4次后得到空載微球。
[0090] 所得空載微球為球形，分散性好，平均粒徑為56. 0 μ m，對Η印G2和Hela兩類細胞 間的粘附有高選擇性，能夠通過表面的半乳糖基特異性識別ASGR而具有主動肝靶向功能。 [0091] 載藥微球的制備：
[0092] 除水相配制時加入lmg鹽酸阿霉素外，其余按本實施例中空載微球的制備方法。
[0093] 所得載藥微球為球形，分散性好，平均粒徑為54. 5μπι ;載藥量為1. 46%，包封率 為61. 78%。該載藥微球在pH 5.5和10mM DTT的環境中釋藥，24h累積釋放藥量75. 62%; 對Η印G2和Hela兩類細胞間的粘附有高選擇性，能夠通過表面的半乳糖基特異性識別ASGR 而具有主動肝靶向功能。
[0094] 實施例4
[0095] 按實施例1的方法制備半乳糖改性明膠。
[0096] 按實施例1的方法以81. 6mg Ν，Ν' -二甲基對苯二胺代替Ν，Ν' -二甲基乙二胺， 制備兩端為仲胺基重復單元中含有二硫鍵的線性聚（β -氨基酯）。
[0097] 空載微球的制備：
[0098] 將lOOmg質量比為1 : 1的半乳糖改性明膠和聚β -氨基酯溶于0· 5ml蒸餾水。 用飽和Na2C03溶液調節pH至9,得到水相。
[0099] 將lml tween 80加入到25ml液體石錯中，于50°C和轉速1500rpm攬泮30min，得 到油相。
[0100] 在1500rpm的攪拌速度下，將水相逐滴加入到油相中。繼續攪拌20min后，冷卻至 10°C，加入0. lg對苯二甲醛，于KTC下避光反應2h。然后加入30ml丙酮，繼續攪拌30min， 過濾，濾渣經丙酮、石油醚洗滌3~4次后得到空載微球。
[0101] 所得空載微球為球形，分散性好，平均粒徑為19. 5 μ m，對Η印G2和Hela兩類細胞 間的粘附有高選擇性，能夠通過表面的半乳糖基特異性識別ASGR而具有主動腫靶向功能。
[0102] 載藥微球的制備：
[0103] 除水相配制時加入10mg鹽酸阿霉素外，其余按本實施例中空載微球的制備方法。
[0104] 所得載藥微球為球形，分散性好，平均粒徑為18. 2μπι ;載藥量為6. 18%，包封率 為65. 12%。該載藥微球在pH 5. 5和10mM DTT的環境中釋藥，24h累積釋放藥量80. 12%; 對Η印G2和Hela兩類細胞間的粘附有高選擇性，能夠通過表面的半乳糖基特異性識別ASGR 而具有主動肝靶向功能。
【主權項】
1. 一種具有肝主動祀向功能并且具有抑和還原刺激響應性的微球，其特征在于：具有 如式（I)的結構的半乳糖改性明膠-聚（目-氨基醋）的組成成分，是由單體半乳糖改性明 膠（galG)、單體端基為仲胺基含有二硫鍵的線性聚（目-氨基醋）（PBA巧與交聯劑反應所形 成的微球。所述的單體galG，具有式（II)的結構，由半乳糖（gal)對明膠（gel)通過改性反應得 到；所述的單體PBAE，具有式（III)的結構，n為聚合度。由雙（帰丙醜氧己基）二硫離 (IV)與N，N'-二甲基姪二胺（V)反應得到。式（V)中，Ri為-畑2) 2-、-畑2) 3-、-畑2) 4-、-所述的交聯劑為二醒，具有式（VI)的結構。式（VI)中，Rz為沒有原子、-CH2-、-(CHz) 2 -、-(甜2)3-、-(CH2)，即所用的交聯劑為己二醒、丙二醒、了二醒、戊二 醒、己二醒、對苯二甲醒、間苯二甲醒或鄰苯二甲醒。2. -種具有肝主動祀向功能并且具有抑和還原刺激響應性的載藥微球，其特征在于： 具有抗腫瘤藥和半乳糖改性明膠-聚（目-氨基醋）的組成成分，是將抗腫瘤藥分散在單體 galG和單體PBAE中，加入交聯劑后，兩種單體發生交聯反應所形成的載藥微球。 所述的抗腫瘤藥為鹽酸阿霉素值O訝或其他抗腫瘤藥； 所述的單體galG，具有式（II)的結構，由半乳糖（gal)對明膠（gel)通過改性反應得 到；所述的單體PBAE，具有式（III)的結構，n為聚合度。由雙（帰丙醜氧己基）二硫離 (IV)與 N, N'-二甲基姪二胺（V)反應得至Ij。式（V)中，Rl 為-((?) 2-、-(邸2) 3-、-(邸2) 4-、-所述的交聯劑為二醒，具有式（VI)的結構。式（VI)中，Rz為沒有原子、-CH2-、-(CH2)2 -、-(CH2)3-、-(CH2)4-,即所用的交聯劑為己二醒、丙二醒、了二醒、戊二 醒、己二醒、對苯二甲醒、間苯二甲醒或鄰苯二甲醒。3. 根據權利要求1所述的一種新型微球的制備方法，其特征在于；W galG和PBAE為 單體，W二醒為交聯劑，經乳化交聯法制備。制備的具體步驟如下： (1) 將單體galG和單體PBAE按比例加入水中，攬拌分散均勻后，制得水相。 