溶液。
[0031]進一步優選地，所述超聲的強度為10-1000W。
[0032]進一步優選地，所述透析袋的截留分子量的范圍為1000-100000Da。
[0033]進一步優選地，所述的水分散介質的質量百分濃度為0.01-10%。
[0034]優選地，所述納米制劑為納米凍干劑，其中，凍干支架劑選自海藻糖、葡萄糖、乳糖、煎糖、右旋糖苷、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇中的一種或多種，且所述凍干支架劑的質量百分濃度為0.01-20%。
[0035]本發明所述的各種制備方法簡便，適于大規模生產，特別適用于制備具有可生物降解、緩釋、主動靶向、運送活性物質、抗腫瘤的藥物，尤其是制備抗去勢抵抗性前列腺癌的藥物。采用本發明的方法獲得的抗腫瘤的前藥及其納米制劑適合于靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內注射、口服或經皮給藥等方式。本發明所述的P(0EGMA-CO-CPT-CO-AR16)靶向前藥納米制劑，可在較低劑量條件下有效地殺傷癌細胞，并且對去勢抵抗性前列腺癌具有優異的特異性識別作用。
【附圖說明】
[0036]圖1為本發明所述的靶向前藥P (0EGMA-co-CPT-co-AR16)的一個優選實施例的合成路線圖；
[0037]圖2 為本發明所述的 P(0EGMA-co-CPT-co-AR16)在 CDCl3中的 1H NMR 圖譜；
[0038]圖3為本發明所述的一個優選實施例中的P (0EGMA-co-CPT-co-AR16)中CPT的
(a)激發與(b)發射光譜;
[0039]圖4為本發明所述的一個優選實施例中的P (0EGMA-co-CPT-co-AR16)納米粒子的粒徑分布圖；
[0040]圖5為本發明所述的一個優選實施例中的P (OEGMA-co-BSMA)細胞毒性實驗；
[0041]圖6為本發明所述的一個優選實施例中的P(0EGMA-co-CPT-co-AR16)納米粒子對DU145細胞株作用48小時和72小時后的細胞存活率圖；
[0042]圖7為本發明所述的一個優選實施例中的10 μ mol/L CPT當量的(a)自由CPT ;
(b)非靶向納米前藥；和(c)靶向納米前藥；作用于DU145細胞2小時的熒光圖。
【具體實施方式】
[0043]下面結合【具體實施方式】對本發明作進一步闡述，但本發明并不限于以下實施方式。
[0044]第一方面，本發明提供了一種用于治療去勢抵抗性前列腺癌的靶向前藥，其為P (0EGMA-co-CPT-co-AR16)。其中，POEGMA為具有長循環功效的水溶性高分子，CPT為具有抗腫瘤活性的化療藥物喜樹堿，AR16為能夠對去勢抵抗性前列腺癌特異性靶向的多肽。
[0045]第二方面，本發明提供了一種上述用于治療去勢抵抗性前列腺癌的靶向前藥的制備方法，所述方法的合成路線如圖1所示，具體包括以下步驟:
[0046](I)制備中間產物 P (OEGMA-co-BSMA):
[0047]將一定量可逆加成斷裂鏈轉移引發劑三硫代酯BPTPA、寡聚乙二醇甲基丙烯酸酯0EGMA、含β -硫代羧基的單體BSMA、溶劑和自由基引發劑加入玻璃管中，真空凍融三次后封管；之后，在20-80°C條件下反應0.5-40小時，得粗產物P (OEGMA-co-BSMA);最后將該粗產物 P (OEGMA-co-BSMA)純化處理得所述 P (OEGMA-co-BSMA)；
[0048](2)制備目標產物 P (0EGMA-co-CPT-co-AR16):
[0049]將一定量P (OEGMA-co-BSMA)、N-羥基丁二酰亞胺、CPT、縮合劑和催化劑溶于有機溶劑中，于反應容器內室溫攪拌1-72小時；然后，加入一定量AR16繼續反應1-48小時，得粗產物 P(0EGMA-co-CPT-co-AR16);最后將該粗產物 P (0EGMA-co-CPT-co_AR16)純化處理得所述目標產物 P (0EGMA-co-CPT-co-AR16)。
[0050]在一個優選實施例中，所述純化處理為:水中透析，然后冷凍干燥。
[0051]在一個優選實施例中，所述步驟(I)中的所述OEGMA的分子量為200-50000。
[0052]在一個優選實施例中，所述步驟(I)中的所述溶劑選自DMF、DMS0、NMP、異丙醇、甲醇、乙醇、二氧六環和四氫呋喃中的一種或多種。
[0053]在一個優選實施例中，所述步驟(I)中的所述自由基引發劑選自過氧化環己酮、過氧化二苯甲酰、叔丁基過氧化氫、偶氮二異丁腈、偶氮二異庚腈中的一種或多種。
[0054]在一個優選實施例中，所述步驟(I)中的所述BPTPA:0EGMA:BSMA:自由基引發劑的摩爾比為 1:10-500:0.5-500:0.0l-10
[0055]在一個優選實施例中，所述步驟(2)中的所述縮合劑選自二環己基碳二亞胺(DCC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)、N，N’- 二異丙基碳二亞胺(DIC)中的一種或多種。
[0056]在一個優選實施例中，所述步驟(2)中的所述催化劑選自吡啶、二甲氨基吡啶(DMAP)、三乙胺和羥基苯并三氮唑中的一種或多種。
