027]動態法制備細菌纖維素(BC)顆粒的方法，包括如下步驟:將木醋桿菌在無菌的條件下按接種量為8 %轉接至復蘇專用培養液(200mL)中，在31°C、80rpm條件下復蘇培養，然后將復蘇的培養菌液接種至培養液中，在30°C、轉速為80rpm、通氣量為0.3v/v.min條件下動態發酵3d，得顆粒狀細菌纖維素；將所獲細菌纖維素用沸騰的0.5mol/L的NaOH溶液煮15min；放入質量分數為I %的NaOH溶液中靜置2天，再在去離子水中浸泡至中性，進行稱重，記為NaOH處理后濕重，干燥后再進行稱重。
[0028]本實施例發酵液pH為5.95，NaOH處理后濕重為7.45g，處理后干重為0.16g，含水率為89.97%。
[0029]實施例5
[0030]動態法制備細菌纖維素(BC)顆粒的方法，包括如下步驟:將木醋桿菌在無菌的條件下按接種量為10%轉接至復蘇專用培養液(200mL)中，在28°C、120rpm條件下復蘇培養，然后將復蘇的培養菌液接種至培養液中，在28°C、轉速為120rpm、通氣量為0.5v/v.min條件下動態發酵4d，得顆粒狀細菌纖維素;將所獲細菌纖維素用沸騰的0.5mol/L的NaOH溶液煮15min;放入質量分數為1%的NaOH溶液中靜置2天，再在去離子水中浸泡至中性，進行稱重，記為NaOH處理后濕重，干燥后再進行稱重。
[0031 ] 本實施例發酵液pH為6.19，NaOH處理后濕重為4.59g，處理后干重為0.1323g，含水率為86.80 %。
[0032]實施例6
[0033]動態法制備細菌纖維素(BC)顆粒的方法，包括如下步驟:將木醋桿菌在無菌的條件下按接種量為12%轉接至復蘇專用培養液(200mL)中，在28°C、120rpm條件下復蘇培養，然后將復蘇的培養菌液接種至培養液中，在28°C、轉速為120rpm、通氣量為0.5v/v.min條件下動態發酵4d，得顆粒狀細菌纖維素;將所獲細菌纖維素用沸騰的0.5mol/L的NaOH溶液煮15min;放入質量分數為1%的NaOH溶液中靜置2天，再在去離子水中浸泡至中性，進行稱重，記為NaOH處理后濕重，干燥后再進行稱重。
[0034]本實施例發酵液pH為6.16,NaOH處理后濕重為9.29g，處理后干重為0.3g，含水率為89.68%。
[0035]實施例7
[0036]動態法制備細菌纖維素(BC)顆粒的方法，包括如下步驟:將木醋桿菌在無菌的條件下按接種量為20 %轉接至復蘇專用培養液(200mL)中，在28 V、120rpm條件下復蘇培養，然后將復蘇的培養菌液接種至培養液中，在28°C、轉速為120rpm、通氣量為0.5v/v.min條件下動態發酵4d，得顆粒狀細菌纖維素;將所獲細菌纖維素用沸騰的0.5mol/L的NaOH溶液煮15min;放入質量分數為1%的NaOH溶液中靜置2天，再在去離子水中浸泡至中性，進行稱重，記為NaOH處理后濕重，干燥后再進行稱重。
[0037]本實施例發酵液pH為5.65，NaOH處理后濕重為15.29g，處理后干重為0.36g，含水率為89.55%。
[0038]實施例8
[0039]將實施例1?7制得的細菌纖維素顆粒，經NaOH處理后濃縮至含水量為50?70%，然后在-80?-20°C下凍結，再用氣流粉碎設備進行流化床式粉碎至粒徑為800?1200目的顆粒，真空干燥即可。經過此步驟處理，能夠將細菌纖維素中的纖維完全破碎，然后可以直接成加工產品，如組織工程支架或人工骨支架。
[0040]其中3D打印人工骨支架的方法如下:首先CT掃描人體損傷處的骨組織，獲取損傷骨圖像數據導入Mimics軟件，建立人體指定部位的骨骼三維模型；通過3D打印系統控制軟件，生成運動軌跡代碼;利用3D打印系統以超微粉碎后的細菌纖維素為打印基本原料，進行人工骨支架的打印，直至完成整個人工骨支架的打印過程。本發明通過3D打印制作人工骨支架，制作的支架對人體無害。
[0041]最后說明的是，以上優選實施例僅用以說明本發明的技術方案而非限制，盡管通過上述優選實施例已經對本發明進行了詳細的描述，但本領域技術人員應當理解，可以在形式上和細節上對其作出各種各樣的改變，而不偏離本發明權利要求書所限定的范圍。
【主權項】
1.動態法制備細菌纖維素顆粒的方法，其特征在于，包括如下步驟:將復蘇的木醋桿菌菌液加入特制培養液中，在26?30°C、轉速為80?180rpm、通氣量為0.3?0.6v/v.min條件下動態發酵3?5d，得顆粒狀細菌纖維素； 所述特制培養液由土豆廢渣加水后在800?100°C條件下加溫不低于I小時而得。2.根據權利要求1所述動態法制備細菌纖維素顆粒的方法，其特征在于:所述復蘇的木醋桿菌由以下方法制得，將木醋桿菌轉接至特制培養液中，在26?31°C、80?ISOrpm條件下增菌培養至細菌數為106cuf/mL。3.根據權利要求1所述動態法制備細菌纖維素顆粒的方法，其特征在于:所述動態發酵后還包括如下步驟:培養所獲細菌纖維素用0.5mol/L的NaOH溶液煮15min，再放入質量分數為I %的NaOH溶液中靜置2天，用去離子水中浸泡至中性，得細菌纖維素顆粒。4.根據權利要求3所述動態法制備細菌纖維素顆粒的方法，其特征在于:將NaOH處理后的細菌纖維素顆粒濃縮至含水量為50?70%，然后在-80?-20 °C下凍結，再用超微粉碎設備粉碎至粒徑為800?1200目的顆粒，真空干燥即可。5.根據權利要求1?4任一項所述動態法制備細菌纖維素顆粒的方法，其特征在于:所述復蘇的木醋桿菌的接種量為2?20%。6.根據權利要求5所述動態法制備細菌纖維素顆粒的方法，其特征在于:所述復蘇的木醋桿菌的接種量為12?20%。7.由權利要求1?6任一項所述方法制得的細菌纖維素顆粒。
【專利摘要】本發明公開了動態法制備細菌纖維素顆粒的方法及其產品，包括如下步驟：將木醋桿菌在無菌的條件下轉接至復蘇專用培養液中，在26～31℃、80～180rpm條件下復蘇培養，然后將復蘇的培養菌液接種至特制培養液中，在26～30℃、轉速為80～180rpm、通氣量為0.3～0.6v/v·min條件下動態發酵3～5d，得顆粒狀細菌纖維素，所獲細菌纖維素經NaOH處理后濃縮至含水量為50～70％，然后在-80～-20℃下凍結，再用氣流粉碎設備進行流化床式粉碎至粒徑為800～1200目的顆粒，真空干燥得細菌纖維素顆粒干品。利用本發明的獲得的細菌纖維素產量高，呈顆粒狀，應用范圍廣，具有很好的市場應用前景。
【IPC分類】C12P19/04, C12R1/02
【公開號】CN105647991
【申請號】
【發明人】吳力克, 張娟
【申請人】中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年4月11日