，加入含有〇 . 5 %甲酸的80 %甲醇溶液 200mL，其中料液比為Ig: 20mL，浸泡2h后，超聲提取30min，重復2次，合并上清液，37 °C旋轉 真空濃縮到只剩水相，使用高速離心機l〇〇〇〇r/min條件下離心5min，定容到75mL水中，濃縮 液過固相萃取柱，10 %甲醇沖洗IOOmL后，50%甲醇沖洗50mL，收集流出液，分別在旋轉蒸發 儀上37°C蒸干得到10%洗脫組分57.6mg，50%甲醇洗脫組分33.Smgw-葡萄糖苷酶抑制活 性實驗結果表明，其粗提液的a-葡萄糖苷酶抑制活性IC 5q為2545.5yg/mL，10%洗脫組分的 IC50為270.0yg/mL，50 %洗脫組分的IC5q為23.18yg/mL，其50 %洗脫組分的a-葡萄糖苷酶抑 制活性要遠高于陽性對照阿卡波糖（圖2)。
[0026] 實施例三 稱取楊梅品種'木葉'果肉冷凍干燥粉末8g，加入含有0.5%甲酸的80%甲醇溶液 160mL，其中料液比為I g: 20mL，浸泡2h后，超聲提取30min，重復2次，合并上清液，37 °C旋轉 真空濃縮到只剩水相，使用高速離心機l〇〇〇〇r/min條件下離心5min，定容到70mL水中，濃縮 液過固相萃取柱，10 %甲醇沖洗IOOmL后，50%甲醇沖洗50mL，收集流出液，分別在旋轉蒸發 儀上37°C蒸干得到10%洗脫組分72.9mg，50%甲醇洗脫組分44.5π^α-葡萄糖苷酶抑制活 性實驗結果表明，其粗提液的a-葡萄糖苷酶抑制活性IC 5q為2083.7yg/mL，10%洗脫組分的 IC50為307.5yg/mL，50 %洗脫組分的IC5q為30.08yg/mL，其50 %洗脫組分的a-葡萄糖苷酶抑 制活性要遠高于陽性對照阿卡波糖（圖3)。
[0027]實施例四 稱取楊梅品種'水晶'果肉冷凍干燥粉末l〇g，加入含有0.5%甲酸的80%甲醇溶液 200mL，其中料液比為Ig: 20mL，浸泡2h后，超聲提取30min，重復2次，合并上清液，37 °C旋轉 真空濃縮到只剩水相，使用高速離心機l〇〇〇〇r/min條件下離心5min，定容到75mL水中，濃縮 液過固相萃取柱，10 %甲醇沖洗IOOmL后，50%甲醇沖洗50mL，收集流出液，分別在旋轉蒸發 儀上37°C蒸干得到10%洗脫組分37.6mg，50%甲醇洗脫組分39.Omg t3a-葡萄糖苷酶抑制活 性實驗結果表明，其粗提液的a-葡萄糖苷酶抑制活性IC5q為2241.5yg/mL，10%洗脫組分的 IC 50為94.0yg/mL，50 %洗脫組分的IC5q為25.1 lyg/mL，其50 %洗脫組分的a-葡萄糖苷酶抑 制活性要遠高于陽性對照阿卡波糖（圖4)。
[0028] 實施例五 稱取楊梅品種'烏紫'果肉冷凍干燥粉末8g，加入含有0.5%甲酸的80%甲醇溶液 160mL，其中料液比為I g: 20mL，浸泡2h后，超聲提取30min，重復2次，合并上清液，37 °C旋轉 真空濃縮到只剩水相，使用高速離心機l〇〇〇〇r/min條件下離心5min，定容到70mL水中，濃縮 液過固相萃取柱，10 %甲醇沖洗IOOmL后，50%甲醇沖洗50mL，收集流出液，分別在旋轉蒸發 儀上37°C蒸干得到10%洗脫組分55.1 1^，50%甲醇洗脫組分34.21^。€[-葡萄糖苷酶抑制活 性實驗結果表明，其粗提液的α-葡萄糖苷酶抑制活性IC 5q為2556.5yg/mL，10%洗脫組分的 IC50為307.8yg/mL，50%洗脫組分的IC 5q為28.37yg/mL，其50%洗脫組分的€(-葡萄糖苷酶抑 制活性要遠高于陽性對照阿卡波糖（圖5)。