[0057]在一個優選實施例中，所述步驟⑵中的所述P (OEGMA-co-BSMA)中的BSMA:N-羥基丁二酰亞胺=CPT:縮合劑:催化劑:AR16的摩爾比為1:0.01-0.1:0.1-0.99:1_10:0.01-0.5:0.01-0.1o
[0058]第三方面，本發明提供了一種上述用于治療去勢抵抗性前列腺癌的靶向前藥的納米制劑，其特征在于，其中的納米粒子的粒徑為10?2000nm，包含的所述革El向前藥為P(0EGMA-co-CPT-co-AR16)。
[0059]在一個優選實施例中，所述納米制劑為納米藥物溶液，其中，所述 P(0EGMA-co-CPT-co-AR16)的摩爾濃度為 0.0001-300 μmol/L，所述P (0EGMA-co-CPT-co-AR16)經過人體內代謝后，釋放的活性拓撲異構酶I抑制劑CPT的摩爾濃度為0.00001-10000 μ mol/L,且釋放的多肽序列AR16的摩爾濃度為0.0001-10000 μmol/L。
[0060]第四方面，本發明提供了一種上述納米藥物溶液的制備方法，其特征在于，選自以下方法中的一種:復乳法，薄膜乳化法，乳化蒸發法，界面沉淀法，自組裝法。其中，所用到的有機溶劑包括乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙醇和二甲亞砜等各種適合于制備納米藥物溶液的有機溶劑。
[0061]在一個優選實施例中，所述制備方法為復乳法，包括步驟:取4mgP (0EGMA-co-CPT-co-AR16)溶于200 μ L 二氯甲烷或二氯甲烷和丙酮的混合溶劑中，超聲乳化(10s X 4)，再加入2.2mL濃度為1%的pluronic F68水分散介質中，再次超聲乳化(1sX 4) ο然后室溫下攪拌0.5-5h除去有機相，即得納米藥物溶液。
[0062]在一個優選實施例中，所述制備方法為薄膜乳化法，包括步驟:取4mgP (0EGMA-co-CPT-co-AR16)溶于400 μ L丙酮溶劑中，旋轉蒸發成膜，隨后加入4mL的水溶液，室溫下攪拌0.5-6h，即得納米藥物溶液。
[0063]在一個優選實施例中，所述制備方法為乳化蒸發法，包括步驟:取4mgP (0EGMA-co-CPT-co-AR16)溶于400 μ L丙酮/ 二氯甲烷的混合溶劑中，加入2.2mL濃度為2%的含聚乙烯醇(PVA)的水分散介質中，超聲或高壓乳勻乳化，乳液在室溫下攪拌2-4h，揮盡有機溶劑，即得納米藥物溶液。
[0064]在一個優選實施例中，所述制備方法為界面沉淀法，包括步驟:取4mgP(0EGMA-co-CPT-co-AR16)溶于400 μ L丙酮溶劑中，在不斷的攪拌條件下，將上述溶液注入2.2mL的濃度為2%的含聚乙烯醇(PVA)水分散介質中，加壓揮發去除丙酮，即得納米藥物溶液。
[0065]在一個優選實施例中，所述制備方法為自組裝法，包括步驟:取4mgP (0EGMA-co-CPT-co-AR16)溶于200 μ L DMSO中，將溶液滴入2mL攪拌著的水中，之后將溶液裝入透析袋中透析除去有機溶劑，即得納米藥物溶液。
[0066]在一個進一步優選的實施例中，所述超聲的強度為10-1000W。
[0067]在一個進一步優選的實施例中，所述透析袋的截留分子量的范圍為
1000-100000Dao
[0068]在一個進一步優選的實施例中，所述的水分散介質的質量百分比為0.01-10%。
[0069]在一個優選實施例中，所述納米制劑為納米凍干劑，其中，凍干支架劑選自海藻糖、葡萄糖、乳糖、煎糖、右旋糖苷、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇中的一種或多種，且所述凍干支架劑的質量百分濃度為0.01-20%。
[0070]實施例1
[0071]AR16肽修飾的具有特異性靶向去勢抵抗性前列腺癌的聚(甲基丙烯酸寡聚乙二醇酯-Co-喜樹喊-C0-AR16)大分子前藥，即P (0EGMA-co-CPT-co-AR16)革巴向前藥的制備:
[0072](I) P (OEGMA-co-BSMA)的制備:將一定量 BPTPA (33mg, 0.1mmol)、OEGMA(2.70g, 9.0mmoI)、BSMA(218mg, 1.0mmoI)和 AIBN(1.6mg, 0.0lmmol)加入玻璃管中。加入1mL 二氧六環進行真空凍融三次后封管。之后，70°C反應5小時。所得反應粗產物在水中透析24小時除去雜質，冷凍干燥。經1H NMR分析，P (OEGMA-co-BSMA)的聚合度為74，OEGMA與BSMA的摩爾百分比分別為88%和12%。經GPC測定，P (OEGMA-co-BSMA)分子量Mn= 22，000，分子量分布1/^= 1.02ο
[0073](2) P (0EGMA-co-CPT-co-AR16)的制備:將一定量 P (OEGMA-co-BSMA) (215mg)、NHS-OH(2.5mg, 22 ymol)、CPT (29mg, 83 ymol)、DCC (27mg, 130 ymol)和 DMAP(Img)溶于有機溶劑中室溫攪拌