本發明涉及醫學檢驗
技術領域：
。特別地，本發明涉及一種用于檢測肌酐的試劑盒和方法。
背景技術：
：肌酐是一種相對分子質量較小(Mw＝113.1)的極性有機氮化合物。血清肌酐來源分為外源性和內源性，外源性肌酐是肉類食物在體內代謝后的產物；內源性肌酐是體內肌肉組織代謝的產物。在肉類食物攝入量穩定且身體的肌肉代謝基本不變時，肌酐的生成恒定。肌酐可通過腎球濾過，在腎小管內很少吸收，每日體內產生的肌酐幾乎全部隨尿液排出，一般不受尿量影響。在臨床上，血肌酐濃度用于反映例如腎臟損害、腎小球濾過率等腎功能。測定血清肌酐的方法主要有兩種：一種是堿性苦味酸速率法(Jaffe法)，一種是肌氨酸氧化酶法。Jaffe法由于線性范圍窄，特異性差，易受樣本中其他物質(如酮體、抗壞血酸、膽紅素、頭孢、多巴胺等)干擾，出現檢測偏差，已逐漸退出市場。目前市場使用較多的為肌氨酸氧化酶法。羥苯磺酸鈣(calciumdobesilate)(又稱多貝斯(doxium))是微血管保護劑，主要用于治療微血管病、靜脈曲張綜合癥以及與微循環障礙伴發額靜脈功能不全，還用于靜脈剝離和靜脈硬化法的輔助治療，用于預防術后綜合癥，水腫及組織浸潤。羥苯磺酸鈣對肌氨酸氧化酶法檢測肌酐的負干擾在1986年被Guder和Hoffman首次報道，而該干擾的機理目前尚不清楚。酚磺乙胺(又名止血敏)的化學名稱為2,5-二羥基苯磺酸二乙胺鹽。其具有止血作用。酚磺乙胺在臨床上主要用于預防和治療外科手術出血過多，血小板減少性紫癜或過敏性紫癜以及其他原因引起的出血。酚磺乙胺對肌氨酸氧化酶法檢測肌酐的負干擾已有報道。羥苯磺酸鈣和酚磺乙胺對肌氨酸氧化酶法檢測肌酐的負干擾對被施用這兩種藥物的患者造成很大的不便。例如，對于糖尿病患者而言，常伴發腎功能不全，而所施用的羥苯磺酸鈣對肌氨酸氧化酶法檢測肌酐的負干擾可能造成糖尿病患者腎功能不正確評估，掩蓋并延誤病情。而對于手術患者，所施用的酚磺乙胺對肌氨酸氧化酶法檢測肌酐的負干擾可能使得不能正確評估其腎功能，造成術后并發癥，影響患者的預后。本領域中需要滿足以下一種或多種特性的肌酐測定試劑盒：能夠抵抗羥苯磺酸鈣和/或酚磺乙胺對肌氨酸氧化酶法檢測肌酐的負干擾；具有良好的重復性以及寬的線性范圍；和/或能抵抗抗壞血酸、血紅蛋白、乳糜對肌酐檢測的干擾。技術實現要素：一方面，本發明提供了一種肌酐測定試劑盒，其利用肌氨酸氧化酶法檢測肌酐。肌氨酸氧化酶法檢測肌酐測定肌酐一般而言所涉及反應為以下：通過肌酐酶將肌酐轉化為肌酸，肌酸通過肌酸酶轉化為肌氨酸，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下生成過氧化氫(H2O2)，最后H2O2在Trinder反應中呈色，即，過氧化氫與4-AAP和色原在過氧化物酶的作用下生成醌亞胺。用于進行肌氨酸氧化酶法的試劑盒通常包含肌酸酶、肌氨酸氧化酶、色原、肌酐酶、4-氨基安替吡啉(4-AAP)和過氧化物酶。本發明的一些實施方案的肌酐測定試劑盒可以采用肌氨酸氧化酶二步酶法測定肌酐。所述肌氨酸氧化酶二步法可以包括兩個步驟。第一步驟用于消除內源性肌酸，其中內源性肌酸在肌酸酶和肌氨酸氧化酶的作用下生成H2O2，生成的H2O2被過氧化氫酶(CAT)分解成H2O和O2，在此步驟中H2O2并不與色原發生反應；在第二步驟中，加入肌酐酶后，肌酐在肌酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶的作用下生成H2O2，過氧化氫酶在過氧化氫酶抑制劑的作用下失活，從而生成的H2O2在Trinder反應中呈色。在一些實施方案中，使用所述肌氨酸氧化酶二步酶法測定肌酐的肌酐測定試劑盒可以包含試劑組1和試劑組2。