氣處于流動狀態，漂浮在空氣中的雜菌容易進入培養皿內造成污染，通常培養5天后開始呈現雜菌污染，培養10天后污染加重，并伴隨明顯的材料干燥現象，如圖1的A和B所示;在有螨蟲存在時，往往培養2?3天即出現嚴重污染，如圖2的A所示。
[0028]發明人在日常培養工作中使用一種家用塑料保鮮盒(見圖3)，進行稻曲病菌的平板培養，意外發現其預防污染的效果非常好。原來是該保鮮盒的蓋子上有一條密封膠，保鮮盒合蓋后，盒內外能達到密不透氣狀態。這種保鮮盒優越的密封性能還沒有被實驗室所認識和利用，用這種盒子裝載培養平板，技術上可以創造出近于無菌化的局部培養環境。可見，本發明的核心就是提供一套技術，使得培養材料自始至終基本處于無菌環境中，從而防止污染。
[0029]當前市面上有各式規格大小的保鮮盒，在實際工作中，只需選擇與培養皿適配的保鮮盒即可。不過，在大小適配的保鮮盒內裝入/取出培養皿的操作頗為困難，因而增加一道工序，先將培養皿裝進塑料袋，再提著袋子將培養皿裝入/取出保鮮盒，使得培養平板的裝/取操作非常方便，如圖4所示。
[0030]另外，有的工作需要將培養材料從培養箱內取出臨時觀察，觀察后仍要放回培養箱繼續培養，遇到這種情形，最好保持培養材料在保鮮盒內，轉到超凈工作臺上再打開保鮮盒，取出材料在超凈工作臺上觀察，觀察操作完畢后放回保鮮盒，再轉回培養箱培養。
[0031]所用的塑料袋最好是新購買未使用過的塑料袋，緣由是新塑料袋內部非常接近無菌環境;塑料袋的質材和大小不限，以薄型、能容納培養皿、并容易放入保鮮盒為宜;一次性使用。
[0032]本發明的平板培養方法，盡管技術上并不復雜，但預防污染的功效非常高，尤其是防止螨蟲引起的污染非常突出，而且實踐操作非常方便。
[0033]實施例1
[0034]應用本發明一種預防污染的平板培養方法，在循環空氣式培養箱進行稻曲病菌培養，按如下步驟操作:
[0035]1.配套工具準備
[0036]取潔凈的密封式塑料保鮮盒和未啟用過的普通塑料袋備用。
[0037]2.培養平板植入生物
[0038]按常規的無菌操作方式，在超凈工作臺上用培養皿將培養基倒成培養平板，并植入稻曲病菌。
[0039]3.培養平板置入配套工具
[0040]將步驟I備用的保鮮盒與塑料袋置入超凈工作臺，在無菌條件下，先將步驟2操作完畢的培養平板置入塑料袋內，再將塑料袋及培養平板整體置入保鮮盒內，蓋上并扣緊保鮮盒的密封蓋，形成盒內裝載培養平板的保鮮盒。
[0041]4.轉入培養箱培養
[0042]將步驟3操作完畢的、內裝培養平板的保鮮盒，從超凈工作臺轉到循環空氣式培養箱，在28°C溫度下培養10天。
[0043]5.培養結果調查
[0044]步驟4的培養操作經過10天后，將培養材料從培養箱取出觀察，稻曲病菌生長成正常菌落，達到培養的目標。培養12皿平板全部無污染，培養基未出現干燥現象，如圖1的C所不O
[0045]而采用常規培養方法的對照，培養12皿平板有7皿污染雜菌，而且有9皿干燥開裂，如圖1的A和B所示。
[0046]實施例2
[0047]應用本發明一種預防污染的平板培養方法，在螨蟲滋生的普通培養箱進行空白平板培養，按實施例1的步驟I至5操作，只是在步驟2的培養平板上不植入任何病原菌或微生物;步驟4使用的恒溫培養箱已經存在螨蟲滋生。步驟4的培養操作僅經過3天。結果，培養12個平板全部正常，如圖2的B所示，污染率為O。
[0048]而采用常規培養方法對照培養的12個平板，全部出現明顯的螨蟲爬行導致的污染，如圖2的A所示，污染率100 %。
[0049]采用本發明的培養方法，在平板培養量較少，所用培養皿不多，超凈工作臺空間足夠的情況下，本發明步驟I備用的保鮮盒和塑料袋可以與培養皿一起，預先置入工作臺上備用。
【主權項】
1.一種預防污染的平板培養方法，其特征在于，用一套簡單的配套工具和技術操作，大幅度降低植物病原菌/微生物日常培養的污染可能性，操作步驟如下: 1)配套工具準備:取潔凈的密封式塑料保鮮盒和未啟用過的普通塑料袋備用； 2)培養平板植入生物:按常規的無菌操作方式，在超凈工作臺上用培養皿將培養基倒成培養平板，并在平板上植入培養對象生物； 3)培養平板置入配套工具:將步驟I)備用的保鮮盒與塑料袋置入超凈工作臺，在無菌條件下，先將步驟2)操作完畢的培養平板置入塑料袋內，再將塑料袋及袋內培養平板整體置入保鮮盒內，蓋上并扣緊保鮮盒的密封蓋，形成盒內裝載培養平板的保鮮盒； 4)轉入培養箱培養:將步驟3)操作完畢的、內裝培養平板的保鮮盒，從超凈工作臺轉到常規恒溫培養箱，在需要的溫度下培養； 5)培養結果調查:到達計劃設定的培養時間后，將步驟4)的培養材料從培養箱取出，進行結果的調查和檢測。
【專利摘要】本發明公開了一種預防污染的平板培養方法，該方法采用一套簡單的配套工具和技術操作，大幅度降低植物病原菌/微生物日常培養的污染可能性，提高平板培養的效率與效果。方法的步驟如下：1)準備配套工具保鮮盒和普通塑料袋；2)將生物植入培養平板：3)在無菌環境中將培養平板置入保鮮盒；4)轉入恒溫箱培養；5)培養結果調查。本發明的最大特色是預防污染的功效高，尤其是防止螨蟲污染非常突出，同時還具有如下優點：1)培養材料不容易干燥，很適合于長時間培養的需要；2)保鮮盒可疊加放置，使得培養箱內的有效作業空間能充分利用；而且批量培養時，便于培養平板的轉移操作。
【IPC分類】C12R1/645, C12N1/14
【公開號】CN105647818
【申請號】
【發明人】王忠文, 蒲相君, 楊平, 時婷婷, 張君成
【申請人】廣西大學
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年4月12日