因此，寡營養細菌 Bacillus sp.D0B150CGMCC N0.11925是一種比較理想的固沙生物材料，這為有效恢復生物 結皮、修復受損沙地提供了新的方法。
【附圖說明】
[0016] 圖1顯示為寡營養細菌Bacillus SP.D0B150CGMCC N0.11925的系統進化發育樹 圖。
【具體實施方式】
[0017] 下面，舉實施例說明本發明，但是，本發明并不限于下述的實施例。
[0018] 本發明中選用的所有原輔材料，以及選用的菌種培養方法都為本領域熟知選用 的，本發明中涉及到的％都為重量百分比，除非特別指出除外。
[0019] 實施例一:寡營養細菌Bacillus SP.D0B150CGMCC N0.11925的分離、篩選及鑒定 [0020] 1、菌種的分離和篩選
[0021] 本發明所使用的沙漠寡營養細菌從新疆準噶爾盆地古爾班通古特沙漠取樣分離， 根據菌種作用機理分析，初步篩選出能夠在LB培養基上生長的菌株。利用傳統的平板培養 法分離出新疆準噶爾盆地古爾班通古特沙漠中的微生物，利用初篩和復篩進行篩選菌種， 平板劃線法純化菌株，通過比較菌種在LB培養基上的生長繁殖情況，篩選出一批生長良好 的微生物菌株，從中優選出綜合性能好的一株編號為D0B 150的沙漠寡營養細菌菌株。
[0022] 分離步驟:采用微生物分離的梯度稀釋法得到一系列的梯度稀釋液，用滅菌吸管 分別吸取Π ^-ΚΓ5稀釋度的混合菌稀釋液〇. lmL，分別移放到倒有LB固體培養基的平板上， 用無菌玻璃棒涂布均勻，然后倒置于37°C的恒溫培養箱中培養至長出單菌落，在無菌操作 臺中以無菌接種環挑取平板上長出的單菌落接種到裝有LB固體培養基的平板上劃線分離 待長出單菌落后，再次轉入滅菌試管斜面上，每株菌每次做三個重復，置于37°C條件下培養 3-5天。利用透過光、反射光及暗背景的光線觀察菌落的一致性，涂片染色用光學顯微鏡觀 察菌體的一致性，經多次反復分離純化直到菌落及個體均勻一致后備用。將純化后的菌株 一部分采用凍干物安瓿管、甘油管和液氮等方式保藏，一部分保存于4°C直接用于后續研 究。
[0023] 所述的LB培養基:蛋白陳10g，酵母膏5g，Nacl 10g，10g~15g瓊脂粉，蒸餾1000mL， pH7 · 0，121 °C 滅菌 20min。
[0024]本發明提供的菌株D0B150,可在適合其增殖的固體培養基或液體培養基中進行增 殖培養。利用常規固體斜面培養培養、低溫保藏的方法，每次傳代可保藏3個月以上；以干燥 冷凍法制做的長期保藏菌種，可保藏1年以上;或是以甘油管進行長期保藏。
[0025] 2、菌株D0B150的生理生化鑒定
[0026]形態特征:該菌種經LB瓊脂培養基分離培養，挑取疑似芽孢桿菌的菌落進行顯微 鏡觀察，將其初步界定芽孢桿菌菌株;該菌株在LB培養基平板上劃線培養6小時以后可以形 成芽孢，其芽孢小于菌體橫徑，位于菌體中心。
[0027]氧和二氧化碳利用試驗:將瓊脂培養基裝入試管后滅菌，待冷卻至45_50°C時做好 標記，無菌操作吸取菌株的菌懸液加入試管中，雙手快速搓動試管，避免振蕩使過多的空氣 混入培養基，待菌種均勻分布于培養基內后，將試管置于冰浴中，使瓊脂迅速凝固，將其靜 置于37°C恒溫培養箱保溫48h后開始連續進行觀察記錄，直至結果清晰為止。結果表明：該 菌均為兼性好氧菌。
[0028] 最適生長溫度試驗：以無菌操作吸取菌株的菌懸液加入液體培養基中，觀察試驗 菌株在10 °C、20 °C、30 °C、40 °C、50 °C、60 °C、70 °C、80 °C、90 °C時的生長情況，菌體的生長量以 Du800型分光光度計680nm處所測定的光密度值的大小表示。如果遇到不能生長時，則至少 觀察15-20天，以充分肯定其能否生長。每一溫度重復3次。結果表明，寡營養細菌D0B150的 最適宜溫度為28-35 °C
