er pUtii strain AP_882，SFT_130，CL_ 120具有100%的同源性，因此該菌鑒定為皮特不動桿菌，命名為Acinetobacter pittii SYJl-S^cinetobacter pittii SYJ1-3的16S rDNA基因在NCBI數據庫中的基因序列號為 KI^eSSSiLAcinetobacter pittii SYJ1-3為革蘭氏陰性菌，細胞形態為桿狀，其掃描電子 顯微鏡照片見圖LAcinetobacter pittii SYJ1-3可以用梓檬酸，可產生接觸酶，可進行硝 酸鹽還原。在平板上培養24h后菌落呈圓形突起，表面光滑，邊緣整齊，不透明，無運動能力， 能夠以石油為唯一碳源進行生長并且能夠降解石油。
[0035] 實施例2:實驗室搖瓶實驗測定Acinetobacter pittii SYJ1-3降解石油的效果
[0036] 從實施例1中得到的Acinetobacter pittii SYJ 1-3純化平板上選取一環菌落接 入LB培養基，搖瓶裝液量為搖瓶體積的30%，培養溫度為28~30°C，培養轉速150-200rpm/ min，培養時間為10-16h，得到SYJ1-3種子培養液。稱取100mg的石油加入含有90ml無機鹽培 養基的搖瓶中，再接種l〇ml上述得到的SYJ1-3種子培養液，同時以未接種SYJ1-3種子培養 液的含有石油的無機鹽培養基作為對照組，實驗組和對照組溶液中初始石油濃度為lmg/ mL。將上述實驗組(含有SYJ1-3種子培養液)和對照組(不含SYJ1-3種子培養液)搖瓶放在培 養箱中，溫度為28~30°C，培養轉速150-200rpm/min，培養時間為7天。培養7天后將實驗組 和對照組溶液分別利用紫外分光光度法檢測石油降解效果。具體地，將培養7天后的實驗組 和對照組溶液中的石油利用50ml石油醚進行萃取，以石油醚作為參比，在225nm下測定其光 吸收值，然后根據標準曲線計算培養7天后實驗組和對照組溶液中的石油濃度，并計算相應 的石油降解效率。石油的降解效率=(初始石油濃度-培養后的石油濃度)/初始石油濃度X 100%。實驗結果表明，經過搖瓶培養，石油降解菌Acinetobacter pittii SYJ 1-3對石油 的降解效率為88.0%，對照組對石油的降解效率僅為6.7%。
[0037] 采用上述相同的方法測定了初始石油濃度為0 . 1 m g / m L~1 m g / m L時， Acinetobacter pittii SYJ 1-3對石油的降解效率，結果表明Acinetobacter pittii SYJ 1-3對不同濃度石油的降解效率為60%~90%。
[0038] 實施例3:Acinetobacter pittii SYJ1-3在小試SBR裝置中的應用和環境適應性 試驗
[0039] 本實驗所用進水為人工配制的模擬廢水和長慶油田采出水原水，人工配制的模擬 廢水配方主要組成為NH4C1 (0.02g/L)、K2HP〇4、NaCl(2g/L)、NaH⑶3(4g/L)、Na 2C03(lg/L)、 MgS〇4(0 · 2g/L)、Fe2S〇4 · 7H2〇(0 · 05g/L)、無水CaCl2(0 · 05g/L)、葡萄糖(Ο · lg)、石油類(50~ 500mg/L)、pH(7.5~8.5)。反應器啟動時SBR中接種的污泥取自某污水處理廠的活性污泥。 污泥接種量為ISSOmg/USBR工藝運行至第15天時，污泥濃度降為390mg/L，將放大培養的 Acinetobacter pittii SYJ1-3菌株投加到SBR工藝中，投加比例約為10% (體積百分比）。 SBR工藝連續運行82天，運行過程中按照實施例2中的方法測定不同時間點進水和出水中的 石油濃度，并計算度對應的石油降解效率(或稱去除效率），結果如圖2所示。從圖2可以看 出，在投加 Acinetobacter pittii SYJ1-3菌株前，SBR工藝對石油的降解效率逐漸降低到 50%以下。在SBR工藝運行的第15天，向工藝中投加 Acinetobacter pittii SYJ1-3菌株后， 工藝對石油的降解效率逐漸升高，并趨于穩定，可達到80~99%。另外，在工藝運行中的不 同時間點，通過高通量測序方法檢測了污泥樣品中微生物種群豐度。結果表明， Acinetobacter sp.的豐度在開始投加時較高，隨著運行時間增加，Acinetobacter sp.的 豐度逐漸趨于穩定，說明Acinetobacter sp.在SBR工藝中的環境適應性較佳。
