15%，發酵培養基組成（重量百分含量)為葡萄糖 2 %、麩皮1 %、蛋白胨1.5 %、酵母粉0.5 %、絲氨酸0.2 %、磷酸二氫鉀0.3 %、七水硫酸鎂 0.2 %、豆油0.02 % ;調節pH值6.0;通風比為1:0.4vvm，罐壓0.04Mpa，在27°C下發酵培養5天 后，放出20L的發酵液，補入20L滅菌后的發酵培養基，繼續發酵2天;如此不斷放料、補料，反 復3次，發酵結束可得發酵液115L，發酵周期為11天。
[0029] 2)微濾過濾：分別將發酵后的蟬擬青霉發酵液20L、20L、20L和55L通過微濾過濾， 分別得到蟬擬青霉濕菌絲體1.781^、1.721^、1.681^、4.961^(含水量78%左右），微濾透析 液 18.22Kg、18.28Kg、18.32Kg和50.04Kg，透析液的透光率為80-85%，C0D為20-60mg/L。微 濾過濾所用的膜材料是孔徑為50nm的陶瓷膜，具體工藝條件是:操作溫度為50~60°C，進壓 為3.0bar，出壓為1 .Obar，壓力差為2.0bar。
[0030] 3)低溫干燥:將步驟2得到的1 · 78kg、1 · 72kg、1 · 68kg、4 · 96kg蟬擬青霉濕菌絲體進 入真空烘箱進行烘干，得到0.402kg、0.396kg、0.390kg和1.132kg水分含量4%左右的蟬擬 青霉菌絲體，該菌絲體中甘露醇為7-12%，多糖含量10-15%。具體干燥工藝條件是:干燥溫 度65°C，相對真空度為-0.085Mpa。
[0031] 傳統生產工藝與本發明工藝產品產量、質量對比表
[0032]
[0034] 從上述表格可以看出采用傳統工藝12天發酵2個批次，可獲得菌絲體1.964kg;而 采用本發明工藝總發酵周期一樣，可獲得4個批次的菌絲體2.32kg，而獲得菌絲體產量是傳 統的118.1%，并且菌絲體產品質量要高于傳統工藝生產。因此采用本發明工藝既可縮短發 酵周期，提高產量和質量，降低生產成本。
[0035] 實施例2
[0036] 1)蝴擬青霉菌(Paecilomyces cicadae)，保藏于云南大學微生物資源中心，保藏 號YUMCCc359。將培養好的蟬擬青霉菌株種子液種到種子培養基，種子培養基組成為葡萄糖 1.8 %、麩皮0.8 %、蛋白胨1.5 %、酵母粉0.4 %、絲氨酸0.2 %、磷酸二氫鉀0.3 %、七水硫酸 鎂0.2%、豆油0.02 % ;調節pH值5.5。培養條件為:通風比為1:0.5vvm，罐壓0.03Mpa，培養溫 度26-28Γ，培養5天左右即可得到種子液。將培養好種子液接種到滅菌后50L發酵培養基， 接種量15 %，發酵培養基組成為葡萄糖1.8 %、麩皮1.2 %、蛋白胨1.5 %、酵母粉0.6 %、絲氨 酸0.2%、磷酸二氫鉀0.3 %、七水硫酸鎂0.2%、豆油0.02 % ;調節pH值6.0 ;通風比為1: 0.4vvm，罐壓0.04Mpa，在27°C下發酵培養5天后，放出40L的發酵液，補入40L滅菌后的發酵 培養基，繼續發酵2天;如此不斷放料、補料，反復3次，發酵結束可得發酵液233L，發酵周期 為11天。
[0037] 2)微濾過濾:分別將發酵后的蟬擬青霉發酵液40L、40L、40L和113L通過微濾過濾， 分別得到蟬擬青霉濕菌絲體3.161^、3.101^、3.081^、9.021^(含水量75%左右），微濾透析 液36 · 84Kg、36 · 9Kg、37 · 92Kg和 103 · 98Kg，透析液的透光率為80-87 %，C0D為30-50mg/L。微 濾過濾所用的膜材料是孔徑為50nm的陶瓷膜，具體工藝條件是:操作溫度為50~60°C，進壓 為3.0bar，出壓為1 .Obar，壓力差為2.0bar。
[0038] 3)低溫干燥:將步驟2得到的3.16kg、3.10kg、3.08kg、9.02kg蟬擬青霉濕菌絲體進 入真空烘箱進行烘干，得到0.810kg、0.806kg、0.802kg和2.320kg水分含量3%左右的蟬擬 青霉菌絲體，該菌絲體中甘露醇為7-12%，多糖含量10-15%。具體干燥工藝條件是:干燥溫 度65°C，相對真空度為-0.085Mpa。
[0039] 傳統生產工藝與本發明工藝產品產量、質量對比表
[0040]