單體galG和單體PBAE的質量比為（1~2) : (1~2)，單體galG和單體PBAE分散在 水中的總體積濃度為25~200mg/ml ; (2) 將乳化劑按比例分散在液體石蠟中，制得油相。 所用乳化劑為span 80或tween 80,乳化劑在液體石蠟中的體積濃度為0. 5%~5% ; (3) 在溫度為25~85°C和攬拌速度為50~1500巧m的條件下，將水相滴加至油相。 所用油相體積是水相體積的5~50倍； (4) 在溫度為-5°C~10°C和攬拌速度為50~1500巧m的條件下，加入交聯劑進行交聯 反應。 所用交聯劑為己二醒、丙二醒、了二醒、戊二醒、己二醒、對苯二甲醒、間苯二甲醒或鄰 苯二甲醒，其用量為galG和PBAE兩者總質量的0. 5~5倍； (5) 收集固形物，用異丙醇、正丙醇、己醇、甲醇或丙麗洗涂后，再用石油離洗涂，真空干 燥，得到galG-PBAE微球。4. 根據權利要求2所述的載藥微球的制備方法，其特征在于；W galG和PBAE為單體， W二醒為交聯劑，W抗腫瘤藥DOX為模型藥物，經乳化交聯法制備。制備的具體步驟如下： (1)將單體galG和單體PBAE按比例加入水中，攬拌分散后，按比例加入抗腫瘤模型藥 物D0X，攬拌均勻，制得水相。 單體galG和單體PBAE的質量比為（I~2) : (I~2)，單體galG和單體PBAE兩者的 總質量為抗腫瘤模型藥物DOX質量的5~50倍，單體galG和單體PBAE分散在水中的總體 積濃度為25~200mg/ml ; (2) 將乳化劑按比例分散在液體石蠟中，制得油相。 所用乳化劑為span 80或tween 80,乳化劑在液體石蠟中的體積濃度為0. 5%~5% ; (3) 在溫度為25~85°C和攬拌速度為50~1500巧m的條件下，將水相滴加至油相。 所用油相體積是水相體積的5~50倍 (4) 在溫度為-5°C~10°C和攬拌速度為50~1500巧m的條件下，加入交聯劑進行交聯 反應。 所用交聯劑為己二醒、丙二醒、了二醒、戊二醒、己二醒、對苯二甲醒、間苯二甲醒或鄰 苯二甲醒，其用量為galG和PBAE兩者總質量的0. 5~5倍； (5) 收集固形物，用異丙醇、正丙醇、己醇、甲醇或丙麗洗涂后，再用石油離洗涂，真空干 燥，得到載DOX/galG-PBAE微球。5. 根據權利要求1~4所述的新型微球的制備方法，其特征在于：所用單體galG(II) 的制備方法是，由目-D-半乳糖（IIa)經0-己醜化保護和漠代反應合成1-漠代-2, 3， 4.6- 四己醜氧基-目-D-半乳糖（1扣），與硫脈縮合后得到2, 3,4,6-四己醜氧基-1-硫 代-目-D-半乳糖基-2'-異硫脈氨漠酸鹽（IIc)，在縛酸劑存在下與氯己臘反應得到2, 3， 4.6- 四己醜氧基-1-臘甲基硫代-目-D-半乳糖（IId)，在甲醇鋼存在下與甲醇縮合得到 2-亞氨基-2-甲氧己基-1-硫代-目-D-半乳糖（lie)，后者與明膠縮合得到單體galG。具 體反應步驟為：6. 根據權利要求1~4所述的新型微球的制備方法，其特征在于：所用單體PBAE(III) 的制備方法是，由雙（2-居己基）二硫離（IIIa)在H己胺（TEA)存在下與丙帰醜氯（IHb) 反應得到雙（帰丙醜氧己基）二硫離（IIIc),后者與N，N'-二甲基姪二胺經邁克爾加成聚 合反應得到單體PBAE。具體反應步驟為：7. 權利要求書I~6所述的微球用作具有抑和還原雙刺激響應性W及肝祀向性的抗 腫瘤藥物載體。8. 權利要求書1~6所述的載藥微球用于肝癌的治療。
【專利摘要】本發明涉及一種具有肝主動靶向功能以及具有pH和還原刺激響應性的微球、制備方法和在醫藥上的用途。其特征為：(1)載體組成為半乳糖改性明膠-聚(β-氨基酯)，微球以半乳糖改性明膠、端基為仲胺基含有二硫鍵的線性聚(β-氨基酯)為單體，以二醛為交聯劑，經乳化交聯法制備；(2)載藥微球具有抗腫瘤藥和半乳糖改性明膠-聚(β-氨基酯)的組成成分，是以鹽酸阿霉素為抗腫瘤藥模型藥物，分散在單體半乳糖改性明膠和線性聚(β-氨基酯)中，加入交聯劑后，兩種單體發生交聯反應所形成的微球；(3)所制備的微球對肝細胞有很好的識別特性，對模型藥物有很好的pH和還原刺激釋放性能，可進一步研制開發為治療肝癌的新型靶向制劑。
【IPC分類】A61K47/42, C08K5/07, C08L79/00, A61K31/704, A61K9/16, A61K45/00, C08J3/12, C08J3/24, A61P35/00, C08L89/00
【公開號】CN105646911
【申請號】
【發明人】蔣玉仁, 詹國平, 曾維霖, 鄧友超, 杜陽森
【申請人】中南大學
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2014年9月23日