專利名稱：一種自身免疫抗體檢測試劑盒及檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種自身免疫抗體檢測試劑盒及檢測方法，屬于醫學檢驗領域。
背景技術：
自身免疫性疾病(autoimmune disease, AID)是指由于某些原因(感染、遺傳、內分泌等)造成免疫系統對自身成分的免疫耐受減低或破壞，致使自身抗體和/或致敏淋巴細胞以及一些固有免疫成分如補體、炎癥因子等損傷自身器官組織而引起的疾病，表現為相應組織器官的功能障礙。自身免疫性疾病包括11大類30余種疾病，其中系統性紅斑狼瘡、混合性結締組織病、進行性系統性硬皮病、多發性肌炎、自身免疫肝病、風濕和類風濕性疾病、I型糖尿病以及惡性腫瘤等是最為常見并嚴重影響患者健康及生活質量的疾病。近年來，自身免疫性疾病發病率明顯上升，其總體發病率占世界人口的3% -5%, 我國AID患者已達3000萬人以上。臨床上越來越多的疾病與自身免疫相關，由于AID可累及人體的各系統、組織和器官，臨床表現復雜，很多AID被認為是疑難病，加之由于國內認識不足及診斷水平的局限，造成大量患者因延誤治療而致殘，自身免疫性疾病已成為嚴重危害人民健康的重大疾病。自身免疫性疾病患者中，絕大多數病人血清或其它體液中可檢測到一種或多種自身抗體(autoantibodies)，能提供對疾病早期診斷和治療極其有價值的依據。每種AID都伴有特征性的自身抗體譜，許多自身抗體又預示著疾病的活動性和可能損傷的靶器官。自身抗體檢測對于診斷和鑒別診斷AID、判斷疾病活動度、判斷預后、觀察治療效果和指導臨床用藥具有重要的臨床意義。目前臨床上自身抗體檢測方法主要有間接免疫熒光法、酶聯免疫吸附法、免疫印跡法、免疫斑點法、免疫沉淀法等，其中多數方法仍然以手工操作為主，操作流程較復雜、對操作人員的要求較高，對檢測結果的解釋受到檢測方法、檢測試劑的類型、試驗人員的專業知識和經驗等多因素的影響。
發明內容
本發明的目的是提供一種操作簡單、快速、靈敏，特異性好，而且對操作人員的要求不高的自身免疫抗體檢測試劑盒及檢測方法。本發明的目的是通過以下技術方案實現的本發明的檢測試劑盒包括包被有抗原的條狀固相載體、酶標結合物、酶底物、封閉劑和緩沖液。本發明的檢測方法是(1)將待檢樣品血清或血漿與包被有抗原的條狀固相載體在室溫下孵育0. 5 1. 5小時；(2)孵育后用緩沖液洗滌固相載體；(3)將酶標結合物與固相載體在室溫下孵育30 60分鐘；(4)孵育后用緩沖液洗滌固相載體；(5)將固相載體與酶底物在室溫下孵育3 7分鐘；(6)孵育后用去離子水清洗固相載體并干燥；(7)將數據處理芯片上存儲的檢測試劑盒信息讀入數據處理芯片中；(8)把干燥的固相載體放入光學檢測系統中，數據處理芯片驅動光學檢測系統對固相載體進行檢測，并將檢測到的光信號經光電及模/數轉換后，轉換為數字信號，傳輸給數據處理芯片；(9)數據處理芯片自動識別數字信號，計算得到固相載體上的各抗原灰度值，并與反應質控線和臨界值質控線的灰度值比較，進而根據分析軟件得到數據分析報告；(10)將分析報告傳輸給打印裝置，打印結果。本發明的檢測試劑盒其內容較齊全，可以應對人體自身免疫抗體的檢測。本發明的檢測方法操作簡單、快速、靈敏，且特異性好，而且對操作人員的要求不高，其檢測結果的解釋基本不受試驗人員的專業知識和經驗等多因素的影響，因此可廣泛應用于各級醫療檢驗場所，尤其是基層醫療機構，對疾病的檢測、預防及治療有極為重要的意義。
圖1是本發明的檢測裝置示意圖，圖2是本發明檢測試劑盒2的結構示意圖(俯視)，圖3是本發明檢測試劑盒2的結構示意圖(側視)，圖4是本發明的移動托盤3的結構示意圖。
具體實施例方式本發明較佳的實施例提供了一種自身免疫抗體檢測試劑盒及檢測方法(見圖1 圖4)，本實施例的檢測試劑盒包括包被有抗原的條狀固相載體、酶標結合物、酶底物、封閉劑和緩沖液。所述條狀固相載體上含有預先設置的反應質控線8和臨界值質控線9。所述條狀固相載體包括但不限于硝酸纖維素(NC)膜、醋酸纖維素(CA)膜、聚偏氟乙烯(PVDF)膜或尼龍(Nylon)膜等；所述包被抗原包括但不限于抗核抗原(ANA)、可提取核抗原(ENA)、自身免疫肝病抗原、脈管炎相關抗原、肌炎相關抗原、糖尿病相關抗原、磷脂綜合癥相關抗原或類風濕關節炎相關抗原。