[0034] 1、0Α對于VSMC異常增殖和迀移的影響，測試結果如圖1所示：
[0035] 0Α誘導VSMCs的異常增殖，且呈劑量效應。0.21^，0.4111]\1，0.8111]\1的(^能夠誘導￥5]\?： 的增殖。其中，〇. 4mM的0A誘導的VSMCs異常增殖效果明顯。
[0036] 2、如圖2所示，不同濃度(3uM和10uM)RMI作用于0.4mM誘導的VSMCs增殖，具有明顯 的抑制效應。
[0037] 3、如圖3所示，與常用藥物對照，川芎嗪（1 OOuM TMP)和阿托伐他汀30uM(AC)對 0.4mM 0A誘導的VSMCs有明顯抑制作用，且RMI是其它藥物濃度的1/10-1/3。
[0038] 4、如圖4所示，RMI對0A誘導的VSMCs異常迀移的影響，10uM RMI作用后可明顯減少 VSMCs的迀移。
[0039] 5、模型動物水平，血液參數測定結果：
[0040] 高血脂癥是動脈粥樣硬化的一大危險因子。高血脂癥即血漿中脂質水平過高。血 漿中脂質的水平和心血管疾病有明顯的關聯，血漿中脂質水平越高，越容易誘發心血管疾 病。所以血液參數的檢測成為判斷動脈粥樣硬化的重要手段之一。收集的血液靜置離心后， 進行血液參數的檢測。血液中的TC、TG、LDL-C、LDL-C、MDA和T-A0C的檢測按照試劑盒的說明 操作，酶標儀檢測0D值，計算各項參數。
[0041 ]在模型動物的基礎上進行藥物長期灌胃，包括低劑量和高劑量的冊1。8周后處理， 酶法測定血液結果如圖5所示：
[0042] A:Normal group，正常組；B:atherosclerotic model group(AS)，動脈粥樣硬化 模型組；C : AS+RMI (L)，低劑量RMI治療組；D : AS + RMI (Η)，高劑量RMI治療組；E : AS+ Atorvastatin(L)，低劑量阿托伐他汀治療組;F:AS+Atorvastatin(H)高劑量阿托伐他汀治 療組；For each group,n = 6
[0043] 總膽固醇(TC):說明在經過RMI和atorvastatin的作用后，血液中的TC可以降低到 正常水平，且藥物作用組中，高低劑量的治療效果差別不顯著。
[0044] 甘油三酯（TG):在RMI作用組中，低劑量作用組的TG水平比高劑量作用組要高，且 存在極顯著差異性(P〈〇.01)。阿托伐他汀作用組中，也同樣高劑量比低劑量降低TG水平的 效果明顯，且存在的差異極顯著(P〈〇.01)。在四組治療組中，低劑量水平上，阿托伐他汀組 的TG水平比RMI要高，且存在顯著差異(P〈0.05)。在高劑量水平上，阿托伐他汀組的TG水平 和RMI組相當，不存在顯著性差異。RMI和阿托伐他汀降低血漿中TG水平的作用呈現劑量效 應。
[0045]低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C):在RMI作用組中，低劑量作用組和高劑量作用組的 LDL-C水平存在極顯著差異斤〈0.01)，1?0降低0^-(：的作用存在劑量效應，在一定范圍內， 劑量越高，降低效果越好。在阿托伐他汀治療組也同樣存在這種情況，也說明了阿托伐他汀 在降低LDL-C作用中也存在劑量效應。
[0046] 高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C):正常對照組和AS組，低劑量RMI作用組，低劑量阿托 伐他汀作用組的HDL-C水平都存在著極顯著差異(P〈0.01)，而正常組和高劑量的作用組的 HDL-C不存在統計學上顯著地差異，說明高劑量RMI和阿托伐他汀能有效升高血液中的HDL-C水平，且與正常水平相當。同時，也說明在藥物作用組中，存在劑量效應。高劑量組比低劑 量組升高HDL-C水平的效果更佳
[0047] 丙二醛(MDA):低劑量RMI作用組和高劑量作用組中的MAD水平存在顯著差異(P〈 0.05)，低劑量阿托伐他汀作用組和高劑量阿托伐他汀作用組的MDA水平存在極顯著差異(P 〈0.01)，說明劑量效應在RMI作用組中更為明顯。從低劑量藥物作用組上看，低劑量RMI作用 組和低劑量的阿托伐他汀作用組的MDA水平低且存在明顯差異(P〈0.05)，高劑量RMI作用組 和高劑量的阿托伐他汀作用組中的MDA水平相當且不存在統計學上的差異。
[0048]總抗氧化能力(T-A0C):正常對照組和AS組、低劑量RMI治療組、低劑量阿托伐他汀 治療組和高劑量治療組的T-A0C水平都存在著極顯著差異;高劑量RMI具有更好的抗氧化作 用；低劑量水平上，RMI和阿托伐他汀作用效果相當，而在高劑量水平上，RMI的抗氧化能力 高于阿托伐他汀。
