白細胞分類計數試劑和白細胞分類方法
【專利摘要】本發明公開一種白細胞分類計數試劑、對白細胞分類計數的方法和兩性離子表面活性劑的應用。該白細胞分類計數試劑包含至少一種陽離子表面活性劑和至少一種兩性離子表面活性劑以及pH緩沖劑。其中，該兩性離子表面活性劑為文中通式I所示的結構的兩性離子表面活性劑或為膽汁酸衍生物型兩性表面活性劑。本發明白細胞分類計數試劑能對嗜酸性粒細胞進行特異性處理，增強了嗜酸性粒細胞與中性粒細胞之間的差異，以達到增強嗜酸性粒細胞分類作用，使老化血中各個白細胞亞類分類效果與新鮮血的分類效果之間差異在可接受的范圍內。該對白細胞分類計數的方法快速，準確。
【專利說明】白細胞分類計數試劑和白細胞分類方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種細胞分類試劑和對細胞分類的方法，具體的涉及一種白細胞分類計數試劑和利用該試劑對血液中白細胞分類的方法以及一種兩性離子表面活性劑的用途。
【背景技術】
[0002]人體血液中的白細胞可以分為單核細胞、淋巴細胞和粒細胞(包括嗜酸性粒細胞、中性粒細胞和嗜堿性粒細胞)五個亞類。正常健康人血液中白細胞各個亞類的比例是相對恒定的，當人體出現某些疾病時，則會表現出某一類或幾類白細胞數量的增多或減少。其中嗜酸性粒細胞是在人全血中占比例很少的一種粒細胞，健康人血液中占白細胞比例為0.5?5%，臨床上出現過敏性疾病或寄生蟲感染等疾病時，嗜酸性粒細胞的數量會出現明顯的變化，因此在人全血檢測中嗜酸性粒細胞的準確分類計數對這些疾病的正確診斷有直接的指導意義。
[0003]嗜酸性粒細胞大小與中性粒細胞接近，在非疾病人群的全血樣本中，即正常成熟的嗜酸性粒細胞，細胞中的顆粒已經完全成熟，使其在前向高角度光散射的作用下，能夠與中性粒細胞得以區分。而在疾病條件下，尤其是寄生蟲感染的病人全血樣本中，由于病理性作用，脊髓中大量不成熟嗜酸性粒細胞進入外周血中，使嗜酸性粒細胞在外周血中的所占比例急劇增加，并且不成熟嗜酸性粒細胞與中性粒細胞的區分程度也明顯降低，應用現有技術的白細胞分類試劑不足以將不成熟嗜酸性粒細胞與中性粒細胞區分開，使得嗜酸性粒細胞的檢測準確性明顯減低。
[0004]在醫院對病人血液樣本進行分析處理時，從病人體內采集新鮮抗凝血樣后,有時會放置一段時間后進行分析，或會對放置較長時間的病人血樣進行復檢(室溫條件下存儲48小時以內)。隨著放置時間的延長，各種細胞經過新陳代謝，新鮮血樣逐漸老化，而同一血樣的新鮮血和老化血之間細胞形態會出現明顯變化，往往會造成老化血的白細胞分類計數可信度降低，其中所占比例較少的嗜酸性粒細胞的分類準確性降低的尤為嚴重。
[0005]目前，國內外對白細胞分類相關內容進行了研究，也出現了一下研究成果。在國外公開了一種用于測量血紅蛋白(HGB)和嗜酸性粒細胞(Eos)的試劑和方法。試劑含有聚氧乙烯結構為基礎的非離子表面活性劑，PH范圍3-11，通過阻抗法(DC)實現Eos分類計數。
[0006]國外還公開了一種用含有聚氧乙烯-9-月桂醚對血樣進行處理后對白細胞進行分類的方法。這種方法在酸性介質下適于區分嗜堿性粒細胞，在堿性介質下適用于區分嗜酸性粒細胞。
[0007]上述兩種現有技術均是從白細胞中單獨分離出嗜酸性粒細胞，但不能同時對其他類型的白細胞進行分類。
