一種鯊魚魚肉高f值寡肽的制備方法
【技術領域】
[0001 ]本發明涉及一種動物高F值寡肽的制備方法，具體涉及一種鯊魚魚肉高F值寡肽的 制備方法。
【背景技術】
[0002] 高F值寡肽混合物是一個由由3~7個氨基酸殘氨基酸殘基所組成的混合小肽(或 稱寡肽)體系。F值(Fischer ratio)是指支鏈氨基酸(BCAA:Val，lie，Leu)與芳香族氨基酸 (△△六:1'印巧^?1^)含量的摩爾數比值。正常人的血液中？值為3.0-3.5，而患有肝臟疾病病 人的F值只有1.0或者更低，而高F值寡肽的F值應大于20,遠高于人體中這兩類氨基酸的比 值。由于它具有獨特的氨基酸組成和生理功能，已經受到食品和醫藥界的高度關注。
【發明內容】
[0003] 本發明所要解決的技術問題是提供一種鯊魚魚肉高F值寡肽的制備方法。
[0004] 本發明為解決上述技術問題所采取的技術方案為：一種鯊魚魚肉高F值寡肽的制 備方法，其包括以下步驟： 1)鯊魚魚肉醇溶蛋白的制備:取鯊魚魚肉按1 g:15 mL~1 g:20 mL固液比加入90%~ 95%的乙醇溶液，用高速組織搗碎機將其制成勻漿，在25~30°C、功率650~700 W超聲提取 150 min~180 min;將提取液的pH值用1 mol/L NaOH調至9.5~10.0,用蒸餾水將乙醇濃 度調至55%~65%，室溫靜置45 min~60 min，于8000~10000 rpm離心10 min~15 min;取 上清液，并加入NaCl至濃度為5%~8%，靜置8 h~10 h后，于8000~10000 rpm離心10~15 min，收集沉淀，凍干，即得鯊魚魚肉醇溶蛋白。
[0005] 2)鯊魚魚肉醇溶蛋白的酶解:取鯊魚魚肉醇溶蛋白，按固液比1 g:5 mL~1 g: 10 11^，加入甘氨酸一氫氧化鈉緩沖液(0.05111〇1/14!19.5)，用0.1111〇1/1!1(：1或0.1111〇1/1 NaOH調節pH到9.0~1.0，得混合液;將混合物溫度調制55~65°C，按照醇溶蛋白質量的0.5 %~1.0 %加入堿性蛋白酶(酶活力1.95X 105)，酶解時間3 h~4 h后，酶解液于90~95°C保 溫10~15min，滅酶活;將酶解液溫度調至50~60 °C，按照醇溶蛋白質量的0.6 %~0.8%加 入木瓜蛋白酶，酶解時間4 h~5 h，酶解液降至室溫，于8000~10000 rpm離心10~15 min， 取上清液。
[0006] 3)鯊魚魚肉高F值寡肽的酶解:將上述上清液依次經超濾、活性碳吸附純化和大孔 樹脂精制，得鯊魚魚肉高F值寡肽。
[0007] 作為優選，所述的步驟1)中的藍魚為灰星藍(Mustelus griseus)。
[0008] 作為優選，所述步驟3)的超濾、活性碳吸附純化和大孔樹脂精制的具體過程為： 超濾:將上述酶解上清液于0.1~0.15 MPa的工作壓力和20~30°C的工作溫度下采用 采用3 kDa超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于3 kDa部分，得超濾酶解液； 活性碳吸附純化制:將超濾酶解液調pH值至2.5~3.5，按照物料與活性炭顆粒比為10~ 15:1將超濾酶解液以0.3~0.5mL/min流速緩慢加入到活性炭顆粒裝載于玻璃柱中，上樣 完成后，采用2~3柱體積的1:1比例的lmol/L氨水和無水乙醇混合溶液洗脫色譜柱，收集洗 脫液，干燥，得活性肽精制多肽 大孔樹脂精制:將活性碳精制多肽配成10~20 mg/mL的溶液，調pH值至6.5~7.5，緩慢 加入到物料與AB-8大孔樹脂比為10~15:1的玻璃柱中，用2~3倍柱體積的雙蒸水洗脫除去 雜質，再用2~3柱體積的95%乙醇洗脫，收集95%乙醇洗脫物，噴霧干燥，即為鯊魚魚肉高F 值寡肽。
[0009] 經測定，所得鯊魚魚肉高F值寡肽的蛋白含量為95.1~96.4%，氨基酸總量為83.7 ~85.4%，支鏈氨基酸的含量為16.8~17.1%，芳香族氨基酸的含量為0.43~0.48%，F值為 35.2~39.6，分子量為630~720 〇3，支鏈氨基酸中￥&1:116:1^11為1:1~1.5 :3~4，芳香族 氨基酸中 Trp: Tyr: Phe 為 1:1 ~1.2:1 ~1.5。
[0010] 與現有技術相比，本發明提供的一種鯊魚魚肉高F值寡肽的制備方法的優點在于： 本發明工藝科學合理，操作簡單，選用堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶作為酶解用酶，酶解過程易 監控;利用的超濾分級、活性炭吸附純化和大孔樹脂精制方法簡單，易于產業化應用；同時， 本發明所制備的鯊魚魚肉高F值寡肽是鯊魚魚肉經酶水解制得，安全、無毒副作用，并且抗 疲勞顯著，對老年人、體弱多病者和術后病人具有良好的保健作用，鯊魚魚肉高F值寡肽可 以作為抗疲勞功能食品進行開發。
【具體實施方式】
[0011]以下結合實施例對本發明作進一步詳細描述。
[0012] 實施例： 一種鯊魚魚肉高F值寡肽的制備方法及其制備方法和用途，制備工藝流程如下：鯊魚魚 肉-超聲提取醇溶蛋白-堿性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解-超濾-活性肽吸附純化-大孔 樹脂精制-鯊魚魚肉高F值寡肽。
[0013] 1)鯊魚魚肉醇溶蛋白的制備:取灰星鯊鯊魚魚肉按1 g:18 mL固液比加入95%的乙 醇溶液，用高速組織搗碎機將其制成勻漿，在30 °C、功率680 W超聲提取150 min;將提取液 的pH值用1 mol/L NaOH調至9.5,用蒸餾水將乙醇濃度調至60%，室溫靜置50 min，于9000 rpm離心12 min;取上清液，并加入NaCl至濃度為6%，靜置9 h后，于9000 rpm離心15 min，收 集沉淀，凍干，即得鯊魚魚肉醇溶蛋白。
[0014] 2)鯊魚魚肉醇溶蛋白的酶解:取鯊魚魚肉醇溶蛋白，按固液比1 g:8 mL，加入甘氨 酸一氫氧化鈉緩沖液(0.05111〇1/14!19.5)，用0.1111〇1/1!1(：1或0.1111〇1/1恥0!1調節口!1到 9.5，得混合液;將混合物溫度調制60°C，按照醇溶蛋白質量的0.6 %加入堿性蛋白酶(酶活 力1.95 X 105)，酶解時間3h后，酶解液于95°C保溫15min，滅酶活;將酶解液溫度調至55 °C， 按照醇溶蛋白質量的0.8%加入木瓜蛋白酶，酶解時間4 h，酶解液降至室溫，于9000 rpm離 心12 min，取上清液。
[0015] 3)鯊魚魚肉高F值寡肽的酶解:將上述上清液依次經超濾、活性碳吸附純化和大孔 樹脂精制，得鯊魚魚肉高F值寡肽。具