專利名稱：生脈注射劑的質量控制方法
技術領域：
本發明是一種生脈注射劑的質量控制方法，屬于中藥的技術領域。
背景技術：
生脈散是傳統制劑，以人參、麥冬、五味子為原料制成，具有益氣養陰、復脈固脫的功效，用于氣陰兩虧，脈虛欲脫的心悸、氣虛、四肢厥冷及心肌梗塞、心源性休克、感染性休克的注射劑，目前臨床上還用于治療冠心病心絞痛、脾胃虛弱證、急性病毒性心肌炎、惡性腫瘤、小兒重癥肺炎、病毒性肺炎、病毒性肝炎、視神經萎縮、糖尿病、頸椎病、銀屑病、突發性耳聾等疾病。生脈注射劑是由生脈散改劑而成，克服了傳統制劑起效慢的缺點，許多發明人及藥品企業對其做了大量的研究工作，如專利申請號為“93110807.1”，名稱為“生脈注射液及其制備工藝”的申請、專利申請號為“96117457.9”，名稱為“一種生脈注射液及其制備方法”的申請；申請人于文勇也曾經向中國專利局申請了名稱為“一種治療心腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法”、專利申請號為02153312.1的發明專利，但是藥物制劑必須要在保證產品質量穩定可控安全的基礎之上，才能不斷的更新發展，為了更好的控制該制劑的質量，保證用藥的安全性，更好的指導生產，使工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產品質地，需要研究、控制該注射液質量的方法；目前，在生脈的相關藥物制劑中，一般僅以紅參的人參皂苷Re、Rb1為檢測指標，但是它根本不能全面反應產品的質量，僅以此用來控制注射液的質量不是十分合理；如果用別的指標進行控制，由于沒有現成的檢測方案、檢測條件等等，所以比較難于實施。
發明內容
本發明的目的在于提供一種生脈注射劑的質量控制方法，這種方法向相關的生產、檢測機構提供了檢測的指標、檢測的手段、技術方法等等；以便更好的控制該制劑的質量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導生產，使生產工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產品質地。
本發明這樣構成生脈注射劑的質量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定等項目，它涉及以紅參藥材或其提取物、麥冬藥材或其提取物和五味子藥材或其提取物按某一比例組方而制成的中藥注射液含各種部位使用的注射液、滴注液、注射用無菌粉末、凍干粉的質量控制方法，該質量控制方法是將紅參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷-Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂甙Rb1、人參皂甙Rc、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rd、焦谷氨酸、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3、麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂甙元、薯蕷皂甙元、麥冬皂甙B、假葉樹皂甙元、β-谷甾醇、葡萄糖、五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為該中藥注射劑的質量控制的檢測指標。
本發明所述的一種生脈注射劑的質量控制方法將人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、紅參對照藥材、麥冬皂苷D、麥冬皂甙B、麥冬對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子對照藥材中全部或部分品種作為該中藥注射液的鑒別方法的檢測指標。
本發明所述的一種生脈注射劑的質量控制方法將人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、紅參對照藥材、麥冬皂苷D、麥冬皂甙B、麥冬對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子對照藥材中全部或部分品種作為該中藥注射劑的含量測定方法的檢測指標。
本發明所述的一種生脈注射劑的質量控制方法將人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、紅參對照藥材、麥冬皂苷D、麥冬皂甙B、麥冬對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子對照藥材中全部或部分品種作為該中藥注射劑的指紋圖譜研究的檢測指標。
本發明所述的一種生脈注射劑的質量控制方法該中藥注射劑中的注射液為無色至棕黃色的澄明液體；粉針為為淡黃色至棕黃色的粉末。
本發明所述的一種生脈注射劑的質量控制方法(1)對于紅參的鑒別技術方法1采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30ul之間某一體積，以紅參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷-Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂甙Rb1、人參皂甙Rc、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rd、焦谷氨酸、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，展開劑可以為氯仿、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照常規的比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以2～30％硫酸乙醇、或噴以1～10％茚三酮乙醇等溶液顯色的方法。
方法2采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，一般使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，以紅參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷-Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂甙Rb1、人參皂甙Rc、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rd、焦谷氨酸、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在203～350nm范圍內。
