一種添加單鏈寡聚脫氧核苷酸獲得iv晶型甲糖寧的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種獲得甲糖寧藥用優勢晶型的方法，特別是涉及一種添加單鏈寡聚 脫氧核苷酸獲得IV晶型甲糖寧的方法。
【背景技術】
[0002] 多晶型現象涉及到醫藥、農藥、食品、染料和爆炸品等領域，自被發現以來一直受 到了人們的廣泛關注。對化學藥物而言，絕大多數的有機化學藥物都存在多晶型現象。對 于同一種物質的不同晶型，雖然化學組成相同，但是表現出不同的物理化學性質，如密度、 硬度、熔點、溶解性和晶體形貌等。
[0003] 在制藥領域，藥物多晶型的研究一直以來都是藥物研發和生產領域的一個重要課 題。多晶型將會影響藥物的藥效、生物利用度和毒副作用。例如，降血壓藥尼群地平的三種 晶型中，III晶型的生物利用度要比I晶型和II晶型高很多。[恒杰，陳大為，任耘，等，尼群地 平多品型家兔體內藥動學及生物利用度的研究，中國醫院藥學雜志，2009, 29 (1)，29-32]。 同一種藥物的不同晶型間存在溶解度、生物利用度和穩定性等差異，因此有效篩選優勢藥 物晶型對藥物工業的發展具有重要的意義。
[0004] 甲糖寧（Tolbutamide，簡寫為TB)，又稱甲苯磺丁脲，它是一種口服的磺脲類降血 糖藥，主要用于治療非胰島素依賴型（II型）糖尿病患者。其藥理作用是促進胰腺胰島B 細胞分泌胰島素，從而達到降低血糖的作用。
[0005] 甲糖寧的分子式為C12HlsN20 3S，是一種無臭無味的白色固體藥物，易溶于乙醇、氯 仿等有機溶劑，但難溶于水。甲糖寧的分子骨架中含有一個苯環（_Ph)、一個砜基（_S0 2_)、 一個羰基（C = 0)和兩個亞氨基（-NH-)等特征基團。其中，苯環為剛性骨架分子， 而-S-N-C-N-C-的長鏈為柔性骨架分子，在一定的條件下易發生扭轉，形成構象多晶型。文 獻報道甲糖寧有五種晶型I~V，其中對于前四種晶型的報道較為詳細，熱力學穩定性順序 為I>III>II>IV，生物利用度順序為IV>II>III>I。從生物利用度方面來看，IV晶型是最有 效的藥用理想晶型。
[0006] 目前，關于甲糖寧多晶型調控的傳統方法包括改變溶劑、以小分子作為添加劑和 以自組裝膜作為模板等。
[0007] 作為生物大分子，DNA具有靈活多變的構象，富含氫鍵供體及受體，并且作為遺 傳信息的存儲物質，對人體無毒無害。在藥物作用方面，以及對成核聚集的影響使其可 能成為一種能夠有效地調控多晶型的優勢添加劑。Ramalho等使用分子動力學考察了 鮭魚DNA與三種放射致敏劑的相互作用，發現該DNA與這幾種藥物都有很強的結合作 用。[Ramalho T. C. , Franca T. C. C. , Cortopassi ff. A. , et al. , Topology and dynamics of the interaction between5-nitroimidazole radiosensitizers and duplex DNA studied by a combination ofdocking, molecular dynamic simulations and NMR spectroscopy, Journal of Molecular Structure, 2011，992(1-3)，65-71] DTanida等通過 模擬計算，分析了荼堿和RNA的自由能，說明RNA和荼堿之間有緊密的結合。[TanidaY.，Ito Μ. , Η. F. , Calculation ofabsolute free energy ofbinding for theophylline and its analogs to RNA aptamer using nonequilibrium work values, Chemical Physics，2007, 337 (1-3) : 135-143]目前使用生物大分子調節藥物晶型還未見報道。
【發明內容】
[0008] 本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種添加單鏈寡聚脫氧核苷酸獲得IV 晶型甲糖寧的方法。
[0009] 本發明的技術方案概述如下：
[0010] -種添加單鏈寡聚脫氧核苷酸獲得IV晶型甲糖寧的方法，包括如下步驟：
[0011] ⑴將過飽和度為3. 5的過飽和的甲糖寧溶液在10-30°c下超聲處理使溶解，所述 甲糖寧溶液的溶劑為體積比為2:1的乙醇和水；
[0012] (2)將超聲處理后的溶液用0. 22 μ m孔徑的有機濾膜過濾，除去不溶物，加入單鏈 寡聚脫氧核苷酸使濃度為〇. 2-2. 0mg/L，振蕩混合均勻；
[0013] (3)將步驟⑵獲得的混合液，以降溫速率為1-10°C /min降溫至4°C ;
[0014] (4)在4°C條件下結晶3-12小時，抽濾，得到的晶體在室溫下干燥12-36小時，得 到IV晶型甲糖寧。
[0015] 超聲處理的溫度優選25°C。
[0016] 單鏈寡聚脫氧核苷酸為Tx，所述X = 5-20之一。
[0017] 優選地，步驟（2)加入單鏈寡聚脫氧核苷酸使濃度為1. 0-2. 0mg/L。
[0018] 步驟（3)降溫速率優選為1. 0-7. 0°C /min。
[0019] 本發明的方法采用單鏈寡聚脫氧核苷酸作為藥物晶型調控添加劑，無毒無害，工 藝簡單，容易制得亞穩態晶型藥物。
【附圖說明】
[0020] 圖1為實施例1制備的IV晶型甲糖寧XRD譜圖。
[0021] 圖2為實施例2制備的IV晶型甲糖寧XRD譜圖。
【具體實施方式】
[0022] 下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明，本發明的實施例是為了使本領域 的技術人員能夠更好地理解本發明，但并不對本發明作任何限制。
[0023] 實驗中采用的是以乙醇水溶液（乙醇和水的體積比為2:1)為溶劑配制的初始過 飽和度為3. 5的甲糖寧溶液（155. 97mg/mL)。
[0024] 過飽和度（S)是根據平衡時溶解度定義的，S = C/C*，其中C是溶質的濃度，C*是 對應溫度下飽和時的濃度，即溶解度。4°C時，TB在乙醇水和乙醇中的溶解度分別為10. 1和 44. 5mg/mL，而在30°C時，TB在兩種溶劑中溶解度分別為44. 6和168. 8mg/mL。
[0025] 單鏈寡聚脫氧核苷酸：
[0026] T5:5' -TTTTT-3' ；
[0027] T6:5' -TTTTTT-3' ；
[0028] T7:5' -TTTTTTT-3' ；
[0042] 上述單鏈寡聚脫氧核苷酸由寶生物工程（