一種白藜蘆醇亞甲胺及其制備方法與應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及白藜蘆醇亞胺衍生物，特別是指一種白藜蘆醇亞甲胺及其制備方法與 應用。
【背景技術】
[0002] 心血管疾病是嚴重危害人類健康的重大慢性疾病之一。據世界衛生組織(WHO)報 告，21世紀初期心血管疾病死亡率已占發達國家的近50%，發展中國家的25%，超過了艾滋 病的死亡率。在我國，隨著生活方式的改變、人口老齡趨勢的加快以及心血管疾病發病的年 輕化，心血管疾病問題也日益突出。目前冠心病已在我國致死性和殘疾性疾病中居于首位， 每年有接近1〇〇萬人死于心血管疾病。而不管是高血脂、高血壓或者是高血糖引起的"三高 癥"或是糖尿病等，最終都將引起動脈粥樣硬化等一系列并發癥，嚴重者甚至出現血栓、心 腦缺血等致命疾病。
[0003] 動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是一種與血脂異常及血管壁成分改變有關 的疾病，主要累及彈性動脈及較多彈性纖維的肌性動脈。AS斑塊會引發多種并發癥，帶來嚴 重的臨床風險，這些并發癥包括心肌梗塞、中風以及主動脈瘤。AS發生的細胞和分子機制尚 不明確，而目前被廣泛接受的是Ross和Glomset于1973年提出的損傷反應假說，Ross[3]在 1999年繼損傷反應假說后明確提出了炎癥假說。研究常用的川芎嗪，其具有抗血小板凝集、 擴張小動脈、改善微循環和腦循環的作用，但是作為臨床用藥，仍然具有一系列的不良反 應。而已經作為臨床用藥的阿托伐他汀，則主要是降低血漿膽固醇和脂蛋白水平，減少低密 度脂蛋白的生產，但同樣具有一系列不良反應，并且其抗AS能力仍不樂觀。因此，尋求新的 毒副作用小、藥效作用強的可應用于臨床診斷的抗AS藥物迫在眉睫。
【發明內容】
[0004] 本發明提出一種白藜蘆醇亞甲胺及其制備方法與在制備抗動脈粥樣硬化藥物中 的應用，解決了現有技術中的抗動脈粥樣硬化的藥物治療效果不顯著，存在一系列的不良 反應的缺陷。
[0005] 本發明的技術方案是這樣實現的：一種白藜蘆醇亞甲胺，所述白藜蘆醇亞甲胺的 結構式為：
[0007] -種白藜蘆醇亞甲胺的制備方法，包括以下步驟：
[0008] 將白藜蘆醇溶解于CH3CN和二甲基甲酰胺中，在冰水浴中逐滴P0C13，得到混合物， 將混合物置于室溫下攪拌反應3h后加入到冰水混合物中得到黃色混合物，將黃色混合物置 于50-60°C下攪拌0.5-0.7h，再用乙酸乙酯提取，合并有機層后用清水洗滌，無水硫酸鈉除 水，過濾，蒸發，并通過硅膠純化，得到化合物1，為黃色粉末，產率89 %。熔點：210-212°C ; [0009]在室溫下，將化合物1溶于乙醇的溶液中，加入氨水，50-55°C下加熱攪拌反應大約 3_3.5h;使反應混合物冷卻到0°C，結晶沉淀、過濾，在60-65Γ下烘干，并在乙醇中重結晶， 得到化合物2,化合物2即為白藜蘆醇亞甲胺白藜蘆醇亞甲胺的產率為83%;熔點：202-204 Γ。
[0010]所述的白藜蘆醇亞甲胺的制備方法，包括以下步驟：
[0011 ] 將lmmo 1白藜蘆醇溶解在95 · 7mmo 1 CH3CN和1 · 5mmo 1二甲基甲酰胺中溶解，在冰水 浴中0.5h內逐滴添加1.5mmolP0Cl3，混合物再在室溫下攪拌反應3h后加到冰水混合物中得 到黃色混合物;將黃色混合物在50°C下攪拌0.5h，再用乙酸乙酯提取;合并有機層、用清水 洗滌，無水硫酸鈉除水，過濾，蒸發，通過硅膠純化，得到化合物1，為黃色粉末，產率89 %。熔 點：210-212°C;
[0012] 在室溫下，，將lmmol化合物1溶于5ml乙醇中，再加入8mL氨水，50°C下加熱攪拌反 應大約3h，使反應混合物冷卻到0°C，結晶沉淀、過濾，在60°C下烘干，并在乙醇中重結晶，得 到化合物2,化合物2即為白藜蘆醇亞甲胺白藜蘆醇亞甲胺的產率為83%;熔點：202-204°C。 [0013]白藜蘆醇-化合物1-化合物2:
[0015] -種白藜蘆醇亞甲胺在制備抗動脈粥樣硬化藥物中的應用，將所述的白藜蘆醇亞 甲胺應用于制備抗動脈粥樣硬化藥物中。
[0016] 本發明的有益效果為:本發明的白藜蘆醇亞甲胺能顯著抑制由油酸(0A)或PDGF誘 導的VSMCs的增殖與迀移，同時在整體水平上對主動脈粥樣硬化有明顯的改善作用，能夠明 顯降低血清TC、TG和LDL，并且顯著升高HDL，同時能夠顯著減少動脈粥樣硬化斑塊的形成和 損傷，并且與其他應用于臨床和醫藥研究上的常用藥物阿托伐他汀和川芎嗪相比，僅10uM 即可達到常用藥物30uM的藥效，具有低用量、高療效的顯著特點。