其中，所述試劑組1包含肌酸酶、肌氨酸氧化酶、色原和過氧化氫酶。所述試劑組2包含肌酐酶、4-氨基安替吡啉(4-AAP)和過氧化物酶。其中，所述色原選自N-(2-羥基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺或其鈉鹽(HDAOS)、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-5-二甲氧基苯胺(DAOS)或其組合。本發明人出乎意料地發現，在利用肌酐氧化酶法的檢測肌酐時，包含選自HDAOS、DAOS或其組合的色原與4-AAP的組合物能夠降低樣品中存在的羥苯磺酸鈣和/或酚磺乙胺對肌酐檢測所造成的負干擾。在一些實施方式中，所述4-氨基安替吡啉的量在0.25-5g/L，優選0.5-2.5g/L的范圍內。4-AAP的量在0.25-5g/L的范圍內時可以有效地降低羥苯磺酸鈣和/或酚磺乙胺對肌酐測定所造成的干擾。在一些實施方式中，所述試劑盒中4-AAP的量可以為0.7g/L、1g/L、1.5g/L、2g/L、3g/L或4g/L。在一些實施方式中，使用這樣的組合物測得的樣品中的肌酐值與對對照樣品測得的肌酐值相比，偏差小于10％，優選小于9％，更優選小于8％，其中所述對照樣品為除不含羥苯磺酸鈣和酚磺乙胺之外，其他均與所述樣品相同的樣品。所述試劑盒中所述色原的量可以在0.1-60mmol/L，優選0.3-50mmol/L的范圍內，例如，所述色原的量可以為0.4mmol/L、1mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L或40mmol/L。在一些實施方式中，所述試劑盒中肌酐酶的量為105-800KU/L，優選120-500KU/L。例如，所述肌酐酶的量可以為150KU/L、200KU/L、250KU/L、300KU/L、350KU/L、400KU/L、450KU/L、500KU/L、550KU/L、600KU/L、650KU/L、700KU/L或750KU/L。肌酐酶的量在105-800KU/L范圍內時可以更有效地降低羥苯磺酸鈣和/或酚磺乙胺對肌酐測定所造成的干擾。所述試劑組1中的過氧化氫酶用于消除內源性肌酸產生的過氧化氫，從而消除內源性肌酸的干擾。在一些實施方式中，所述過氧化氫酶的量在20-1000KU/L，優選50-600KU/L的范圍內。例如，所述過氧化氫酶的量可以為50KU/L、100KU/L、150KU/L、200KU/L、250KU/L、300KU/L、350KU/L、400KU/L、450KU/L、500KU/L、550KU/L、600KU/L、650KU/L、700KU/L、750KU/L、800KU/L、850KU/L、900KU/L或950KU/L。將過氧化氫酶的量提高至例如50KU/L及以上可以更好地充分消除內源性肌酸的干擾。過氧化氫酶的量控制在20-1000KU/L的范圍內時可以更有效地降低羥苯磺酸鈣和/或酚磺乙胺對肌酐測定所造成的干擾。在本發明的一些優選實施方式中，所述試劑盒包含0.1-60mmol/L，優選0.3-50mmol/L的選自HDAOS和DAOS的色原；0.25-5g/L，優選0.5-2.5g/L的4-AAP；105-800KU/L，優選120-500KU/L的肌酐酶；以及20-1000KU/L，優選50-600KU/L的過氧化氫酶。在這些實施方式中，測得的樣品中的肌酐值與對對照樣品測得的肌酐值相比，偏差小于10％，優選小于8％，更優選小于6％，其中所述對照樣品為除不含羥苯磺酸鈣和酚磺乙胺之外，其他均與所述樣品相同的樣品。