，引物各20pmol，模板DNA ΙμL，TaqTM (TaKaRa公司）0.5U，dNTP SyLPCR擴增條件：95°C預變性5min，94°C45sec，55°Clmin，72°C lmin循環30次，72°C10min修復延伸，4°C終止反應。PCR產物的純化:PCR產物進行1%瓊脂糖 凝膠中電泳，用TaKaRa PCR FragmentRecoveryKit從膠中回收目的片段，溶于30μ1的高純 水中。送至測序公司進行16S r DNA區段序列的測定，菌種寡營養細菌D0B150的基因序列參 見附后的基因序列表。
[0040] AGAGTTTGATCCTGGTTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGAATGGATTAAGAGCTT GTTCTTATGAAGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGTCCATAAGACTGGGATAACTCCGGGAAG CCGGGGCTAGTACCGGATAACATTTTGAACCGCATGGTTCGAAATTGAAAGGCGGCTTCGGCTGTCACTTATGGATG GACCCGCGTCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGTTTGAT CGGCCACACTGGGACTGAGCCACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCACCAGTAGCCAATCTTCCGCAATGGACGAAAG TCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTAGCCAAGAACAAGTGCTA GTTGAATAAGCTGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACG TAGTTGGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGTGCGCAGGTGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCA CGGCTCAACCGTGCAGGGTCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAATTCCATGTGTAGCCG TGAAATGCGTAGAGATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGTCTGTAACTGACACTGAGGCGCGAAA GGGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTTGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGAGGGTTTCC GCCCTTTAGTGCTGAAGTTAACGCATTAAGCACTCCGTCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATT GACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTATAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATC CTCTGAAAACCCTAGAGATAGGGCTTCTCCTTCGGGAGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCACCTCGTGT CGTGAGATGGTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCACTATTAAGTTGGGCACTCTAAG GTGATTGACGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGAACTGGGCTACACAC GTGCTACAATGAACGGTACAAAGAGCTGTAAGACCGCGAGGTGGAGCTAATCTCATAAAACCGTTCTCAGTTCGGAT TGTACGCTGCAACTCGCCTACATGAAGCTGCAATCGCTAGTGATCGCGGATCAGCTTGCCGCGGTGAATACGTTCCC GGGCCTTGTACACACCGCCCCTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGGGGTAACCTTTTTGGAGCCA GCCGCCTAAGGTGGGACAGATGATTGGCGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGAATCGGAAGGTGCGGCTGGATCACCT CCTT
[0041 ] 2、16S r DNA基因序列比對及系統發育分析
[0042] 將測序得到的16S r DNA序列與GenBank數據庫中的核苷酸序列進行BLAST分析， 從中獲取相近的16S r DNA序列，將寡營養細菌D0B150的16S r DNA序列在NCBI數據庫中進 行BLAST分析后，構建系統進化樹，參見附圖1所示。
[0043] 通過16S rRNA基因序列測定及比對，并建立系統發育樹分析，結果表明菌株屬于 芽抱桿菌屬（Bacillus · sp)，其與NCBI報道菌株Bacillus cereus WJL_063(FJ527559)同源 性最高，最高相似性為97.6%，與該屬模式菌株序列比對最高同源性分別為97.5% (Bacillus cereusATCC 14579T) ^97.4% (Bacillus anthracisATCC 14578T) ^97.4% (Bacillus thuringiensisATCC 10792T)、97.4%(Bacillus toyonensis BCT_7112T)及 97.1%(Bacillus pseudomycoides DSM 12442T)，初步斷定為該屬潛在新種。以 BiologMicrostation系統的GEN III測定卡進行測試，其D-麥芽糖，D-海藻糖，D-松二糖，水 蘇糖，a_D_乳糖，蜜二糖，N-乙酰-D-匍糖胺N-乙酰-β-D-甘露糖胺，α-D-匍糖，D-甘露糖，D-果糖，D-半乳糖3-甲酰葡糖，D-果糖，D-甘露醇，D-阿拉伯醇，肌醇，甘油，D-葡糖-6-磷酸，D-果糖-6-磷酸，D-絲氨酸，氨基乙酰-L-脯氨酸，L-絲氨酸，果膠，L-半乳糖醛酸內酯，D-葡糖 酸，D-葡糖醛酸，葡糖醛酰胺，粘酸，粘液酸，奎寧酸，糖質酸，L-蘋果酸，γ -氨基-丁酸，a-羥 基-丁酸，羥基_D，L 丁酸乙酰乙酸，甲酸等利用均為陽性結果，判定為芽孢桿菌屬一潛在 新種，該菌建議的生物學命名為Bacillus sp.D0B150。
[0044] 結合寡營養細菌D0B150的形態結構特征及生理生化特性，從其歸屬，屬于芽孢桿 菌屬類群。將所測得的16S r DNA序列輸入Genbank，以Blast程序進行同源性比較，發現它 與Bacillus sp HN002的16S r DNA序列的相似性最大，是一種典型的新的芽孢桿菌菌種。 結合寡營養細菌D0B150的形態結構特征及生理生化特性，確定其為菌種編號為D0B150綜合 命名為芽孢桿菌(Bacillus sp.)。
[0045] 實施例三:寡營養細菌Bacillus sp.D0B150CGMCC NO. 11925的特性研究及應用 [0046] 1、實驗過程
[0047]將寡營養細菌D0B150在LB培養基上反復劃線活化后，用于液體菌劑的制備，接種 后置37°C搖瓶培養60h。
[0048] (1)固沙試驗
[0049]用流沙裝長30cm X寬20cm X高5cm的磁盤2個，將流沙裝入盤中，把經過搖床震蕩 培，養后的寡營養細菌D0B150噴灑在其中一個沙盤的流沙表面，另一個沙盤噴灑等量的自 來水作為對照。
[0050] (2)保水試驗
[00511取己知烘干恒重的坩堝20個(其中10個噴水作對照，10個噴寡營養細菌D0B150的 菌液)稱重，記為Wi，分別稱30g沙子裝入這20個坩堝中，向其中10個裝沙的坩堝各噴6g寡營 養細菌DOB 150的菌液作為試驗組，向另外10個裝沙的坩堝各噴水6g作為對照組，記為W2。將 這20