(2)對于麥冬的鑒別技術方法1采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30ul之間某一體積，以麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂甙元、薯蕷皂甙元、麥冬皂甙B、假葉樹皂甙元、β-谷甾醇、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、氯仿、丙酮、正丁醇、二乙胺、、吡啶、甲苯、甲酸、環己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照常規的比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色的方法。
方法2采用高效液相色譜法或蒸發光散射與高效液相色譜聯用法，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，一般使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，以麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂甙元、薯蕷皂甙元、麥冬皂甙B、假葉樹皂甙元、β-谷甾醇、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在203～600nm范圍內。
(3)對于五味子的鑒別技術方法1采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30ul之間某一體積，以五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環己烷的一種或一種以上試劑按照常規的比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10％磷鉬酸乙醇溶液等溶液顯色的方法。
方法2采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，一般使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙腈、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，以五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在203～600nm范圍內。
本發明所述的一種生脈注射劑的質量控制方法對于檢查包括pH值、裝量差異、澄明度、無菌、不溶性微粒、蛋白質、鞣質、樹脂、草酸鹽、鉀離子、重金屬、砷鹽、農藥殘留等全部項目或部分項目，具體檢測方法與當時現行版的中國藥典附錄收載的保持一致，鉀離子、重金屬、砷鹽的檢測方法還包括以微波消解法處理樣品，進而采用原子吸收法、等離子發射光譜(ICP-AES)或電感耦合等離子質譜(ICP-MS)法進行測定的方法；藥品中的技術要求為(1)pH值在2～10之間，或其中部分范圍；(2)重金屬不得過百萬分之二十；(3)砷鹽不得過百萬分之二；(4)有機氯農藥殘留總量不得過百萬分之一。
本發明所述的一種生脈注射劑的質量控制方法對于指紋圖譜采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、乙腈、水、0.1～10％的冰醋酸、庚烷磺酸鈉、二甲基甲烷中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，以梯度或等度洗脫的方法分離，檢測波長在200～600nm范圍內，以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、紅參藥材、麥冬皂苷D、麥冬皂甙B、麥冬藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素中全部或部分品種作為特征指紋峰或內標物峰。
本發明所述的一種生脈注射劑的質量控制方法對于含量測定方法1以可見紫外分光光度法測定本品中的總皂苷含量，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，測定波長為400～600nm中某一波長，一般采用標準曲線法或對照品法測定，常用對照品為Rg1。
方法2以可見紫外分光光度法測定本品中的總多糖含量，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，測定波長為400～600nm中某一波長，一般采用標準曲線法或對照品法測定，常用對照品為葡萄糖。
方法3以高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷-Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂甙Rb1、人參皂甙Rc、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rd、焦谷氨酸、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長在203～350nm范圍內。
方法4采用高效液相色譜法測定本品中麥冬皂苷D、魯斯可皂甙元、薯蕷皂甙元、麥冬皂甙B、假葉樹皂甙元、β-谷甾醇中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以以乙腈、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長在203～600nm范圍內。
方法5采用高效液相色譜法測定本品中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙腈、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長在203～600nm范圍內。
本發明所述的一種生脈注射劑的質量控制方法(1)對于紅參的鑒別技術采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為1ul，以人參皂苷Rb1、Re、Rg1中全部或部分品種作為對照品，直接取樣，展開劑為氯仿、甲醇、水按照常規的比例配制而成，檢視條件為噴以2～30％硫酸乙醇顯色后紫外等下檢視的方法。
