專利名稱：液體植酸酶穩定性的測定方法
技術領域：
本發明涉及一種液體植酸酶穩定性的測定方法。
背景技術：
磷是動物所必需的礦物元素之一，在動物日糧中提供充足的磷非常重要。植物性飼料原料中雖然含有大量的磷，但是其中有60-80%是以植酸磷的形式存在，而在單胃動物和水產動物中缺乏分解植酸磷所需的酶，磷的利用率僅為0-30%，因此需要在飼料中添加大量的無機磷來補充磷的不足。這樣會造成飼料成本的大量增加，同時飼料中的植酸磷不能被動物所利用，被大量排泄到動物體外，造成對土壤和水的嚴重污染。植酸酶是一種能將飼料中的植酸磷水解成為無機磷和肌醇的飼用酶制劑，對單胃動物的飼喂效果已經得到了廣泛的認可。單胃動物飼料中加入植酸酶后，可以將植物性飼料中本身磷的利用率提高到60 %以上，減少50-70 %的無機磷用量，糞便中磷的排出量減少30-40 %以上，并且大大降低植酸鹽的抗營養作用，對提高畜牧生產效益、降低環境污染具有重要的意義。然而，在中國的飼料工業中，70%以上的飼料是顆粒飼料。在飼料制粒過程中，一般溫度要達到80-85°C，高者可達到90°C，其對作為熱敏物質的植酸酶活性破壞嚴重。對經過顆粒機環模擠壓成型冷卻后的顆粒飼料使用液體植酸酶以霧化方式噴涂于顆粒表面，可以防止顆粒飼料熱加工過程對植酸酶活性的破壞，同時可以適當降低酶制劑的使用量，降低飼料成本，這就是液體植酸酶后噴涂技術。液體植酸酶中含有大量的水，而水是所有化學反應的介質，相對于固體植酸酶來說，液體植酸酶在儲存、運輸和使用過程中的穩定性比較差。液體植酸酶的穩定性能是評價其品質優劣的關鍵。液體植酸酶是一種有機物溶液，某些雜質含量(包括有機物和無機物)，在一定條件下會引起液體植酸酶產生大量不溶性沉淀，然后產生兩種不良后果，一是引起植酸酶變性，酶活性降低；二是引起植酸酶后噴涂噴霧效果差，單位體積霧滴數減少，甚至堵塞管道和噴頭。目前消除這種負面作用的方法有兩個途徑:一是盡量降低液體中雜質含量。二是通過特定穩定技術促進有機物溶解，防止析出不溶物。現有的評價液體植酸酶穩定性的方法，一是只通過觀察有無沉淀來定性的判斷其穩定性，二是未考慮實際運輸、儲存和使用過程中震蕩因素對其澄清度和酶活的重要影響。從下表I可以看出，有些液體植酸酶震蕩相對靜置來說，酶活失活嚴重；吸光度上升，澄清度嚴重下降。表I為植酸酶樣品在靜置或震蕩條件下的酶活、吸光度變化情況的比較
權利要求
1.一種液體植酸酶穩定性的測定方法,該方法包括: 1)將液體植酸酶在6°c 60°C的溫度震蕩處理10分鐘 120小時； 2)在步驟I)的處理過程中選取至少一個時間點測定該液體植酸酶震蕩前后的吸光度和酶活； 3)根據步驟2)中的吸光度的變化評價澄清度的穩定性，以及根據步驟2)中酶活的變化評價酶活活性的穩定性。
2.根據權利要求1所述的液體植酸酶穩定性的測定方法，其中，步驟I)中，所述溫度為30 45°C，所述震蕩處理的時間為30分鐘 24小時，以及所述震蕩處理的強度為100 300次/分鐘。
3.根據權利要求1所述的液體植酸酶穩定性的測定方法，其中，步驟I)中，所述溫度為37°C或45°C，所述時間為24小時或I小時，并且震蕩處理的強度為200次/分鐘。
4.根據權利要求1 3中任一項所述的液體植酸酶穩定性的測定方法，其中，所述時間點為震蕩處理時間。
5.根據權利要求1所述的液體植酸酶穩定性的測定方法，其中，步驟2)中，在546nm下使用分光光度計測定該液體植酸酶震蕩前后的吸光度；以及按照GB/T18634-2009方法測定該液體植酸酶的酶活。