所述抗核抗原和可提取核抗原(ANA-ENA)包括但不限于RNP68、RNPA, RNPC, SmB, SmD, R0/SSA6O、Ro/SSA52、La/SSB、Rib-P, PCNA, CENPB, Scl70, Jo_l、組蛋白抗原或人源性雙鏈DNA抗原；所述自身免疫肝病抗原包括但不限于PDH(ΑΜΑ Μ2)、SplOO、LKMl、gp210、LCl或 SLA ；所述脈管炎相關抗原包括但不限于TO3、MPO或GBM ；所述肌炎相關抗原包括但不限于Jo-l、Mi2、PM4cl、Ul-snRNP或Ku ；所述糖尿病相關抗原包括但不限于IAA、ICA、GDA、IA-2A或&ιΤ8 ；所述磷脂綜合癥相關抗原包括但不限于B2GP1或心磷脂抗原；所述類風濕關節炎相關抗原包括但不限于RF、RA33或CCP。所述酶標結合物包括但不限于抗人IgG-HRP、抗人IgG_AP，以及根據現有技術可以藕聯到抗人IgG分子上的其它酶分子。所述酶底物包括但不限于TMB、BCIP/NBT、AMPPD,⑶P-STAR以及根據現有技術可以與所述酶標結合物上的酶分子反應進行顯色和進行化學發光等的化合物分子。所述封閉劑包括但不限于奶粉、脫脂奶粉、BSA、BSA第5組分、PEG聚合物、酪蛋白及其降解物以及其它根據現有技術可以與所述固相載體和抗原發生非特異結合的物質。所述緩沖液包括但不限于磷酸鹽緩沖液、TRIS緩沖液等；所述緩沖液含有一定濃度的去垢劑和防腐劑等；所述去垢劑包括但不限于吐溫(Tween)、曲拉通(Triton)等；所述防腐劑包括但不限于MIT、Oxypyrion、硫柳汞、疊氮鈉等。本實施例的檢測方法是(1)將待檢樣品血清或血漿與包被有抗原的條狀固相載體在室溫下孵育0. 5 1. 5小時；(2)孵育后用緩沖液洗滌固相載體；(3)將酶標結合物與固相載體在室溫下孵育30 60分鐘；(4)孵育后用緩沖液洗滌固相載體；(5)將固相載體與酶底物在室溫下孵育3 7分鐘；(6)孵育后用去離子水清洗固相載體并干燥；(7)將數據處理芯片上存儲的檢測試劑盒信息讀入數據處理芯片中；(8)把干燥的固相載體放入光學檢測系統中，數據處理芯片驅動光學檢測系統對固相載體進行檢測，并將檢測到的光信號經光電及模/數轉換后，轉換為數字信號，傳輸給數據處理芯片；(9)數據處理芯片自動識別數字信號，計算得到固相載體上的各抗原灰度值，并與反應質控線和臨界值質控線的灰度值比較，進而根據分析軟件得到數據分析報告；(10)將分析報告傳輸給打印裝置，打印結果。上述實施例檢測方法使用的檢測裝置包括機罩1、數據處理芯片4、傳送機構5、光學檢測系統6和控制裝置7，機罩1的下面裝有帶凹槽10的移動托盤3，傳送機構5設置在移動托盤3的下部，數據處理芯片4與傳送機構5電連接，機罩1內裝有光學檢測系統6和控制裝置7。移動托盤3的表面設有二十個凹槽10。移動托盤3是通過傳送機構5進行水平移動的一種平板，傳送機構5可以采用普通的皮帶傳動和滾輪傳動。移動托盤3的移動受控于數據處理芯片4的控制信號，并根據具體信號指令，檢測試劑盒2會循序移動到光學檢測系統6所在的位置。因此，移動托盤3會按照順序將檢測試劑盒2逐一移送至光學檢測系統6的位置。光學檢測系統6是檢測所述試劑盒反應顏色的一種檢測傳感器。本發明的光學檢測系統6為CIS接觸式圖像傳感器，其發光體由300-600個緊密排列的紅、藍、綠三色LED燈組成，這些LED燈所發出的光混合在一起，通常把LED燈的波長設定在430-690nm 之間的范圍。光源直接照射到固相載體上，其發射光通過導光管直接被多晶片傳感器所接收，產生高保真的采樣信號。光信號經光電及模/數轉換后，將數字信號通過接口傳輸回數據處理芯片，數據處理芯片在CPU的統一管理下，首先對反應質控線8和臨界值質控線9的信號進行自動識別并讀取數據，接著對多個項目的反應信號進行自動識別，并將光信號存儲在存儲器中。上述實施例所述的數據處理芯片可以依據檢測結果，自動運行存儲的分析軟件， 對檢測結果進行技術分析，并將分析報告傳送給輸出裝置。輸出信號的接口可以采用串行、 并行或網絡接線等多種形式。采用USB接口方式，可以與目前流行的USB接口打印機和計算機連接。上述實施例的特點是利用移動托盤，可以同時依次放置20個檢測用條狀固相載體，批量檢測自身抗體標本，節約操作人員的實際操作時間。其優點在于可一次性批量分析 20個檢測結果，使檢測試劑的檢測時間更為集中，在檢測裝置進行檢測時間段內，操作人員可以自由安排其它工作；由于優化了整個過程的時間安排，因此加快了檢測速度。