(2)對于麥冬的鑒別技術采用薄層色譜法，使用硅膠G為薄層板，點樣量為1ul，以麥冬對照藥材作為對照品，樣品前處理包括直接取樣，展開劑為氯仿、丙酮按照一定比例配制而成，檢視條件為噴以2～30％硫酸乙醇顯色后紫外等下檢視的方法液、濃硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色的方法。
(3)對于五味子的鑒別技術采用薄層色譜法，使用GF254薄層板，點樣量為1ul之間某一體積，以五味子醇甲作為對照品，直接取樣，展開劑為石油醚、甲酸乙酯、甲酸的上層液，檢視條件為紫外光燈下254nm檢視。
本發明所述的一種生脈注射劑的質量控制方法對于指紋圖譜采用高效液相色譜法，樣品前處理為直接取樣，使用C18類型填料的色譜柱，以A為50mmol.L-1KH2PO4溶液，B為乙腈-水為流動相，以梯度洗脫的方法分離，檢測波長為203nm，以人參皂苷Rg1作為特征指紋峰或內標物峰。
本發明所述的一種生脈注射劑的質量控制方法對于含量測定方法1以高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re，樣品前處理為直接取樣，使用C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長為203m。
方法2采用高效液相色譜法測定本品中五味子醇甲，樣品前處理為直接取樣，使用C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長為250nm。
與現有技術相比，本發明提供的質量控制方法能更好的控制一種生脈注射劑的產品質量，保證用藥的安全性，使用本發明后，能夠保證藥物制成品的質量，從生產開始、選用原材料，到每一個生產過程的工藝步驟均必須嚴格按照工藝規程執行，否則產品就有可能不滿足質量要求；我們在進行試驗時發現采用本發明就會要求選用紅參、麥冬、五味子的等級必須達到一級以上，否則制成品會出現不合格的情況；這樣更有利于指導生產，使工藝控制更加嚴格合理，讓消費者全面認識產品品質、放心使用這類藥品。本發明選取的指標成分是產品的重要有效活性成分，對控制藥品質量是十分必要的，作為含量控制的指標很理想。本申請人為了要從源頭抓起產品質量，在固定中藥材品種、產地和采收期的前提下，制定中藥材、有效部位或中間體、注射劑的指紋圖譜；在研究中發現本方中的人參、麥冬含有大量的皂苷，并且五味子、人參、麥冬都含有多糖，由于皂苷為一類極性較大、結構復雜的化合物，它無紫外吸收，無專一顯色劑，再加上皂苷測定經常受糖的干擾，采用常規技術條件測定時，由于紫外檢測末端吸收時靈敏度低，噪音影響大，且有干擾峰，很難使用，因此，本申請人經過流動相等測定條件的一系列考察，最終在A為50mmol.L-1KH2PO4溶液，B為乙腈-水的梯度洗脫流動相條件下，分別考察了在不同波段典型波長203、210、230、254下的色譜峰情況，結果顯示，在203nm下紅參、麥冬、五味子及注射用生脈樣品色譜峰較多，峰形較好，故選用203nm作為檢測波長，得到的指紋圖譜能夠很好的檢測產品質量。所以本發明選定了一系列的成分和方法作為控制、檢測產品質量的技術手段，使實施生脈制劑的生產技術有了保障，得到的制劑更加可靠，達到了發明的目的。
為證明利用本發明提供的質量控制方法能更好的控制一種生脈注射劑的產品質量，得到的藥物具有有效的效果，申請人進行了一系列實驗；實驗例1檢測指標的研究1、(1)對CCL4急性肝損傷模型小鼠的影響取小鼠45只，隨機分為3組，即正常對照組、模型對照組(0.1％ccl410ml/kg)，五味子醇甲105mg/kg+0.1％ccl410ml/kg)每日分別灌胃給藥1次，正常對照組、模型對照組給予等體積蒸餾水，連續7日，末次給藥后除正常對照組外均腹腔注射0.1％ccl410ml/kg，18h后采血，取血清測定GPT、GOT值。
組別 nGPT GOT正常對照組1562.5±8.01133.2±9.50模型對照組15171.3±10.56 228.5±30.25五味子醇甲15124.2±5.95 176.2±11.52(2)對D-半乳糖胺急性肝損傷模型小鼠的影響取小鼠30只，隨機分為3組，每日灌胃給藥1次，連續15日，于給藥第14日，藥后各鼠同時(除正常對照組)外腹腔注射D-半乳糖胺650mg/kg，24h，采血，測定GPT、GOT值。
組別 n GPT GOT正常對照組1049.5±3.21 116.3±8.24模型對照組10288.2±30.17430.5±80.2310180.3±22.15201.4±34.22結果表明，五味子醇甲對于肝損傷具有良好的治療作用。
2、不同產地五味子藥材的五味子醇甲含量產地 五味子醇甲含量(％)遼寧 0.6
吉林2.8內蒙古 1.1黑龍江 0.5五味子果實中木脂素總量為18.1％～19.2％，其中醇甲含量較高，經口給予五味子醇甲可導致小鼠死亡，有毒性，但是五味子醇甲具有一定的治療作用，也是活性成分之一，所以控制五味子醇甲對于藥材質量、制劑安全都是十分重要的。上述研究結果表明重視藥材產地及種內變異，對于保證和提高藥材質量具有重要意義，對于控制成品療效至關重要。
實驗例2指紋圖譜的研究1、流動相的選擇研究過程中分別考察了(1)甲醇-水(20∶70)，(2)乙腈-水(10∶70)，(3)乙腈-水(梯度洗脫)(4)A為50mmol.L-1KH2PO4溶液，B為乙腈-水(70∶20)(梯度洗脫)四種流動相系統。結果顯示流動相(1)條件下，峰形較差，1小時內出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動相(2)流動相條件下，峰形較差，分離不好；(3)條件下，峰拖尾嚴重，出峰不完全；流動相(4)條件下，峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而最終被選用。
2、檢測波長的確定研究中在A為50mmol.L-1KH2PO4溶液，B為乙腈-水(70∶20)(梯度洗脫)流動相條件下，分別考察了在不同波段典型波長203、210、230、254下的色譜峰情況，結果顯示，在203nm下紅參、麥冬、五味子及注射用生脈樣品色譜峰較多，峰形較好，故最終選用203nm作為檢測波長。