[0029] 通過上述對于菌種寡營養細菌Bacillus sp.D0B150CGMCC NO. 11925的菌體形態、 培養特征觀察及生理生化指標測定，即通過菌體形態觀察、菌株培養特征觀察、生長溫度測 定、耐性試驗等試驗，與常見的芽孢桿菌相比，參照《伯杰氏系統細菌學鑒定手冊》第八版和 《常用細菌系統鑒定手冊》的方法進行分類，從菌種分類角度將菌種編號為D0B150的菌株綜 合鑒定為芽孢桿菌(Bacillus sp)。
[0030] 具體的，本發明通過對新疆準噶爾盆地古爾班通古特沙漠中的微生物進行分離、 篩選和培養，獲得一批微生物菌株，從中篩選出一株編號為D0B150的菌株，經微生物學分類 與鑒定，該菌株屬于Bacillus sp。本發明采用菌株編號為D0B150的芽孢桿菌(Bacillus sp.)，該菌株已于申請日前保藏于布達佩斯條約微生物國際保藏單位：中國微生物菌種保 藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)。地址:北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學 院微生物研究所，郵編：100101。保藏日期是2015年12月24日，保藏號是CGMCC No. 11925。經 微生物學鑒定為芽孢桿菌(Bacillus sp)。
[0031] 菌株可在寡營養培養基R2A培養基及1/5TSA培養基上良好生長，也可在常用細菌 培養基，如在LB培養基中生長。其中，采用R2A培養基平板30°C恒溫培養，菌落呈圓形、邊緣 不整齊、略凸起、淡黃色、半透明、稀薄易挑取。形態學顯微觀察，菌體呈桿狀，1.0~1.2μπιΧ 3~5μπι，菌體兩端鈍圓，有鞭毛，無莢膜，多成短鏈狀排列。在LB培養基上生長6小時以后可 以形成芽孢，其芽孢小于菌體橫徑，位于菌體中心，可在寡營養培養基上生長，兼性好氧，最 適宜溫度為28-35Γ。在LB上可生長良好，菌落較大，不透明，表面粗糙似毛玻璃狀或，邊緣 常成擴展狀，具有生物固沙功能，分泌胞外多糖，產生卵磷脂酶、酪蛋白酶、明膠酶、過氧化 氫酶。參照《伯杰氏系統細菌學鑒定手冊》第八版和《常用細菌系統鑒定手冊》對編號為 D0B150菌株進行鑒定，結合生理生化綜合檢測確定菌種編號為D0B150的菌株為芽孢桿菌 (Bacillus sp.)中的成員，從分類學角度劃分為芽孢桿菌(Bacillus sp.)，但是，通過綜合 分析可知D0B150的菌株為一種新的芽孢桿菌(Bacillus sp.)中的成員。
[0032] R2A培養基:酵母浸出粉0.5g，蛋白胨0.5g，酪蛋白水解物0.5g，葡萄糖0.5g，可溶 性淀粉〇. 5，磷酸氫二鉀0.3g，K2HP〇4 0.3g，MgS〇4 0.024g，丙酮酸鈉 0.3g，瓊脂15.0，蒸餾水 1000mL，pH值7.2 左右。
[0033] 1/5TSA培養基：胰蛋白胨5.0g，大豆胨1.0g，NaCl 10g 15.0g，瓊脂15.0,蒸餾水 100〇1^4田直7.2左右。
[0034] LB培養基:胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，瓊脂15.0，蒸餾水1000mL，pH值 7.2左右。
[0035] 實施例二:寡營養細菌Bacillus sp.D0B150CGMCC NO. 11925的分子水平鑒定
[0036] 1、PCR擴增寡營養細菌D0B150的DNA序列及其測序
[0037]挑取少量寡營養細菌D0B150菌株的單菌落，放入盛有25yL無菌水的EP管中，100°C 煮沸8-10min，后迅速放入冰水混合物中5min。離心10000r/min、5min，4°C保存，用時取上 清。
[0038] 16S r DNA基因序列測定及其系統進化樹的構建：按常規方法提取寡營養細菌 D0B150菌株的總DNA，用去離子水將稀釋通用引物進行16S r DNA區段的PCR擴增。
[0039] 50μ1的反應體系含：10 X PCR緩沖液5μ1