d、注射劑中丹酚酸B或其鎂鹽的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹酚酸B或其鎂鹽對照品的水或10％～無水甲醇或10％～無水乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-水或0.2％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.2％～5％甲酸水溶液10～50∶2～30∶93～20為流動相，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內；供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；e、注射劑中丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛中一種或兩種的薄層色色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛對照品中一種或兩種的甲醇或乙醇溶液為對照；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各1～30μl，分別點于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯或甲酸乙酯-丙酮或甲醇或乙醇-甲酸或冰醋酸1～25∶0.2～5∶0.2～5或苯或甲苯或二甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或冰醋酸2～25∶1～22∶0.2～10為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈365nm或254nm或日光下檢視或噴以三氯化鐵與鐵氰化鉀的混合溶液后日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，應顯相同顏色的斑點；f、注射劑中丹參素或其鈉鹽或原兒茶醛中一種或兩種的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛中一種或兩種對照品的水或甲醇或乙醇溶液為對照；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液5～40∶95～60為流動相，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內；供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；g、注射劑中紅參或人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，用水溶解后用氨飽和的正丁醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷提取，濾過，濾液揮干，殘渣用甲醇或乙醇溶解，作為供試品溶液；另取紅參或人參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中的一種或幾種，制備對照溶液；紅參或人參對照藥材溶液的制備取紅參或人參對照藥材適量，加三氯甲烷或二氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷或二氯甲烷液，殘渣加水飽和正丁醇或醋酸乙酯提取，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘渣用甲醇或乙醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中一種或幾種對照品的甲醇或乙醇溶液為對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各1～30μl，分別點于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷或正己烷或環己烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇或乙醇或丙酮-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～30 10℃以下放置的下層溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上層溶液或三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-水1～20∶0.2～10∶0.05～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％～50％硫酸乙醇試劑，在80℃～160℃烘至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜或對照品色譜相應的位置上，應顯相同顏色的斑點；h、注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，加水溶解后上于已處理好的大孔吸附樹脂柱，依次用水、梯度乙醇溶液除雜后，再用50％～無水乙醇溶液洗脫，收集50％～無水乙醇洗脫部分，揮干，殘渣用水或甲醇或乙醇或流動相溶解并定至合適濃度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸溶液5～40∶95～60為流動相或甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個或蒸發光檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內；供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
5.按照權利要求4所述的雙參注射劑的質量控制方法，其特征在于所述注射劑的鑒別方法包括以下全部或部分內容a、注射劑中丹參、丹參酮IIA的薄層色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，加乙醚提取，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為供試品溶液；另取丹參對照藥材，丹參酮IIA對照品中的一種或兩種，制備對照溶液；丹參對照藥材溶液的制備取丹參對照藥材，加乙醚提取，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取丹參酮IIA對照品，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯19∶1為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材及對照品中的一種或兩種色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點；b、注射劑中丹參酮IIA的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對照品的甲醇溶液為對照；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液75∶25為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為270nm，柱溫為30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、注射劑中丹酚酸B的薄層色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，加75％甲醇溶液溶解，作為供試品溶液；以丹酚酸B對照品的75％甲醇溶液為對照；吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸2∶3∶4∶0.5∶2為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈254nm檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；d、注射劑中丹酚酸B的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；取丹酚酸B對照品的75％甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為286nm，柱溫25℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；e、注射劑中丹參素、原兒茶醛中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取丹參素鈉和原兒茶醛對照品中的一種或兩種，分別加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸8∶7∶2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以新鮮配制的2％三氯化鐵與1％鐵氰化鉀等體積的混合液，在日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；f、注射劑中丹參素、原兒茶醛中一種或兩種的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參素鈉、原兒茶醛對照品的水溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液13∶87為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為280nm，柱溫30℃，供試品色譜中，與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；g、注射劑中紅參或人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測雙參注射制劑適量，用水溶解后用氨飽和的正丁醇提取，濾過，濾液揮干，殘渣用甲醇溶解，作為供試品溶液；另取紅參或人參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中的一種或幾種，制備對照藥材溶液；紅參或人參對照藥材溶液的制備取紅參或人參對照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘渣加水飽和正丁醇提取，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘渣用甲醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf中一種或幾種對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水7.5∶2∶0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜或對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；h、注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種的液相色譜鑒別方法取待測雙參注射劑適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，量取適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、10％乙醇溶液、20％乙醇溶液、25％乙醇溶液洗脫除雜后，用80％乙醇溶液洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