在一些實施方式中，所述試劑盒中肌酸酶、肌氨酸氧化酶和過氧化物酶的量可以通過本領域技術人員常規地確定。例如肌酸酶的量可以為1-300KU/L，優選5-150KU/L；肌氨酸氧化酶的量可以為0.5-150KU/L，優選2-100KU/L；過氧化物酶的量可以為1-100KU/L，優選1-50KU/L。所述試劑組1和/或試劑組2中還可以包含緩沖溶液，其可以為本領域中常規使用的緩沖溶液。在一些實施方式中，所述緩沖溶液可以各自獨立地為MOPS、good's緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液、磷酸鹽緩沖液、甘氨酸緩沖液以及其任意組合。在一些實施方式中，所述緩沖液的量在5-1000mmol/L、優選10-500mmol/L的范圍內。所述緩沖液的pH可以在6.0-8.5的范圍內。本發明試劑盒還可以包含本領域通常使用的其他輔助成分。例如，所述試劑組1還可以包含以下試劑中的一種或更多種：穩定劑、防腐劑、表面活性劑和抗壞血酸氧化酶。其中，所述穩定劑可以為蔗糖、BSA、糖醇等或其任意組合，其量可以為0.5-200g/L，優選1-50g/L。所述防腐劑可以為二氯乙酰胺、咪唑烷基脲、生物防腐劑ProClin系列、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、尼泊金酯等或其任意組合，其量可以為0.1-100g/L，優選0.1-50g/L。所述抗壞血酸氧化酶用于抑制肌酐檢測中抗壞血酸的干擾，其量可以為1-100KU/L，優選1-50KU/L。所述表面活性劑可以為TWEEN、SPAN、TRITON、EMULGEN系列表面活性劑，其量可以為0.1-100g/L，優選0.1-50g/L。例如，所述試劑組2還可以包含防腐劑和/或表面活性劑。所述防腐劑可以為疊氮鈉、二氯乙酰胺、咪唑烷基脲、生物防腐劑ProClin系列、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、尼泊金酯，其量可以為0.1-100g/L，優選0.1-50g/L。所述表面活性劑可以為TWEEN、SPAN、TRITON、EMULGEN系列表面活性劑，其量可以為0.1-100g/L，優選0.1-50g/L。本發明試劑盒中的各試劑可以各自獨立地為液體形式或凍干粉形式。同一試劑組中的試劑可以放置在同一容器中或單獨放置。本發明的試劑盒可以采用本領域技術人員熟知的方法配制。例如，可以通過將同一試劑組中的試劑混合均勻來配制本發明試劑盒。本發明的試劑盒特別適合用于檢測正在接受或已經接受羥苯磺酸鈣和/或酚磺乙胺治療的患者的樣品中的肌酐，所述患者例如正在接受或已經接受羥苯磺酸鈣和/或酚磺乙胺治療的微血管病、靜脈曲張綜合癥以及與微循環障礙伴發額靜脈功能不全、外科手術出血過多，血小板減少性紫癜或過敏性紫癜以及其他原因引起的出血的患者，所述樣品可以例如是血液或尿液。另一方面，本發明提供了一種使用上文所述試劑盒檢測樣品中的肌酐含量的方法，這種方法可以被稱為二步酶法。所述方法包括以下步驟：(a)將樣品和校準品分別與所述試劑組1混合并孵育所得的混合物，測定所得混合物的吸光度A1，(b)將所述試劑組2與經孵育的步驟(a)的混合物混合并孵育，測定所得混合物的吸光度A2，(c)根據下式計算肌酐濃度，樣品中肌酐濃度＝(A2U-A1U)/(A2C-A1C)*CC上式中，A2U和A1U分別表示樣品的吸光度A2和A1；A2C和A1C分別表示校準品的吸光度A2和A1；CC表示校準品的濃度。所述“校準品”指的是純肌酐的溶液，純肌酐可以商購獲得，可以將其配置為合適的濃度，例如10-10000μmol/L。在上述方法中，步驟(a)和步驟(b)中的孵育時間可由本領域技術人員常規地確定。