解時間小于6h時，水溶性膳食纖維的提取率隨著酶解時間 的增加而增大，當酶解時間大于6h時，水溶性膳食纖維的提取率隨著酶解時間的增大而降 低，故酶解時間為6h時水溶性膳食纖維的提取率最大，為最佳酶解時間。
[0065] 實施例3
[0066] 將忍冬藤洗凈瀝干水分，放在恒溫干燥箱中干燥，粉碎，過40目篩。
[0067]準確稱取15份預處理過的忍冬藤樣品3.OOOg分別置于干燥潔凈的錐形瓶中，加水 分散，料液質量比1:12，用鹽酸和氫氧化鈉調節pH6.0，加3-5滴緩沖溶液，用移液槍加入α-淀粉酶，封口，在60°C恒溫水浴條件下酶解45min;升溫滅酶，冷卻至室溫后用鹽酸調節pH至 4.5，加入緩沖溶液，加入糖化酶，重新封口，45 °C恒溫條件下酶解Ih，升溫滅酶[4]。冷卻至室 溫后調節Ph4.8，加入緩沖溶液，分別加入40ul濃度為0.5%、0.8%、1.0%、1.2%、1.5%即 (0.005g/ml，0.008g/ml，0.010g/ml，0.012g/ml，0.015g/ml)的纖維素酶，每組平行三次，加 入40ul0.003g/ml的木聚糖酶45 °C恒溫酶解6小時，滅酶，真空抽濾，4000r/min離心10分鐘， 濃縮，加入4倍重量體積分數為80%的乙醇醇析8h，離心，傾去上清夜，80-90°C干燥，得到水 溶性膳食纖維。水溶性膳食纖維提取率如表3，圖4。
[0068]表3不同纖維素酶質量的水溶性膳食纖維提取率
[0070] 由表3和圖3可知，在纖維素酶濃度為O.OlOg/ml的條件下水溶性膳食纖維的提取 率有顯著性差異，且在此濃度下水溶性膳食纖維的提取率最高，故酶法提取水溶性膳食纖 維的實驗中，最佳纖維素酶濃度為〇. 〇l〇g/ml。
[0071] 實施例4
[0072] 將忍冬藤洗凈瀝干水分，放在恒溫干燥箱中干燥，粉碎，過40目篩。
[0073]準確稱取15份預處理過的忍冬藤樣品3.OOOg分別置于干燥潔凈的錐形瓶中，加水 分散，料液質量比1:12，用鹽酸和氫氧化鈉調節pH6.0，加3-5滴緩沖溶液，用移液槍加入α-淀粉酶，封口，在60°C恒溫水浴條件下酶解45min;升溫滅酶，冷卻至室溫后用鹽酸調節pH至 4.5，加入緩沖溶液，加入糖化酶，重新封口，45 °C恒溫條件下酶解Ih，升溫滅酶[4]。冷卻至室 溫后調節Ph4.8,加入緩沖溶液，分別加入0.03g/ml的纖維素酶40ul以及分別加入濃度為 0 · 001g/ml、0 · 002g/ml、0 · 003g/ml、0 · 004g/ml、0 · 005g/ml 的木聚糖酶40ul，每組平行三次， 45°C恒溫酶解6小時，滅酶，真空抽濾，4000r/min離心10分鐘，濃縮，加入4倍重量體積分數 為80 %的乙醇醇析8h，離心，傾去上清夜，80-90 °C干燥，得到水溶性膳食纖維。水溶性膳食 纖維提取率如表4,圖5。
[0074]表4不同木聚糖酶濃度的水溶性膳食纖維提取率
[0076] 由表4和圖5可知木聚糖酶濃度在0.003g/ml和0.004g/ml時與其他濃度的有顯著 性差異，且在0.2 %、0.3 % (即0.003g/ml、0.004g/ml)下水溶性膳食纖維的提取率最高。
[0077] 實施例5
[0078] 將忍冬藤洗凈瀝干水分，放在恒溫干燥箱中干燥，粉碎，過40目篩。