[0008]另外，國外公開了一種白細胞分類的試劑，該試劑包括至少一種離子表面活性劑，可以是陽離子或兩性表面活性劑中一種，至少含一種帶陰離子的有機化合物，一種非離子表面活性劑和用來調整PH值的緩沖劑。檢測方法為激光散射法。
[0009]國外還公開了一種白細胞五分類的試劑，通過兩種試劑，第一試劑為稀釋血樣的高滲溶液，第二試劑為含陰離子表面活性劑和非離子表面活性劑的溶液，檢測方法為直流阻抗和射頻法。
[0010]在國外另一專利中公開了一種白細胞五分類的方法和試劑系統。溶血劑由兩種試劑組成，第一試劑含烷基磺酸的堿金屬鹽類、有機酸、無機酸或其混合物及非離子表面活性劑。第二試劑含聚氧乙烯或聚氧丙烯的共聚物類表面活性劑、十二烷基磺酸鈉的高深堿性溶液。檢測方法為直流阻抗和射頻法。
[0011]在國內公開了一種通過兩種試劑完成白細胞五分類的方法。該兩種試劑除都含有非離子表面活性劑和緩沖液外，第一種試劑至少含有一種離子表面活性劑和一種帶陰離子的有機化合物，將血細胞分為淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞以及嗜堿性粒細胞和中性粒細胞四類，第二種試劑至少含有一種離子表面活性劑，將血細胞分成嗜堿性粒細胞和其他細胞類群。檢測方法為激光散射法。國內還公開了一種白細胞分類計數試劑，該試劑包含陽離子、兩性表面活性劑以及其組合，包含苯環或者雜環的有機化合物，調節PH值的緩沖液。檢測方法為激光散射法。
[0012]以上現有技術的分類試劑以及方法中，溶血劑溶解全血樣本中的紅細胞，并對白細胞進行非特異性作用，結合檢測方法通過各種類型白細胞的結構特點進行區分，其中嗜酸性粒細胞是作為其中一個類群進行分類和計數。由于現有技術并不含有針對嗜酸性粒細胞特異性處理的成分，因此對于含有高嗜酸的全血樣本或老化血樣中嗜酸性粒細胞的分類準確性不夠理想。
【發明內容】
[0013]本發明的目的在于克服現有技術的上述不足，提供一種能夠快速溶解紅細胞，能增強嗜酸性粒細胞分類作用，使新鮮全血樣本和室溫存儲48小時的老化全血樣本的白細胞分類結果更為準確的白細胞分類計數試劑。
[0014]本發明另一目的是提 供一種方便、快捷，且能準確對新鮮全血樣本和室溫存儲48小時以內的老化全血樣本中的白細胞進行分類計數的方法。
[0015]本發明又一目的是提供一種兩性離子表面活性劑在制備白細胞分類計數試劑中的用途。
[0016]為了實現上述發明目的，本發明的技術方案如下:
[0017]一種白細胞分類計數試劑，包括
[0018](I)表面活性劑溶液，所述表面活性劑溶液能夠溶解紅細胞，使白細胞膜部分損傷，穩定嗜酸性粒細胞和老化細胞的細胞膜，所述表面活性劑溶液含有至少一種陽離子表面活性劑和至少一種兩性離子表面活性劑；
[0019]所述兩性表面活性劑具有通式I所示的結構
[0020]
【權利要求】
1.一種白細胞分類計數試劑，包括 (1)表面活性劑溶液，所述表面活性劑溶液能夠溶解紅細胞，使白細胞膜部分損傷，穩定嗜酸性粒細胞和老化細胞的細胞膜，所述表面活性劑溶液含有至少一種陽離子表面活性劑和至少一種兩性離子表面活性劑； 所述兩性表面活性劑為具有通式I所示結構的兩性表面活性劑，
2.如權利要求1的白細胞分類計數試劑，其特征在于，所述n為3，和/或R2和R3各自獨立選自羥乙基或甲基。
3.如權利要求1的白細 胞分類計數試劑，其特征在于，所述m為3，和/或X為磺酸基。
4.如權利要求1的白細胞分類計數試劑，其特征在于，所述R2和R3為乙氧基，或所述R2和R3為羥丙基。