例如，孵育時間可以為2-30分鐘，例如5分鐘、10分鐘或20分鐘。在一些實施方式中，所述方法中所檢測的樣品來自正在接受或已經接受羥苯磺酸鈣和/或酚磺乙胺治療的患者。在一些實施方式中，所述方法中使用的樣品與試劑組1、試劑組2的量的比例為樣品：試劑組1：試劑組2＝1:45:15。例如，樣品、試劑組1和試劑組2的用量可以分別為4μl、180μl和60μl。又一方面，本發明提供了包含選自N-(2-羥基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺或其鈉鹽和N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-5-二甲氧基苯胺的色原與4-AAP的組合物用于降低在肌酐檢測中樣品中存在的羥苯磺酸鈣和/或酚磺乙胺所造成的干擾的用途。在一些實施方式中，所述用于降低在肌酐檢測中樣品中存在的羥苯磺酸鈣和/或酚磺乙胺所造成的干擾的組合物中，所述4-氨基安替吡啉的量為0.25-5g/L，優選0.5-2.5g/L。在一些實施方式中，所述用于降低在肌酐檢測中樣品中存在的羥苯磺酸鈣和/或酚磺乙胺所造成的干擾的組合物還包含105-800KU/L，優選120-500KU/L的肌酐酶和/或20-1000KU/L，優選50-600KU/L的過氧化氫酶。在一些實施方式中，所述用途使用上文所述的試劑盒。在本發明中，對于一個方面所描述的特征、實施方案、優選實施方案同樣適用于本發明的其他方面。在本發明的一些實施方案中，組合物、試劑組、試劑盒以及方法用“包含”或“包括”描述。但本領域技術人員可以理解，所述組合物、試劑組、試劑盒以及方法也可以由基本上由相應化合物、試劑或步驟組成或由相應化合物、試劑或步驟組成。除了與本發明的目的明顯不相容的情況外，本發明的描述應理解為包括本發明的各種實施方式或要素的組合，以及它們的替代方式的組合。具體實施方式現將描述實施本發明的一些方面的一些說明性且非限制性的實施例以及對比例。實施例1：肌酐測定試劑盒的配制將下表1和下表2中所示的所有組分按照如下所示濃度混合以制備試劑組1和2。表1：試劑組1表2：試劑組2實施例2：肌酐測定試劑盒的配制將下表3和下表4中所示的所有組分按照如下所示濃度混合以制備試劑組1和2。表3：試劑組1表4：試劑組2實施例3：肌酐檢測方法以及重復性試驗收集3名健康體檢人員無溶血、無脂濁、無黃疸的新鮮混合血清作為樣品。采用四川邁克生物科技股份有限公司的肌酐校準品(濃度：352.8μmol/L批號：0715031)對試劑進行校準。通過全自動生化儀(日立7170)，將樣品和校準品與實施例1和實施例2中的試劑組1混勻，在37℃下反應5分鐘得混合物1；用空白管調零，在600nm處測定混合物的吸光度A1，然后在混合物中加入實施例1和實施例2中的試劑組2，再在37℃下反應5分鐘，得混合物2，再按照如上所述測定混合物2的吸光度A2；根據下式計算肌酐濃度。其中樣品用量為4μl，試劑組1試劑用量為180μl，試劑組2用量為60μl。樣品中肌酐濃度＝(A2U-A1U)/(A2C-A1C)*CC上式中，A2U和A1U分別表示樣品的吸光度A2和A1；A2C和A1C分別表示校準品的吸光度A2和A1；CC表示校準品的濃度。利用上述方法重復測定肌酐濃度10次。計算變異系數。結果參見下表5。表5.肌酐測定試劑盒重復性實驗由以上結果可見，肌酐測定試劑盒精密度CV<3％，重復性好。實施例4：線性范圍檢測取肌酐濃度2000.0μmol/L左右的線性樣品，用生理鹽水稀釋成9個不同的濃度(稀釋梯度分別為0、1/64、1/32、1/16、1/8、1/4、1/2、9/10、1)作為理論濃度。