健壯的單芽，備用，光照培養條件為:光照12?16 h/d，光照強度2000 ?2500Lx，溫度 25±2°C ；
(4)壯苗培養:將步驟(3)增殖培養中獲得的單芽接種至壯苗培養基進行壯苗培養，壯苗培養基成分為 MS+GA32.0mg/L+NAA0.5mg/L+ 蔗糖 25 ?30g/L + 卡拉膠 8.0 ?10.0g/L +ACl.0?1.5g/L+50%多菌靈I?1.5g/L+椰汁15%，ρΗ5.5?6.5，光照培養15?20d后得到無根苗，光照培養條件為:光照12?16 h/d，光照強度2000?2500Lx，溫度25±2°C ；
(5)生根培養:將步驟(4)壯苗培養中獲得的無根苗接種至生根培養基進行生根培養，生根培養基成分為:MS+IBA3.0 mg/L+蔗糖25?30g/L +卡拉膠8.0?10.0 g/L +50%多菌靈I?1.5g/L+香蕉泥10%，pH5.5?6.5，光照培養25?35d得到生根的試管苗，光照培養條件為:光照10?12 h/d，光照強度1500?2000Lx，溫度25±2°C，統計生根率為88.9% ；
(6)煉苗移栽:將步驟(5)生根培養得到的試管苗，挑選苗高6?8cm的壯苗帶瓶移至溫度25±2°C、空氣相對濕度75?80%、光強2000?2500Lx的環境下，逐漸打開瓶蓋，煉苗2?3天，然后取出組培苗，洗凈培養基，栽至溫度16?26°C，空氣相對濕度80%?85%，光強2000?2500Lx環境下的苗床中，苗床基質由泥炭土、珍珠巖、松樹皮按體積比3:1:1混合而成，試管苗移栽成活率高為95.4%。
[0011]實施例3
(O外植體采集及消毒:春季剪取長2?3cm帶莖尖的蜈蚣蘭莖段，剝去葉片，用清水沖洗I?2h，在超凈工作臺上用75%乙醇溶液消毒40S，用0.1%升汞溶液消毒8min，用無菌水沖洗5?6次； (2)芽誘導培養:將經步驟(I)消毒后的莖段切下莖尖，接種至芽誘導培養基，進行叢生芽誘導培養，芽誘導培養基成分為:MS+6-BA4.0mg/L+IAA0.7mg/L+蔗糖25?30g/L+卡拉膠 8.0 ?10.0g/L+ACl.0 ?1.5g/L+50% 多菌靈 I ?1.5g/L+CM10%，pH 為 5.5 ?6.5，光照培養25?35d得到叢生芽，光照培養條件為:光照10?12 h/d,光照強度1500?2000Lx，溫度 25±2°C ；
(3)增殖培養:將步驟(2)芽誘導培養得到的叢生芽切取單芽，接種至增殖培養基進行增殖培養，增殖培養基成分為MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.8mg/L+蔗糖25?30g/L+卡拉膠8.0 ?10.0 g/L+ACl.0 ?1.5g/L+50% 多菌靈 I ?1.5g/L+CM10%，ρΗ5.5 ?6.5，光照培養30?40d后切取生長健壯的單芽，備用，光照培養條件為:光照12?16 h/d，光照強度2000 ?2500Lx，溫度 25±2°C ；
(4)壯苗培養:將步驟(3)增殖培養中獲得的單芽接種至壯苗培養基進行壯苗培養，壯苗培養基成分為 MS+GA31.5mg/L+NAA0.4mg/L+ 蔗糖 25 ?30g/L + 卡拉膠 8.0 ?10.0g/L +ACl.0?1.5g/L+50%多菌靈I?1.5g/L+椰汁15%，ρΗ5.5?6.5，光照培養15?20d后得到無根苗，光照培養條件為:光照12?16 h/d，光照強度2000?2500Lx，溫度25±2°C ；
(5)生根培養:將步驟(4)壯苗培養中獲得的無根苗接種至生根培養基進行生根培養，生根培養基成分為:MS+IBA2.0 mg/L+蔗糖25?30g/L +卡拉膠8.0?10.0 g/L +50%多菌靈I?1.5g/L+香蕉泥10%，pH5.5?6.5，光照培養25?35d得到生根的試管苗，光照培養條件為:光照10?12 h/d，光照強度1500?2000Lx，溫度25±2°C，統計生根率為86.7% ；
(6)煉苗移栽:將步驟(5)生根培養得到的試管苗，挑選苗高6?8cm的壯苗帶瓶移至溫度25±2°C、空氣相對濕度75?80%、光強2000?2500Lx的環境下，逐漸打開瓶蓋，煉苗2?3天，然后取出組培苗，洗凈培養基，栽至溫度16?26°C，空氣相對濕度80%?85%，光強2000?2500Lx環境下的苗床中，苗床基質由泥炭土、珍珠巖、松樹皮按體積比3:1:1混合而成，試管苗移栽成活率高為96.7%。