3、藥材、中間體和注射用生脈指紋圖譜的相關性紅參藥材指紋圖譜相似度計算結果對照指S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10紋圖譜S1 1.000 0.983 0.942 0.904 0.960 0.942 0.941 0.965 0.933 0.953 0.956S2 0.984 1.000 0.934 0.916 0.938 0.922 0.918 0.934 0.938 0.950 0.987S3 0.943 0.930 1.000 0.981 0.998 0.981 0.980 0.997 0.993 0.984 0.973S4 0.905 0.913 0.978 1.000 0.977 0.994 0.996 0.980 0.979 0.970 0.974S5 0.960 0.939 0.997 0.977 1.000 0.984 0.981 0.995 1.000 0.987 0.994S6 0.942 0.924 0.983 0.994 0.981 1.000 0.996 0.982 0.982 0.972 0.987S7 0.943 0.918 0.981 0.996 0.979 0.996 1.000 0.983 0.980 0.971 0.986S8 0.961 0.934 0.998 0.982 0.995 0.983 0.980 1.000 0.997 0.985 0.993S9 0.932 0.935 0.996 0.976 1.000 0.981 0.982 0.998 1.000 0.986 0.980S10 0.954 0.948 0.983 0.973 0.984 0.975 0.970 0.985 0.985 1.000 0.945
對照指0.956 0.987 0.973 0.974 0.994 0.987 0.986 0.993 0.980 0.945 1.000紋圖譜麥冬藥材指紋圖譜相似度計算結果對照指S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10紋圖譜S1 1.0000.9850.9160.9360.9290.9560.9350.9360.9490.9560.942S2 0.9831.0000.9170.9380.9220.9190.9370.9380.9480.9460.957S3 0.9150.9171.0000.9780.9950.9970.9800.9780.9720.9740.986S4 0.9340.9330.9761.0000.9820.9800.9991.0000.9880.9870.993S5 0.9270.9220.9940.9801.0000.9960.9820.9810.9740.9740.988S6 0.9540.9150.9980.9820.9961.0000.9800.9800.9730.9720.987S7 0.9320.9370.9800.9990.9820.9801.0000.9980.9870.9870.993S8 0.9340.9360.9791.0000.9810.9800.9991.0000.9870.9880.972S9 0.9460.9480.9720.9880.9730.9720.9840.9861.0001.0000.960S100.9500.9470.9730.9890.9740.9730.9870.9891.0001.0000.983對照指0.9420.9570.9860.9930.9880.9870.9930.9720.9600.9831.000紋圖譜五味子藥材指紋圖譜相似度計算結果對照指S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10紋圖譜S1 1.000 0.941 0.932 0.969 0.932 0.971 0.991 0.973 0.995 0.986 0.984S2 0.941 1.000 0.971 0.995 0.998 0.970 0.971 0.958 0.956 0.959 0.986S3 0.932 0.972 1.000 0.973 0.972 0.998 1.000 0.989 0.989 0.985 0.996S4 0.967 0.995 0.974 1.000 0.997 0.972 0.973 0.960 0.961 0.962 0.985S5 0.933 0.999 0.972 0.997 1.000 0.974 0.974 0.960 0.960 0.961 0.984S6 0.972 0.970 0.998 0.972 0.971 1.000 0.998 0.985 0.986 0.988 0.995S7 0.991 0.971 1.000 0.975 0.978 0.996 1.000 0.989 0.989 0.987 0.997S8 0.973 0.956 0.989 0.960 0.960 0.987 0.989 1.000 0.993 0.991 0.993S9 0.994 0.959 0.989 0.961 0.960 0.988 0.988 0.994 1.000 0.989 0.992S100.986 0.959 0.989 0.962 0.961 0.986 0.989 0.990 0.989 1.000 0.994對照指0.984 0.986 0.996 0.985 0.984 0.995 0.997 0.993 0.992 0.994 1.000紋圖譜提取混和物中間體指紋圖譜相似度計算結果對照指S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10紋圖譜S1 1.000 0.951 0.960 0.961 0.972 0.966 0.957 0.977 0.964 0.993 0.976S2 0.951 1.000 0.965 0.956 0.973 0.964 0.994 0.968 0.970 0.959 0.967S3 0.960 0.967 1.000 0.980 0.999 0.982 0.980 0.997 0.996 0.975 0.973S4 0.963 0.957 0.982 1.000 0.979 0.995 0.998 0.980 0.979 0.962 0.975S5 0.971 0.971 0.999 0.979 1.000 0.981 0.979 0.997 1.000 0.986 0.982S6 0.969 0.963 0.982 0.994 0.981 1.000 0.997 0.982 0.983 0.979 0.989S7 0.957 0.994 0.980 0.998 0.980 0.997 1.000 0.978 0.980 0.978 0.988S8 0.976 0.966 0.997 0.980 0.998 0.983 0.980 1.000 0.999 0.965 0.995
