將粉碎物投入提取管道內；
[0049]3、超聲波水提:原料加10倍純化水進行超聲波連續逆流提取，超聲波頻率為3萬赫茲，提取溫度為55 °C，獲取含水量85-90%的提取液。
[0050]4、濃縮:經超濾膜(截留分子量為十萬以上)過濾，去掉小于十萬分子量的物質和水，獲取含水量30-40 %的濃縮物。
[0051 ] 5、醇沉:濃縮物邊攪拌邊加入4倍量食用酒精，靜置24h，去上清液;離心甩干獲取含酒精量5-10%的浸膏。
[0052]5.微波干燥:浸膏裝入微波料盤，抽真空干燥，溫度50°C，時間60-80分鐘，干燥物含水率<6%;
[0053]6.包裝:干燥物80目粉碎過篩，包裝；
[0054]7.檢驗:檢驗各項指標，全部合格進庫；
[0055]8.本工藝約為1:25提取比例。
[0056]實施例五
[0057]所述富砸酵母粉通過以下方法獲得:
[0058]1、在實驗室選育合適的啤酒酵母菌種，以麥芽汁為培養基在酵母生長的特定環境下培養，在幾個不同的階段加入砸，找出酵母與砸的最佳結合條件，既利于提高結合砸量，又利于酵母的生長，同時選取不同的砸化合物進行試驗，選擇最佳材料；
[0059]2、以糖蜜加適量砸化合物為培養基，殺菌后接入酵母菌種，流加氮、磷等營養鹽進行發酵培養，在溫度30°C，pH4.5?5.0的條件下通風培養24?48小時，使無機砸結合成有機態的砸，通過離心法分離出酵母，用水反復沖洗后經濃縮和噴霧干燥即得到淡黃色的富砸酵母粉，砸含量可達1000 X 10以上，通常為500 X 10左右，其蛋白質2 44%，水份< 8.5%，富含18種氨基酸，維生素B為33.2X10。
[0060]實施例六
[0061 ]所述抗腫瘤組合物的動物實驗研究
[0062]采用4周齡雌性裸鼠24只，右前肢背部皮下移植人高惡度乳腺癌細胞株制作荷瘤動物模型。將受試藥物所述抗腫瘤組合物分低、中、高劑量組，即10mg/kg/天(0.4mg/只/天)、20mg/kg/天(0.8mg/只/天)和40mg/kg/天(1.6mg/只/天)。另設陰性對照組水(200ul/只/天)。每組設6只裸鼠。各組均于腫瘤接種起即第O天灌胃給藥，每天2次。同天，各實驗鼠右后背皮下移植2 X 106個人源高惡度乳腺癌細胞，繼續灌胃給藥每天2次，再連續給藥28天(4周)，具體根據腫瘤生長情況而定。荷瘤N0D/SCID小鼠給藥期間每2-3天測量動物體重和移植腫瘤生長體積。于末次給藥后處死各組荷瘤鼠，完整剝離瘤組織，用1/10000分析天平稱重，各實驗組實體腫瘤數碼相機照相，并測量各實驗組腫瘤重量和計算各組實體腫瘤平均重量。Western檢測各組EGFR蛋白表達情況，q-PCR檢測EGFR及VEGF和MMPs的mRNA水平變化。
[0063]實驗結果:受試藥物所述抗腫瘤組合物用三蒸水按濃度溶解，溶解后藥液呈棕色混懸狀溶液;體外實驗結果顯示所述抗腫瘤組合物可抑制人源高惡性乳腺癌細胞的EGFR蛋白水平的表達，且有劑量依賴性。藥物可抑制人源高惡性乳腺癌細胞血管生成因子EGFR、VEGF的RNA水平表達。而增強血管生成抑制因子TSP-1的RNA表達水平，而對金屬基質蛋白酶的表達無顯著抑制作用;體內實驗結果顯示所述抗腫瘤組合物有一定程度抑制人源高惡性乳腺癌細胞生長作用，顯著抑制其所至腫瘤EGFR蛋白水平的表達，但對其RNA水平的抑制不顯著，可顯著抑制血管生成因子VEGFA和VEGFC RNA水平的表達，對金屬基質蛋白酶的表達也可見一定程度抑制。
[0064]結論:所述抗腫瘤組合物對本實驗室建立的高惡變乳腺癌細胞的癌基因EGFR表達起抑制作用，同時抑制血管生成因子VEGFA、VEGFC的基因表達，促進血管生成抑制因子TSP-1的基因表達。研究結果提示所述抗腫瘤組合物有抑制乳腺癌細胞血管生成和侵襲能力的生物學作用。
【主權項】