[0042]從上述表格可以看出采用傳統工藝12天發酵2個批次，可獲得菌絲體4.32kg;而采 用本發明工藝總發酵周期一樣，可獲得4個批次的菌絲體4.738kg，而獲得菌絲體產量是傳 統的109.7%，并且菌絲體產品質量要高于傳統工藝生產。因此采用本發明工藝既可縮短發 酵周期，提高產量和質量，降低生產成本。
【主權項】
1. 一種快速深層液態發酵生產蟬擬青霉菌粉的方法，其特征是該方法包括下述步驟： 1) 蟬擬青霉半連續發酵液制備:將蟬擬青霉種子液接種到滅菌后的發酵培養基進行深 層液態發酵得到蟬擬青霉發酵培養液，所述的深層液態發酵接種量為體積含量的10~ 20%，通風比為1:0.1-1.(^￥111，罐壓0.02~0.051^^，在20~30°(：下發酵培養2-7天后，放出 培養器容積的10-50%的發酵液，補入同等滅菌后的發酵培養基，繼續發酵1-3天;如此不斷 放料、補料，操作周期為1-3天，得到蟬擬青霉發酵液； 2) 蟬擬青霉發酵液陶瓷膜過濾:將步驟2)中所得的蟬擬青霉發酵液通過微濾膜得到微 濾透析液和菌絲體，收集菌絲體； 3) 低溫真空烘干:將步驟2)中所得的菌絲體在真空度為-0.065~-0.095Mpa，65~85°C 條件下進行干燥。2. 根據權利要求1所述的快速深層液態發酵生產蟬擬青霉菌粉的方法，其特征是所述 的蟬擬青霉種子液是通過以下方法制備得到的：蟬擬青霉種子培養基組成為葡萄糖1-3%、 麩皮0.5-1.5%、蛋白胨0.5-1.5%、酵母粉0.1-1 %、磷酸二氫鉀0.1-0.5%、絲氨酸0 . ΙΟ. 5%、七水硫酸鎂 0.1-0.5%、豆油 0.01-0.05%; 調節 pH 值 5.0-6.5; 培養條件為:通風比為 1:0 · 1-1 · Ovvm，罐壓0 · 02~0 · 05Mpa，培養溫度25~30°C，培養周期2-6天。3. 根據權利要求2所述的快速深層液態發酵生產蟬擬青霉菌粉的方法，其特征是該方 法所述的蟬擬青霉種子液是通過以下方法制備得到的:將經活化搖瓶蟬擬青霉菌種接入種 子培養基，種子培養基組成為葡萄糖2%、麩皮1 %、蛋白胨1.5%、酵母粉0.5%、絲氨酸 0.2 %、磷酸二氫鉀0.3 %、七水硫酸鎂0.2 %、豆油0.02 % ;調節pH值5.5。培養條件為:通風 比為1:0.5vvm，罐壓0.03Mpa，培養溫度26-28 °C，培養5天。4. 根據權利要求1所述的快速深層液態發酵生產蟬擬青霉菌粉的方法，其特征是蟬擬 青霉發酵培養基組成為葡萄糖1-3%、麩皮0.5-1.5%、蛋白胨0.5-1.5%、酵母粉0.1-1 %、 磷酸二氫鉀〇. 1-0.5 %、絲氨酸0.1-0.5 %、七水硫酸鎂0.1-0.5 %、豆油0.01-0.05 % ;調節 pH{t5.0-6.5〇5. 根據權利要求1所述的一種快速深層液態發酵生產蟬擬青霉菌粉的方法，其特征是 步驟2)所述的微濾膜為陶瓷膜或有機膜，其孔徑在0.05~0.5μπι，操作溫度為50~60°C，工 作壓力:進壓為2~4bar，出壓為0~5bar。6. 根據權利要求5所述的一種快速深層液態發酵生產蟬擬青霉菌粉的方法，其特征是 步驟2)所述的微濾膜為陶瓷膜或有機膜，其孔徑在50nm，操作溫度為50~60°C，工作壓力： 進壓為3bar，出壓為lbar。
【專利摘要】本發明公開了一種快速深層液態發酵生產蟬擬青霉菌粉的方法，該方法是將蟬擬青霉菌種采用半連續發酵工藝快速獲取富含大量的菌絲體的發酵液，然后將發酵液通過微濾膜處理分離得到蟬擬青霉的菌絲體。本發明改變了傳統蟬擬青霉間歇性的分批發酵工藝，并且菌絲體的分離采用高效的陶瓷膜微濾替代離心機分離方式。半連續發酵工藝克服了傳統分批發酵工藝的工藝環節多，中間間隙時間長，設備效率低等缺點；而采用高效的陶瓷膜過濾發酵液，能夠減少進入濾液的菌絲體，既能提高菌絲體的收率，降低濾液的COD，降低污水處理量，又不破壞細胞本身，保證胞內有效成分的全部回收。與傳統的工藝相比，本發明具有顯著的經濟效益、社會效益和環保效益。
【IPC分類】C12N1/14, C12R1/80
【公開號】CN105647814
【申請號】
【發明人】王文風, 徐國華, 楊亞威, 劉曉霞, 孫妮娜, 徐玲, 王英燕, 張芙蓉
【申請人】江蘇神華藥業有限公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2015年11月30日