[0049] 5、模型動物水平，血管石蠟切片：
[0050] 主動脈形態學分析：
[0051 ]在模型動物的基礎上進行藥物長期灌胃，包括低劑量和高劑量的RMI，以及降血脂 常用藥物阿托伐他汀。4,6,8周后處理，血管石蠟切片和HE染色得到的結果分別如圖6、7所 不。
[0052] RMI(L):10mg/Kg.RMI(H):30mg/Kg.Atorvastatin(L):50mg/Kg.Atorvastatin (H):100mg/Kg〇
[0053] 如圖所示可知，第8周，模型組、低劑量RMI、低劑量阿托伐他汀組的內膜和中膜接 壤明顯增厚，中膜平滑肌細胞異常增殖，導致內膜向內腔突出。模型組的增厚更為明顯。 [0054] 6、模型動物水平，肝臟石蠟切片：
[0055]在模型動物的基礎上進行藥物長期灌胃，包括低劑量和高劑量的RMI，以及降血脂 常用藥物阿托伐他汀做對照。8周后處理，肝臟石蠟切片和HE染色得到的結果如圖8所示：
[0056] RMI(L):10mg/Kg.RMI(H):30mg/Kg.Atorvastatin(L):50mg/Kg.Atorvastatin (H):100mg/Kg〇
[0057] 7、Western blot檢測ERKl/2、pERKl/2以及PGC-Ια的影響
[0058] 我們采用蛋白化學方法檢測RMI是否對MAPK信號通路中ERK1/2的磷酸化產生影 響。實驗結果如圖9所示磷酸化ERK/ERK，較對照組比較倍數。
[0059]以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，凡在本發明的精 神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1. 一種白襲蘆醇亞甲胺，其特征在于，所述白襲蘆醇亞甲胺的結構式為：2. -種如權利要求1所述的白襲蘆醇亞甲胺的制備方法，其特征在于包括W下步驟： 將白襲蘆醇溶解于C曲CN和二甲基甲酯胺中，在冰水浴中逐滴P0C13,得到混合物，將混 合物置于室溫下攬拌反應化后加入到冰水混合物中得到黃色混合物，將黃色混合物置于 50-60°C下攬拌0.5-0.化，再用乙酸乙醋提取，合并有機層后用清水洗涂，無水硫酸鋼除水， 過濾，蒸發，并通過硅膠純化，得到化合物1，為黃色粉末； 在室溫下，將化合物1溶于乙醇的溶液中，加入氨水，50-55°C下加熱攬拌反應大約3-3.5h;使反應混合物冷卻到(TC,結晶沉淀、過濾，在60-65°C下烘干，并在乙醇中重結晶，得 到化合物2，化合物2即為白襲蘆醇亞甲胺。3. 如權利要求2所述的白襲蘆醇亞甲胺的制備方法，其特征在于包括W下步驟： 將Immo 1白襲蘆醇溶解在95.7mmo 1C曲CN和1.5mmo 1二甲基甲酯胺中溶解，在冰水浴中0.化內逐滴添加1.5mmolP0Cl3，混合物再在室溫下攬拌反應化后加到冰水混合物中得到黃 色混合物;將黃色混合物在50°C下攬拌0.化，再用乙酸乙醋提取;合并有機層、用清水洗涂， 無水硫酸鋼除水，過濾，蒸發，通過硅膠純化，得到化合物1，為黃色粉末； 在室溫下，，將Immol化合物1溶于5ml乙醇中，再加入SmL氨水，50°C下加熱攬拌反應大 約化，使反應混合物冷卻到(TC,結晶沉淀、過濾，在60°C下烘干，并在乙醇中重結晶，得到化 合物2，化合物2即為白襲蘆醇亞甲胺。4. 一種白襲蘆醇亞甲胺在制備抗動脈粥樣硬化藥物中的應用，其特征在于:將如權利 要求1所述的白襲蘆醇亞甲胺應用于制備抗動脈粥樣硬化藥物中。
【專利摘要】本發明提出了一種白藜蘆醇亞甲胺及其制備方法與在制備抗動脈粥樣硬化藥物中的應用。本發明的白藜蘆醇亞甲胺能顯著抑制由油酸(OA)或PDGF誘導的VSMCs的增殖與遷移，同時在整體水平上對主動脈粥樣硬化有明顯的改善作用，能夠明顯降低血清TC、TG和LDL，并且顯著升高HDL，同時能夠顯著減少動脈粥樣硬化斑塊的形成和損傷，并且與其他應用于臨床和醫藥研究上的常用藥物阿托伐他汀和川芎嗪相比，僅10uM即可達到常用藥物30uM的藥效，具有低用量、高療效的顯著特點。
【IPC分類】C07C251/24, A61P9/10, C07C249/02
【公開號】CN105646281
【申請號】
【發明人】陳鯤, 劉珂莉, 陳谷茹, 曹寬, 詹中文, 周伯春, 賴雅平
【申請人】廣州大學
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年1月22日