1.一種含有灰樹花提取物抗腫瘤組合物，其特征在于:所述組合物由以下重量份的組分制得: 灰樹花提取物:120-130份，富砸酵母:0.8-1.2份。2.根據權利要求1所述的含有灰樹花提取物抗腫瘤組合物，其特征在于:所述富砸酵母中，砸的含量為:2.0-3.0mg砸/g酵母。3.根據權利要求2所述的含有灰樹花提取物抗腫瘤組合物，其特征在于:所述富砸酵母中，砸的含量為:2.1mg砸/g酵母。4.根據權利要求1-3任一項所述的含有灰樹花提取物抗腫瘤組合物，其特征在于:所述灰樹花提取物包括灰樹花多糖。5.根據權利要求4所述的含有灰樹花提取物抗腫瘤組合物，其特征在于:所述灰樹花多糖包括葡聚糖、葡萄糖、巖藻糖、木糖、甘露糖和豐乳糖。6.權利要求1-5所述含有灰樹花提取物抗腫瘤組合物的制備方法，其特征在于:所述灰樹花提取物采用超聲波提取和微波干燥工藝；富砸酵母則在培養酵母的過程中加入砸元素，使無機砸結合成有機態的砸，通過離心法分離出酵母，用水反復沖洗后經濃縮和噴霧干燥即得到淡黃色的富砸酵母粉。7.根據權利要求6所述的含有灰樹花提取物抗腫瘤組合物的制備方法， 其特征在于:所述灰樹花提取物的制備方法，包括如下的步驟: 生產流程包括:原料粉碎—投料—超聲波水提—膜過濾—醇沉—微波干燥—包裝—檢驗 1)粉碎:原料用粉碎機粉碎至10-30目備用； 2)投料:將粉碎物投入提取管道內； 3)超聲波水提:原料加8—10倍純化水進行超聲波連續逆流提取，超聲波頻率為2-3萬赫茲，提取溫度為50-60°C，獲取含水量85-90%的提取液。 4)濃縮:經超濾膜(截留分子量為十萬以上)過濾，去掉小于十萬分子量的物質和水，獲取含水量30-40 %的濃縮物。 5)醇沉:濃縮物邊攪拌邊加入4倍量食用酒精，靜置24h，去上清液;離心甩干獲取含酒精量5-10%的浸膏。 6)微波干燥:浸膏裝入微波料盤，抽真空干燥，溫度400C —50 0C，時間60-80分鐘，干燥物含水率<6%; 7)包裝:干燥物80目粉碎過篩，包裝； 8)檢驗:檢驗各項指標，全部合格進庫； 9)本工藝為1:25提取比例。8.根據權利要求6所述的含有灰樹花提取物抗腫瘤組合物的制備方法，其特征在于:所述富砸酵母粉通過以下方法獲得: 1)在實驗室選育合適的啤酒酵母菌種，以麥芽汁為培養基在酵母生長的特定環境下培養，在幾個不同的階段加入砸，找出酵母與砸的最佳結合條件，既利于提高結合砸量，又利于酵母的生長，同時選取不同的砸化合物進行試驗，選擇最佳材料； 2)以糖蜜加適量砸化合物為培養基，殺菌后接入酵母菌種，流加氮、磷等營養鹽進行發酵培養，在溫度30°C，pH4.5?5.0的條件下通風培養24?48小時，使無機砸結合成有機態的砸，通過離心法分離出酵母，用水反復沖洗后經濃縮和噴霧干燥即得到淡黃色的富砸酵母粉，砸含量可達1000x10以上，通常為500x10左右，其蛋白質2 44%，水份< 8.5%，富含18種氨基酸，維生素B為33.2x10。9.權利要求1-5所述的含有灰樹花提取物抗腫瘤組合物，其特征在于:所述的抗腫瘤組合物，其外包覆有膠囊殼，膠囊殼是用食用級藥用的明膠經過精處理與輔助材料制造而成的用于盛裝固體粉末、顆粒的卵狀空心外殼。膠囊殼具有良好的生物利用度，能迅速、可靠和安全地溶解，膠囊殼空心膠囊由藥用明膠加輔料精制而成。
【專利摘要】本發明申請提供一種含有灰樹花提取物的抗腫瘤轉移、增強免疫力的中藥組合物及其制備方法。所述組合物由以下重量份的組分制得：灰樹花提取物：120-130份，富硒酵母：0.8-1.2份。上述抗腫瘤組合物的制備方法，其中，所述灰樹花提取物采用超聲波提取和微波干燥工藝；富硒酵母則在培養酵母的過程中加入硒元素，使無機硒結合成有機態的硒，通過離心法分離出酵母，用水反復沖洗后經濃縮和噴霧干燥即得到淡黃色的富硒酵母粉。研究結果提示所述抗腫瘤組合物有抑制乳腺癌細胞血管生成和侵襲能力及增強免疫力的生物學作用。
【IPC分類】A61K36/07, A61P35/00, A61K9/48
【公開號】CN105641000
【申請號】
【發明人】張繼文
【申請人】深圳市康道生物有限公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2015年6月1日