2)膠體金標記頭孢噻呋單克隆抗體的制備 調節膠體金溶液pH值至8.0，用恒速攪拌器均勻攪拌，同時逐滴加入頭孢噻呋單克隆抗 體，1小時后加入抗體量相當的PEG，充分反應30分鐘后加入抗體量相當的BSA，加完后，繼續 攪拌30分鐘。在9000rpm下離心30分鐘，獲得均一性的金標抗體沉淀，再加 PNPB重懸備用， 得到膠體金標記頭孢噻呋單克隆抗體。
[0035] (3)膠體金檢測裝置的制備 在硝酸纖維素膜上噴涂頭孢噻呋免疫抗原溶液形成檢測線T線，采用噴涂兔抗鼠 IgG形 成控制線T線。所述檢測線和控制線相互平行，兩者距離0.5cm。
[0036]然后，在底板上，沿同一方向依次將樣品墊、噴涂有頭孢噻呋免疫抗原的檢測線T 線和噴涂有兔抗鼠 IgG的控制線Τ線的硝酸纖維素膜和吸水紙依次搭接粘連，其中，檢測線 靠近樣品墊，所述控制線靠近吸水紙，將粘好的所述檢測試紙切成等寬度的試紙條;反應杯 內加入膠體金標記頭孢噻呋單克隆抗體，凍干;將所述反應杯及試紙條密封干燥保存。 [0037] 實施例5 樣品中頭孢噻呋的檢測，方法為： 取新鮮雞組織樣品絞碎，頭孢噻呋殘留經乙腈和丙酮提取，正己烷除脂肪，取樣置于反 應杯中，室溫孵育10分鐘，隨后插入試紙條，室溫孵育3分鐘。取出試紙條，輕輕刮除試海綿 墊，進行結果判讀。若T線與C線同時顯示紫紅色條帶，則結果為陰性;若T線顏色比C線淺或C 線顯色而T線不顯色，則結果為陽性;若C線、T線均不顯色，則檢測裝置已失效。
[0038] 實施例6 頭孢噻呋膠體金檢測裝置的靈敏度檢測。
[0039]通過加標實驗，發現本發明中頭孢噻呋膠體金檢測裝置的靈敏度可達0.5ppm，CV 值小于15%。
[0040] 實施例7 頭孢噻呋膠體金檢測裝置的特異性實驗。
[0041] 在陰性的魚肉組織中，分別加入頭孢噻呋0.5ppm，四環素、青霉素、頭孢匹林、紅霉 素、林可霉素、泰樂菌素、鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、磺胺二甲嘧啶各20ppm，按實施例5的 操作步驟進行檢測，發現本裝置對頭孢噻呋有優異的選擇性，與以上添加藥物無交叉反應。
[0042] 實施例8 頭孢噻呋膠體金檢測裝置的保質期實驗。
[0043]用三批常規生產的產品分別做保質期實驗，放置于室內室溫環境保持，每隔1個月 取12個裝置，用質控樣本檢測，分別做陰性，分別為0.25ppm，0.5ppm和lppm濃度的樣品，重 復三次，觀察數據變化，考察保質期時間。陰性顯色從14個月開始下降，在1年時間內產品品 質無明顯變化，因此確定保質期為1年。
[0044]以上內容是結合具體的優選實施方式對本發明所作的進一步詳細說明，不能認定 本發明的具體實施只局限于這些說明。對于本發明所屬技術領域的普通技術人員來說，在 不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬于本發明的 保護范圍。
【主權項】
1. 一種頭抱嚷巧半抗原，其特征在于:其具有式(I)所示的化學結構式：2. 根據權利要求1所述的頭抱嚷巧半抗原，其特征在于，采用W下步驟制備得到： 步驟SI:將頭抱嚷巧鋼溶解于甲醇中，加入冰乙酸，于20~30°C下攬拌10~120分鐘，其 中，所述冰乙酸的摩爾量是頭抱嚷巧鋼摩爾量的1~3倍;再加入水，用二氯甲燒萃取，旋干 有機相，得到淡粉紅色固體； 步驟S2:取步驟Sl中得到的淡粉紅色固體溶于DMF中，加入碳酸鐘及漠丙酸，35~45°C 下反應2~8小時，采用二氯甲燒萃取過柱提純得所述頭抱嚷巧半抗原。3. -種頭抱嚷巧免疫抗原，其特征在于:采用權利要求1或2所述的頭抱嚷巧半抗原制 備得到，將所述頭抱嚷巧半抗原與DCC、NHS混合，于4°C下攬拌，離屯、后取上清液;將人血清 蛋白溶于抑值為8.0的PBS溶液中，加入DMF后攬拌，然后將所述上清液逐漸加入其中，4 °C下 反應6~2地，離屯、后，取上清液，透析純化，得到所述頭抱嚷巧免疫抗原。