用實施例1和2制備的試劑盒按照實施例3所述檢測方法對每個濃度測定3次，計算平均值，作為實測濃度。以理論濃度為自變量，以實測濃度為因變量求出線性回歸方程，計算線性回歸相關系數r；將理論濃度代入線性回歸方程，計算估算濃度及實測濃度與估算濃度的偏差。結果如下表7所示。表6：肌酐測定試劑盒的線性范圍檢測由以上結果可見：肌酐測定試劑盒線性相關系數r為1.00，大于0.99；偏差范圍小，線性可達2000.0μmol/L。證實所述試劑盒線性范圍滿足肌酐行業標準要求。實施例5：抗抗壞血酸、血紅蛋白、乳糜、膽紅素、酚磺乙胺和羥苯磺酸鈣干擾的測定用混合血清配制以下濃度的抗壞血酸(g/L)：0.2、0.4、0.6、0.8、1.0；以下濃度的血紅蛋白(g/L)：1、2、3、4、5；以下濃度的乳糜(mmol/L)：5、10、15、20、25、35。用實施例1和實施例2的試劑盒按照實施例3所述方法測定不含上述干擾物質的基礎血清和以上配制的樣品中的肌酐濃度，并計算樣品與基礎血清所測值之間的相對偏差，偏差在10％以內認為是沒有干擾。結果參見下表7。表7：抗壞血酸、血紅蛋白、乳糜和膽紅素干擾的測定由以上可見，Vc0.6g/L，血紅蛋白5g/L，膽紅素800μmol/L，乳糜35mmol/L對肌酐測定的結果無干擾。證明試劑抗干擾能力強。本申請人出乎意料地發現，使用實施例1和2的試劑盒，酚磺乙胺250mg/L以及羥苯磺酸鈣100mg/L對肌酐測定結果無干擾。實施例6：抗酚磺乙胺干擾條件的探討1.不同色原類型與4-AAP的量配制濃度如下表8所示的4-AAP溶液，配制10mmol/LN-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOPS)(同仁化工)、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOOS)(同仁化工)、苯酚(成都科龍)、N,N-雙(4-磺丁基)-3-5-二甲基苯胺(MADS)(同仁化工)、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-5-二甲基苯胺(MAOS)(同仁化工)、HDAOS(同仁化工)、DAOS(同仁化工)的色原溶液。除了4-AAP以及色原外，其余成分均按照實施例1所示配方制備肌酐測定試劑盒。收集健康體檢人員無溶血、無脂濁、無黃疸的新鮮混合血清，添加純肌酐至200.0-250.0μmol/L(由于配方差異，各配方測得值會略有差異，具體參見各表格中0mg/L藥物濃度樣本值)作為基礎血清。將酚磺乙胺水溶液(山東方明藥業集團股份有限公司)與基礎血清按1：9比例配制成藥物濃度為250mg/L的干擾樣品；對照樣品為生理鹽水與基礎血清按1：9比例配制；不同藥物濃度干擾樣品由250mg/L藥物干擾樣品與對照樣本不同比例配制而得。按照實施例3所述測定對照樣品以及不同濃度的干擾樣品中的肌酐濃度，計算相對于對照樣品的偏差，結果如下表12所示。表8.不同色原類型和4-AAP的量對抗酚磺乙胺干擾的影響由上表可見，使用色原HADOS和DAOS測定且4-AAP量在0.25-5g/L范圍內的結果相對于對照樣品的偏差在10％之內。2.不同色原量配制濃度為下表9所示的色原溶液，所述色原為TOPS、TOOS、苯酚、MADS、MAOS、HDAOS、DAOS。配制4-AAP濃度為0.5g/L。除了色原和4-AAP外，其余組分均按照實施例1所示配方制備肌酐測定試劑盒。收集健康體檢人員無溶血、無脂濁、無黃疸的新鮮混合血清，添加純肌酐至200.0-250.0μmol/L(由于配方差異，各配方測得值會略有差異，具體參見各表格中0mg/L藥物濃度樣本值)。