[0079]準確稱取9份預處理過的忍冬藤樣品3.OOOg分別置于干燥潔凈的錐形瓶中，加水 分散，料液質量比1:12，用鹽酸和氫氧化鈉調節pH6.0，加3-5滴緩沖溶液，用移液槍加入α-淀粉酶，封口，在60°C恒溫水浴條件下酶解45min;升溫滅酶，冷卻至室溫后用鹽酸調節pH至 4.5，加入緩沖溶液，加入糖化酶，重新封口，45 °C恒溫條件下酶解Ih，升溫滅酶[4]。冷卻至室 溫后調節Ph4.8，加入緩沖溶液，分別加入0.010g/ml的纖維素酶40ul以及分別加入0.003g/ ml的木聚糖酶40ul，45°C恒溫酶解6小時，分別提取1、2、3次，每組平行三次，滅酶，真空抽 濾，4000r/min離心10分鐘，濃縮，加入4倍重量體積分數為80 %的乙醇醇析8h，離心，傾去上 清夜，80-90°C干燥，得到水溶性膳食纖維。水溶性膳食纖維提取率如表5，圖6。
[0080]表5不同浸提次數的水溶性膳食纖維提取率
[0082] 實施例6
[0083] 將忍冬藤洗凈瀝干水分，放在恒溫干燥箱中干燥，粉碎，過40目篩。
[0084]準確稱取預處理過的忍冬藤樣品3. OOOg分別置于干燥潔凈的錐形瓶中，加水分 散，料液質量比1:12，用鹽酸和氫氧化鈉調節pH6.0，加3-5滴緩沖溶液，用移液槍加入4ul純 度>99 %的液態α-淀粉酶，封口，在60 °C恒溫水浴條件下酶解45min;升溫滅酶，冷卻至室溫 后用鹽酸調節pH至4.5，加入緩沖溶液，加入8ul純度>99 %的液化型糖化酶，重新封口，45°C 恒溫條件下酶解Ih，升溫滅酶[4]。冷卻至室溫后調節Ph4.8,加入緩沖溶液，分別加入 0.012g/ml的纖維素酶40ul以及分別加入0.003的木聚糖酶40ul，45°C恒溫酶解5小時，滅 酶，真空抽濾，4000r/min離心10分鐘，濃縮，加入4倍重量體積分數為90 %的乙醇醇析7h，離 心，傾去上清夜，85 °C干燥，獲得忍冬藤中水溶性膳食纖維的提取率為3.78 %，持水率為 61%，溶脹力為5.31111/8。
[0085] 實施例7對比試驗
[0086] 實驗一:本實驗與實施例6的實驗條件不同之處在于，α-淀粉酶和糖化酶的反應條 件均為pH5.0，在50°C恒溫水浴條件下酶解50min;
[0087] 實驗二:本實驗與實施例6的實驗條件不同之處在于:將α-淀粉酶和糖化酶同時加 入到加水分散后的料液中，反應條件為pH5.0，50°C恒溫水浴條件下酶解50min。
[0088] 對比水溶性膳食纖維提取率，其中實驗一的水溶性膳食纖維提取率平均為 2.453%，實驗二的水溶性膳食纖維提取率平均為2.343 %。實驗證明，將α-淀粉酶和糖化酶 分開酶解忍冬藤具有顯著效果。
[0089]盡管已經示出和描述了本發明的實施例，本領域的普通技術人員可以理解:在不 脫離本發明的原理和宗旨的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本 發明的范圍由權利要求及其等同物限定。
[0090] 參考文獻：
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【主權項】
1. 一種從忍冬藤中提取水溶性膳食纖維的方法，其特征在于，將忍冬藤預處理后依次 進行一次酶解、二次酶解和三次酶解，每次酶解后均進行滅酶處理，最后經濃縮、醇沉、干燥 處理得到水溶性膳食纖維，其中所述一次酶解為使用α-淀粉酶酶解，所述二次酶解為使用 糖化酶酶解，所述三次酶解為使用纖維素酶和木聚糖酶的復合酶進行酶解。2. 根據權利要求1所述的一種從忍冬藤中提取水溶性膳食纖維的方法，其特征在于，所 述預處理為將忍冬藤洗凈、干燥、粉碎、過篩。3. 