用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗 脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I) (420mg)。
[0036] 結構確證:HR-ESIMS顯示[Μ+Na]+為m/z 377.1408,結合核磁特征可得分子式為 C21H22O5，不飽和度為 11。核磁共振氫譜數據δΗ(ΡΡπι，DMS〇-d6，400MHz): H-2 (5 · 42，dd，J = 12.7,3.0)，H-3(2.81，m)，H-3(2.95，dt，J = 24.8，12.4)，H-6(6.60，s)，H-2'，6'（7.33，m)， H-3'-5'（7.28，m)，H-7"（5.92，d，J=12.5)，H-8"（5.81，d，J = 12.5)，9"-Me(l.ll，s)，9"-Me (I · 12，s)，9"-OMe(3·81，s);核磁共振碳譜數據δ。(ppm，DMS〇-d6，IOOMHz):79·9(CH，2-C)， 44.2(CH2,3-C)，191.3(C，4-C)，115.3(C，4a-C)，162.9(C，5-C)，105.1(CH，6-C)，162.1(C， 7-C)，115.2(C，8-C)，158.7(C，8a-C)，138.5(C，l'-C)，126.5(CH，2'，6'-C)，128.8(CH，3'， 5'-C)，126.9(CH，4'-C)，116.6(CH，7"-C)，142.0(CH，8"-C)，71.2(C，9"-C)，29.2(CH 3,9"-Me)，30.0 (CH3，9" -Me)，56.0 (CH3，9" -OMe);碳原子標記參見圖I。1H NMR譜顯示了典型的黃 酮類化合物信號，5!15.42((1(1，了=12.7,3.0泡，!1-2)，2.81(111，!1-3)和2.95((1^ = 24.8， 12·4Ηζ，Η-3)</Η 譜也顯示了兩個雙峰信號5.92(d，J=12.5Hz，H-7"#PSH5.81(d，J = 12.5抱，!1-8"），它們為烯烴質子。13〇匪1?光譜顯示21個碳信號，包含三個甲基0〇29.2,9"-Me，30.0,9"-Me和56.0,9"-0Me)，一個亞甲基（SC44.2,3-C)，九個次甲基（SC79.9,2-C; 105.1，6-C;126.5,2'，6'-C;128.8,3'，5'-C;126.9,4'-C;116.6,7"-C;142.0,8"-C)，八個 季碳（SC191.3,4-C;115.3,4a-C ;162.9,5-C;162.1，7-C;115.2,8-C;158.7,8a-C;138.5， 1'-(：;71.2,9"-〇。(：-50(：162.9)和(：-70(：162.1)低場的化學位移表明兩者各連有一個羥 基。NOESY譜中H-8"與甲氧基質子(δΗ3.81，s)的相關性，以及H-8"和H-7"的相關性，表明Ον (SC71.2) 位連有一個甲氧基。綜合氫譜、碳譜、 HMBC 譜和 NOESY 譜，以及文獻關于相關類型 核磁數據，可基本確定該化合物如圖1所示，立體構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實 驗值基本一致(圖2)。
[0037]實施例2:化合物(I)分離制備及結構確證
[0038] (a)將干燥的生藥補骨脂(8kg)粉碎，用85%乙醇熱回流提取(25LX 3次），合并提 取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3L X 3次）、乙酸乙酯(3L X 3次)和水飽和的正丁醇 (3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物(378g);(b)步驟 (a)中正丁醇萃取物用AB-8大孔樹脂除雜，先用5%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇洗 脫12柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物（132g);(c)步驟(b)中70 % 乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1 (10個柱體積）、30:1 (10個柱體積）、 15:1(8個柱體積)和8:1(10個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c) 中組分4(27g)用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為12:1(8個柱體積）、8:1(10個柱體 積)和5:1(8個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2(15g) 用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收 集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)(415mg)。
[0039] 結構確證:同實施例1。
[0040] 實施例3:化合物(I)分離制備及結構確證
[0041 ] (a)將干燥的生藥補骨脂(8kg)粉碎，用85%乙醇熱回流提取(25LX 3次），合并提 取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3L X 3次）、乙酸乙酯(3L X 3次)和水飽和的正丁醇 (3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物(372g);(b)步驟 (a)中正丁醇萃取物用AB-8大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫6個柱體積，再用80%乙醇洗 脫8個柱體積，收集80%洗脫液，減壓濃縮得80%乙醇洗脫濃縮物（123g); (c)步驟（b)中 80%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1 (10個柱體積）、30:1 (10個柱體 積）、15:1(8個柱體積)和8:1(10個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步 驟(c)中組分4(27g)用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為12:1(8個柱體積）、8:1(10個 柱體積)和5:1(8個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2 (15g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為80 %的甲醇水溶液等度洗 脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I) (413mg)。
[0042] 結構確證:同實施例1。
[0043]實施例4:益骨口服液的制備
[0044] 按處方比例取生藥淫羊藿36g、骨碎補36g、生地36g、茯苓75g、仙靈脾36g和紅花 75g共6味，計294g。將生藥粉碎，用水提取3次，每次用水體積為3L，每次提取2小時。合并3次 水提液，加熱濃縮至1470ml。再加入化合物（I) 147mg攪拌溶解。
[0045]實施例5:益骨口服液的制備
[0046] 按處方比例取生藥淫羊藿30g、骨碎補30g、生地30g、茯苓60g、仙靈脾30g和紅花 60g共6味，計240g。將生藥粉碎，用水提取3次，每次用水體積為2.5L，每次提取2小時。合并3 次水提液，加熱濃縮至960ml。再加入化合物（I) 76.8mg攪拌溶解。
[0047]實施例6:益骨口服液的制備
[0048] 按處方比例取生藥淫羊藿42g、骨碎補42g、生地42g、茯苓90g、仙靈脾42g和紅花 90g共6味，計348g。將生藥粉碎，用水提取3次，每次用水體積為3.5L，每次提取2小時。合并3 次水提液，加熱濃縮至2088ml。再加入化合物（I) 250.6mg攪拌溶解。
[0049] 實施例7:實施例4的對比實施例，不含有化合物(I)
[0050] 按處方比例取生藥淫羊藿36g、骨碎補36g、生地36g、茯苓75g、仙靈脾36g和紅花 75g共6味，計294g。將生藥粉碎，用水提取3次，每次用水體積為3L，每次提取2小時。合并3次 水提液，加熱濃縮至1470ml。
[0051 ]實施例8:實施例4的對比實施例，僅含有化合物(I)
[0052]精密稱取化合物(I)，用蒸餾水溶解，制成濃度為100yg/mL的水溶液。
[0053]實施例9:益骨口服液對去勢大鼠骨密度與骨生物力學的影響 [0054] 一、材料與方法
[0055] 1、實驗藥物益骨口服液水提液:①按實施例4和7制備。②氯氨酮:上海第一生化藥 業有限公司生產。③化合物(I)的水溶液按實施例8制備。
[0056] 2、實驗動物取12周齡的雌性wistar大鼠40只，體重約200g左右（由浙江中醫藥大 學實驗動物中心提供），分成A、B、C、D 4組，每組10只。飼養室保持良好通風，室溫控制在(21