【附圖說明】
[0017] 為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現 有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本 發明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動性的前提下，還可 以根據這些附圖獲得其他的附圖。
[0018] 圖1為0A對于VSMC異常增殖和迀移的影響結果示意圖；
[0019] 圖2為RMI對0A誘導的VSMCs異常迀移的影響結果示意圖；
[0020] 圖3為與常用藥物對照，川芎嗪（100uM TMP)和阿托伐他汀30uM(AC)對0.4mM 0A誘 導的VSMCs異常迀移的影響結果示意圖；
[0021]圖4為RMI對0A誘導的VSMCs異常迀移的影響結果示意圖【具體實施方式】；
[0022]圖5為酶法測定血液結果示意圖；
[0023]圖6為血管石蠟切片結果示意圖；
[0024]圖7為HE染色得到的結果示意圖；
[0025]圖8為肝臟石蠟切片和HE染色得到的結果示意圖；
[0026]圖9為采用蛋白化學方法檢測RMI是否對MAPK信號通路中ERK1/2的磷酸化產生影 響結果示意圖。
[0027]下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完 整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于 本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他 實施例，都屬于本發明保護的范圍。
[0028]本發明中所選用的新化合物白藜蘆醇亞甲胺(RMI)，為白藜蘆醇亞胺衍生物。所謂 的白黎蘆醇(resveratrol，3，4'，5-三羥基二苯乙稀），為天然植物的單體物質，是一種含有 茂類結構的非黃酮類多酚化合物，結構類似于雌激素乙蔗酚(如圖1所示），主要存在于百合 科、寥科、豆科植物及葡萄皮、花生、虎杖、決明子、黎蘆等70多種植物中。其抗氧化、抗炎、抗 增殖及延長壽命等作用受到廣泛關注，近年來對其在心血管疾病治療方面的藥理學作用成 為研究熱點。研究表明白藜蘆醇，一典型的多酚化合物，對動脈粥樣硬化、高血壓、心衰等心 血管疾病具有潛在的多靶點的保護效應.。紅葡萄酒的血管保護作用和白藜蘆醇的對血管 平滑肌細胞的抗誘變功效，歸因其具有多效性，包括雌激素受體調變(ER)，抗炎作用等，刺 激心臟保護基因以及熱休克蛋白以及抗氧化應激的抗氧化蛋白的蛋白，誘發抗氧化應激。 白藜蘆醇的幾種保護效應的胞內通路都與氧化應激有關。
[0029] 但由于白藜蘆醇的化學不穩定性，很易被氧化，并且在細胞中生物利用度較低。為 達到更好的生物利用度和更好的抗動脈粥樣硬化的作用，我們在白藜蘆醇有效功效框架的 基礎上，對其改性，我們合成了大量的白藜蘆醇衍生物，通過初步藥理篩選這些衍生物，白 藜蘆醇亞甲基亞胺(RMI)因其可能的抗氧化和抗動脈粥樣硬化而被選用。盡管白藜蘆醇對 體外血管細胞的保護作用都進行了廣泛的研究，但是新合成RMI，作為其亞胺衍生物，RMI在 動脈粥樣硬化方面的應用未見報道，是否在體內和體外對動脈粥樣硬化具有更有效的改善 作用，特別是否通過氧化應激，抑制血管平滑肌細胞增殖，和保護血管內皮細胞，這仍然不 可知。因此，本研究的目的是評估新合成RMI在氧化損傷和降低動脈粥樣硬化的嚴重性，改 善內皮細胞凋亡以及降低大鼠脂肪肝的潛力。因此，設計和其他臨床藥物阿托伐他汀(AC) 在抗動脈粥樣硬化的作用的比較。
[0030] 發明人根據本發明提供的方法制備得到白藜蘆醇亞甲胺(RMI):
[0031] 將白藜蘆醇溶解于CH3CN和二甲基甲酰胺中，在冰水浴中逐滴P0C13，得到混合物， 將混合物置于室溫下攪拌反應3h后加入到冰水混合物中得到黃色混合物，將黃色混合物置 于50-60°C下攪拌0.5-0.7h，再用乙酸乙酯提取，合并有機層后用清水洗滌，無水硫酸鈉除 水，過濾，蒸發，并通過硅膠純化，得到化合物1，為黃色粉末，產率89 %。熔點：210-212°C ;
[0032] 在室溫下，將化合物1溶于乙醇的溶液中，加入氨水，50_55°C下加熱攪拌反應大約 3_3.5h;使反應混合物冷卻到0°C，結晶沉淀、過濾，在60-65Γ下烘干，并在乙醇中重結晶， 得到化合物2,化合物2即為白藜蘆醇亞甲胺白藜蘆醇亞甲胺的產率為83%;熔點：202-204 Γ。
[0033]發明人對白藜蘆醇亞甲胺做了如下試驗：