S9 0.965 0.970 0.999 0.977 1.000 0.982 0.980 0.999 1.000 0.976 0.984S100.994 0.959 0.975 0.961 0.986 0.979 0.977 0.965 0.976 1.000 0.976對照指0.976 0.967 0.973 0.975 0.982 0.989 0.988 0.995 0.984 0.976 1.000紋圖譜注射用生脈指紋圖譜相似度計算結果對照指S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9S10紋圖譜S1 1.000 0.987 0.993 0.993 0.986 0.990 0.991 0.993 0.996 0.998 0.996S2 0.986 1.000 0.996 0.996 0.988 0.994 0.993 0.994 0.993 0.989 0.996S3 0.994 0.996 1.000 0.996 0.992 0.996 0.995 0.995 0.990 0.991 0.997S4 0.992 0.996 0.996 1.000 0.989 0.992 0.993 0.996 0.992 0.994 0.998S5 0.985 0.988 0.992 0.989 1.000 0.990 0.990 0.989 0.984 0.986 0.994S6 0.990 0.994 0.997 0.992 0.990 1.000 0.997 0.995 0.989 0.986 0.995S7 0.991 0.992 0.996 0.993 0.991 0.998 1.000 0.996 0.99 0.989 0.997S8 0.992 0.994 0.994 0.996 0.989 0.996 0.996 1.000 0.992 0.995 0.999S9 0.996 0.991 0.990 0.993 0.984 0.989 0.990 0.994 1.000 0.997 0.996S100.997 0.987 0.991 0.994 0.985 0.988 0.986 0.993 0.998 1.000 0.998對照指0.996 0.996 0.997 0.998 0.994 0.995 0.997 0.999 0.996 0.998 1.000紋圖譜結果顯示，藥材、中間體浸膏和成品粉針三者間有良好的相關性，本申請人研究的生脈指紋圖譜能很好的控制產品質量。
具體的實施方式本發明的實施例1一種生脈注射劑的質量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定等項目。
1、性狀該中藥注射劑中的注射液為無色至棕黃色的澄明液體；粉針為為淡黃色至棕黃色的粉末。
2、鑒別(1)對于紅參的鑒別技術方法1采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5~30ul之間某一體積，以紅參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷-Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂甙Rb1、人參皂甙Rc、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rd、焦谷氨酸、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，展開劑可以為氯仿、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以2~30％硫酸乙醇、或噴以1~10％茚三酮乙醇等溶液顯色的方法。
方法2采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，一般使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在合適比例條件下為流動相，以紅參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷-Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂甙Rb1、人參皂甙Rc、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rd、焦谷氨酸、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在203~350nm范圍內。
(2)對于麥冬的鑒別技術方法1采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5~30ul之間某一體積，以麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂甙元、薯蕷皂甙元、麥冬皂甙B、假葉樹皂甙元、β-谷甾醇、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、氯仿、丙酮、正丁醇、二乙胺、、吡啶、甲苯、甲酸、環己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色的方法。
方法2采用高效液相色譜法或蒸發光散射與高效液相色譜聯用法，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，一般使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在合適比例條件下為流動相，以麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂甙元、薯蕷皂甙元、麥冬皂甙B、假葉樹皂甙元、β-谷甾醇、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在203~600nm范圍內。
(3)對于五味子的鑒別技術方法1采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5~30ul之間某一體積，以五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10％磷鉬酸乙醇溶液等溶液顯色的方法。
方法2采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，一般使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙腈、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在合適比例條件下為流動相，以五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在203~600nm范圍內。
