的基于羅丹明6G 的汞離子檢測熒光探針分子的DMS0: HEPES(0.02mo 1 /L，pH = 7.4) = 6:4 (v: v)溶液，再分別 加入25μΙ^?度為0 · lmol/L的Al3+，Na+，Co2+，Ni2+，Cu2+，Zn 2+，Pb2+，Cd2+，Ag+，Fe3+，Hg 2+和Cr3+的 高氯酸鹽水溶液。靜置3分鐘后，將各測試工作液轉移至lcmX lcm的標準石英比色皿中，測 定其紫外光譜。
[0041] 基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子對汞離子的紫外選擇性檢測如圖5所 示。結果表明基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子僅對汞離子在533nm處出現明顯的 紫外吸收峰。該結果表明本發明所涉及的基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子對汞離 子表現出高度的紫外選擇性。
[0042]實施例3:基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子對汞離子熒光檢測的選擇性 [0043] 采用DMS0(二甲基亞砜）：HEPES(4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖溶液）（0.02mol/L，pH = 7.4) =6:4( v:v)溶液控制實驗條件。
[0044] 將基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子用DMS0:HEPES = 6:4(V:V)的溶劑溶 解并定容到l〇〇mL的容量瓶中，配制成熒光探針分子濃度為20ymol/L的溶液。
[0045]將樣品瓶分為12組，每組各樣品瓶分別加入5mL濃度為20ymol/L的基于羅丹明6G 的汞離子檢測熒光探針分子的DMS0: HEPES(0.02mo 1 /L，pH = 7.4) = 6:4 (v: v)溶液，再分別 加入30μΙ^?度為0 · lmol/L的Al3+，Na+，Co2+，Ni2+，Cu2+，Zn 2+，Pb2+，Cd2+，Ag+，Fe3+，Hg 2+和Cr3+的 高氯酸鹽水溶液。靜置3分鐘后，將各測試工作液轉移至lcmX lcm的標準石英比色皿中，測 定其熒光光譜。激發波長為525nm，發射波長為556nm。基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針 分子對汞離子熒光選擇性檢測如圖6所示。可見基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子 在556nm處僅對Hg 2+有明顯的熒光增強現象（約300倍增強），表明本發明所涉及的基于羅丹 明6G的汞離子檢測熒光探針分子對汞離子表現出高度的熒光選擇性。
[0046]實施例4:基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子對汞離子的定量紫外檢測 [0047] 采用DMS0(二甲基亞砜）：HEPES(4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖溶液）（0.02mol/L，pH = 7.4) =6:4( v:v)溶液控制實驗條件。
[0048] 將基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子用DMS0:HEPES = 6:4(V:V)的溶劑溶 解并定容到l〇〇mL的容量瓶中，配制成熒光探針分子濃度為20ymol/L的溶液。
[0049] 稱取0.9071g Hg(C10)2 · 3H20,用20mL去離子水溶解，配制成濃度為0.1mol/L的 Hg2+水溶液。（）
[0050] 將樣品瓶分為11組，每組各樣品瓶分別加入5mL濃度為20ymol/L的基于羅丹明6G 的汞離子檢測熒光探針分子的DMSO: HEPES(0.02mo 1 /L，pH = 7.4) = 6:4 (v: v)溶液，再分別 加入0.5yL~25yU^度為0. lmol/L的Hg2+水溶液，使測試體系中萊離子濃度為ΙΟμ mol/L~ 500ymol/L，測定其紫外可見光譜。
[0051] 本發明所涉及的基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子在水溶液體系中隨汞 離子濃度變化的紫外光譜見圖7。將紫外光譜533nm處的吸光度與相應汞離子濃度進行擬 合，在萊離子濃度為l〇Miol/L~500ymol/L范圍內可得到一擬合曲線（圖8)。結果表明，本發 明所涉及的基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子在水溶液體系中可以定量檢測汞離 子濃度。