以上所述，僅為本發明較佳的具體實施方式
，這些具體實施方式
都是基于本發明整體構思下的不同實現方式，而且本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本發明揭露的技術范圍內，可輕易想到的變化或替換，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。因此，本發明的保護范圍應該以權利要求書的保護范圍為準。
權利要求
1.一種自身免疫抗體檢測試劑盒，其特征在于，檢測試劑盒包括包被有抗原的條狀固相載體、酶標結合物、酶底物、封閉劑和緩沖液。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述條狀固相載體上含有預先設置的反應質控線和臨界值質控線。
3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述條狀固相載體包括硝酸纖維素膜、 醋酸纖維素膜、聚偏氟乙烯膜或尼龍膜；所述包被抗原包括抗核抗原、可提取核抗原、自身免疫肝病抗原、脈管炎相關抗原、肌炎相關抗原、糖尿病相關抗原、磷脂綜合癥相關抗原或類風濕關節炎相關抗原。
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述抗核抗原和可提取核抗原包括 RNP68、RNPA、RNPC、SmB、SmD、R0/SSA6O、Ro/SSA52、La/SSB、Rib-P、PCNA、CENPB、Sc170、Jo-1、 組蛋白抗原或人源性雙鏈DNA抗原。
5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述酶標結合物包括抗人IgG-HRP或抗人 IgG-AP。
6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述酶底物包括TMB、BCIP/NBT、AMPPD 或 CDP-STAR。
7.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述封閉劑包括奶粉、脫脂奶粉、BSA、 BSA第5組分、PEG聚合物或酪蛋白。
8.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述緩沖液包括磷酸鹽緩沖液或TRIS 緩沖液。
9.一種使用權利要求1所述自身免疫抗體檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于(1)將待檢樣品血清或血漿與包被有抗原的條狀固相載體在室溫下孵育0. 5 1. 5小時；(2)孵育后用緩沖液洗滌固相載體；(3)將酶標結合物與固相載體在室溫下孵育30 60分鐘； ⑷孵育后用緩沖液洗滌固相載體；(5)將固相載體與酶底物在室溫下孵育3 7分鐘；(6) 孵育后用去離子水清洗固相載體并干燥；(7)將數據處理芯片上存儲的檢測試劑盒信息讀入數據處理芯片中；(8)把干燥的固相載體放入光學檢測系統中，數據處理芯片驅動光學檢測系統對固相載體進行檢測，并將檢測到的光信號經光電及模/數轉換后，轉換為數字信號，傳輸給數據處理芯片；(9)數據處理芯片自動識別數字信號，計算得到固相載體上的各抗原灰度值，并與反應質控線和臨界值質控線的灰度值比較，進而根據分析軟件得到數據分析報告；(10)將分析報告傳輸給打印裝置，打印結果。
全文摘要
本發明涉及一種自身免疫抗體檢測試劑盒及檢測方法，檢測試劑盒包括包被有抗原的條狀固相載體、酶標結合物、酶底物、封閉劑和緩沖液。檢測方法是將待檢樣品血清或血漿與包被有抗原的條狀固相載體在室溫下孵育；孵育后用緩沖液洗滌固相載體；將酶標結合物與固相載體在室溫下孵育；孵育后用緩沖液洗滌固相載體；將固相載體與酶底物在室溫下孵育；孵育后用去離子水清洗固相載體并干燥；把干燥的固相載體放入檢測系統中。本發明的檢測方法操作簡單、快速、靈敏，且特異性好，而且對操作人員的要求不高，其檢測結果的解釋基本不受試驗人員的專業知識和經驗等多因素的影響，因此可廣泛應用于各級醫療檢驗場所，尤其是基層醫療機構。
文檔編號G01N33/558GK102323404SQ201110130659
公開日2012年1月18日 申請日期2011年5月18日 優先權日2011年5月18日
發明者梁培華, 高翔 申請人:梁培華, 高翔