[0029]實施例六 稱取楊梅品種'小葉細蒂'果肉冷凍干燥粉末Sg，加入含有0.5%甲酸的80%甲醇溶液 160mL，其中料液比為I g: 20mL，浸泡2h后，超聲提取30min，重復2次，合并上清液，37 °C旋轉 真空濃縮到只剩水相，使用高速離心機l〇〇〇〇r/min條件下離心5min，定容到70mL水中，濃縮 液過固相萃取柱，10 %甲醇沖洗IOOmL后，50%甲醇沖洗50mL，收集流出液，分別在旋轉蒸發 儀上37°C蒸干得到10%洗脫組分58.1 1^，50%甲醇洗脫組分25.41^。€[-葡萄糖苷酶抑制活 性實驗結果表明，其粗提液的α-葡萄糖苷酶抑制活性IC 5q為3167.0yg/mL，10%洗脫組分的 IC50為343.8yg/mL，50%洗脫組分的IC 5q為69.49yg/mL，其50%洗脫組分的€(-葡萄糖苷酶抑 制活性要遠高于陽性對照阿卡波糖（圖6)。
[0030] 實施例七 稱取楊梅品種'早大梅'果肉冷凍干燥粉末l〇g，加入含有0.5%甲酸的80%甲醇溶液 200mL，其中料液比為Ig: 20mL，浸泡2h后，超聲提取30min，重復2次，合并上清液，37 °C旋轉 真空濃縮到只剩水相，使用高速離心機l〇〇〇〇r/min條件下離心5min，定容到75mL水中，濃縮 液過固相萃取柱，10 %甲醇沖洗IOOmL后，50%甲醇沖洗50mL，收集流出液，分別在旋轉蒸發 儀上37°C蒸干得到10%洗脫組分82.4mg，50%甲醇洗脫組分58.2π^α-葡萄糖苷酶抑制活 性實驗結果表明，其粗提液的α-葡萄糖苷酶抑制活性IC 5q為2891. lyg/mL，10%洗脫組分的 IC50為245.5yg/mL，50%洗脫組分的IC5q為51.89yg/mL，其50%洗脫組分的α-葡萄糖苷酶抑 制活性要遠高于陽性對照阿卡波糖（圖7)。
【主權項】
1. 一種楊梅果肉提取物在制備a-葡萄糖巧酶抑制劑中的應用，其特征在于，所述的楊 梅果肉提取物通過W下制備步驟獲得： a、 楊梅果實采收后，將果核丟棄，果肉部分液氮充分凍干，在冷凍干燥儀中-80°C下干 燥7化至恒重，用磨樣機打磨成粉末狀。 b、 用濃度為80 %的甲醇溶液浸泡化后，超聲提取30min，料液比為Ig: 20血，使用高速離 屯、機100(K)r/min條件下離屯、5min，取上清液。超聲提取重復2次，合并上清液，上清液在旋轉 蒸發儀上37°C蒸干濃縮后溶于一定量的水中。 C、濃縮液過預處理好的Cl 8 Scp-PakS固相萃取柱，用濃度為10 %的甲醇溶液洗脫后再 用濃度為50%的甲醇溶液洗脫，將10%和50%甲醇洗脫后的流出液分別收集后濃縮干燥即 可得到10 %洗脫組分和50 %洗脫組分的楊梅果肉提取物。2. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于:所述楊梅選用品種為'華莽'、'東魅'、'木 葉'、'水晶'、'烏紫'、'小葉細蒂'或'早大梅'。3. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于:所述a-葡萄糖巧酶抑制劑的應用是指可在 制備功能食品或保健藥品中應用，所述楊梅果肉提取物為10%洗脫組分或50%洗脫組分或 二種組分混合。4. 根據權利要求1或3所述的應用，其特征在于:所述的a-葡萄糖巧酶抑制劑由楊梅果 肉提取物與食品或保健藥品可接受的輔助劑制成。
【專利摘要】本發明提供一種楊梅果肉提取物在制備α-葡萄糖苷酶抑制劑的應用。楊梅果肉提取物由甲醇提取濃縮，經固相萃取柱萃取分離后得到。經初步的活性篩選試驗證明：不同品種楊梅果肉粗提物均表現出α-葡萄糖苷酶抑制活性。該粗提物經固相萃取柱富集后不同的洗脫組分抑制α-葡萄糖苷酶的活性顯著提高，尤其50％洗脫組分活性遠高于陽性對照阿卡波糖。本發明對于楊梅資源的合理利用，以及提高楊梅產品附加值具有重大意義。
【IPC分類】A61K36/185, A61K131/00, A61P3/10
【公開號】CN105641006
【申請號】
【發明人】李鮮, 閆淑霞, 孫崇德, 陳昆松
【申請人】浙江大學
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年2月19日