3、檢查包括pH值、裝量差異、澄明度、無菌、不溶性微粒、蛋白質、鞣質、樹脂、草酸鹽、鉀離子、重金屬、砷鹽、農藥殘留等全部項目或部分項目，具體檢測方法與當時現行版的中國藥典附錄收載的保持一致，鉀離子、重金屬、砷鹽的檢測方法還包括以微波消解法處理樣品，進而采用原子吸收法、等離子發射光譜(ICP-AES)或電感耦合等離子質譜(ICP-MS)法進行測定的方法；藥品中的技術要求為(1)pH值在2~10之間，或其中部分范圍；(2)重金屬不得過百萬分之二十；(3)砷鹽不得過百萬分之二；(4)有機氯農藥殘留總量不得過百萬分之一。
4、指紋圖譜采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、乙腈、水、0.1~10％的冰醋酸、庚烷磺酸鈉、二甲基甲烷中的一種或一種以上品種溶劑在合適比例條件下為流動相，以梯度或等度洗脫的方法分離，檢測波長在200~600nm范圍內，以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、紅參藥材、麥冬皂苷D、麥冬皂甙B、麥冬藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素中全部或部分品種作為特征指紋峰或內標物峰。
5、含量測定方法1以可見紫外分光光度法測定本品中的總皂苷含量，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，測定波長為400~600nm中某一波長，一般采用標準曲線法或對照品法測定，常用對照品為Rg1。
方法2以可見紫外分光光度法測定本品中的總多糖含量，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，測定波長為400~600nm中某一波長，一般采用標準曲線法或對照品法測定，常用對照品為葡萄糖。
方法3以高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷-Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂甙Rb1、人參皂甙Rc、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rd、焦谷氨酸、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在合適比例條件下為流動相，檢測波長在203~350nm范圍內。
方法4采用高效液相色譜法測定本品中麥冬皂苷D、魯斯可皂甙元、薯蕷皂甙元、麥冬皂甙B、假葉樹皂甙元、β-谷甾醇中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以以乙腈、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在合適比例條件下為流動相，檢測波長在203~600nm范圍內。
方法5采用高效液相色譜法測定本品中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙腈、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在合適比例條件下為流動相，檢測波長在203~600nm范圍內。
本發明的實施例2一種生脈注射劑的質量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定等項目。
1、性狀該中藥注射劑中的注射液為無色至棕黃色的澄明液體；粉針為為淡黃色至棕黃色的粉末。
2鑒別(1)對于紅參的鑒別技術采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為1ul，以人參皂苷Rb1、Re、Rg1中全部或部分品種作為對照品，直接取樣，展開劑為氯仿、甲醇、水按照一定比例配制而成，檢視條件為噴以2~30％硫酸乙醇顯色后紫外等下檢視的方法。
(2)對于麥冬的鑒別技術采用薄層色譜法，使用硅膠G為薄層板，點樣量為1ul，以麥冬對照藥材作為對照品，樣品前處理包括直接取樣，展開劑為氯仿、丙酮按照一定比例配制而成，檢視條件為噴以2~30％硫酸乙醇顯色后紫外等下檢視的方法液、濃硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色的方法。
(3)對于五味子的鑒別技術采用薄層色譜法，使用GF254薄層板，點樣量為1ul之間某一體積，以五味子醇甲作為對照品，直接取樣，展開劑為石油醚、甲酸乙酯、甲酸的上層液，檢視條件為紫外光燈下254nm檢視。
3、檢查包括pH值、裝量差異、澄明度、無菌、不溶性微粒、蛋白質、鞣質、樹脂、草酸鹽、鉀離子、重金屬、砷鹽、農藥殘留等全部項目或部分項目，具體檢測方法與當時現行版的中國藥典附錄收載的保持一致，鉀離子、重金屬、砷鹽的檢測方法還包括以微波消解法處理樣品，進而采用原子吸收法、等離子發射光譜(ICP-AES)或電感耦合等離子質譜(ICP-MS)法進行測定的方法；藥品中的技術要求為(1)pH值在2~10之間，或其中部分范圍；(2)重金屬不得過百萬分之二十；(3)砷鹽不得過百萬分之二；(4)有機氯農藥殘留總量不得過百萬分之一。
4、指紋圖譜采用高效液相色譜法，樣品前處理為直接取樣，使用C18類型填料的色譜柱，以A為50mmol.L-1KH2PO4溶液，B為乙腈-水為流動相，以梯度洗脫的方法分離，檢測波長為203nm，以人參皂苷Rg1作為特征指紋峰或內標物峰。
5、含量測定方法1以高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re，樣品前處理為直接取樣，使用C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水在合適比例條件下為流動相，檢測波長為203nm。
方法2采用高效液相色譜法測定本品中五味子醇甲，樣品前處理為直接取樣，使用C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水在合適比例條件下為流動相，檢測波長為250nm。
本發明的實施例3一種生脈注射劑的質量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定等項目。
1、性狀該中藥注射劑中的注射液為無色至棕黃色的澄明液體；粉針為為淡黃色至棕黃色的粉末。
2鑒別(1)對于紅參的鑒別技術采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為1ul，以人參皂苷Rb1、Re、Rg1中全部或部分品種作為對照品，直接取樣，展開劑為氯仿、甲醇、水按照一定比例配制而成，檢視條件為噴以2~30％硫酸乙醇顯色后紫外等下檢視的方法。