[0052]實施例5:基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子對汞離子的定量熒光檢測 [0053] 采用DMS0(二甲基亞砜）：HEPES(4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖溶液）（0.02mol/L，pH = 7.4) =6:4( v:v)溶液控制實驗條件。
[0054] 將基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子用DMS0:HEPES = 6:4(V:V)的溶劑溶 解并定容到l〇〇mL的容量瓶中，配制成熒光探針分子濃度為20ymol/L的溶液。
[0055] 稱取0.9071g Hg(C10)2 · 3H20,用20ml去離子水溶解，配制成成濃度為0.1m〇l/L的 Hg2+水溶液。
[0056]將樣品瓶分為12組，每組各樣品瓶分別加入5mL濃度為20ymol/L的基于羅丹明6G 的汞離子檢測熒光探針分子的DMSO: HEPES(0.02mo 1 /L，pH = 7.4) = 6:4 (v: v)溶液，再分別 加入0.5yL~30yU^度為0. lmol/L的Hg2+水溶液，使測試體系中萊離子濃度為ΙΟμ mol/L~ 600ymol/L。靜置3分鐘后，將各測試工作液轉移至lcmXlcm的標準石英比色皿中，測定其熒 光光譜。熒光測試光柵縫隙大小為2.5 X 2.5nm。圖9為本發明所涉及的基于羅丹明6G的汞離 子檢測熒光探針分子在水溶液體系中隨汞離子濃度變化的熒光光譜圖。將熒光光譜556nm 處的熒光強度與相應汞離子濃度進行擬合，在汞離子濃度為l〇ymol/L~600ymol/L范圍內 得到一擬合曲線（圖10)，表明本發明所涉及的基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子在 水溶液體系中可以定量檢測汞離子濃度。
[0057]實施例6:其它金屬離子對基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子檢測汞離子 的干擾實驗
[0058] 采用DMS0(二甲基亞砜）：HEPES(4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖溶液）（0.02mol/L，pH = 7.4) =6:4( v:v)溶液控制實驗條件。
[0059] 將基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子用DMS0:HEPES = 6:4(V:V)的溶劑溶 解并定容到l〇〇mL的容量瓶中，配制成熒光探針分子濃度為20ymol/L的溶液。
[0060]將樣品瓶分為12組，每組各樣品瓶分別加入5mL濃度為20ymol/L的基于羅丹明6G 的汞離子檢測熒光探針分子的DMS0:HEPES(0.02mol/L，pH = 7.4)=6:4(V:V)溶液。其中一 組樣品作為空白對照。往其它11組樣品瓶中分別加入60μΙ^?度為0.1m 〇l/L的Al3+，Na+，Co2+， Ni2+，Cu2+，Zn2+，Pb2+，Cd 2+，Ag+，Fe3+，Hg2+和Cr3+的高氯酸鹽水溶液，測定其對探針熒光光譜的 影響。然后再分別依次向這12組溶液中加入30yL濃度為O.lmol/L的Hg2+，放置3分鐘后，依次 測定該系列溶液熒光光譜。激發波長為525nm，發射波長為556nm。將記錄的熒光強度與對應 金屬離子作柱狀圖，如圖11所示。圖11中橫坐標分別對應:a:空白對照，b: Ag+，c: Al3+，d: Cd2 +，e: Co2+，f: Cr3+，g: Cu2+，h: Fe3+，i : Na+，j : Ni2+，k: Pb2+，1: Zn2+離子存在條件下，分別加入Hg2+ 離子后在556nm處的熒光強度。圖11表明其它常見金屬離子對本發明所涉及的基于羅丹明 6G的汞離子檢測熒光探針分子檢測汞離子基本無顯著干擾。
[0061 ]實施例7:基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子在活細胞Spi 112內對汞離子 的熒光識別