6.根據權利要求1所述的液體植酸酶穩定性的測定方法，其中，步驟3)中，所述酶活的變化可為下列公式(I)表示的酶活存留率: 酶活存留率=存留酶活/初始酶活X 100%(I)， 其中，存留酶活為震蕩處理后的酶活，初始酶活為震蕩處理前的酶活。
7.根據權利要求1所述的液體植酸酶穩定性的測定方法，其中，步驟3)中，所述吸光度的變化可為下列公式(2)表示的吸光度變化率: 吸光度變化率=震蕩后吸光度值/初始吸光度值X 100% (2)， 其中，初始吸光度值為震蕩處理前的吸光度值。
8.一種液體植酸酶穩定性的測定方法，該方法包括以下步驟: 1)根據液體植酸酶運輸、儲存、使用環境溫度等實際情況，將恒溫振蕩器設定溫度為6°C 60°C，震蕩處理時間設定為10分鐘 120小時，在震蕩處理的時間范圍內選取至少一個時間點，恒溫振蕩器轉速設定為100 300轉/分鐘； 2)將待測液體植酸酶搖勻后，等分到m個具塞玻璃瓶中，塞緊瓶口，備用，其中，m為大于或等于2的整數； 3)調節恒溫振蕩器至上述溫度和速度，待恒溫恒速后，同時放入上述準備好的m個具塞玻璃瓶，放入后立即開始計時，震蕩到待測時間點后取出具塞玻璃瓶，將液體植酸酶充分混勻，測定植酸酶的活性和546nm下相對于蒸懼水的吸光值,記錄結果；剩余的m個未震蕩液體植酸酶同時測定植酸酶的活性和546nm下相對于蒸餾水的吸光值，作為震蕩前的初始對照； 4)根據步驟3)中的數據計算酶活存留率和吸光度變化率，其中， 該時間點震蕩的m個樣品的酶活測定結果取算術平均值為該溫度點存留酶活，未震蕩的m個樣品酶活測定結果平均值作為初始酶活， 該時間點的酶活存留率=存留酶活/初始酶活X 100%，其中，存留酶活為震蕩處理后的酶活，初始酶活為震蕩處理前的酶活， 該時間點震蕩的m個樣品的吸光度測定結果取算術平均值為該溫度點震蕩后吸光度值，未震蕩的m個樣品吸光度測定結果平均值作為初始吸光度值， 該時間點的吸光度變化率=震蕩后吸光度值/初始吸光度值X 100%，其中，初始吸光度值為震蕩處理前的吸光度值。
9.根據權利要求8所述的液體植酸酶穩定性的測定方法，其中，步驟I)中，將恒溫振蕩器設定溫度為37°C或45°C，震蕩處理時間設定30分鐘，恒溫振蕩器轉速設定為200轉/分鐘。
10.根據權利要求8所述的液體植酸酶穩定性的測定方法，其中，在546nm下使用分光光度計測定該液體植酸酶震蕩前后的吸光度，以及按照GB/T18634-2009方法測定植酸酶的活 性。
全文摘要
本發明涉及一種測定液體植酸酶穩定性能的方法，該方法包括1)將液體植酸酶在6℃～60℃的溫度震蕩處理10分鐘～120小時；2)在步驟1)的處理過程中選取至少一個時間點測定該液體植酸酶震蕩前后的吸光度和酶活；3)根據步驟2)中的吸光度的變化評價澄清度的穩定性，以及根據步驟2)中酶活的變化評價酶活的穩定性。該方法提供一種可以有效地定量比較各種液體植酸酶的穩定性能優劣的方法，特別是提供一種通過比較震蕩前后液體植酸酶的吸光度和酶活活性的變化來判斷不同液體植酸酶穩定性的優劣的方法。
文檔編號G01N21/31GK103196844SQ201210001858
公開日2013年7月10日 申請日期2012年1月5日 優先權日2012年1月5日
發明者蘇俊兵, 魏秀蓮, 郭寶林 申請人:北京昕大洋科技發展有限公司