3、檢查包括pH值、裝量差異、澄明度、無菌、不溶性微粒、蛋白質、鞣質、樹脂、草酸鹽、鉀離子、重金屬、砷鹽、農藥殘留等全部項目或部分項目，具體檢測方法與當時現行版的中國藥典附錄收載的保持一致，鉀離子、重金屬、砷鹽的檢測方法還包括以微波消解法處理樣品，進而采用原子吸收法、等離子發射光譜(ICP-AES)或電感耦合等離子質譜(ICP-MS)法進行測定的方法；藥品中的技術要求為(1)pH值在2~10之間，或其中部分范圍；(2)重金屬不得過百萬分之二十；(3)砷鹽不得過百萬分之二；(4)有機氯農藥殘留總量不得過百萬分之一。
4、指紋圖譜采用高效液相色譜法，樣品前處理為直接取樣，使用C18類型填料的色譜柱，以甲醇-水為流動相，以等度洗脫的方法分離，檢測波長為203nm，以人參皂苷Re作為特征指紋峰或內標物峰。
5、含量測定方法1以高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re，樣品前處理為直接取樣，使用C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水在合適比例條件下為流動相，檢測波長為203nm。
權利要求
1.一種生脈注射劑的質量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定等項目，其特征在于它是將紅參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷-Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂甙Rb1、人參皂甙Rc、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rd、焦谷氨酸、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3、麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂甙元、薯蕷皂甙元、麥冬皂甙B、假葉樹皂甙元、β-谷甾醇、葡萄糖、五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素及五味子酯甲、五味子酯乙中的全部或部分品種作為該中藥注射劑的質量控制的檢測指標。
2.按照權利要求1所述的生脈注射劑的質量控制方法，其特征在于將人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、紅參對照藥材、麥冬皂苷D、麥冬皂甙B、麥冬對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子對照藥材中的全部或部分品種作為該中藥注射液的鑒別方法、含量測定方法和指紋圖譜研究的檢測指標。
3.按照權利要求1所述的生脈注射劑的質量控制方法，其特征在于該中藥注射劑中的注射液為無色至棕黃色的澄明液體；粉針為淡黃色至棕黃色的粉末。
4.按照權利要求1或2所述的生脈注射劑的質量控制方法，其特征在于對于紅參的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30ul之間某一體積，以紅參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷-Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂甙Rb1、人參皂甙Rc、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rd、焦谷氨酸、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為氯仿、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以2～30％硫酸乙醇、或噴以1～10％茚三酮乙醇等溶液顯色的方法；對于麥冬的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30ul之間某一體積，以麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂甙元、薯蕷皂甙元、麥冬皂甙B、假葉樹皂甙元、β-谷甾醇、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、氯仿、丙酮、正丁醇、二乙胺、、吡啶、甲苯、甲酸、環己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色的方法；對于五味子的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30ul之間某一體積，以五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10％磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法。
5.按照權利要求4所述的生脈注射劑的質量控制方法，其特征在于對于紅參的鑒別方法采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，以紅參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷-Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂甙Rb1、人參皂甙Rc、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rd、焦谷氨酸、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在203～350nm范圍內；對于麥冬的鑒別方法采用高效液相色譜法或蒸發光散射與高效液相色譜聯用法，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，以麥冬對照藥材、麥冬皂苷D、魯斯可皂甙元、薯蕷皂甙元、麥冬皂甙B、假葉樹皂甙元、β-谷甾醇、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在203～600nm范圍內；對于五味子的鑒別方法采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙腈、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規合適的比例條件下為流動相，以五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在203～600nm范圍內。
