50μΜ、25μΜ、12.5μΜ、6.25μ Μ、3.125μΜ及1.56μΜ 7個濃度，每個濃度3個重復孔加藥，并設空白對照，DMS0對照及陽性對 照吉非替尼(Gef itinib))，24h后加入5mg/mL的ΜΤΤ(20μ!7孔），繼續培養4. Oh;棄去培養上 清，按200yL/孔加入DMS0，用酶標儀在490nm測定每孔吸光度值，計算對腫瘤細胞抑制率。
[0139] 采用以下列公式計算化合物對腫瘤細胞生長的抑制率（％):
[0140] 細胞抑制率=(實驗組0D值-DMS0對照組0D值)/空白對照組0D值X 100% ; IC5Q值采 用SPSS 19.0計算。
[0141 ]表一.化合物對三種腫瘤細胞的抑制活性3
[0142]
[0143] a MTT測試，每次3個平行樣，置信度95%。
[0144] 參見圖1，圖1為化合物1，2,3,4,6,7,8分別對A549，MDA-MB-231，HCT116三種細胞 株的抑制活性結果柱狀圖。橫坐標表示化合物編號，縱坐標標識化合物的半數抑制濃度 (IC 5Q)，圖1顯示，化合物1，2，3，4，6，7，8都表現出了對腫瘤細胞的抑制活性。尤其是化合物7 和8對A549，HCT116和MDA-MB-231三種細胞系都表現出了較好的抑制活性，其半數抑制濃度 (IC 5Q)小于陽性對照吉非替尼。
[0145] 實施例8:對黃色葡萄球菌Mu50，金黃色葡萄球菌RN4220和金黃色葡萄球菌Newman WT的抑制活性
[0146] 1)從牛奶管中接菌，在培養基上劃線，放入培養箱中過夜培養。
[0147] 2)從平板上挑取單克隆(Mu50、RN4220、Newman)接種到3mL TSB液體培養基，放入 搖床37°C，220rpm，搖菌3_4h。
[0148] 3)用紫外分光光度計測菌液0D值，液體LB培養基調零。測量后用液體TSB培養基調 菌液0D值，使0D為0.02。
[0149] 4)在96孔板內加入0D為0.02的菌液。第一列孔內加入198yL菌液，其余孔內均加入 1 OOyL菌液。在第一列中分別加入2yL( lmg/ml)待測化合物，吹吸混勻。
[0150] 5)從96孔板內第一列吹吸混勻后吸取100yL加入第二列，第二列吹吸混勻后吸取 100yL加入第三列，依次逐列梯度稀釋。最后一列吸取100yL菌液后棄掉。
[0151] 7)用封口膜封好96孔板后，放入搖床37°C，220rpm過夜培養。
[0152] 8)第二天觀察96孔板孔內菌體的生長情況，記錄不長菌的孔數，最小抑制濃度即 為不長菌的孔所對應的濃度。
[0153] 9)空白對照DMS0，陽性對照藥物萬古霉素(Van)。
[0154] Table 2.化合物對黃色葡萄球菌Mu50,金黃色葡萄球菌RN4220和金黃色葡萄球菌 Newman WT抑制活性3
[0155]
[0156] a最小抑菌濃度大于lmg/ml的化合物均未列出。
[0157] 圖2結果顯示化合物8表現出了較好的抑菌活性，對黃色葡萄球菌Mu50,金黃色葡 萄球菌RN4220和金黃色葡萄球菌Newman WT都有抑制活性，其中對RN4220和Newman WT的最 小抑制濃度(MIC)小于陽性對照萬古霉素。而對于Mu50的MIC值與萬古霉素相當。其余化合 物的最小抑菌濃度均大于lmg/ml，對于大于lmg/ml的化合物未進行進一步的研究。
[0158] 總之，本發明基于天然產物的藥效團進行新的骨架設計和合成，所得的化合具有 一定的抗腫瘤和抗菌活性，有進一步研究的價值。
[0159] 本發明所用的試劑均為商業可購買得到的試劑;本發明所要求保護的具體技術方 案，不限于上述實施例所表達的技術方案的具體組合。
【主權項】
1. 嗎I噪[I，2-a]喀晚[4,5-b]哇嘟-7,13-二酬類化合物，其特征在于，具有如式I中所示 的結構式：式I中，R為8-10位上n(n = 0-3)個各自獨立的取代基，C曲，F，Cl，Br，N02;R2為l-4位上n (n = 0-3)個各自獨立的取代基，C出，F，Cl，Br，N02 ;化為氧原子，-NN出，-NOH基團。2. 