將酚磺乙胺水溶液與基礎血清按1：9比例配制成藥物濃度為250mg/L的干擾樣品；對照樣品為生理鹽水與基礎血清按1：9比例配制；不同藥物濃度干擾樣品由250mg/L藥物干擾樣品與對照樣本不同比例配制而得。按照實施例3所述測定對照樣品以及不同濃度的干擾樣品中的肌酐濃度，計算相對于對照樣品的偏差，結果如下表9所示。表9.不同色原量對抗酚磺乙胺干擾的影響由上表可見，在0.1mmol/L-60mmol/L的大濃度范圍內的HDAOS和DAOS均可以抵抗250mg/L以下的酚磺乙胺的干擾，僅在酚磺乙胺濃度很高時出現稍大于10％的偏差。3.肌酐酶的量配制如表10所示濃度的肌酐酶，除肌酐酶和色原類型外，其余組分均按照實施例1所示配方來制備肌酐測定試劑盒。收集健康體檢人員無溶血、無脂濁、無黃疸的新鮮混合血清，添加純肌酐至200.0-250.0μmol/L(由于配方差異，各配方測得值會略有差異，具體參見各表格中0mg/L藥物濃度樣本值)。將酚磺乙胺水溶液與基礎血清按1：9比例配制成藥物濃度為250mg/L的干擾樣品；對照樣品為生理鹽水與基礎血清按1：9比例配制；不同藥物濃度干擾樣品由250mg/L藥物干擾樣品與對照樣本不同比例配制而得。按照實施例3所述測定對照樣品以及不同濃度的干擾樣品中的肌酐濃度，計算相對于對照樣品的偏差，結果如下表10所示。表10.不同肌酐酶的量對抗酚磺乙胺干擾的影響由上表可見，所有濃度的肌酐酶都可以實現與對照樣品相比小于10％的偏差。但在105-800KU/L，尤其是120-500KU/L的范圍內，偏差更小。4.過氧化氫酶的量配制如表11所示濃度的過氧化氫酶，除過氧化氫酶和色原類型外，其余組分均按照實施例1所示配方來制備肌酐測定試劑盒。收集健康體檢人員無溶血、無脂濁、無黃疸的新鮮混合血清，添加純肌酐至200.0-250.0μmol/L(由于配方差異，各配方測得值會略有差異，具體參見各表格中0mg/L藥物濃度樣本值)。將酚磺乙胺水溶液與基礎血清按1：9比例配制成藥物濃度為250mg/L的干擾樣品；對照樣品為生理鹽水與基礎血清按1：9比例配制；不同藥物濃度干擾樣品由250mg/L藥物干擾樣品與對照樣本不同比例配制而得。按照實施例3所述測定對照樣品以及不同濃度的干擾樣品中的肌酐濃度，計算相對于對照樣品的偏差，結果如下表11所示。表11.不同過氧化氫酶的量對抗酚磺乙胺干擾的影響由上表可見，基本所有濃度范圍的過氧化氫酶都可以實現與對照樣品相比小于10％的偏差。但在50-1000KU/L的范圍內，偏差更小。5.肌氨酸氧化酶、肌酸酶和過氧化物酶的量配制如表12所示濃度的肌氨酸氧化酶、肌酸酶和過氧化物酶，除肌氨酸氧化酶、肌酸酶和過氧化物酶和色原類型外，其余組分均按照實施例1所示配方來制備肌酐測定試劑盒。收集健康體檢人員無溶血、無脂濁、無黃疸的新鮮混合血清，添加純肌酐至200.0-250.0μmol/L(由于配方差異，各配方測得值會略有差異，具體參見各表格中0mg/L藥物濃度樣本值)。將酚磺乙胺水溶液與基礎血清按1：9比例配制成藥物濃度為250mg/L的干擾樣品；對照樣品為生理鹽水與基礎血清按1：9比例配制；不同藥物濃度干擾樣品由250mg/L藥物干擾樣品與對照樣本不同比例配制而得。按照實施例3所述測定對照樣品以及不同濃度的干擾樣品中的肌酐濃度，計算相對于對照樣品的偏差，結果如下表12所示。由上可見，肌氨酸氧化酶、肌酸酶和過氧化物酶的量對于抵抗酚磺乙胺對肌酐檢測的干擾沒有影響。6.與市售試劑盒的對比6.1與市售試劑盒1的對比6.1.1市售試劑盒1的主要成分試劑組1包含2000U/L肌酸酶、6000U/L肌氨酸氧化酶、5000U/L過氧化物酶和0.4mmol/LN-乙基-N-(3-丙磺基)-3-甲基苯胺(ESPMT)；試劑組2包含25000U/L肌酐酶和1.0mmol/L4-AAP。