所示；
(3)增殖培養:將原球莖轉接到增殖培養基，在溫度25±2°C，光照14h/d，光照強度1600?2000LX條件下培養8周，得到類原球莖和芽的混合體，所述的增殖培養基為:1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+ 胰蛋白胨 3g/L+ACl.0g/L+ 蔗糖 20g/L+ 瓊脂 6g/L，PH 為6.0?6.5，如圖2所示;
(4)分化培養:將增殖培養得到的混合體轉接到分化培養基，在溫度25±2°C，光照14h/d，光照強度1600?2000Lx條件下培養7周，得到具有I?2片葉的小苗，所述的分化培養基為:l/2MS+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+ 鮮棗汁 80ml/L+ACl.0g/L+ 蔗糖 20g/L+ 瓊脂 6g/L，PH為6.0?6.5，如圖3所示；
(5)生根培養:將小苗轉入生根培養基，在溫度25±2°C，光照14h/d，光照強度2000?2500Lx條件下培養7周，得到根長3?4cm的試管苗，所述的生根培養基為:1/2MS+IBA0.3mg/L+NAA0.5mg/L+ 鮮棗汁 80ml/L+ACl.0g/L+ 蔗糖 20g/L+ 瓊脂 6g/L，PH 為6.0?6.5，如圖4所示；
(6)煉苗移栽:將試管苗帶瓶移至常溫、無直射光環境下，煉苗I周，取出試管苗，用清水洗凈培養基，用浸泡過的水苔包裹根部栽到營養杯中，環境要求通風良好，遮光65%?70%，空氣相對濕度70%?75%，溫度15?28°C，2周后試管苗即可成活，移栽成活率達92%以上，如圖5所示。
[0013]實施例3
一種虎斑兜蘭組培快繁方法，其特征在于包括以下步驟:
(1)外植體滅菌:人工授粉140d后，采集未開裂的蒴果作為外植體，用75%酒精滅菌50s，再用10%次氯酸鈉滅菌15min，無菌水沖洗7次；
(2)種子萌發培養:在無菌條件下將滅菌后的蒴果切開，將種子均勻撒播在種子萌發培養基上，在溫度25 ±2°C，光照14 h/d，光照強度1600?2000Lx條件下培養8周，種子發育成原球莖，所述的種子萌發培養基為1/2RE+6-BA0.6mg/L+ACl.0g/L+蔗糖20g/L+瓊脂6g/L，PH為6.0?6.5，如圖1所示；
(3)增殖培養:將原球莖轉接到增殖培養基，在溫度25±2°C，光照14h/d，光照強度1600?2000LX條件下培養9周，得到類原球莖和芽的混合體，所述的增殖培養基為:1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+ 胰蛋白胨 3g/L+ACl.0g/L+ 蔗糖 20g/L+ 瓊脂 6g/L，PH 為6.0?6.5，如圖2所示;
(4)分化培養:將增殖培養得到的混合體轉接到分化培養基，在溫度25±2°C，光照14h/d,光照強度1600?2000Lx條件下培養8周，得到具有I?2片葉的小苗，所述的分化培養基為:l/2MS+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+ 鮮棗汁 80ml/L+ACl.0g/L+ 蔗糖 20g/L+ 瓊脂 6g/L，PH為6.0?6.5，如圖3所示；
(5)生根培養:將小苗轉入生根培養基，在溫度25±2°C，光照14h/d，光照強度2000?2500Lx條件下培養8周，得到根長3?4cm的試管苗，所述的生根培養基為:1/2MS+IBA0.3mg/L+NAA0.5mg/L+ 鮮棗汁 80ml/L+ACl.0g/L+ 蔗糖 20g/L+ 瓊脂 6g/L，PH 為6.0?6.5，如圖4所示；
(6)煉苗移栽:將試管苗帶瓶移至常溫、無直射光環境下，煉苗I周，取出試管苗，用清水洗凈培養基，用浸泡過的水苔包裹根部栽到營養杯中，環境要求通風良好，遮光65%?70%，空氣相對濕度70%?75%，溫度15?28°C，2周后試管苗即可成活，移栽成活率達96%以上，如圖5所示。
[0014]最后應說明的是:以上實施例僅用以說明本發明的技術方案，而非對其限制；盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解:其依然可以對前述實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應技術方案的本質脫離本發明實施例技術方案的精神和范圍。
【主權項】
1.一種虎斑兜蘭組培快繁方法，其特征在于包括以下步驟: (1)外植體滅菌:人工授粉140d后，采集未開裂的蒴果作為外植體，用75%酒精滅菌.30?50s，再用10%次氯酸鈉滅菌10?15min，無菌水沖洗5?7次； (2)種子萌發培養:在無菌條件下將滅菌后的蒴果切開，將種子均勻撒播在種子萌發培養基上，在溫度25±2°C，光照14 h/d，光照強度1600?2000Lx條件下培養7?8周，種子發育成原球莖，所述的種子萌發培養基為1/2RE+6-BA0.6mg/L+ACl.0g/L+蔗糖20g/L+瓊脂.6g/L，PH 為 6.0 ?6.5 ; (3)增殖培養:將原球莖轉接到增殖培養基，在溫度25±2°C，光照14h/d，光照強度.1600?2000Lx條件下培養8?9周，得到類原球莖和芽的混合體，所述的增殖培養基為:.1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+ 胰蛋白胨 3g/L+ACl.0g/L+ 蔗糖 20g/L+ 瓊脂 6g/L，PH 為.6.0 ?6.5 ; (4)分化培養:將增殖培養得到的混合體轉接到分化培養基，在溫度25±2°C，光照14h/d，光照強度1600?2000Lx條件下培養7?8周，得到具有I?2片葉的小苗，所述的分化培養基為:l/2MS+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+ 鮮棗汁 80ml/L+ACl.0g/L+ 蔗糖 20g/L+ 瓊脂.6g/L，PH 為 6.0 ?6.5 ; (5)生根培養:將小苗轉入生根培養基，在溫度25±2°C，光照14h/d，光照強度.2000?2500Lx條件下培養7?8周，得到根長3?4cm的試管苗，所述的生根培養基為:.1/2MS+IBA0.3mg/L+NAA0.5mg/L+ 鮮棗汁 80ml/L+ACl.0g/L+ 蔗糖 20g/L+ 瓊脂 6g/L，PH 為.6.0 ?6.5 ; (6)煉苗移栽:將試管苗帶瓶移至常溫、無直射光環境下，煉苗I周，取出試管苗，用清水洗凈培養基，用浸泡過的水苔包裹根部栽到營養杯中，環境要求通風良好，遮光65%?.70%，空氣相對濕度70%?75%，溫度15?28°C，2周后試管苗即可成活。
【專利摘要】本發明公開了一種虎斑兜蘭組培快繁方法，屬于植物組織培養研究領域。本方法包括如下步驟：（1）外植體滅菌，（2）種子萌發培養，（3）增殖培養，（4）分化培養，（5）生根培養，（6）煉苗移栽。適時采集虎斑兜蘭蒴果，滅菌后將種子撒播到無菌萌發培養基上萌發，在不同培養階段采用不同的培養基配方進行培養，然后通過煉苗和移栽得到健康、遺傳性狀穩定的優質種苗，本方法繁殖系數高，繁殖周期短，移栽成活率達92%以上，能夠進行大規模商品化育苗生產，有利于虎斑兜蘭野生資源的保護與開發，具有廣泛的應用前景。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105165629
【申請號】
【發明人】張桂玲, 溫四民
【申請人】臨沂大學
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年10月26日