根據權利要求1所述的一種從忍冬藤中提取水溶性膳食纖維的方法，其特征在于，還 包括將忍冬藤預處理后加水分散的步驟，所述加水分散為向原料中加入9-17倍重量的水分 散。4. 根據權利要求1所述的一種從忍冬藤中提取水溶性膳食纖維的方法，其特征在于，所 述α_淀粉酶的酶解條件為在溫度為50-65°C條件下酶解20-60min。5. 根據權利要求1所述的一種從忍冬藤中提取水溶性膳食纖維的方法，其特征在于，所 述糖化酶的酶解條件為在溫度為40_65°C條件下酶解40-80min。6. 根據權利要求1所述的一種從忍冬藤中提取水溶性膳食纖維的方法，其特征在于，所 述復合酶的酶解條件為在pH4.8，溫度為40-50 °C條件下酶解4-1 Oh，得到酶解液。7. 根據權利要求1所述的一種從忍冬藤中提取水溶性膳食纖維的方法，其特征在于，具 體步驟如下： (1) 原料的預處理:將忍冬藤洗凈、干燥、粉碎，過篩備用； (2) 加水分散:將經步驟(1)粉碎后的忍冬藤粉加入12倍重量的水分散，攪拌均勻； (3) -次酶解:將步驟(2)中的分散液用鹽酸調節pH6.0,加入緩沖液，再加入4ul純度〉 99%的液態α-淀粉酶，在溫度為60 °C條件下酶解45min，得到酶解液，所述α-淀粉酶的酶活為 4 萬 u/g; (4) 一次滅酶:將步驟(3)所得酶解液進行滅酶處理； (5) 二次酶解:將步驟(4)所得滅酶后溶液用鹽酸或氫氧化鈉調節pH4.5,加入緩沖液， 加入8ul純度>99%的液化型糖化酶，在溫度為60 °C條件下酶解60min，得到酶解液，所述糖化 酶的酶活為10萬u/ml; (6) 二次滅酶:將步驟(5)所得酶解液進行滅酶處理； (7) 三次酶解:將步驟(6)所得滅酶后溶液用鹽酸或氫氧化鈉調節pH4.8,加入緩沖液， 分別加入〇.〇12g/ml的纖維素酶40ul、0.003g/ml的木聚糖酶40ul，在溫度為40-50°C條件下 酶解4-10h，得到酶解液，所述纖維素酶的酶活為1萬u/g，所述木聚糖酶的酶活為1800萬u/ g; (8) 三次滅酶:將步驟(7)所得酶解液進行滅酶處理； (9) 濃縮、醇沉處理:將步驟(8)所得滅酶后溶液真空抽濾，濾液離心，取上清液進行濃 縮處理，得到濃縮液;所得濃縮液進行醇沉處理，離心分離得到醇沉沉淀物，80-90°C干燥， 得到水溶性膳食纖維。8. 根據權利要求7所述的一種從忍冬藤中提取水溶性膳食纖維的方法，其特征在于，所 述步驟(9)中濾液離心條件為4000r/min離心10分鐘。9. 根據權利要求7所述的一種從忍冬藤中提取水溶性膳食纖維的方法，其特征在于，所 述步驟(9)中醇沉處理為將步驟(9)中得到的濃縮液加入4倍重量體積分數為80-90%的乙醇 醇析6-12h。10.根據權利要求7所述的一種從忍冬藤中提取水溶性膳食纖維的方法，其特征在于， 所述乙醇的體積分數為80%，所述乙醇醇沉時間為8h。
【專利摘要】本發明公開了一種從忍冬藤中提取水溶性膳食纖維的方法，涉及植物綜合利用技術領域，本發明以忍冬藤為原料，經過干燥、粉碎、過篩，調節pH、三次酶解后滅酶、離心，分別得到濾液和沉淀物，濾液經過濃縮、醇沉、離心、干燥得到水溶性膳食纖維。本發明利用忍冬藤為原料，實現了農副產品原料的精深加工，減少資源浪費。同時為忍冬藤產品的綜合利用提供了一條新途徑。
【IPC分類】A23L33/24
【公開號】CN105639660
【申請號】
【發明人】劉謙, 郭鳳倩, 張永清, 蒲高斌, 李佳
【申請人】山東中醫藥大學
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年1月29日