6.1.2結果按照以上所述方法進行檢測，結果如下表13所示：表13：利用市售試劑盒1檢測時酚磺乙胺干擾的情況可見，市售試劑盒1無法抵抗酚磺乙胺對肌酐檢測的干擾。6.2與市售試劑盒2的對比6.2.1市售試劑盒2的主要成分試劑組1包含75IU/ml肌酸脫水酶、11IU/ml肌氨酸氧化酶、0.3mmol/LN-乙基-N-(2-羥-3-磺丙)-3-5-二甲氧-4-氟苯胺(F-DAOS)；試劑組2包含330IU/ml肌酐酶和4.9mmol/L4-AAP。6.1.2結果按照以上所述方法進行檢測，結果如下表14所示：表14：利用市售試劑盒2檢測時酚磺乙胺干擾的情況酚磺乙胺0mg/L50mg/L100mg/L150mg/L200mg/L250mg/L1177.6120.493.883.974.069.82177.5119.793.982.775.669.5M177.6120.193.983.374.869.7RE/％/-32.39％-47.14％-53.08％-57.87％-60.77％是否干擾/是是是是是可見，市售試劑盒2無法抵抗酚磺乙胺對肌酐檢測的干擾。6.3與其他市售試劑盒的對比使用市售試劑盒3、4和5檢測時酚磺乙胺干擾的情況見表15。其中，市售試劑盒3的主要成分為，試劑組1：肌酸脒基水解酶≥40KU/L，肌氨酸氧化酶≥7KU/L，抗壞血酸氧化酶≥2KU/L，過氧化氫酶≥100KU/L，ESPMT≥0.47mmol/L；試劑組2：肌酐胺基水解酶≥400KU/L，過氧化物酶≥50KU/L，4-AAP≥2.95mmol/L。市售試劑盒4的主要成分為，試劑組1：肌酸酶60U/ml，肌氨酸氧化酶15U/ml，EMSE1.4mmol/l；試劑組2：過氧化物酶30U/ml，肌酐酶310U/ml，；4-AAP2.5mmol/L。市售試劑盒5的主要成分為，試劑組1：肌酸酶≥332μkat/L，肌氨酸氧化酶≥132μkat/L，過氧化氫酶≥1.67μkat/L；HTIB1.2g/L，抗壞血酸氧化酶≥33μkat/L；試劑組2：肌酸酐酶≥498μkat/L，過氧化物酶≥16.6μkat/L，4-AAP0.5g/L。表15：利用市售試劑盒3-5檢測時酚磺乙胺干擾的情況實施例7：抗羥苯磺酸鈣干擾條件的探討按照實施例6所示方法，探討抗羥苯磺酸鈣干擾的條件。發現在能夠抵抗酚磺乙胺的組分濃度條件下，均可以實現抗羥苯磺酸鈣的干擾。數據如下表16所示：表16：抗羥苯磺酸鈣干擾條件的探討2.與市售試劑盒的對比2.1與市售試劑盒1的對比市售試劑盒1組分如實施例6中6.1.1部分所述。按照以上所述方法進行檢測，結果如下表17所示：表17：利用市售試劑盒1檢測時羥苯磺酸鈣干擾的情況可見，市售試劑盒1無法抵抗羥苯磺酸鈣對肌酐檢測的干擾。2.2與市售試劑盒2的對比市售試劑盒2組分如實施例6中5.2.1部分所述。按照以上所述方法進行檢測，結果如下表18所示：表18：利用市售試劑盒2檢測時羥苯磺酸鈣干擾的情況酚磺乙胺0mg/L20mg/L40mg/L60mg/L80mg/L100mg/L1177.5144.1123.5106.495.888.12175.8144.7121.6106.496.688.8M176.7144.4122.6106.496.288.5RE/％/-18.26％-30.63％-39.77％-45.54％-49.93％是否干擾/是是是是是可見，市售試劑盒2無法抵抗羥苯磺酸鈣對肌酐檢測的干擾。當前第1頁1 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