6.按照權利要求1、2或3所述的生脈注射劑的質量控制方法，其特征在于對于檢查包括pH值、裝量差異、澄明度、無菌、不溶性微粒、蛋白質、鞣質、樹脂、草酸鹽、鉀離子、重金屬、砷鹽、農藥殘留等全部項目或部分項目，具體檢測方法與當時現行版的中國藥典附錄收載的保持一致，鉀離子、重金屬、砷鹽的檢測方法還包括以微波消解法處理樣品，進而采用原子吸收法、等離子發射光譜或電感耦合等離子質譜法進行測定的方法；藥品中的技術要求為(1)pH值在2～10之間，(2)重金屬不超過百萬分之二十，(3)砷鹽不超過百萬分之二，(4)有機氯農藥殘留總量不超過百萬分之一。
7.按照權利要求1或2所述的生脈注射劑的質量控制方法，其特征在于對于指紋圖譜采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、乙腈、水、0.1～10％的冰醋酸、庚烷磺酸鈉、二甲基甲烷中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，以梯度或等度洗脫的方法分離，檢測波長在200～600nm范圍內，以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、紅參藥材、麥冬皂苷D、麥冬皂甙B、麥冬藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素中全部或部分品種作為特征指紋峰或內標物峰。
8.按照權利要求1或2所述的生脈注射劑的質量控制方法，其特征在于對于含量測定以可見紫外分光光度法測定本品中的總皂苷含量，樣品前處理包括直接取樣以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，測定波長為400～600nm中某一波長，采用標準曲線法或對照品法測定，常用對照品為Rg1；對于含量測定也可以以可見紫外分光光度法測定本品中的總多糖含量，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，測定波長為400～600nm中某一波長，采用標準曲線法或對照品法測定，常用對照品為葡萄糖；對于含量測定還可以以高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷-Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂甙Rb1、人參皂甙Rc、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rd、焦谷氨酸、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長在203～350nm范圍內。對于含量測定也可以采用高效液相色譜法測定本品中麥冬皂苷D、魯斯可皂甙元、薯蕷皂甙元、麥冬皂甙B、假葉樹皂甙元、β-谷甾醇中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長在203～600nm范圍內。對于含量測定還可以采用高效液相色譜法測定本品中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙腈、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長在203～600nm范圍內。
9.按照權利要求4或5所述的生脈注射劑的質量控制方法，其特征在于對于紅參的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G薄層板，點樣量為1ul，以人參皂苷Rb1、Re、Rg1中全部或部分品種作為對照品，直接取樣，展開劑為氯仿、甲醇、水按照常規比例配制而成，檢視條件為噴以2～30％硫酸乙醇顯色后紫外下檢視的方法；對于麥冬的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G為薄層板，點樣量為1ul，以麥冬對照藥材作為對照品，樣品前處理包括直接取樣，展開劑為氯仿、丙酮按照常規比例配制而成，檢視條件為噴以2～30％硫酸乙醇顯色后紫外下檢視的方法液、濃硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化鐵乙醇溶液溶液顯色的方法；對于五味子的鑒別采用薄層色譜法，使用GF254薄層板，點樣量為1ul之間某一體積，以五味子醇甲作為對照品，直接取樣，展開劑為石油醚、甲酸乙酯、甲酸的上層液，檢視條件為紫外光燈下254nm檢視。
10.按照權利要求7所述的生脈注射劑的質量控制方法，其特征在于對于指紋圖譜可以采用高效液相色譜法，樣品前處理為直接取樣，使用C18類型填料的色譜柱，以A為50mmol.L-1KH2PO4溶液，B為乙腈-水為流動相，以梯度洗脫的方法分離，檢測波長為203nm，以人參皂苷Rg1作為特征指紋峰或內標物峰。
11.按照權利要求8所述的生脈注射劑的質量控制方法，其特征在于對于含量測定以高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re，樣品前處理為直接取樣，使用C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長為203nm；也可以采用高效液相色譜法測定本品中五味子醇甲，樣品前處理為直接取樣，使用C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長為250nm。
全文摘要
本發明提供一種生脈注射劑的質量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定等項目，這種控制方法向相關的生產、檢測機構提供了檢測的指標、檢測的手段、具體的技術方法等等；以便更好的控制該制劑的質量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導生產，使生產工藝控制更加嚴格合理，使用本發明后，能夠保證藥物制成品的質量，從生產開始、選用原材料，到每一個生產過程的工藝步驟均必須嚴格按照工藝規程執行，才有可能保證產品的質量符合國家標準的要求。
文檔編號G01N30/02GK1621836SQ20041008151
公開日2005年6月1日 申請日期2004年12月13日 優先權日2004年12月13日
發明者于文勇 申請人:貴陽云巖西創藥物科技開發有限公司