[0012]最后應說明的是:以上實施例僅用以說明本發明的技術方案，而非對其限制；盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解:其依然可以對前述實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應技術方案的本質脫離本發明實施例技術方案的精神和范圍。
【主權項】
1.一種蜈蚣蘭組培快繁方法，其特征在于包括以下步驟: (O外植體采集及消毒:春季剪取長2?3cm帶莖尖的蜈蚣蘭莖段，剝去葉片，用清水沖洗I?2h，在超凈工作臺上用75%乙醇溶液消毒40S，用0.1%升汞溶液消毒8min，用無菌水沖洗5?6次； (2)芽誘導培養:將經步驟(I)消毒后的莖段切下莖尖，接種至芽誘導培養基，進行叢生芽誘導培養，培養25?35d得到叢生芽，培養條件為:光照10?12 h/d，光照強度1500?2000Lx，溫度 25 ±2 cC ; (3)增殖培養:將步驟(2)芽誘導培養得到的叢生芽切取單芽，接種至增殖培養基進行增殖培養，培養30?40d后切取生長健壯的單芽，備用，培養條件為:光照12?16 h/d，光照強度2000?2500Lx，溫度25±2°C ； (4)壯苗培養:將步驟(3)增殖培養中獲得的單芽接種至壯苗培養基進行壯苗培養，培養15?20d后得到無根苗，培養條件為:光照12?16 h/d,光照強度2000?2500Lx，溫度25±2°C ； (5)生根培養:將步驟(4)壯苗培養中獲得的無根苗接種至生根培養基進行生根培養，培養25?35d得到生根的試管苗，培養條件為:光照10?12 h/d，光照強度1500?2000Lx，溫度 25 ±2 cC ; (6)煉苗移栽:將步驟(5)生根培養得到的試管苗，挑選苗高6?8cm的壯苗帶瓶移至溫度25±2°C、空氣相對濕度75?80%、光強2000?2500Lx的環境下，逐漸打開瓶蓋，煉苗2?3天，然后取出組培苗，洗凈培養基，栽至溫度16?26°C，空氣相對濕度80%?85%，光強2000?2500Lx環境下的苗床中，苗床基質由泥炭土、珍珠巖、松樹皮按體積比3:1:1混合而成。2.根據權利要求1所述的一種蜈蚣蘭組培快繁方法，其特征在于，步驟(2)中所述的芽誘導培養基成分為:MS+6_BA3.0?5.0mg/L+IAA0.5?0.8mg/L+鹿糖25?30g/L+卡拉膠8.0 ?10.0g/L+ACl.0 ?1.5g/L+50% 多菌靈 I ?1.5g/L+CM10%，pH 為 5.5 ?6.5。3.根據權利要求1所述的一種蜈蚣蘭組培快繁方法，其特征在于，步驟(3)中所述的增殖培養基成分為MS+6-BA4.0?6.0mg/L+NAA0.6?1.0mg/L+鹿糖25?30g/L+卡拉膠8.0 ?10.0 g/L+ACl.0 ?1.5g/L+50% 多菌靈 I ?1.5g/L+CM10%，ρΗ5.5 ?6.5。4.根據權利要求1所述的一種蜈蚣蘭組培快繁方法，其特征在于，步驟步驟(4)中所述的壯苗培養基成分為MS+GA31.0?2.0mg/L+NAA0.3?0.5mg/L+蔗糖25?30g/L +卡拉膠 8.0 ?10.0g/L + ACl.0 ?1.5g/L+50% 多菌靈 I ?1.5g/L+ 椰汁 15%，ρΗ5.5 ?6.5。5.根據權利要求1所述的一種蜈蚣蘭組培快繁方法，其特征在于，步驟(5)中所述的生根培養基成分為:MS+IBA1.0?3.0 mg/L+蔗糖25?30g/L+卡拉膠8.0?10.0 g/L+50%多菌靈I?1.5g/L+香焦泥10%，pH5.5?6.5。
【專利摘要】本發明公開了一種蜈蚣蘭組培快繁方法，屬于植物組織培養研究領域。本方法包括如下步驟：外植體采集及消毒、芽誘導培養、增殖培養、壯苗培養、生根培養、煉苗移栽。通過篩選出各培養階段的培養基配方和培養條件，使用多菌靈抑制內生菌污染，采用合理的煉苗措施，從而建立蜈蚣蘭組織培養快速繁殖技術體系，實現了蜈蚣蘭的組織培養和快速穩定繁殖，采用本方法重復性良好，得到的再生植株植物學性狀穩定，有效增殖率高，生根苗生長健壯、整齊，生根率為85%～90%，移栽成活率為94%～98%，可進行大規模商品化育苗生產，對于保護蜈蚣蘭種質資源及其開發利用具有重要意義。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105165612
【申請號】
【發明人】張桂玲, 溫四民
【申請人】臨沂大學
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年9月25日