6.按照權利要求1所述的雙參注射劑的質量控制方法，其特征在于所述注射劑含量的測試方法應包括以下全部或部分內容a、注射劑中丹參素、原兒茶醛中一種或兩種的含量測定取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛對照品中一種或兩種的水或甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸溶液5～40∶95～60為流動相，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內；以外標一點法或標準曲線法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應為以下一項或幾項(1)每單位量含丹參素的限度不得少于2.25mg；(2)每單位量含原兒茶醛的限度不得少于1.0mg；(3)每單位量含丹參素和原兒茶醛的總和的限度不得少于3.25mg；b.注射劑中總酚的含量測定取待測雙參注射制劑適量，加水溶解并稀釋至合適濃度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，加50％甲醇或水1～25ml，加5％亞硝酸鈉溶液0.3ml～5ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液0.3ml～5ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4～25ml，再加50％甲醇或水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以蘆丁或原兒茶醛或丹參素鈉或丹酚酸B或其鎂鹽作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，采用分光光度法，在500±100nm處測定吸收度，以外標一點法或標準曲線法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總酚的限度以蘆丁或原兒茶醛或丹參素鈉或丹酚酸B或其鎂鹽計，不得少于7.5mg；c.注射劑中丹酚酸B或其鎂鹽含量測定取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹酚酸B或其鎂鹽對照品的水或10％～無水甲醇或10％～無水乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸水溶液10～50∶2～30∶93～20為流動相，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內；以外標一點法或標準曲線法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含丹酚酸B或其鎂鹽的限度不得少于1.2mg；d、注射劑中丹參酮IIA的含量測定取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或乙醇或流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液20～90∶80～10為流動相，流速為0.5～2ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內；以外標一點法或標準曲線法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含丹參酮IIA的限度不得少于0.1mg；e、注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種的含量測定取待測雙參注射制劑適量，加水溶解后上于已處理好的大孔吸附樹脂柱，依次用水、梯度乙醇溶液除雜后，再用50％～無水乙醇溶液洗脫，收集50％～無水乙醇洗脫部分，揮干，殘渣用水或甲醇或乙醇或流動相溶解并定至合適濃度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸溶液5～40∶95～60或甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內的一個或幾個或蒸發光檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內；以外標法或標準曲線法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應為以下一項或幾項每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于0.35mg；每單位量含人參皂苷Re的限度不得少于0.17mg；每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于0.2mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1中兩種或三種成分總和的限度不得少于0.52mg；f、注射劑中總皂苷的含量測定取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加蒸餾水或甲醇或乙醇適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛-冰醋酸溶液0.1ml～10ml，高氯酸0.1ml～15ml，搖勻，30℃～80℃水浴上加熱3～50分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或人參皂苷Re或人參皂苷Rf為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，采用分光光度法，在547±100nm的波長處測定吸收度，以外標法或標準曲線法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或人參皂苷Re或人參皂苷Rf計，不得少于4.0mg。
7 .按照權利要求6所述的雙參注射劑的質量控制方法，其特征在于所述注射劑含量的測試方法應包括以下全部或部分內容a.注射劑中丹參素、原兒茶醛中一種或兩種的含量測定取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參素鈉、原兒茶醛中一種或兩種對照品的水溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液13∶87為流動相，檢測波長為280nm，柱溫30℃，以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應為以下一項或幾項(1)每單位量含丹參素的限度不得少于4.5mg；(2)每單位量含原兒茶醛的限度不得少于2mg；(3)每單位量含丹參素和原兒茶醛的總和的限度不得少于6.5mg；b.注射劑中總酚含量測定取待測雙參注射制劑適量，加水制成每1ml含2.5mg的溶液，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以原兒茶醛作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在518nm處測定吸收度，以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總酚的限度以原兒茶醛計，不得少于15.0mg；c、注射劑中丹酚酸B含量測定取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹酚酸B對照品的75％甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為286nm，柱溫25℃；以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含丹酚酸B的限度不得少于2.4mg；d、注射劑中丹參酮IIA的含量測定取待測雙參注射制劑適量，置量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以丹參酮IIA對照品的甲醇溶液為對照；采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液75∶25為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為270nm，柱溫為30℃；以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含丹參酮IIA的限度不得少于0.2mg；e、注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種的含量測定取待測雙參注射劑適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，量取適量，上于已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、10％乙醇溶液、20％乙醇溶液、25％乙醇溶液洗脫除雜后，用80％乙醇溶液洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣用水適量使溶解并定至合適濃度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，含量限度應為以下一項或幾項(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于0.7mg；(2)每單位量含人參皂苷Re的限度不得少于0.34mg；(3)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于0.4mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re中兩種或三種成分總和的限度不得少于1.04mg；f、注射劑中總皂苷的含量測定取待測雙參注射制劑適量，置10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取0.6ml，至25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻2分鐘，用冰醋酸定至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，采用分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標一點法進行計算，待測雙參注射制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計，不得少于8.0mg。
8.按照權利要求6或7所述的雙參注射劑的質量控制方法，其特征在于所述注射劑中的酚類、皂苷類及其它所有可測成分的總含量占制劑中扣除輔料量和水分量的總固體量的25％以上。
全文摘要
本發明提供了一種雙參注射劑的質量控制方法，該方法包括雙參注射劑的指紋圖譜測試；紅參或人參藥材、丹參藥材、丹參素或其鈉鹽、原兒茶醛、丹酚酸B或其鎂鹽、丹參酮II
文檔編號G01N30/00GK1853673SQ200610200068
公開日2006年11月1日 申請日期2006年1月23日 優先權日2005年2月7日
發明者于文勇 申請人:貴陽云巖西創藥物科技開發有限公司