4. 根據權利要求3所述的頭抱嚷巧免疫抗原，其特征在于:所述透析純化時，在4 °C下用 生理鹽水透析3天，每天更換3次透析液。5. -種頭抱嚷巧單克隆抗體，其特征在于:采用權利要求3或4所述的頭抱嚷巧免疫抗 原與免疫Balb/c小鼠經細胞融合，篩選得到分泌頭抱嚷巧單克隆抗體的雜交瘤細胞，用獲 得的雜交瘤細胞采用體內誘生腹水法制備得到頭抱嚷巧單克隆抗體。6. 根據權利要求5所述的頭抱嚷巧單克隆抗體，其特征在于:所述體內誘生腹水法的步 驟為：對小鼠腹腔注射液體石蠟油0.5mL/只，7天后腹腔注射所述雜交瘤細胞3~5 X IO6/ 只，10天后，待小鼠腹部明顯膨大時收集腹水，用正辛酸-硫酸錠沉淀法來純化腹水得到所 述頭抱嚷巧單克隆抗體。7. -種頭抱嚷巧膠體金檢測裝置，其特征在于:包括反應杯和檢測試紙，所述檢測試紙 包括底板，W及底板上依次鋪設的樣品墊、硝酸纖維素膜和吸水紙;所述反應杯里含有膠體 金標記的如權利要求5所述的頭抱嚷巧單克隆抗體，所述硝酸纖維素膜上設有檢測線和控 制線，所述檢測線為采用權利要求3或4所述的頭抱嚷巧免疫抗原在硝酸纖維素膜上進行噴 涂制得。8. 根據權利要求7所述的頭抱嚷巧膠體金檢測裝置，其特征在于:所述控制線為采用兔 抗鼠 IgG進行噴涂制得，所述檢測線和控制線相互平行。9. 權利要求7或8所述的頭抱嚷巧膠體金檢測裝置的制備方法，其特征在于，其包括W 下步驟： 步驟A:將頭抱嚷巧鋼溶解于甲醇中，加入冰乙酸，于20~30°C下攬拌10~120分鐘，其 中，所述冰乙酸的摩爾量是頭抱嚷巧鋼摩爾量的I~3倍;再加入水，二氯甲燒萃取，旋干有 機相，得到淡粉紅色固體;將淡粉紅色固體溶于DMF中，加入碳酸鐘及漠丙酸，35~45°C下反 應2~8小時，采用二氯甲燒萃取過柱提純得所述頭抱嚷巧半抗原;利用碳二亞胺法將所述 頭抱嚷巧半抗原與載體人血清蛋白偶聯，制備得到頭抱嚷巧免疫抗原； 步驟B:將所述頭抱嚷巧免疫抗原與免疫Balb/c小鼠經細胞融合，篩選得到分泌頭抱嚷 巧單克隆抗體的雜交瘤細胞，用獲得的細胞誘導小鼠產生腹水，純化后獲得頭抱嚷巧單克 隆抗體； 步驟C:用巧樣酸=鋼與氯金酸反應制備膠體金;將膠體金與所述頭抱嚷巧單克隆抗體 混合形成金標抗體，離屯、復溶后得到膠體金標記的頭抱嚷巧單克隆抗體； 步驟D:將步驟C得到的膠體金標記的頭抱嚷巧單克隆抗體分裝至反應杯中，低溫干燥； 將所述頭抱嚷巧免疫抗原在硝酸纖維素膜上進行噴涂制得檢測線，將兔抗鼠 IgG在硝酸纖 維素膜上進行噴涂制得控制線； 步驟E:沿同一方向依次在底板上鋪設樣品墊、硝酸纖維素膜和吸水紙并粘附在底板 上，組裝得到所述檢測試紙。10.權利要求9所述的頭抱嚷巧膠體金檢測裝置的制備方法，其特征在于:還包括將粘 好的所述檢測試紙切成等寬度的試紙條，將所述反應杯及試紙條密封干燥保存。
【專利摘要】本發明提供了一種頭孢噻呋半抗原及其膠體金檢測裝置及其制備方法，所述頭孢噻呋半抗原，為具有式（1）所示的化學結構式。采用本發明的技術方案，特異性強，檢測靈敏度高，準確性高，重復性好，能更加快速、簡便地檢測頭孢噻呋殘留；不需要任何儀器設備，便于攜帶；試紙條使用簡單，無需專業人士操作；試紙制作容易，成本低廉，滿足了食品安全檢測中對頭孢噻呋殘留量檢測需求。
【IPC分類】C07K1/107, C07K14/765, C07K16/44, G01N33/558, G01N33/94, G01N33/532, C07D501/36, C07D501/04
【公開號】CN105646536
【申請號】
【發明人】嚴義勇, 朱海, 付輝, 李細清, 畢思遠, 汪鳳林
【申請人】深圳市易瑞生物技術有限公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2015年12月29日