[0040] 在本說明書的描述中，參考術語"一個實施例"、"一些實施例"、"示例"、"具體示 例"、或"一些示例"等的描述意指結合該實施例或示例描述的具體特征、結構、材料或者特 點包含于本發明的至少一個實施例或示例中。在本說明書中，對上述術語的示意性表述不 一定指的是相同的實施例或示例。而且，描述的具體特征、結構、材料或者特點可以在任何 的一個或多個實施例或示例中以合適的方式結合。
[0041] 盡管已經示出和描述了本發明的實施例，本領域的普通技術人員可以理解:在不 脫離本發明的原理和宗旨的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本 發明的范圍由權利要求及其等同物限定。
【主權項】
1. 一種皮特不動桿菌，其于2015年11月16日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普 通微生物中心(CGMCC)，保藏單位的地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微 生物研究所，保藏編號CGMCC NO. 11670,保藏名稱為皮特不動桿菌Acinetobacter pittii SYJ 1-3〇2. 權利要求1所述的皮特不動桿菌在降解石油中的用途。3. -種降解石油的方法，其特征在于，包括： 將含有權利要求1所述的皮特不動桿菌和石油的混合物置于適合所述皮特不動桿菌生 長或繁殖的條件下進行培養。4. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述培養的溫度為28~30攝氏度。5. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，在所述培養過程中，對所述含有皮特不動 桿菌和石油的混合物進行攪拌處理。6. 根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述攪拌處理的轉速為150~200rpm。7. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述石油以含有石油的液體混合物形式提 供。8. 根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述含有石油的液體混合物為石油和無機 鹽培養基的混合物。9. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，包括： 將一環所述皮特不動桿菌菌落接種于LB培養基中，并于28~30攝氏度、150~200rpm攪 拌條件下進行培養，得到皮特不動桿菌種子培養液； 將所述皮特不動桿菌種子培養液接種于含有石油的無機鹽培養基中，并于28~30攝氏 度、150~200rpm攪拌條件下進行培養。10. 根據權利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述無機鹽培養基含有:NH4N03 2g/L、 Na2HP〇4· I2H2O 3.8g/L、KH2P〇4 1.5g/L、NaCl lg/L、MgS〇4 0.2g/L、FeS〇4.7H20 0.05g/L， 無水CaCl2 0.05g/L，原油5g/L、pH 7.0~7.2。
【專利摘要】本發明公開了皮特不動桿菌及其用途，其中，該皮特不動桿菌于2015年11月16日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏單位的地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏編號CGMCC？NO.11670，保藏名稱為皮特不動桿菌Acinetobacter？pittii？SYJ1-3。本發明的皮特不動桿菌能夠以石油為碳源生長和增殖，利用自身代謝降解石油，可以有效用于石油廢水、石油污染土壤等的治理，不僅石油降解效率高，且操作簡單、方便，成本較低。CGMCC No.1167020151116
【IPC分類】C02F3/34, B09C1/10, C12N1/20, C12R1/01, C02F101/32
【公開號】CN105647838
【申請號】
【發明人】左劍惡, 李曉霞
【申請人】清華大學
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年3月31日