5.如權利要求1的白細胞分類計數試劑，其特征在于，所述n為3，所述X為磺酸基，所述R2和R3各自獨立選自羥丙基。
6.如權利要求1的白細胞分類計數試劑，其特征在于，所述兩性離子表面活性劑選自癸基酰胺丙基甜菜堿、月桂基酰胺丙基甜菜堿、椰油酰胺丙基甜菜堿、硬脂基酰胺丙基甜菜堿、月桂基二羥乙基甜菜堿、十四烷基二羥乙基甜菜堿、硬脂基二羥乙基甜菜堿、月桂基磺基甜菜堿、十四烷基磺基甜菜堿、十六烷基磺基甜菜堿、十八烷基磺基甜菜堿、十二烷基乙氧基磺基甜菜堿、十四烷基乙氧基磺基甜菜堿、十六烷基乙氧基磺基甜菜堿、十八烷基乙氧基橫基甜菜喊、十二烷基輕丙基橫基甜菜喊、十四烷基輕丙基橫基甜菜喊、十TK烷基輕丙基磺基甜菜堿、十八烷基羥丙基磺基甜菜堿、月桂酰胺丙基羥丙基磺基甜菜堿、椰油酰胺丙基羥丙基磺基甜菜堿、十四烷基酰胺丙基羥丙基磺基甜菜堿、十六烷基酰胺丙基羥丙基磺基甜菜堿、十八烷基酰胺丙基羥丙基磺基甜菜堿、3- [ (3-膽烷酰胺丙基)-二甲基銨]-1-丙磺酸鹽、3-[(3-膽烷酰胺基丙基)_ 二甲基銨]-2-羥-1-丙磺酸鹽中的至少一種。
7.如權利要求1的白細胞分類計數試劑，其特征在于，所述陽離子表面活性劑為具有通式II結構的季銨鹽陽離子表面活性劑:
8.如權利要求1的白細胞分類計數試劑，其特征在于，所述試劑還包括帶陰離子基團的有機化合物，所述帶陰離子基團的有機化合物優選8-苯胺基-1-萘磺酸、8-苯胺基-1-萘磺酸鹽、6-(對甲苯胺基)-2-萘磺酸、6-(對甲苯胺基)-2-萘磺酸鹽、鉻變酸、萘磺酸中的至少一種。
9.如權利要求1的白細胞分類計數試劑，其特征在于，還包含助溶劑，所述助溶劑優選醇、環糊精、環糊精衍生物中的至少一種；所述醇優選甲醇、乙醇、乙二醇、丙三醇、苯氧乙醇、異丙醇中的至少一種；所述環糊精優選a -環糊精、^ -環糊精中的至少一種；所述環糊精衍生物優選二甲基-(6-環糊精、羥乙基-(6-環糊精、羥丙基-(6-環糊精、羧甲基-(6-環糊精中的至少一種。
10.一種對白細胞分類計數的方法，包括如下步驟: 將權利要求1~9任一所述的白細胞分類計數試劑與待測血樣混合反應，溶解紅細胞和血小板，損傷白細胞； 檢測所述白細胞的至少兩種光信號，得到所述白細胞的形態和大小信息； 根據所述白細胞的形態和大小信息，將所述白細胞分為淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞相對應的3個集團以及與中性粒細胞和嗜堿性粒細胞相對應的I個集團共4個集團，并對所述各集團中所含細胞數目進行計數。
11.如權利要求10所述的用于白細胞分類的方法，其特征在于，采用測定角度為2~6度的低角度散射光來測定白細胞的大小信息，采用測定角度為6~20度的高角度散射光測定白細胞的形態信息。
12.—種具有通式I所示結構的兩性離子表面活性劑在制備白細胞分類計數試劑中的用途，
【文檔編號】G01N21/47GK103575702SQ201210264108
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年7月27日 優先權日:2012年7月27日
【發明者】喬巖梅, 許文娟, 張華利, 張鵬 申請人:深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司