[0062] 在37 °C下，將向Spi 112細胞(斜紋夜蛾細胞)種在96孔板上，加入lmL細胞懸液，然 后分別加入濃度為O.OlmoVL的萊離子溶液(^1^、3以1^、6以1^，孵育2小時后，再分別加入濃度為 2mmol/L的基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子lmL，孵育1小時。分別對空白對照組及 測試組進行熒光成像實驗，結果見圖12。圖12a中可以見到基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光 探針分子在細胞內基本無熒光發射，隨著汞離子濃度的增加熒光強度逐漸增強。當汞離子 濃度達到600ymol/L時，細胞發射明亮的黃綠色熒光（圖12c)。該實驗證明本發明所涉及的 基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子可以在活細胞Spill2內對汞離子進行熒光識別。 實驗所用儀器為Olympus 1X71。
[0063]實施例8:基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子在活線蟲體內對汞離子熒光 識別
[0064]將培養皿中的線蟲用19緩沖液(每升緩沖液中含有15.12克他冊〇4.12!120;3克 KH2P〇4;5克NaCl;0.25克MgS〇4 · 7H20)洗出來，分三組裝到離心管中。再向這三組離心管中 加入lmL M9溶液，然后分別向這三組離心管中加入濃度為0.01m〇l/L的汞離子溶液0μL、30μ L、60yL，在室溫條件下孵育2小時。線蟲用Μ9緩沖液洗滌3次，在2500r/min速度下離心2分 鐘，之后向裝有線蟲的離心管內加入濃度為2mmol/L的基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探 針分子l〇yL，并在20°C孵育1小時。線蟲再次用M9溶液洗滌3次，在2500r/min速度下離心2分 鐘后轉移到載玻片上進行熒光成像實驗。結果見圖13。圖13a中可以看到基于羅丹明6G的汞 離子檢測熒光探針分子自身在線蟲內基本無熒光發射，當汞離子濃度達到600ymol/L時，線 蟲體內發射出黃綠色熒光（圖13c)。該實驗表明本發明所涉及的基于羅丹明6G的汞離子檢 測熒光探針分子可以在線蟲體內對汞離子進行熒光識別。實驗所用儀器為Olympus BX51倒 置焚光顯微鏡。
【主權項】
1. 一種基于羅丹明6G的隸離子檢測巧光探針分子，其特征在于具有如下結構：2. 根據權利要求1所述的基于羅丹明6G的隸離子檢測巧光探針分子的制備方法，包括 W下步驟： (1) 將羅丹明6G和水合阱在甲醇中加熱回流4~6小時，得到的絮狀沉淀經抽濾后，經娃 膠層析柱用第一洗脫劑分離提純，得到的固體物質為羅丹明6G酷阱化合物； (2) 將步驟（1)得到的羅丹明6G酷阱化合物和2-醒基-8-徑基哇嘟溶解到沸騰的乙醇 中，加入冰醋酸，在氮氣的保護下加熱回流6~10小時，得到的沉淀物質經溶劑洗涂過濾后， 經硅膠層析柱用第二洗脫劑分離提純，得到的固體物質即為基于羅丹明6G的隸離子檢測巧 光探針分子。3. 根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于:所述步驟（1)中羅丹明6G、水合阱和甲 醇的比例為3g:lmL:50mL，所述第一洗脫劑為正己燒:二氯甲燒：甲醇體積比為10:4:1的混 合物。4. 根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于:所述步驟(2)中羅丹明6G酷阱化合物 和2-醒基-8-徑基哇嘟W及冰醋酸的摩爾比為3:2:0.1，所述溶劑為乙醇：乙酸積比為1:1的 混合物，所述第二洗脫劑為二氯甲燒。5. -種根據權利要求1所述的基于羅丹明6G的隸離子檢測巧光探針分子用于水體樣 品、煙草樣品或活細胞內隸離子檢測的用途。6. 根據權利要求5所述的用途，其所述活細胞為斜紋夜蛾細胞及活線蟲體細胞。
【專利摘要】本發明涉及一種基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子，該熒光探針分子具有如下所示結構。本發明還公開了所述基于羅丹明6G的汞離子檢測熒光探針分子的制備方法以及用于汞離子檢測的用途。
【IPC分類】C07D491/107, C09K11/06, G01N21/64
【公開號】CN105646511
【申請號】
【發明人】李雪梅, 周瑩, 魏玉玲, 張俊峰, 徐濟倉, 趙瑞瑞, 陳建華
【申請人】云南中煙工業有限責任公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年3月19日