根據權利要求1所述的嗎|噪[1，2-曰]喀晚[4,5-6]哇嘟-7，13-二酬類化合物的制備方 法，其特征在于，包括W下步驟： 步驟1，100mL燒瓶中加入2-氨基哇嘟-3-甲酸衍生物(式n)和溶劑，滴加二氯亞諷，攬 拌加熱反應溫度為30~100°C，反應時間0.5~lOh，反應結束直接減壓除去多余的二氯亞諷 和溶劑，再向燒瓶中加入嗎I噪釀衍生物(式虹）和溶劑在5~150°C下反應0.5~1 Oh，反應溫 度為溶劑的沸點，式n所示的化合物和式m所示的化合物的物質的量之比為1:1~10,反應 結束后冷卻過濾，濾餅用甲醇洗劑，得到黃色固體，即為嗎I噪[l，2-a]喀晚[4,5-b]哇嘟-7， 13-二酬類化合物，即式I所示化合物，R為C出或F或Cl，或化或N02 ; 步驟2，50ml燒瓶中加入嗎I噪[1，2-a]喀晚[4，5-b ]哇嘟-7，13-二酬類化合物和溶劑，然 后加入鹽酸徑胺或者水合阱W及催化量的乙酸，式I所示化合物與鹽酸徑胺或水合阱的物 質的量比為1:1~10,在10~l〇〇°C下反應，反應1~化后冷卻，過濾，濾餅用甲醇洗，得淺黃 色固體，干燥后得到結構式為式I的化合物，Ri為NOH或NN出。3. 根據權利要求1所述的嗎I噪[1，2-a ]喀晚[4，5-b ]哇嘟-7，13-二酬類化合物，具體結 構式如下： 當R=H,化= 0，R2 =邸寸，所述式I中的化合物為式1所示的衍生物；當R=9-F，Rl = 0，R2 =邸寸，所述的式忡的化合物為式2所示的衍生物；當R=9-C1，Rl = 0，R2 =邸寸，所述式忡的化合物為式3所示的衍生物；當R=9-化，Rl = O，R2 =邸寸，所述式I中的化合物為式4所示的衍生物；當R=9-C冊，Rl = 0，R2 =邸寸，所述式I中的化合物為式5所示的衍生物；當R=8-C1，9-CH3，Rl = 0，R2 =邸寸，所述式忡的化合物為式6所示的衍生物；當R = 8，9-C1，R1 =0，R2 = H時，所述式I中的化合物為式7a所示的衍生物；當R = 9，10-Cl，R1 =0，R2 =邸寸，所述式I中的化合物為式化所示的衍生物；當1? = 8-(：1-9斗，1?1=0，1?2 =酣寸，所述式1中的化合物為式8曰所示的衍生物；當1? = 9斗-IO-Cl，Rl=O，R2 = H時，所述式I中的化合物為式8b所示的衍生物8b;當R=H，Rl =NN肥，R2 =邸寸，所述式I中的化合物為式9所示的衍生物；當R=H, Rl=NOH, R2 =邸寸，所述式忡的化合物為式10所示的衍生物；當R=9-N02，Rl = 0，R2 = H時，所述式I中的化合物為式11所示的衍生物；當R=H, Rl = 0，R2 = 2-即寸，所述式I中的化合物為式12所示的衍生物；當R=H, Rl = O, R2 = 2-C1時，所述式I中的化合物為式13所示的衍生物；當R=H，Rl = O，R2 = 2-化時，所述式I中的化合物為式14所示的衍生物；當R=H, Rl = 0，R2 = 2-C冊時，所述式I中的化合物為式15所示的衍生物；4. 根據權利要求1所述的化合物為活性成分的藥物組合物。5. 根據權利要求1所述化合物為原料藥的藥物制劑。6. 根據權利要求1所述的化合物在制備治療腫瘤藥物中的應用。7. 根據權利要求1所述的化合物在制備治療抗菌藥物中的應用。8. 根據權利要求6所述的藥物制劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、滴丸劑、微丸劑、 口服液、水針劑、輸液劑、粉針劑或凍干粉針劑。
【專利摘要】吲哚[1,2-a]嘧啶[4,5-b]喹啉-7,13-二酮類化合物，具有如式Ⅰ中所示的結構式：制備方法為：結構式Ⅱ所示的化合物和結構式Ⅲ所示的化合物按照物質的量比1:1～10，反應0.5～10h，得到結構式為Ⅰ的化合物，R1為氧原子，即吲哚[2,1-b]嘧啶[4,5-b]喹啉-7,13-二酮結構；以吲哚[2,1-b]嘧啶[4,5-b]喹啉-7,13-二酮和鹽酸羥胺或水合肼為原料，物質的量比為，化合物Ⅰ:鹽酸羥胺或水合肼按照1:1～10的比例，反應1～5h，干燥后得到結構式為Ⅰ的化合物，R1為NOH或NNH2；應用抗腫瘤和抗菌組合藥物中；原料廉價易得，產率高，操作簡單；用于治療腫瘤及殺菌。
【IPC分類】A61P35/00, A61P31/04, A61K31/519, C07D471/14
【公開號】CN105646490
【申請號】
【發明人】侯寶龍, 王翠玲, 梁海華, 劉建利
【申請人】西北大學
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年1月27日